Studie o vlivu imunity u myší

Pro více informací prosím kontaktujtedavid.wan@wecistanche.com

Dva ze třiceti mužůDBA/2NCrl(D2N)myši použité jako kontrolní kmen při analýze dat pozadíDBA/2N-MDXmyši s abnormálními nálezy naznačujícími infekci. Případ 1: 4-týdenní samec myši D2N vykazoval léze bílého plaku v levé ledvině (bez klinických příznaků) a bylo provedeno patologické vyšetření ledviny. Infiltrace zánětlivých buněk, především neutrofilů, byla pozorována v tubulech a intersticiu levé ledviny a Staphylococcus aureus (S.aureus) byl detekován z levého renálního segmentu. Proto byla tato léze na levé ledvině diagnostikována jako hnisavátubulointersticiálnínefritida způsobená infekcí S. aureus. Případ 2: Levá torticollis se ztrátou hmotnosti byla detekována u 9-týdenního samce myši D2N. Histologické vyšetření odhalilo exsudativní zánět kolem faryngeálního ústí eustachových trubic a hnisavý zánět středního ucha a levého vnitřního ucha s tvorbou abscesů a shluků jako grampozitivní mikrokolonie. S. aureus byl identifikován z výtěrů kultur obou zevních zvukovodů. V důsledku toho byl tento případ torticollis způsoben S. aureus-hnisavým zánětem středního ucha a internetem. S. aureus je dobře známý jako oportunní patogen s potenciálem často způsobovat hnisavá onemocnění u imunokompetentních laboratorních zvířat. Nicméně, pokud je nám známo, tento případ infekce S. aureus prezentovaný torticollis u myši D2N není hlášen.

Kliknutím sem se dozvíte více o Cistanche

Izoláty Staphylococcus aureus (MRSA) rezistentní na meticilin se objevily u laboratorní myši v Centru pro vědu o laboratorních zvířatech Národní obranné lékařské akademie v roce 2018 aMRSAizoláty byly získány z myší také v dalších myších místnostech poté. U těchto izolátů MRSA byla provedena molekulární typizace, jako je Multi-locus sekvenční typizace (MLST), Staphylococcus aureus Protein A(spa) typizace, SCCmec typizace a koagulázová typizace pro určení jejich genotypů. Všechny izoláty odhalily identické genotypy (ST1, spa t1784, SCCmec typ IV a koaguláza typ VII), což naznačuje, že izoláty byly identické klony. Před vznikem MRSA v roce 2018 nebyly v tomto zařízení izolovány žádné izoláty s takovými genotypy, předpokládalo se, že klon MRSA byl do zařízení dovezen prostřednictvím lidí nebo laboratorních zvířat. ST11 je první komunitou získanou MRSA získanou od dětí ve Spojených státech, avšak ST1 je v současnosti získávána od lidí a zvířat po celém světě. V Japonsku byly kmeny ST1 a SCCmec typu IV izolovány z lidí a koček, což naznačuje, že ST1 se přenáší mezi lidmi a zvířaty. Kmen MRSA s těmito genotypy, ale také se spa tl784, byl získán z lidí. V současné době je rozdíl mezi MRSA získanými v nemocnici, MRSA získanými v komunitě a MRSA související s hospodářskými zvířaty nejednoznačnější. Tyto výsledky naznačují, že myši mohou působit jako rezervoáry MRSA.

