Potenciál neohesperidinu proti stárnutí a jeho synergické účinky, část 1
May 26, 2022
Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPro více informací
Abstraktní:Aktivita proti stárnutí mnoha rostlinných flavonoidů, stejně jako jejich mechanismy působení, byly zkoumány v současné literatuře. Nicméně studie o synergických účincích mezi různými flavonoidními sloučeninami byly v předchozích zprávách dosti omezené. V této studii jsme pomocí vysoce výkonného testu testovali synergické účinky mezi různými citrusovými flavonoidy v průběhu chronologické životnosti kvasinek (CLS). Studovali jsme účinek čtyř flavonoidních sloučenin včetně naringinu, hesperidinu, hesperidinu, neohesperidinu a také jejich různých kombinací na CLS kvasinkového kmene BY4742. Testována byla také jejich schopnost vychytávání ROS, antioxidační aktivita in vitro a vliv na extracelulární pH. Výsledky ukázaly, že neohesperidin prodlužuje CLS kvasinek způsobem závislým na koncentraci. Zejména jsme zjistili, že neohesperidin vykazuje velký potenciál při prodlužování CLS pučících kvasinek individuálně nebo synergicky s hesperetinem. Neohesperidin vykazoval nejsilnější funkci při snižování akumulace reaktivních forem kyslíku (ROS) v kvasinkách.puritans vitamín CTato zjištění jasně naznačují, že neohesperidin je potenciálně citrusový flavonoid proti stárnutí a jeho synergický účinek s jinými flavonoidy na CLS kvasinek bude zajímavým předmětem budoucího výzkumu funkce proti stárnutí citrusových plodů.
klíčová slova:citrusové flavonoidy; neohesperidin; aktivita proti stárnutí; chronologická životnost; Synergický účinek
1. Úvod
Stárnutí, komplexní a multifaktoriální biologický proces, lze definovat jako postupnou ztrátu fyziologické a psychické integrity, vedoucí k postupnému zhoršování téměř všech funkcí a zvýšené zranitelnosti vůči smrti [1]. Léčba, která se zaměřuje na různé faktory a/nebo cesty v procesu stárnutí, je dobrým kandidátem pro studium. V současnosti se trend stárnutí populace postupně zvyšuje. Vzhledem k tomuto trendu v populaci má velký praktický význam najít účinné způsoby, jak zpomalit stárnutí nebo zlepšit zdravý stav stárnutí. Aktivita fytochemikálií proti stárnutí byla studována výzkumníky z celé řady oborů. V existující literatuře se uvádí, že mnoho různých rostlinných sloučenin má přímou/potenciální aktivitu proti stárnutí [2-5].
Pučící kvasinka Saccharomyces cerevisiae hrála vedoucí roli jako modelový organismus pro studium evolučně konzervovaných mechanismů, které jsou relevantní pro lidské stárnutí a nemoci související s věkem [6]. U kvasinek existují dva typy délky života, a to replikativní životnost (RLS)[7] a chronologická životnost (CLS)[8]. RLS je definována jako počet dceřiných buněk, které může mateřská buňka produkovat, než se zastaví pučení [9], zatímco CLS je doba, po kterou pučící kvasinkové buňky přežívají poté, co prošly zastavením buněčného cyklu vyvolaným vyčerpáním živin ve stacionární fázi [9]. 10]. RLS a CLS mohou sloužit jako modely pro proliferující a neproliferující tkáně u vyšších eukaryot [6].
Dlouhodobé a úspěšné používání kombinací bylinných léčiv v tradiční medicíně nás inspirovalo ke studiu synergického účinku fytochemikálií, které mají zdravé funkce.sistancheV současné době se hodnocení synergie stalo klíčovou oblastí lékařského výzkumu s cílem zvýšit účinnost léčby a ovlivnit nejen jeden cíl, ale několik cílů[11]. Předchozí výzkumy ukázaly, že naringin, hesperidin, hesperetin a neohesperidin, široce rozšířené v citrusových plodech, mají četné biologické aktivity související s anti-agingem, a podrobné informace o těchto fytochemikáliích jsou uvedeny v literatuře [12-21]. Fytochemikálie však byly méně hodnoceny jako kombinace. Přinejmenším jejich ternární kombinace byly hlášeny jen zřídka. Mezitím nebyl účinek neohesperidinu na CLS pučící kvasinky BY4742 dříve odhalen.
