Studie o analýze složek a antioxidační aktivitě polysacharidů z Cistanche Deserticola Deserticola

Abstraktní: V tomto článku byly neutrální cukr CLP1 a kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola získány extrakcí polysacharidu z Cistanche deserticola deserticola a čištěním surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola deserticola kolonovou chromatografií na celulóze DEAE. Obsah celkového cukru, kyseliny uronové a bílkovin v surovém polysacharidu Cistanche deserticola CLP, neutrálním cukru Cistanche deserticola CLP1 a kyselém cukru Cistanche deserticola CLP2 byl stanoven skenováním ultrafialového spektra a byla stanovena molekulová hmotnost a monosacharidové složení polysacharidu. Současně byl experimentálně analyzován obsah surového polysacharidu CLP Cistanche deserticola. Schopnost vychytávání radikálů DPPH a celková antioxidační kapacita neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola deserticola. Naměřená data ukázala, že složení surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola deserticola, neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola deserticola byly podobné, ale obsah byl výrazně odlišný; Neutrální cukr CLP1 z Cistanche deserticola deserticola a kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola deserticola mohou získat více elučních píku, když jsou separovány a purifikovány na DEAE celulózové chromatografické koloně a molekulová hmotnost je mezi 0 a 10 000 Da, což naznačuje že hlavní složkou polysacharidu Cistanche deserticola deserticola je malomolekulární cukr. Monosacharidy neutrálního cukru CLP1 v Cistanche deserticola deserticola ukázaly, že monosacharidy obsažené v neutrálním cukru CLP1 v Cistanche deserticola deserticola deserticola byly hlavně manóza, galaktóza uronová kyselina, glukóza, galaktóza a arabinóza; Výsledky stanovení monosacharidů kyselého cukru Cistanche deserticola CLP2 ukázaly, že monosacharidy obsažené v kyselém cukru Cistanche deserticola CLP2 byly především ramnóza, galaktóza uronová kyselina, glukóza a galaktóza. Experiment vychytávání volných radikálů DPPH a experiment celkové antioxidační kapacity polysacharidů v Cistanche deserticola ukázaly, že antioxidační kapacita neutrálního cukru CLP1 v Cistanche deserticola byla vyšší než u surového polysacharidu CLP v Cistanche deserticola a kyselého cukru CLP2 v Cistanche deserticola.

Klíčová slova: Cistanche deserticola; polysacharidy; Analýza komponent; Antioxidační aktivita; absorbance

Experiment Cistanche deserticola

Cistanche deserticola deserticola je druh bylinné parazitické rostliny, která obsahuje velké množství fenolických glykosidů, alkaloidů, fenethylalkoholových glykosidů, cukrů a alkoholů. Mezi nimi jsou cukry především ve formě polysacharidů. Polysacharidy Cistanche deserticola mají silnou funkci regulace imunitní aktivity [1-2]. Jako intermediární metabolit v lidských životních aktivitách jsou volné radikály v nestabilním stavu a mají vysokou intenzitu oxidační aktivity, která způsobí poškození tkání a orgánů biomakromolekul v lidském těle. Hlavním směrem současných Food studií se proto stalo používání přírodních antioxidantů k odstranění volných radikálů. Polysacharidové složky v Cistanche deserticola mají silnou antioxidační kapacitu, která může podporovat eliminaci volných radikálů v lidském těle [3].

Výhody cistanche tubulosa — Antioxidant

V tomto článku byla jako výzkumný objekt vzata Cistanche deserticola deserticola a polysacharidové látky byly extrahovány a klasifikovány. Molekulová hmotnost polysacharidových látek Cistanche deserticola deserticola byla měřena vysokoúčinnou gelovou permeační chromatografií. Zároveň bylo hloubkově analyzováno složení polysacharidových látek. Antioxidační aktivita polysacharidu Cistanche deserticola deserticola byla analyzována měřením kapacity vychytávání volných radikálů a celkové antioxidační kapacity polysacharidových složek Cistanche deserticola deserticola. Poskytuje teoretický základ pro vývoj a využití Cistanche deserticola deserticola a podporu přidané hodnoty.