V nedávné imunoterapii rakoviny je aktivita molekul, jako je PD-1, inhibována, aby se zvýšila aktivita imunitních buněk proti rakovině. I přes vysoký léčebný efekt existují případy, kdy se v imunoterapii rakoviny rozvine autoimunitní onemocnění. Zde jsme vytvořili systém, který dokáže degradovat PD-1 časově specifickým způsobem v kultivovaných buňkách a myších pomocíSystém SMASh degron. Fúzní protein PD-1-SMASh v buňkách Jurkat a CD3 plus splenocytech byl snížen o 1 den po podání Asunapreviru (ASV) nebo Grazopreviru (GRV), což jsou inhibitory proteázy NS3/4A. Růst buněk adenokarcinomu MC-38 inokulovaných u PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) myší s ASV byl potlačen ve srovnání s divokým typem (WT) a neléčenými KI myšmi. Navíc WT myši, kterým byly transplantovány buňky kostní dřeně KI po ozáření letálním zářením, mohly odmítnout buňky MC-38 s GRV. Myši KI vypadaly zdravé a nevykazovaly žádné známky autoimunitního onemocnění. Domníváme se, že se očekává, že použití degronového systému v živých organismech pokročí nejen v různých biologických studiích, ale i v léčbě nemocí.

Progesteron (P4) je vylučován z placenty k udržení gestace a funguje jako imunitní regulátor. Glukokortikoid je dalšíimunitní-regulačnísteroidy k regulaci zánětu. V této studii byly lidské periferní krevní mononukleární buňky (PBMC) transplantovány do NOG myší k vyvolání reakce štěpu proti hostiteli (GVHD) a použity pro srovnání mezi účinky P4 a kortizolu (COR). PBMC byly stimulovány v přítomnosti různých koncentrací P4 nebo COR a buňky byly analyzovány průtokovou cytometrií (FCM). Alikvoty zPBMCbyly transplantovány NOG myším a P4 nebo COR byly injikovány myším dvakrát týdně. Po 28 dnech byly provedeny FCM a imunohistochemické analýzy. V důsledku toho vysoká koncentrace P4 inhibovala aktivaci T buněk in vitro, zatímco inhibice po odstranění nepokračovala. Potlačení aktivace T buněk bylo menší při léčbě COR ve srovnání s P4 a vyčerpání T buněk bylo výraznější. Myši s injekcí P4-nesly více splenocytů, zejména CD8 T buněk, ve srovnání s kontrolními myšmi. Nicméně nižší exprese CD25, menší infiltrace lidských T buněk do plic a jater a méněGVHDbyly pozorovány příznaky. Na druhé straně byl počet splenocytů, zejména T buněk, u myší s injekcí COR významně nižší a aktivované/vyčerpané buňky byly hojné. Tyto výsledky naznačují, že P4 preferuje udržování T buněk ve srovnání s COR in vitro.

Helicobacter hepaticus a Helicobacter bills jsou známé jako patogeny, které způsobují hepatitidu a kolitidu u myší. Existence několika pozitivních případů je stále každoročně potvrzena v zařízeních pro experimentální zvířata v Japonsku. Jako vzorek pro PCR testování H. hepaticus a H. bilis je nejlepší použít obsah slepého střeva nebo čerstvé výkaly.

V poslední době jsou transportní a skladovací činidla DNA a RNA vyráběna různými výrobci. Očekává se, že tyto reagencie budou problémy při přepravě vzorků používaných pro testy PCR budou odstraněny. Proto byla v této studii prozkoumána užitečnost činidla pro uchovávání nukleové kyseliny provedením PCR testu Helicobacter s použitím obsahu slepého střeva konzervovaného za použití činidla pro uchování nukleové kyseliny. Výsledkem bylo, že vzorky skladované po dobu 7 dnů s použitím konzervačního roztoku mohly být detekovány Helicobacter na stejné úrovni jako čerstvý vzorek. Z výše uvedeného bylo navrženo, že v PCR testu Helicobacter, I když přeprava trvá dny, je možné provést test s vysokou přesností přepravou vzorku ponořeného do reagencie pro skladování nukleové kyseliny letem v chladničce.

Již dříve jsme vyvinuli mutantní kmeny E. coli s významně zvýšenou adherencí k in vitro pevným povrchům modifikací genů, které reagují na hladovění živinami. Abychom vyhodnotili interakci mezi těmito kmeny E. coli se zvýšenou adhezí (AEE) a in vivo střevním prostředím, hodnotili jsme jejich schopnost kolonizace střevního traktu inokulací myší.