Za účelem odhalení funkce kombinací flavonoidů při prodlužování CLS pučících kvasinek BY4742 byly v současné době také testovány čtyři flavonoidní sloučeniny, jejich binární a ternární kombinace vliv na CLS kvasinek BY4742 a jejich schopnost vychytávání ROS a antioxidační aktivita in vitro práce. Mezitím byly detekovány hodnoty extracelulárního pH kvasinek ošetřených těmito čtyřmi sloučeninami, protože extracelulární acidifikace kultivačního média by mohla způsobit intracelulární poškození v chronologicky stárnoucí populaci [22].
2. Výsledky
2.1. Neohesperidin prodloužil životnost kvasinek způsobem závislým na koncentraci
DMSO byl univerzálně používán jako rozpouštědlo pro léčiva nerozpustná ve vodě a různé koncentrace DMSO různě ovlivňovaly růst kvasinek [23]. Proto jsme nejprve testovali vhodnou koncentraci DMSO. Jak je znázorněno na obrázku 1(A), nebyl zjištěn žádný významný rozdíl v délce života kvasinek při 0,2 procenta a 0,4 procenta DMSO v kultivačním médiu ve srovnání s kontrolou, zatímco životnost při 0,6 procenta a 0,8 procenta DMSO byly významně sníženy. Abychom eliminovali vliv rozpouštědla v experimentech, nastavili jsme konečnou koncentraci DMSO v médiu na 0,2 procenta pro provádění následujících experimentů.
Cistanche může proti stárnutí
Pro rychlou kvantifikaci CLS byly použity vysoce výkonné testy jako přínos rozsáhlého modelu chronologického stárnutí [24,25]. Proto jsme použili tuto metodu ke screeningu čtyř citrusových flavonoidů (naringin, hesperidin, hesperetin a neohesperidin) na jejich aktivitu proti stárnutí. Stanovili jsme dlouhověkost těchto čtyř fytochemikálií v rozsahu dávek od 0 μM do 100 μM. Z výsledku bylo zjištěno, že neohesperidin vykazoval potenciál prodloužit CLS BY4742 při 0,1 μM, zatímco ostatní tři sloučeniny nemohly zvýšit přežití buněk při nastavených koncentracích (obrázek 1B). z kombinatorických experimentů zde byly zvoleny koncentrace A, B, C a D jako 100, {{20}}.1, 0.1 a 0.1 μM, v tomto pořadí. Konkrétně pro další kombinační testy byly použity A (100 uM naringin), B (0,1 uM hesperidin), C (0,1 uM hesperetin) a D (0,1 uM neohesperidin).
Předpokládá se, že kumulativní doba zpracování je důležitým faktorem ovlivňujícím růst buněk. V souladu s touto hypotézou naše data naznačovala, že čtyři flavonoidní sloučeniny neovlivnily růst buněk okamžitě po přidání za 24 hodin v různých dobách zpracování (obrázek 2). Protože růstové křivky kvasinek ošetřených A, B, C a D byly téměř stejné jako u kontrolních.co je cistancheTo také ukázalo, že tyto čtyři sloučeniny neinhibují růst kvasinkových buněk. Když však bylo zpracování zahájeno 2. den, mohla se míra přežití růstu/CLS během dlouhého období změnit (obrázek 3).