Pouštní žijící cistanche

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Příprava vzorku Cistanche deserticola

Odvažte 2,5 kg Cistanche deserticola, nakrájejte ji, přidejte 12,5 l destilované vody a vařte 3 hodiny. Po varu zfiltrujeme a filtrát shromáždíme. Přidejte 75 procent ethanolu a nechte stát 24 hodin. Centrifugujte jej při 4000 ot./min po dobu 30 minut, shromážděte sediment a sediment zmrazte a vysušte, abyste získali surový polysacharid CLP z Cistanche deserticola [4]. Vezměte DEAE celulózu, před odplyněním ji namočte a nabobtnajte, vložte ji do DEAE celulózové aniontově výměnné chromatografické kolony a vyvažte ji destilovanou vodou a roztokem NaCl. Naváží se 100 mg surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola deserticola a rozpustí se v 10 ml destilované vody. Po promytí destilovanou vodou shromážděte eluční činidlo a zakoncentrujte jej pro lyofilizaci za získání neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola; Po eluci roztokem NaCl byl eluent shromážděn, zakoncentrován a lyofilizován po dialýze za získání kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola [5].

Připravte neutrální cukr CLP1 a kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola do polysacharidových roztoků o koncentraci 1 mg/ml. Pro skenování UV spektroskopií použijte 210-600nm spektrofotometr. Když se objeví pík při 260-280nm, je potvrzeno, že roztok obsahuje protein a nukleovou kyselinu [6].

Hlavní chemické složky Cistanche deserticola

2 Stanovení polysacharidových složek Cistanche deserticola

Obsah celkového cukru v Cistanche deserticola byl stanoven metodou fenolsírové kyseliny. Změřte {{0}}, 0,2, 0,4, 0,6, {{10}},8 a 1 ml roztoky glukózy o koncentraci 0,1 mg/ml a umístěte je do skleněných zkumavek. Přidejte destilovanou vodu do konstantního objemu 1 ml a poté do zkumavek přidejte 0,5 ml fenolového činidla s koncentrací 6 procent a 2,5 ml koncentrované kyseliny sírové. Dobře protřepejte a ochlaďte na pokojovou teplotu. Pomocí spektrofotometru změřte absorbanci při 490 nm s obsahem cukru na ose x a absorbancí na ose y, nakreslete standardní křivku a vypočítejte regresní rovnici [7-8].

Pro stanovení obsahu bílkovin ve vzorcích Cistanche deserticola byla použita metoda Coomassie brilantní modři. Odeberte 1 ml standardních vzorků s různými koncentracemi a roztoky vzorků s koncentracemi 0,1 mg/ml, v tomto pořadí přidejte 4 ml roztoku Coomassie brilantní modři do každé zkumavky, dobře protřepejte a poté nechte stát. Pomocí spektrofotometru změřte absorbanci při 495 nm a vypočítejte obsah proteinu ve vzorku podle rovnice standardní křivky [9].

Obsah kyseliny uronové v Cistanche deserticola byl stanoven m-hydroxyfenylovou metodou. Vezměte 0,4 ml standardního roztoku s různými koncentracemi a roztok vzorku s koncentrací 0,1 mg/mL, přidejte 2,5 ml koncentrované kyseliny sírové do zkumavky, dobře protřepejte a poté proveďte 25min vroucí vodní lázeň, vyjměte ji a ochlaďte na pokojovou teplotu, přidejte m-hydroxyfenyl o koncentraci 0,3 procenta a roztok hydroxidu sodného o koncentraci 0,5 procenta do zkumavku, dobře ji protřepejte a poté ji umístěte na 30 minut. Pomocí spektrofotometru změřte absorbanci při 525 nm a vypočítejte obsah kyseliny uronové ve vzorku podle rovnice standardní křivky [10-11]. Relativní molekulová hmotnost polysacharidu Cistanche deserticola byla stanovena vysokoúčinnou gelovou chromatografií a monosacharidové složení Cistanche deserticola deserticola bylo stanoveno vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií [12].