Před hodnotícím experimentem jsme transformovali AEE plazmidem exprimujícím luciferázu pro vizualizaci in vivo. jak byly orálně naočkovány hladovějícím myším a každých několik dní odebírány výkaly. Počet živýchAEEbyla odhadnuta měřením CFU ze shromážděných výkalů.

Výsledkem bylo, že ve srovnání s kontrolním kmenem byly AEE hojnější ve stolici po dobu delší než jeden týden, což ukazuje na zvýšenou kolonizaci ve střevním traktu. Pozorováním lokalizace luminiscence luciferázy neinvazivním zobrazováním pomocí IVIS bylo také zjištěno, že AEE mají tendenci kolonizovat slepé střevo a tlusté střevo.

[Cíl] V současné době [Pasteurella]pneumotropicabyl překlasifikován jako nový rod Rodentibacter. Z nich R.pneumotropicus a R. Healy jsou hlavními cíli mikrobiologického sledování u hlodavců. Izolovali jsme řadu Rodentibacter sp. které nebylo možné identifikovat jako druhy z hlodavců. V této studii zkoumáme charakteristiky Rodentibacter sp. izolát se zaměřením na bakteriální virulenci. [Metody] Rodentibacter sp. které byly izolovány z krysí průdušnice byly použity pro studii. Návrh sekvenování genomu byl proveden na sekvenátoru nové generace a poté byly předpovězeny geny spojené s virulencí. V experimentech na zvířatech byly myši Rag2 použity pro Rodentibacter sp. infekce.|Výsledky| Návrhem sekvenování genomu byl identifikován jedinečný gen kódující toxin RTX u Rodentibacter sp. Proteinová sekvence toxinu RTX byla homolognější k těm produkovaným Enterobacteriaceae než Pasteurellaceae. V experimentu na zvířatech byla téměř u všech infikovaných myší Rag 2 potvrzena smrtelná pneumonie nebo septikémie. Ačkoli izolát nemohl být identifikován jako R. pneumotropicus a R. heylii, tento blízce příbuzný druh může být letální pro zvířata s oslabenou imunitou v přítomnosti faktorů virulence, jako je toxin RTX.

V programu NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) jsme sekvenovali genomy myších oportunních patogenních bakterií a provedliRNAseqProtozoa u myší, aby se vyvinuly testy PCR pro tyto organismy. Tyto výsledky jsme použili k analýze Rodentibacter spp. a prvoky u potkanů ​​ve spolupráci s Kyoto University (NBRP Rat). Zde uvádíme výsledky testů na vzorcích potkanů. [Metody] Sekvence genu 16S rRNA o velikosti asi 1,5 kbp byly přečteny pomocí PCR pro šest izolátů krysy Rodentibacter spp. a návrh sekvence genomu jednoho izolátu (č. 25) byl stanoven pomocí Illumina HiSeq 2500. Byla provedena PCR s obsahem krysího slepého střeva provedeno na základě výsledků RNAseq myších prvoků. [Výsledky] Sekvence genu 16S rRNA všech izolátů byly identické a byly identifikovány jako Rodentibacter Ratti analýzou OTU. Resekvenování izolátu #25 také odhalilo, že tento kmen byl R. Ratti. PCR pro myší prvoky poskytla pozitivní výsledky pro potkaní amébu. U Trichomonas nebyly získány žádné pozitivní výsledkyPCRna krysích exemplářích. [Diskuse] Krysí izoláty Rodentibacter spp. v této zprávě zkoumali všichni R. Ratti. Při provádění testů na hlodavce u potkanů ​​je důležité si uvědomit přítomnost R. Ratti. Některé vzorky trusu potkanů ​​vykázaly pozitivní na myší amébu PCR. Toto je první krok ve vývoji PCR pro detekci prvoků u potkanů.

Rodentibacter organismy 'