Hodnocení toxicity extraktu z květu Dolicandrone Serrulata (DSF) na funkci ledvin a jater

další informace:ali.ma@wecistanche.com

Hodnocení toxicity extraktu z květu Dolichandrone serrulata na životně důležité a reprodukční orgány u dospělých samců potkanů

C. Chaimontria a S. Iamsaard

Abstraktní

AčkoliKvět Dolicandrone serrulataBylo prokázáno, že vodný extrakt (DSF) má farmakologické vlastnosti, jeho systémová toxicita musí být ještě vyhodnocena. Cílem této studie bylo prozkoumat účinek DSF na subchronickou toxicitu (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt na biochemické parametry a histologické strukturyjátra, ledvina, varle. a nadvarlete plus vas deferens. Dospělým samcům potkanů ​​byl podáván DSF (Květ Dolicandrone serrulata) při 100 300 a 600 mg/kg tělesné hmotnosti prostřednictvím orální sondy po dobu 48 po sobě jdoucích dnů, zatímco kontrolní ata dostávala destilovanou vodu. Na konci experimentu krev.játra, ledvinaByly odebrány vzorky varlat a nadvarlat plus chámovodu pro stanovení jakýchkoli změn biochemických složek séra včetně hladin ALT, ALP a kreatininu a histologických struktur. Výsledky neodhalily žádný významný rozdíl v tělesné hmotnosti a spotřebě potravy nebo vody mezi kontrolou a DSF (Květ Dolicandrone serrulata)-léčené skupiny. Bylo zjištěno, že DSF (Květ Dolicandrone serrulata)významně zvyšuje hmotnost nadvarlete plus vas deferens, zatímcoledvinaajátravykázala pokles ve skupině s vysokou dávkou (P walue< 0.05).="" histological="" changes="" in="" these="" vital="" and="" reproductive="" tissues="" including="" fibrosis="" were="" not="" observed="" after="" administration="" but="" alt,="" alp,="" and="" creatinine="" levels="" were="" significantly="" altered="" in="" the="" treated="" groups(pwlue="" <="" 0.051.="" these="" altered="" levels.="" however,="" were="" still="" within="" normal="" ranges="" in="" conclusion,="" these="" findings="" demonstrated="" that="" d.serulata="" flower="" extract="" had="" no="" sub-chronic="" toxicity="" on="" vital="" and="" reproductive="" structures="" but="" slightly="" altered="" some="">funkce jater a ledvin.

Klikněte na Cistanches a Cistanche pro onemocnění ledvin

klíčová slova:dolicandroneserrulata, játra, ledvina, varle, nadvarle.

1. Úvod

Používání bylin k léčbě nemocí má dlouholetou tradici. Potenciální léčivé vlastnosti rostlin závisí na typech a množství jejich chemických sloučenin. Je známo, že každá část jednotlivých léčivých rostlin má jiné sloučeniny. Kromě toho se typ a množství látek může lišit v závislosti na dalších faktorech, jako je druh byliny, prostředí výsadby a období sklizně (Sringeunyuan a Hongwiset, 1990). V současné době thajská vláda podporuje používání léčivých rostlin a bylin, které jsou považovány za léčivé alternativy moderní zdravotní péče (Sringeunyuan a Hongwiset., 1990) vzhledem k tomu, že rostlinné produkty jsou většinou netoxické. Navíc bylinné léčby vycházejí z místních znalostí thajské tradiční medicíny. Khae Na neboDolicandrone serrulata(neboD.serrulata květ(DSF)) je prastará léčivá rostlina, o které se tradičně věřilo, že má mnoho farmakologických vlastností (Sriprasert, 2016). Většina částí (květ. lusk. kůra. a kořen) této rostliny je užitečná a konzumuje se pro své četné farmakologické vlastnosti (Sriprasert, 2016; Kiratipaiboon et al., 2012). Současná studie odhalila ochranný účinek DSF (Květ Dolicandrone serrulata)proti reprodukčnímu poškození u diabetických potkanů ​​(Yannasithinon et al., 2021). Biologické studie metanolového extraktu DSF (Květ Dolicandrone serrulata)prokázal své slibné antioxidační aktivity (Phanthong et al., 2015). Bylo zjištěno, že DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakty obsahovaly šest sloučenin včetně haleronu, kyseliny protokatechuové, rengyolonu, kleroindicinu B uvnitř a isomaltózy (Phanthong et al, 2015). Kromě toho předchozí studie hodnotila fytochemické profily a biologické aktivity DSF (Květ Dolicandrone serrulata)ethanolové extrakty (Sriprasert, 2016). Fytochemické studie etanolových extraktů z této rostliny odhalily sekundární metabolity, jako jsou flavonoidy, kumariny, saponiny, taniny, terpenoidy, steroidy a srdeční glykosidy (Sriprasert, 2016). Nedávno byl vodný extrakt DSF (Květ Dolicandrone serrulata)bylo popsáno, že má antioxidační kapacitu a monoterpenoidy, jako je rengyolon a kleroindicin B (Chaimontriet al., 2021). Ukázalo se však, že některé rostliny příbuzné této D. serrulata jsou toxické pro životně důležité a reprodukční orgány. Například vodný extrakt P. alliaceum extrahovaný ethanolem ve studii akutní toxicity snižoval schopnost bílých krvinek (Granados-Echegoyenet al., 2015). Dříve Aba a Amadi (2019) uvedli, že extrakt z plodů A. carambola by mohl poškodit jaterní a ledvinové tkáně. Navíc bylo zjištěno, že sluneční ženšen může změnit parametry krevního séra, včetně hladin ALT, ALP a kreatininu, které indikujídysfunkce jater a ledvin(Kim et al. 2013). Navíc Azu et al. (2010) uvedli, že vysoké dávky extraktu z plodů K. Africana by mohly inhibovat spermatogenezi. Bylo zjištěno, že nepřetržitá konzumace čerstvých rostlinných produktů po delší dobu může poškodit životně důležité a reprodukční orgány (Kiratipaiboon a kol., 2012; Freitas a kol., 2013; Joshi a kol., 2011; Karnati a kol., 2013; Lee a kol. 2012). Ačkoli DSF (Květ Dolicandrone serrulata)byl konzumován po dlouhou dobu, toxické účinky jeho vodného extraktu najátra, ledvina, varlata a nadvarlata musí být ještě posouzena. Abychom lépe porozuměli této otázce, tato studie se snažila prozkoumat subchronickou toxicitu DSF (Květ Dolicandrone serrulata)výtažky na životně důležitých a reprodukčních orgánech, aby se zjistila možnost bezpečné konzumace této látky po delší dobu.

Květ Dolicandrone serrulata(DSF)

2. Materiály a metody

2.1.Zvířata

Čtyřicet dospělých samců krys Sprague-Dawley (120-150g) bylo zakoupeno od Nomura Siam International, Bangkok, Thajsko. Zvířata byla držena v nerezových klecích za podmínek experimentální místnosti (12h. cyklus světlo/tma, teplota 23±2 stupně, vlhkost 40-60 procent, zvuk<85 decibels,="" and="" light="" intensity="" approximately="" 350-400="" lux)in="" the="" northeast="" laboratory="" animal="" center,="" khon="" kaen="" university,="" thailand.="" this="" experimental="" study="" was="" approved="" by="" the="" animal="" ethics="" committee="" research="" of="" northeast="" laboratory="" animal="" center="" khon="" kaen="" university.="" the="" code="" of="" this="" animal="" ethic="" is="">

2.2. Sběr a příprava květu D.serrulata

Rostlinné vzorky čerstvého Khae Na byly shromážděny z oblasti Ban Thum, okres Mueang, provincie Khon Kaen, Thajsko a ověřeny společností Assist. Prof. Dr. Pimwadee Pornpongrungrueng, Katedra biologie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Khon Kaen (poukazové vzorky D.serrulata, uchovávané v herbáři KKU s řadou S.lamsaard02). Při extrakci sušené DSF (Květ Dolicandrone serrulata)byla nakrájena na malé kousky, než byla namočena a vařena v destilované vodě při 90-95 stupni stupně po dobu 40 minut. Vodný DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt byl lyofilizován pomocí lyofilizátoru (M-00359-1/57,13-1011-18-2019, Labconco, Becthai Scientific Industry, Thajsko). Procentuální výtěžek surového DSFextraktu byl 40,78 procenta. Tento extrakt byl získán od Dr. Sitthichai lamsaarda, jak bylo dříve popsáno v podrobnostech extrakce (Chaimontri et al., 2021; Yannasithinon et al, 2021).

2.3. Experimentální design

Po aklimatizaci po dobu 7 dnů byli samci potkanů ​​náhodně rozděleni do 4 skupin (10 potkanů ​​na skupinu) včetně kontroly, DSF (Květ Dolicandrone serrulata)100, DSF (Květ Dolicandrone serrulata)300 a DSF (Květ Dolicandrone serrulata)600 skupin, resp. DSF (Květ Dolicandrone serrulata) dávky extraktu byly vypočteny na základě maximální konzumní dávky DSF (Květ Dolicandrone serrulata)u osoby s průměrnou hmotností 60 kg. Stručně, dávka 600 mg/kg tělesné hmotnosti byla vypočtena ze spotřeby 40 květin/den/osobu. Proporcionální poměry střední (300 mg) a nejnižší (100 mg) dávky byly vypočteny z 600 mg. Pro DSF (Květ Dolicandrone serrulata)léčených skupinách byly krysy léčeny DSF (Květ Dolicandrone serrulata)-extrakt rozpuštěný v destilované vodě (DW) v dávkách 100, 300 a 600 mg/kg tělesné hmotnosti, v daném pořadí, pomocí orální sondy. Zvířatům v kontrolní skupině byla podávána pouze DW. Jejich tělesné hmotnosti byly zaznamenávány denně během podávání po dobu 48 po sobě jdoucích dnů.

2.4. Biochemická analýza

Na konci experimentu byly všechny krysy anestetizovány thiopentalem sodným (60 mg/kg BW prostřednictvím ip) před eutanazií cervikální dislokací. Po otevření hrudní stěny byla krev odebrána srdeční punkcí a centrifugována při 12,{2}} r/min po dobu 10 minut při 4 stupních pomocí mikrocentrifugy (Microfuge 22R Centrifuge, Beckman Coulter TM, USA) k oddělení krevních buněk. ze séra. Krevní sérum bylo okamžitě odesláno na imunologické oddělení, Srinagarind Hospital, Lékařská fakulta, Univerzita Khon Kaen, Thajsko pro stanovení dusíku močoviny v krvi (BUN) a kreatininu (např.ledvinafunkcía albumin, aspartátaminotransferáza (AST), alaninaminotransferáza (ALT) a alkalická fosfatáza (ALP) (pro jaterní funkce). Biochemické hladiny byly stanoveny pomocí elektrochemiluminiscenčního imunotestu (Roche Diagnostics) s Cobas a imunitním analyzátorem (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo).

2.5. Histologické studium životně důležitých orgánů

Po odběru krve,játra, ledvinaa rychle byly odebrány a zváženy reprodukční orgány včetně varlat a nadvarlat. Všechny tkáně byly fixovány 10% formalínovým fixačním roztokem po dobu 72 hodin. Poté byly zpracovány pro rutinní parafinové řezy a obarveny Massonovými trichromovými barvivy, aby se prozkoumal vývoj kolagenových vláken. Stručně, tkáňové řezy byly zbaveny parafinu xylenem a rehydratovány sériově sestupnými alkoholy. Poté byly řezy ponořeny do Bouinova roztoku a obarveny Weigertovým železným hematoxylinem. Následně byly řezy obarveny pomocí Massonových trichromových barvících souprav (katalogové č. HT15, Sigma-Aldrich, Inc, USA). Nakonec byly řezy promyty 1% kyselinou octovou. Histologické změny životně důležitých orgánů a reprodukčních orgánů byly pozorovány a fotografovány světelným mikroskopem Nikon ECLIPSE E200 vybaveným digitálním fotoaparátem DXM1200.

2.6. Statistická analýza

Všechna data byla vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (SD). Pro srovnání rozdílů mezi čtyřmi skupinami byla použita Post Hoc vícenásobná srovnání pro normálně distribuovaná data a rozdíly v datech byly provedeny pomocí One Way ANOVA s použitím programu SPSS statistics 19.0.2software(statistický balíček pro the Social Sciences, verze 19.{5}}.2, SPSS Inc, Armonk, New York, USA instalováno z KKUSoftware Center, Khon Kaen University) pro analýzu dat. Ke zkoumání signifikantního rozdílu mezi skupinami byl použit program SPSS. P-hodnota<0.05 was="" considered="" a="" significant="">

3. Výsledky

3.1. Vliv extraktu z květu D.serrulata na tělesnou hmotnost a životně důležité a reprodukční orgány

Průměrné tělo změnilo tělo a hmotnosti varlat zvířat v kontrolní a léčené skupině nevykazovaly žádný významný rozdíl. Naproti tomu hmotnost nadvarlete plus vas deferens v DSF (Květ Dolicandrone serrulata)600 léčená skupina byla významně zvýšena ve srovnání s kontrolou. Příjem vody a spotřeba potravy u všech zvířat nevykazovaly žádné významné rozdíly (tabulka 1). Zajímavé je, že relativní váhyledvinaa játrav DSF (Květ Dolicandrone serrulata)300 a 600 léčených zvířat bylo významně sníženo ve srovnání s kontrolou (P < 0,05).

Tabulka 1. Srovnání tělesné hmotnosti, varlat, nadvarlat plus vas deferens, ledvin a hmotnosti jaterních orgánů mezi kontrolou a DSF (Květ Dolicandrone serrulata)-léčených potkanů ​​po 48 dnech studie subchronické toxicity.

3.2. Vliv květového extraktu D.serrulata na biochemické parametry

Po analýzách séra biochemické parametry indikující funkci jater ukázaly, že DSF (Květ Dolicandrone serrulata)významně snížily hladiny alaninaminotransferázy (ALT) a alkalické fosfatázy (ALP) ve srovnání s kontrolní skupinou (P<0.05, table="" 2).="" by="" contrast,="" creatinine="" levels="" which="">funkce ledvin, z DSF (Květ Dolicandrone serrulata)100 a DSF (Květ Dolicandrone serrulata)300 skupin bylo významně zvýšeno ve srovnání s kontrolní skupinou (P<0.05, table="" 2).="" interestingly,="" no="" difference="" in="" renal="" function="" was="" indicated="" by="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" albumin,="" and="" blood="" urea="" nitrogen(bun)levels="" in="" all=""> (Květ Dolicandrone serrulata)léčených skupinách.

Tabulka 2. Srovnání hladin biochemických parametrů v séru mezi kontrolními a léčenými potkany po 48 dnech studie subchronické toxicity

3.3. Účinek extraktu z květu D.serrulata na vývoj kolagenových vláken ve varlatech, kaudálním nadvarleti, ledvinách a játrech potkanů

Tkáňové řezy varlete, kaudální nadvarle,ledvina, a játraobarvené Massonovým trichomem nevykázaly žádný rozdíl v tloušťce kolagenových vláken mezi kontrolními a léčenými skupinami, jak je znázorněno na obrázcích 1-4. Naproti tomu hojná kolagenová vlákna a fibroblasty byly nalezeny v bazální lamině pod semenotvorným epitelem (modré šipky na obrázku 1). Kromě toho ocasní nadvarle ukazuje jemná kolagenová vlákna spolu s tubulární stěnou a intertubulárními prostory (černé hvězdy na obrázku 2 ). V ledvinách jsou kolagenová vlákna přítomna v bazální membráně renálních tubulů a Bowmanově prostoru (modré šipky na obrázku 3). Kromě toho jaterní tkáň všech skupin vykazovala malé množství kolagenového vlákna obklopujícího portální triádu obsahující jaterní tepnu, portální žílu a žlučovod (modré šipky na obrázku 4).