3 Výsledky stanovení a analýzy polysacharidových složek Cistanche deserticola

Křivka skenování UV spektra fotometru při 210-600nm je znázorněna na obrázku 1

Obrázek 1 UV spektrální skenovací křivka (210-600nm)

Z obrázku 1 je vidět, že neutrální cukr CLP1 z Cistanche deserticola deserticola má zřejmý absorpční vrchol při 280 nm a kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola deserticola deserticola nemá zřejmý absorpční vrchol při 260-280 nm, ale UV absorpční spektrum je vysoké. Protože tryptofan a tyrosin obsažené v proteinu mají vysokou absorpční hodnotu pro ultrafialové světlo při 280 nm, lze určit, že neutrální cukr CLP1 z Cistanche deserticola obsahuje glykoprotein a není možné určit, zda kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola obsahuje nukleové kyseliny. kyseliny a bílkoviny.

DEAE celulózová aniontoměničová chromatografická kolonová chromatografie může adsorbovat iontové látky a nečistoty na chromatografické koloně pro realizaci separace polysacharidových látek. Po zahuštění a vysušení promývacího roztoku destilované vody bylo od Cistanche deserticola získáno celkem 34,68 mg neutrálního cukru CLP1 a po eluci, zahuštění a vysušení roztokem NaCl bylo od Cistanche získáno celkem 16,52 mg kyselého cukru CLP2. deserticola. Během experimentu byly získány rovnice standardní křivky obsahu celkového cukru, obsahu bílkovin a kyseliny uronové z Cistanche deserticola. Byly měřeny obsahy celkového cukru, bílkovin a kyseliny uronové v Cistanche deserticola, jak je uvedeno v tabulce 1.

Tabulka 1 Celkový obsah cukru, bílkovin a kyseliny uronové v Cistanche deserticola

Regresní rovnici lze získat stanovením molekulové hmotnosti a plochy píku standardního vzorku. Molekulová hmotnost vzorku, který má být testován, může být získána dosazením hodnoty fotoemisního signálu vzorku, který má být testován, do regresní rovnice. Další analýzou a výpočtem lze získat číselnou průměrnou molekulovou hmotnost, hmotnostní průměrnou molekulovou hmotnost a disperzní koeficient neutrálního cukru CLP1 a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola. Výsledky výpočtu retenčního času a molekulové hmotnosti vysoce účinného gelového permeačního chromatogramu neutrálního cukru Cistanche deserticola CLP1 a kyselého cukru Cistanche deserticola CLP2 jsou uvedeny v tabulce 2. Číselná průměrná molekulová hmotnost se používá k vyjádření velikosti měřené molekuly. a poměr hmotnostní průměrné molekulové hmotnosti k číselné průměrné molekulové hmotnosti se používá k vyjádření šířky distribuce molekul.

Tabulka 2 Výsledky výpočtu doby stanovení retenčního píku a molekulové hmotnosti

Z tabulky 2 je vidět, že rozmezí distribuce molekulové hmotnosti neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola je 0~10 000 Da, což naznačuje, že polysacharid v Cistanche deserticola je malý molekulový polysacharid s různými molekulami a molekulová hmotnost vykazuje heterogenitu. Lze odvodit, že neutrální cukr CLP1 z Cistanche deserticola a kyselý cukr CLP2 z Cistanche deserticola jsou směsi několika polysacharidových látek.

Viz Tabulka 3 pro HPLC píky a retenční časy píku devíti standardních vzorků monosacharidů, neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola deserticola. Porovnáním doby špičky lze dojít k závěru, že existuje pět zjevných monosacharidů v neutrálním cukru CLP1 z Cistanche deserticola a čtyři zřejmé monosacharidy v kyselém cukru CLP2 z Cistanche deserticola. Podíl monosacharidů v neutrálním cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola a kyselém cukru CLP2 z Cistanche deserticola deserticola je uveden v tabulce 4.

