Účinky Ludwigia Octovalvis proti stárnutí na myši Drosophila Melanogaster a SAMP8, část 1

AbstraktníZkoumali jsme účinky proti stárnutí Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae), je extrakt, který je široce konzumován jako zdravý nápoj v několika zemích. Pomocí ovocné mušky Drosophila melanogaster jako modelového organismu jsme prokázali, že extrakt z L. octovalvis (LOE) významně prodloužil životnost much na vysoce, ale ne nízkokalorické dietě, což naznačuje, že LOE může regulovat délku života prostřednictvím dietních omezení ( dráha související s DR). LOE také zmírnil kognitivní pokles související s věkem jak u much, tak u myší se sklonem k senescenci 8 (SAMP8), aniž by způsobil jakékoli rozpoznatelné negativní kompromisy, včetně příjmu vody, příjmu potravy, plodnosti nebo spontánní motorické aktivity. LOE obsahoval vysoké hladiny polyfenolů a flavonoidů, které mají silnou aktivitu vychytávání DPPH radikálů a bylo prokázáno, že zmírňují oxidační poškození a letalitu mušek vyvolané paraquatem. Analýza plynovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií (GC-MS) identifikovala 17 známých molekul, z nichž dvě nejhojnější byly -sitosterol a skvalen. Dále jsme prokázali, že -sitosterol by mohl prodloužit životnost, pravděpodobně prostřednictvím aktivace AMP-aktivované proteinkinázy (AMPK) v tukovém těle dospělých much. Naše údaje naznačují, že LOE je silný zásah proti stárnutí s potenciálem pro léčbu poruch souvisejících s věkem.

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a dokáže vychytávat reaktivní formy kyslíku, bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý opravný účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na cistanches herba

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Klíčová slovaLudwigia octovalvis. Dietní omezení. Životnost. AMPK

Úvod

Pochopení stárnutí je hlavní výzvou naší doby vzhledem k demografickým trendům a předpokládané zátěži starší společnosti. Studie zkoumající nemoci související s věkem, jako jsou neurodegenerativní onemocnění, rakovina a kardiovaskulární onemocnění, již přinesly významné poznatky o lidském stárnutí. Je známo, že dietní omezení (DR) snížením příjmu kalorií bez podvýživy nebo změnou rovnováhy složek potravy je nejúčinnějším zásahem k prodloužení zdravé délky života u různých druhů, od kvasinek přes mouchy až po savce (Lin et al. 2000; Wood a kol., 2004; Bonkowski a kol., 2006; Wu a kol., 2013). U hlodavců může DR významně prodloužit délku života u normálních myší a myší s krátkou životností se sklonem k senescenci 8 (SAMP8) (Weindruch a Walford 1982; Choi a Kim 2000; Simons et al. 2013). U much lze také pozorovat výrazné prodloužení životnosti (Zheng et al. 2005; Soh et al. 2013). Ačkoli studie na primátech (opice rhesus) dosud nepřinesly definitivní výsledky týkající se účinku DR na mortalitu, je jasné, že DR u opic má příznivé fyziologické účinky podobné těm, které byly pozorovány u hlodavců a much (Colman et al. 2009; Mattison et kol. 2012). Ukázalo se, že prodloužení délky života pomocí DR je pravděpodobně zprostředkováno několika genetickými cestami zahrnujícími snímání živin a metabolismus, jako je inzulín/IGF, sirtuiny (Sir), SKN-1, cíl rapamycinu a proteinkináza aktivovaná AMP (AMPK) dráhy (Lin a kol. 2000; Kaeberlein a kol. 2005; Bishop a Guarente 2007; Alcedo a Kenyon 2004; Stenesen a kol. 2013). Zdá se, že Sir2/Sirt1 (Lin et al. 2004) a AMPK (Xiao et al. 2011) mohou být aktivovány zvýšenými poměry AMP/ATP, ADP/ATP nebo NAD/NADH, což odráží nižší stav buněčné energie. Ty zase indukují řadu následných signalizačních událostí, které transformují metabolický stav buněk ze spotřeby energie na její ukládání a tvorbu.

Vzhledem k praktickým limitům pro lidi při praktikování DR v každodenním životě se vývoj DR mimetik ukázal jako vzrušující pole pro výzkum proti stárnutí. Doplňky stravy obsahující nutraceutické sloučeniny nebo rostlinné extrakty mohou poskytnout bezpečné a účinné zásahy k prodloužení zdravého života. Ovocné extrakty z nektarinek a jablek, stejně jako bylinné extrakty z Rhodiola rosea a Curcuma longa, již prokázaly, že prodlužují životnost vrtulí, a to snížením oxidačního poškození (Boyd et al. 2011; Peng et al. 2011; Schriner a kol., 2009; Lee a kol., 2010; Schriner a kol., 2013). Hlavní složky identifikované v těchto rostlinách podporujících zdraví jako pravděpodobné kandidáty na účinky prodlužující životnost jsou polyfenoly, které mají potenciál působit jako lapače volných radikálů nebo redoxně aktivní chelátory kovů (Galleano et al. 2010). Resveratrol, polyfenolová sloučenina nacházející se převážně ve slupce červených hroznů, je nejznámějším příkladem této třídy molekul a bylo prokázáno, že prodlužuje životnost druhů tak evolučně vzdálených jako Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster a Nothobranchius. furzeri (Howitz a kol. 2003; Wood a kol. 2004; Valenzano a kol. 2006). Ačkoli byly prokázány antioxidační vlastnosti resveratrolu, hromadící se důkazy naznačují, že tato sloučenina může také působit jako silný aktivátor pro několik genů spojených s dlouhověkostí, včetně Sir2/Sirt1 zmíněných výše (Hubbard et al. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae) má široké rozšíření v tropických oblastech mnoha zemí světa. Ačkoli úplné chemické složení L. octovalvis nebylo plně popsáno, tato rostlina má dlouhou historii použití jako bylinný lék k léčbě různých stavů, včetně edému, nefritidy a hypotenze. Velké populace v Asii denně konzumují extrakt L. octovalvis (LOE) jako zdravý nápoj. Toxikologické hodnocení u myší naznačilo, že chronická léčba LOE může poskytnout imunoregulační, hepatoprotektivní a kardiovaskulární ochranné vlastnosti bez pozorovatelných vedlejších účinků (Kadum Yakob et al. 2012). Kromě toho se uvádí, že LOE má antibakteriální a protirakovinné účinky (Chen et al. 1989; Chang et al. 2004). V této studii jsme zkoumali účinky LOE proti stárnutí pomocí ovocných mušek a myší SAMP8 jako modelových organismů. Naše zjištění naznačují, že LOE se může vyvinout jako intervence proti stárnutí.

Metody

Příprava LOE

Celé rostliny L. octovalvis byly obvykle sbírány během letní sezóny a sušené rostliny byly získány z místní Zemědělské zlepšovací stanice a Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. na Tchaj-wanu. Kontrola kvality pro L. octovalvis byla sledována společností Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. a voucherový vzorek (č. 034) byl uložen v herbáři společnosti Hsiehyu Biotech Company Ltd. Pro přípravu LOE bylo 100 g prášku L. octovalvis namočeno do 400 g ml 95% ethanolu přes noc při 4 stupních a poté dvakrát extrahován při 55 stupních po dobu 30 minut. Supernatant byl centrifugován (při 8,000xg po dobu 5 minut) a filtrován (TOYO č. 1), aby se odstranily zbytky. LOE byl získán po dekompresním procesu.

Plynová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC-MS)

GC-MS analýza LOE byla provedena pomocí HP- 6890 plynového chromatografu a HP-5973 hmotnostně selektivního detektoru (MSD, Agilent Technologies), vybaveného kapilární plynovou chromatografickou kolonou HP-5MS (12,5 m×0,2 mm ID, 0,33 μm tloušťka filmu) (J&W Scientific). Vstřikovací objem byl 2 ul v režimu splitless a vstupní teplota byla 290 stupňů. Jako nosný plyn bylo použito helium (průtok 0,6 ml/min) a teplota pece byla naprogramována následovně: počáteční teplota: 35 stupňů, zvýšená o 5 stupňů/min na 90 stupňů, poté o 10 stupňů/min na 200 stupňů a nakonec o 20 stupňů/min na 290 stupňů, kde se udržovalo 8 min. Analýza byla provedena v režimu EI s ionizačním napětím fixovaným na 70 eV. Skenování (m/z 45-550) MSD bylo provedeno pomocí softwaru HP Chemistation.