Obrázek 1. Reprezentativní histologie varlat obarvených Massonovým trichomem kontroly: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), respektive DSF600 (D). Červené šipky=kolagenová vlákna; SG=spermatogonie; RS=kulaté spermatidy.	Obrázek 2. Reprezentativní histologie kaudálního epididymis obarveného Massonovým trichomem kontroly: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), respektive DSF600 (D). Kolagenová vlákna černé hvězdičky =.
Obrázek 3. Reprezentativní histologie ledviny barvené podle Massonova trichomu kontroly: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), respektive DSF600 (D). Modré šipky=kolagenová vlákna; RT=renálních tubulů.	Obrázek 4. Reprezentativní histologie jater ukazující portální triádu barvenou Massonovým trichomem kontroly: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), respektive DSF600 (D). Modré šipky=kolagenová vlákna.

4. Diskuze

Tato studie ukázala, že DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt neovlivniljátra, ledvinaa struktury reprodukčních orgánů po podávání po dobu 48 dnů. Nicméně DSF (Květ Dolicandrone serrulata)mírně pozměněnofunkce jater a ledvinale jejich sérové ​​hladiny byly stále v normálním rozmezí v souladu se standardními hodnotami. Bylo hlášeno, že vysoké dávky (500 mg/kg BW) stejného druhu této rostliny potlačovaly produkci spermií (Azuet al., 2010); nicméně vysoká dávka DSF (Květ Dolicandrone serrulata)(600 mg/kg tělesné hmotnosti) nezměnila hmotnost reprodukčního orgánu ani histologické struktury. Tento výsledek souhlasil s předchozí studií ukazující zvýšenou koncentraci a kvalitu epididymálních spermií po DSF (Květ Dolicandrone serrulata)léčba (Chaimontri et al., 2021). Kromě toho DSF zlepšil počet spermií a fyziologii, stejně jako histopatologii varlat u diabetických potkanů ​​typu 1 (Yannasithinon et al., 2021). Spolu s našimi výsledky tato šetření naznačují, že vodný DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt nemá subchronickou toxicitu na mužský reprodukční systém. To lze vysvětlit vodným DSF (Květ Dolicandrone serrulata)vykazující antioxidační aktivity a obsahující celkový obsah fenolů včetně terpenoidních složek (Chaimontri et al., 2021). V literatuře se skutečně ukázalo, že mnoho částí D.serrulata extrahovaných ethanolem nebo methanolem má také antioxidační schopnosti a látky, jako jsou alkaloidy, flavonoidy, glykosidy, fenolické sloučeniny, saponiny a taniny (Chatchanayuenyong a Sujayanont, 2020; Khaing a kol., 2018; Kiratipaiboon a kol., 2012; Sinaphet a kol., 2006; Sittiwet, 2009). Tyto antioxidační kapacity DSF (Květ Dolicandrone serrulata)mohla snížit vysoké hladiny rychlé glukózy v krvi (FBG) a testikulárního malondialdehydu (MDA) se zvýšenými hladinami testosteronu u potkanů ​​léčených DM 2. typu (Yannasithinon et al., 2021).