Tabulka 3 Retenční doba vrcholů monosacharidové vysoce výkonné kapalinové chromatografie

Tabulka 4 Podíl monosacharidů v Cistanche deserticola

Obsah monosacharidů v neutrálním cukru CLP1 z Cistanche deserticola po hydrolýze je významně odlišný od obsahu monosacharidu v kyselém cukru CLP2 z Cistanche deserticola. Obsah glukózy v neutrálním cukru CLP1 Cistanche deserticola je až 88,62 procent, obsah glukózy v kyselém cukru CLP2 v Cistanche deserticola je pouze 9,99 procent a obsah aldehydové kyseliny galaktózy, galaktózy a ramnózy v kyselém cukru CLP2 Cistanche deserticola jsou všechny více než 5 procent.

4 Analýza antioxidační aktivity polysacharidu Cistanche deserticola

Během antioxidační experimentální analýzy polysacharidu Cistanche deserticola deserticola byl polysacharid Cistanche deserticola deserticola připraven do roztoku polysacharidu Cistanche deserticola deserticola o koncentraci {{0}}, 0,25, 0 0,5, 1.0, 2.{10}}, 4,0 mg/ml, a rychlost vychytávání volných radikálů DPPH a celková antioxidační kapacita roztoku. Během stanovení rychlosti vychytávání volných radikálů DPPH roztoku polysacharidu Cistanche deserticola deserticola přidejte 2 × Celkem 2 ml 10-4mol/l DPPH byly rovnoměrně promíchány a umístěny na 15 minut do tmavého prostředí. Roztok byl centrifugován při rychlosti centrifugy 4000 ot/min a době centrifugace 15 minut. Pomocí spektrofotometru změřte hodnotu absorbance roztoku při vlně 517 nm, ze které lze získat rychlost vychytávání radikálů DPPH roztoku polysacharidu Cistanche deserticola deserticola, jak je uvedeno v tabulce 5.

Tabulka 5 Rychlost vychytávání radikálů DPPH roztoku polysacharidu Cistanche deserticola

Z tabulky 5 je vidět, že rychlost vychytávání surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola a neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola na volných radikálech DPPH je významně vyšší než u kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola na volných radikálech DPPH. Když je koncentrace roztoku nižší než 2.0mg/ml, rychlost vychytávání radikálů DPPH surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola deserticola a neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola se postupně zvyšuje se zvyšující se koncentrací a se konečně stává stabilní.

Při stanovení celkové antioxidační kapacity polysacharidu Cistanche deserticola deserticola byla pro rychlou detekci použita testovací souprava antioxidační kapacity. Vezměte standardní detekční roztok Trolox a nařeďte jej destilovanou vodou na {{0}}, 0,25, 0,5, 1.0, 2.{101} {10}}, respektive 4,0 mg/ml. Přidejte pracovní roztok peroxidázy na destičku s detekčními jamkami, poté přidejte vzorek nebo standardní detekční roztok, který chcete testovat, a nakonec přidejte pracovní roztok soupravy pro rychlou detekci. Dobře promíchejte a nechte 6 minut stát. Celková antioxidační kapacita polysacharidu Cistanche deserticola byla stanovena čtečkou mikrodestiček při vlnové délce 405nm a 734nm [14-15]. V tabulce 6 jsou uvedeny výsledky testu celkového účinku antioxidantu roztoku polysacharidu Cistanche deserticola deserticola.

Tabulka 6 Celková antioxidační kapacita roztoku polysacharidu Cistanche deserticola

Z tabulky 6 je vidět, že když je koncentrace roztoku Cistanche deserticola nižší než 4.0mg/ml, celková antioxidační kapacita surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola, neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola a kyselého cukru CLP2 u Cistanche deserticola se zvyšuje se zvyšující se koncentrací roztoku; Antioxidační kapacita neutrálního cukru CLP1 z Cistanche deserticola deserticola je významně vyšší než u surového polysacharidu CLP z Cistanche deserticola deserticola deserticola a kyselého cukru CLP2 z Cistanche deserticola deserticola deserticola.