2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH) aktivita pohlcující radikály a celkový obsah polyfenolů a flavonoidů

Aktivita vychytávání radikálů DPPH byla měřena za použití modifikované metody popsané dříve (Brand-Williams et al. 1995). Stručně, 100 ul různých koncentrací LOE, kyseliny askorbové, resveratrolu, skvalenu nebo sitosterolu (Sigma) bylo přidáno do 200 ul 100 μM DPPH v 96-mikrojamkových destičkách, aby se dosáhlo konečných koncentrací 0, 1, 5, 10 a 50 ug/ml. Reakční směs byla inkubována ve tmě při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Snížení absorbance bylo měřeno při 520 nm ve čtečce mikrodestiček (AccuReader 965). Celkové fenolické složky LOE byly stanoveny pomocí Folin-Ciocalteuova činidla, za použití kyseliny gallové jako standardu (Slinkard a Singleton 1977). Celý obsah flavonoidů byl měřen kolorimetrickým stanovením s chloridem hlinitým, přičemž jako standard byl použit rutin (Shih et al. 2010).

Buněčné kultury a Western blot analýzy

Buňky Drosophila Schneider (S2) byly pěstovány při 25 stupních v Schneiderově médiu Drosophila (Invitrogen), doplněném 10 procentem tepelně inaktivovaného fetálního hovězího séra (Gibco). Buňky byly ošetřeny různými koncentracemi LOE a -sitosterolu (Sigma) za normálních (1× médium, jak je uvedeno výše) podmínek růstu nebo za podmínek DR (0,5× médium, 1:1 ředění 1× média ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem ( PBS)) po dobu 12 hodin. Proteinové hladiny fosforu-AMPK a -tubulinu (protilátky od Cell Signaling Technology) byly analyzovány pomocí Western blotu, jak bylo popsáno dříve (Wang et al. 2005).

Testy much a životnosti

Zásoby Canton-S (CS), w1118, tukové tělo GeneSwitch driver S106 (Bloomington Stock Center #8151) a UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) byly vypěstovány na standardní sacharóze/kvasnicích/kukuřičné mouce . S106 panny byly kříženy s UASAMPK.RNAi samci v AMPK knockdown experimentech. Pro testy životnosti byly mouchy, které se uzavřely do 48 hodin (přibližně 100 samců a 100 samic), přemístěny do 1-l populační klece a udržovány ve zvlhčovaném inkubátoru s řízenou teplotou se 12-h zapnuto/ cyklus vypnutého světla při 25 stupních (Wang et al. 2009). Čerstvé jídlo bylo podáváno každý druhý den a byl hodnocen počet a pohlaví mrtvých much. Vysoce kalorické a nízkokalorické potraviny obsahovaly 15 nebo 5 procent dextrózy a droždí. Do všech potravin byla přidána dvě procenta agaru a 0,23 procenta Tegoseptu (Apex). K potravinám popsaným v každém experimentu byly přidány různé koncentrace LOE, skvalenu, -sitosterolu, RU486 (Mifepristone, Sigma) nebo kontrolního vehikula.

Krmení, plodnost a spontánní motorická aktivita much

Desetidenní mouchy chované na vysoce kalorickém krmivu obsahujícím různé koncentrace LOE byly přeneseny do čerstvých lahviček stejného krmiva s přídavkem 0,5 procenta FD&C no. 1 modré potravinářské barvivo. Po 24 hodinách bylo 10 much homogenizováno v jedné zkumavce obsahující PBS a množství požitého barviva bylo stanoveno spektrofotometrem pro absorbanci barviva při 625 nm. Plodnost samic byla stanovena denním počítáním vajíček vyprodukovaných třemi pářícími se páry. Mouchy byly denně převáděny do nových lahviček obsahujících vhodnou potravu a po dobu prvních 20 dnů dospělého života byl počítán a zaznamenáván počet nakladených vajec. Pro monitorování úrovní aktivity byly skleněné lahvičky obsahující jednoho samce mouchy na příslušném zdroji potravy umístěny do lokomotorických záznamových komor, které mají kruhové prstence zdrojů infračerveného světla; přerušení paprsku se zaznamenává jako aktivita (TriKinetics). Data byla zaznamenávána každých 20 s po dobu 72-h. Monitory aktivity byly umístěny ve výše popsaném inkubátoru.