Obrázek 3. (A) Míra přežití kvasinek BY4742 při léčbě různými sloučeninami a jejich kombinacemi od dne 2 do dne 20 byla měřena každé dva dny. Míra přežití byla vypočtena následovně. Kde tOD= 0.3,2den je čas, kdy hodnota OD věkového bodu 2. dne dosáhne 0,3 v křivkách růstu. Počáteční věkový bod (den 2) je definován jako 100% životaschopnost a relativní procento přežití každého následného věkového bodu lze vypočítat následovně: Za =,—×100n=dnů, Dt představuje průměrnou dobu zdvojnásobení. Integrál přežití (S) pro každou jamku je definován jako plocha pod křivkou přežití (AUC a lze jej odhadnout podle vzorce: SI=E(L plus )(den-den-1), kde denm je věkový bod, jako jsou dny 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 a 20. (B) Vliv čtyř flavonoidních sloučenin a jejich binárních a ternárních kombinací na chronologickou délku života v kvasinkách BY4742 při jejich prospěšných koncentracích.AUC znamená plochu pod křivkou. Jednocestná ANOVA vícenásobná srovnání. Data byla vyjádřena jako průměrné hodnoty ± standardní chyba průměru (SEM), n=4.*p<><0.0001.a（100um naringin）,="" b（0.1="" μm="" hesperidin）,="" c（0.1="" μm="" hesperetin）,="" d="" （0.1="" μum="">
2.2. Neohesperidin pozitivně interagoval s hesperetinem pro prodloužení CLS kvasinek BY4742
Bylo prokázáno, že kombinovaná terapie je novou a vysoce účinnou terapeutickou strategií pro zvládnutí mnoha onemocnění, jako je diabetes [26], rakovina [27], kardiovaskulární poruchy [28], obezita a osteoporóza [29]. Zde jsme studovali účinek binárních a ternárních kombinací naringinu, hesperidinu, hesperetinu a neohesperidinu na CLS pučící kvasinky BY4742. Obrázek 3A ukazuje míru přežití kvasinek při různých ošetřeních flavonoidy. Pro každé ošetření bylo detekováno 10 bodů stárnutí. Ukázalo se, že míra přežití u některých léčeb byla vyšší ve srovnání s protějšky kontroly.Čistota proti stárnutíZ obrázku 3B nám výsledek jasně ukázal, že léčba D, BD a ABD vykazovala významné rozdíly (p<0.05), just="" weaker="" than="" cd="" and="" bcd=""><0.0001). we="" can="" see="" that="" d(neohesperidin)showed="" an="" important="" function="" in="" the="" individual="" or="" synergistically="" treatments.="" therefore,="" we="" could="" conclude="" that="" neohesperidin="" had="" great="" potential="" in="" increasing="" cls="" of="" budding="" yeast="" by4742="" individually="" or="" synergistically="" with="">
2.3. Neohesperidin významně snížil obsah intracelulárních reaktivních druhů kyslíku (ROS)
Podle Harmana je poškození buněčné složky způsobené ROS generovaným v mitochondriích hlavní silou urychlující proces stárnutí organismu [30,31]. Jak je znázorněno na obrázku 4A, všechny čtyři flavonoidy vykazovaly pozoruhodnou schopnost vychytávání ROS. Mezi čtyřmi jednotlivými léčbami měl neohesperidin nejvýraznější účinek.cistanche benefíciosJiné kombinované léčby, všechny ternární kombinace a také BD, nesnížily intracelulární ROS. Pokud jde o binární kombinace, jako jsou AB, AC, AD a BC, vykazovaly vyšší aktivity vychytávání ROS než jejich odpovídající jednotlivé látky. Schopnost vychytávání ROS binární kombinace BD byla mezi B a D, zatímco funkce CD byla téměř stejná jako D.
Obrázek 4. （A）Účinek A （100 μM naringinu）, B （0,1 μM hesperidinu）, C（0,1 μM hesperetinu）, D（0,1 μM neohesperidinu ), jejich binární a ternární kombinace na intracelulárních hladinách ROS kvasinek (BY4742) pěstovaných ve standardním SD médiu po ošetření po dobu 2 dnů (n= 12). Byla použita ROS sonda H2DCFDA. Dichlordihydrofluorescein (DCF). Jednosměrná ANOVA vícenásobná srovnání. Data byla vyjádřena jako průměrné hodnoty ± standardní chyba průměru (SEM), n=12. * str<0.0001;(b)the antioxidant="" capacity="" （y="" m="" trolox="" equivalents/μm="" phytochemical）="" of="" a="" （naringin）,="" b（hesperidin）,="" c="" （hesperetin）,="" d="" (neohesperidin)="" and="" their="" binary="" and="" ternary="" combinations="" evaluated="" by="" 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl="" (dpph,="" frap="" and="" abts="" assays.="" apci="" (antioxidant="" potency="" composite="" index)="Z(the" sample="" data="" of="" each="" method/the="" highest="" sample="" data="" of="" every="" method)/the="" number="" of="" methods="" ·100.="" the="" higher="" the="" apci="" is="" the="" lower="" the="" rank="" number="">
Tento článek je převzat z Molecules 2019, 24, 4093; doi:10.3390/molecules24224093 www.mdpi.com/journal/molecules