Čaj Cistanche

5 Závěr

Výsledky analýzy polysacharidu Cistanche deserticola deserticola vysokoúčinnou gelovou permeační chromatografií ukázaly, že molekulová hmotnost polysacharidu v něm obsaženého nebyla větší než 10 000 Da a obsahoval více elučních píku. Polysacharid Cistanche deserticola deserticola měl určité antioxidační vlastnosti. Výsledky této studie položily základ pro další rozvoj a využití Cistanche deserticola.

Reference:

 [1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen a kol. Pokrok ve výzkumu hlavních chemických složek a biologických aktivit Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2019, 42 (9): 1896-1900

[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Optimalizace procesu dvojité enzymatické extrakce pro česnekové polysacharidy a jeho antioxidační aktivita in vitro ［ J ］. Čínská koření, 2020, 45 (10): 30-35, 48

[3] Yang Ting, Eladan McIntyre, Tao Yichun a kol. Stanovení obsahu polysacharidů a antioxidační aktivity Cistanche tubulosa dregs ［ J ］. Journal of Xinjiang Medical University, 2019, 42 (2): 234-236241

[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin a kol. Studie technologie extrakce rozpouštědlem fenethylalkoholových glykosidů z Cistanche tubulosa [J]. Food Science and Technology, 2019, 44 (4): 225-229

[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Studie o procesu bleskové extrakce glykosidů echinacey a Verbascum thapsus v Cistanche deserticola ［ J ］. Lékařská dieta a zdraví, 2020, 18 (23): 27-28

[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui a kol. Vliv ošetření ultrazvukem na reologické vlastnosti polysacharidu Cistanche deserticola deserticola ［ J ］. Bulletin of Biology, 2021, 56 (2): 48-53

[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan a kol. Účinky různých hostitelů, stanovišť a dat sklizně na obsah aktivních složek v Cistanche deserticola ［ J ］. Chinese Wild Plant Resources, 2021, 40 (5): 18-23

[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu a kol. Studie fyzikálně-chemických vlastností a antioxidační aktivity polysacharidu Auricularia auricula bohatého na selen ［ J ］. Čínské aroma, 2021, 46 (6): 54-59

[9] Chen Yuebai. Screening procesu extrakce lentinanu a analýza současného stavu výzkumu jeho zdravotních účinků [J]. Čínské aroma, 2021, 46 (8): 189-191

[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi a kol. Analýza složení a antioxidační aktivita polysacharidů z Cistanche deserticola v Lanzhou ［ J ］. Food Industry Science and Technology, 2021, 42 (15): 96-103

[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru a kol. Rychlá kvalitativní analýza chemických složek Cistanche salsa metodou přímého vstřikování vícestupňové hmotnostní spektrometrie s plným skenováním ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2021, 46 (16): 4150-4156

[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Optimalizace extrakčního procesu a antioxidační aktivity polysacharidu z Macrocybe gigantea metodou odezvy povrchu ［ J ］. Chinese Condiments, 2021, 46 (10): 78-82

[13] Xu Sheng, Chai Shasha. Metoda rychlé detekce hlavních účinných látek v Cistanche deserticola [J]. Journal of Wuhan Odborná a technická vysoká škola, 2021, 20 (4): 116-120

[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele a kol. Optimalizace procesu extrakce Lentinanu na základě kvadratické regresní rotační ortogonální metody ［ J ］. Čínské aroma, 2021,46 (11): 88-93

[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting a kol. Simultánní stanovení vícesložkového obsahu Cistanche deserticola pomocí reverzní fáze hydrofilní interakční chromatografie přizpůsobená multireakční monitorovací metodě [J]. Analytická chemie, 2020, 48 (11): 1573-1593