Pavlovovská čichová asociativní krátkodobá paměť much

Mouchy v různém věku byly trénovány vystavením elektrošokům (70 V), které byly spárovány s jedním zápachem po dobu 60 sekund. Následně byly mouchy vystaveny druhému pachu bez elektrošoku po dobu 60 sekund. Mouchy byly ponechány v klidu po dobu 45 s a poté byly podrobeny testu T-bludiště po dobu 2 minut, ve kterém si musely vybrat mezi dvěma vůněmi. Používané vůně byly methylcyklohexanol (1:1, 000 ředění v minerálním oleji) nebo oktanol (1,5:1, 000 ředění v minerálním oleji). U všech experimentů bylo provedeno alespoň pět sezení pro každý párování zápach-elektrošok. Všechna data byla zprůměrována a jsou zobrazena jako procento indexu paměti pro každou skupinu. Výkonnostní index byl vypočten odečtením počtu much vstupujících do paže, ve které byl zápach spárován s elektrošokem, od počtu vstupujících do opačného ramene, kde zápach nebyl spárován s elektrošokem, a dělením celkovým počtem much.

Oxidační stres vyvolaný paraquatem a stanovení 4-hydroxy-2-nominálního (HNE)

Desetidenní mouchy chované na vysoce kalorické potravě obsahující různé koncentrace LOE byly přeneseny do lahviček s filtračním papírem namočeným v roztoku 0 nebo 20 mM paraquatu a 6 procentech dextrózy. Počet mrtvých much byl počítán každé 3 až 4 hodiny. Po 12 hodinách byly odebrány některé mouchy ošetřené paraquatem a HNE byla měřena pomocí soupravy OxiSelect™ HNE Addduct ELISA Kit (Cell Biolabs) podle protokolu poskytnutého výrobcem.

Zvířata

Všechny experimentální protokoly se řídily místními předpisy pro etiku zvířat. Myši SAMP8 byly chovány a udržovány v Modular Animal Caging System® (Alternative Design) a jejich potrava byla sterilizována gama zářením. V místnosti byl 12-h světelný cyklus zapnuto/vypnuto, přičemž fáze tmy začínala ve 20 hodin. U myší byl LOE přidáván do pitné vody v konečných koncentracích 0, 50 a 100 ug/ ml. Pravidelně byl sledován příjem potravy, spotřeba vody a změna tělesné hmotnosti.

Příprava RNA, syntéza cDNA a kvantitativní polymerázová řetězová reakce (qPCR)

Celková RNA byla připravena z alespoň 30 much pomocí RNeasy Mini Kit (Qiagen). RNA byla ošetřena DNázou a převedena na cDNA pomocí oligo-d(T)15 (Invitrogen) a reverzní transkriptázy SuperScript III (Invitrogen), jak bylo popsáno dříve (Chou et al. 2013). Reakce qPCR byly provedeny pomocí systému StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) a genově specifické primery byly CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA a CACATTTCGA AAAACTCCATGGGT pro AMPK- a GACGAAATGTCGAGGATGTCAGTGTGTCGAGGATGTCAGTCAG Byla provedena dvoukroková PCR reakce s denaturací při 95 stupních po dobu 15 s, nasedáním a prodlužováním spojenými při 60 stupních po dobu 1 minuty v celkem 40 cyklech. Úroveň exprese mRNA každého cílového genu ve srovnání s GAPDH byla kvantifikována odečtením: Cttarget − CtGAPDH=ΔCt. Rozdíl jednoho cyklu PCR se rovná dvojnásobné změně úrovně exprese mRNA. Jedinečnost amplikonů byla potvrzena pomocí disociačních křivek.