Předchozí studie uváděly toxicitu mnoha látek včetně rostlinných extraktů na depozitech kolagenových vláken v diabetických varlatech (Ismail et al. 2017), hypertenzním nadvarleti (Mazen a Zidan, 2017), distribuci jaterních hvězdicových buněk (Nishimura et al, 2012; Towne et al., 2015) achronické onemocnění ledvinpacientů (Allon et al, 2019). Jak bylo prokázáno v této nedávné studii, intenzita kolagenových vláken přítomných ve varlatech, kaudálním nadvarleti, játrech a ledvinových tkáních barvených Massonovým trichromem nevykazuje žádný rozdíl mezi kontrolou a DSF (Květ Dolicandrone serrulata)léčebné skupiny. Tyto výsledky ukázaly, že DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt neindukoval histopatologickou fibrózu, akumulovaná kolagenová vlákna, ve vitálních a reprodukčních tkáních. Tyto výsledky naznačovaly, že konzumace DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt po subchronické období nezpůsobil fibrózu v reprodukčních nebo životně důležitých orgánech. Bylo zaznamenáno, že tloušťka Bowmanova pouzdra mezi DSF (Květ Dolicandrone serrulata) léčené skupiny nevykazovaly žádné zjevné změny ve srovnání s kontrolní skupinou. Kromě toho se hmotnosti těchto orgánů mezi skupinami významně nelišily, což souhlasilo s předchozí studií, která pozorovala myši léčené po období akutní toxicity (Katisart a Konsue, 2019).

Játra a ledvinymikrostruktury nevykazovaly žádné zjevné změny po DSF (Květ Dolicandrone serrulata)podávání v jakékoli dávce. Jejich funkce však byly mírně změněny v důsledku snížených hladin ALT a ATP, zatímco hladiny kreatininu byly významně zvýšeny. Takové funkční změny lze vysvětlit aktivitou saponinu nalezeného v DSF (Květ Dolicandrone serrulata)surový extrakt, jak je popsáno v předchozí studii (Kiratipaiboon et al. 2012). Tento mechanismus může být podobný mechanismu pozorovanému při léčbě slunečním ženšenem, jehož obsah saponinů vedl ke změnám parametrů krevního séra vázaných na játra aledvinafunkcejako jsou hladiny ALT, ALP a kreatininu (Kim et al.2013). Takové fyziologické změny však nebyly dostatečné k vážnému poškození jater aledvinastruktur. Jak je uvedeno v tabulce 2; biochemické parametry v krevním séru z DSF (Květ Dolicandrone serrulata)léčené skupiny byly ve srovnání s kontrolami změněny, ale jejich hladiny byly stále v normálním rozmezí včetně ALT[{{0}}U/L], ALP 62-230 U/L] a kreatininu [0.2-0,5 mg/dl, jak bylo dříve uvedeno na zvířecím modelu (Hayakawa et al., 2013; Pereira et al., 2017). Jako omezení studie jsou uvedeny další toxické látky v DSF (Květ Dolicandrone serrulata)a apoptotické markery v tkáních je třeba dále zkoumat, aby se určila jejich bezpečnost pro použití a spotřebu po delší dobu.

5. Závěr

Tato studie prokázala, že vodný DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt z květů neměl žádnou toxicitu na životně důležité orgány a mužské reprodukční tkáně, ale produkoval mírné změny některých parametrůjátra aledvinafunkce.

6. Budoucí vyhlídky

Na základě zjištění tohoto článku je bezpečnost DSF (Květ Dolicandrone serrulata)byla prokázána spotřeba po delší dobu pro mikrostruktury ledvin a jater. Konkrétně DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt se ukázal jako netoxický pro varlata a nadvarlata. Doufejme, DSF (Květ Dolicandrone serrulata)extrakt může být dále vyvinut jako doplněk stravy pro mužské reprodukční zdraví.

Reference

1. ABA, PE a AMADI, AU, 2019. Vyhodnocení možných hepatotoxických a nefrotoxických potenciálů extraktu šťávy Averrhoa carambola u samic potkaních albínů. Časopis základní a klinické fyziologie a farmakologie, sv.31,č.1.https:// doi.org/10.1515jbcpp-2019-0042.PMid:31536032.

2. ALLON,M.,LITOVSKY,SH,TEYJ,SUNDBERG,CA.,ZHANG,Y,CHEN, Z.,FANG,Y.,CHEUNG,AK.and SHIU,YT,2019.Abnormality vaskulární histologie a konfigurace kolagenových vláken v pacientů s pokročilýmchronické onemocnění ledvin.The Journal of Vascular Access, sv. 20, č. 1, s.{2}}.http://dx. doi. org/10.1177/1129729818773305.PMid:29742957.

Poznámka:výše uvedené není úplný seznam referencí