Nové rozpoznávání objektů, zvýšené T bludiště a testy v otevřeném poli

Pro nový test rozpoznávání objektů byly myši nejprve zvyklé na otevřený box (50 cm × 25 cm × 50 cm) po dobu 10 minut denně po dva po sobě jdoucí dny, aniž by byly přítomny žádné předměty. Třetí den byly myši umístěny do boxu na 2 minuty a poté byly každé myši předloženy dva podobné objekty. Čas strávený zkoumáním každého objektu byl zaznamenán během následujícího 5-minutového období (definovaného jako trénink). Myši byly poté vráceny do jejich domovské klece. O jednu, dvě nebo tři hodiny později byla stejná zvířata znovu testována po dobu 5 minut v boxu se známým a novým objektem (definovaným jako test paměti). Index diskriminace objektů byl vypočten odečtením času stráveného zkoumáním známého objektu od času stráveného zkoumáním nového objektu a jeho dělením celkovým časem stráveným zkoumáním obou objektů.

Maze zvýšeného T bylo upraveno z předchozích studií (Cruz-Morales et al. 2008; De-Mello a Carobrez 2002; Maia et al. 2010; Santos et al. 2006; Takahashi et al. 2005). Tvořilo ji jedno rameno obehnané stěnami vysokými 15 cm, kolmými na dvě protilehlá otevřená ramena. Tři ramena měla stejné rozměry (30 cm x 5 cm) a celý přístroj byl vyvýšen 50 cm nad podlahu. V den tréninku byla každá myš umístěna na distální konec uzavřené paže, čelem k průsečíku paží, a bylo jí umožněno prozkoumat uzavřenou paži. Zkouška skončila, když myš buď vstoupila do otevřené paže (všechny čtyři tlapky byly v oblasti otevřené paže) nebo zůstala v uzavřené paži po dobu 300 sekund. Počet pokusů potřebných k dosažení kritéria vyhýbání se byl použit k posouzení schopnosti myší učit se během tréninkových relací. Dvacet čtyři hodin po tréninku byly myši znovu vystaveny uzavřenému rameni a doba, po kterou zůstaly v uzavřeném rameni, byla zaznamenána jako hodnocení retence paměti.

Test na otevřeném poli byl proveden v otevřeném boxu (50 cm x 25 cm x 50 cm). Každá myš byla umístěna do středu otevřeného pole a bylo jí umožněno volně prozkoumávat zařízení po dobu 1 hodiny. Směr a rychlost pohybu každé myši byly zaznamenány automatickým pozorováním (Diagnostic and Research Instruments).

Výsledek

LOE-indukované prodloužení životnosti je spojeno s DR

Abychom otestovali, zda má LOE účinek proti stárnutí in vivo, nejprve jsme zkoumali životnost mušek CS chovaných na potravinách obsahujících různé koncentrace LOE. Samci mušek CS na vysoce kalorickém krmivu měli průměrnou životnost 41,5 dne a přidání 50, 100 a 1,000 ug/ml LOE do krmiva pro mouchy prodloužilo životnost samců much o 8,9, 16,1, respektive 9,6 procenta (obr. 1a a tabulka 1). Samice mušek CS na vysoce kalorickém krmivu měly průměrnou životnost pouze 32,2 dne, což je ve srovnání s jejich samčími protějšky kratší doba. LOE však vyvolalo ještě větší prodloužení životnosti u samic mušek CS, kde 100 ug/ml LOE mělo největší účinek (24,2 procenta prodloužení; obr. 1b a tabulka 1) a 100 ug/ml LOE také prodloužilo životnost u samců i samice w1118 letí, což naznačuje, že LOE-prodloužená životnost není omezena na CS genetické pozadí (obr. 1c, da tabulka 1).

Protože DR je dobře zdokumentovaná intervence pro prodloužení životnosti, chtěli jsme otestovat, zda by účinky LOE na dlouhověkost byly změněny DR. Samci a samice mušek CS chovaných na nízkokalorickém krmivu vykázali 17,8 a 49,4 procenta zvýšení průměrné délky života ve srovnání s muškami CS chovanými na vysoce kalorických krmivech (obr. 1e, f a tabulka 1). LOE však nevyvolalo prodloužení životnosti nad to, které již bylo pozorováno u kontrolních much na nízkokalorické potravě (obr. 1e, f a tabulka 1), což naznačuje vztah mezi LOE a prodloužením životnosti vyvolaným DR, což znamená, že tyto zásahy mohou jednat, alespoň částečně, stejnými cestami.

Chronická léčba LOE nevyvolává negativní kompromisy

Vzhledem k tomu, že prodloužení životnosti vyvolané LOE je potenciálně spojeno s dráhou DR, zkoumali jsme, zda LOE může snížit příjem potravy much a vést ke stavu podobnému DR. Sledovali jsme příjem potravy much pomocí standardního systému přidávání barviva do potravy (Wang et al. 2009). Samice mušek CS v průměru přijímaly mnohem více potravy ve srovnání se samci stejného věku, ale nebyl pozorován žádný rozdíl v příjmu potravy mezi kontrolními a muškami léčenými LOE u obou pohlaví (obr. 2a).

Kromě sníženého příjmu potravy mohou intervence, které prodlužují délku života, zahrnovat negativní kompromisy, jako je snížená plodnost a fyzická aktivita (Flatt a kol. 2008; Wang a kol. 2009; Sohal a Buchan 1981). Zjistili jsme, že mušky CS ošetřené LOE nevykazovaly žádný rozdíl v produkci vajec během prvních 20 dnů života v dospělosti (obr. 2b). Jak LOE ošetřené, tak kontrolní CS mouchy také vykazovaly normální cirkadiánní rytmus a spontánní motorickou aktivitu (obr. 2c), jak bylo uvedeno dříve (Wang et al. 2009).

LOE zmírňuje deficity paměti související s věkem u ovocných mušek a myší SAMP8

Funkční pokles neuronů je společným znakem procesu stárnutí. Zkoumali jsme funkční paměť much pomocí Pavlovova čichového asociativního testu krátkodobé paměti. Muchy CS na vysoce kalorickém jídle vykazovaly postupný kognitivní pokles v prvních 20 dnech života v dospělosti (obr. 3a). Tento pokles paměti byl zmírněn DR, se statisticky významným rozdílem pozorovaným v den 20 (obr. 3a, b). LOE také snížilo pokles paměti související s věkem v závislosti na dávce, přičemž mouchy na 100 ug/ml LOE dosáhly úrovně plató podobné té, která byla pozorována u much DR (obr. 3b).

Dále jsme zkoumali prokognitivní účinek LOE u myší SAMP8, o kterých je známo, že vyvíjejí časný nástup deficitů v učení a paměti a bylo prokázáno, že jsou vhodným modelem pro studium základních mechanismů Alzheimerovy choroby (Flood a Morley 1992, 1993). Chan a kol., 2006; Takeda 2009). V testech rozpoznávání nových objektů 3-měsíc staré myši SAMP8 vykazovaly trvalou rozpoznávací paměť až 3 hodiny po tréninku, přičemž trávily více času na novém objektu ve srovnání se známým objektem (obr. 3c, d). Toto zachování paměti však nebylo pozorováno u 8-měsíců starých myší SAMP8 (obr. 3c, d). Přidání LOE (100 ug/ml) do pitné vody po dobu 5 měsíců (počínaje stářím 3 měsíců) významně zvýšilo uchování rozpoznávací paměti u myší SAMP8, dokonce i 3 hodiny po tréninku (obr. 3d). Suplementace vodou 50 ug/ml LOE měla méně příznivých účinků, ale byla schopna zlepšit zachování paměti až na 2 hodiny (obr. 3d).

V testech ve zvýšeném T bludišti všechny skupiny myší vyžadovaly podobný počet tréninkových pokusů, aby dosáhly kritéria vyhýbání se, což naznačuje, že všechny myši měly podobné schopnosti učení (obr. 3e). V 24-h testech obnovy paměti vykazovaly pouze 8-měsíc staré, ale ne 3-měsíc staré myši SAMP8 významný deficit v uchování paměti (obr. 3f). Tento věkem podmíněný deficit paměti strachu u myší SAMP8 by také mohl být zachráněn 5-měsíčním doplňováním LOE v pitné vodě (obr. 3f). Prokognitivní účinky LOE pozorované výše nelze připsat žádné změně v obecné motorické aktivitě myší, protože v testech v otevřeném poli nebyl pozorován žádný rozdíl v cestovní rychlosti nebo vzdálenosti (obr. 3g a data neuvedena). Myši SAMP8, které dostávaly 5-měsíční léčbu LOE, nevykazovaly žádné účinky na příjem potravy nebo spotřebu vody a žádnou změnu tělesné hmotnosti (obr. 3h–j).

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】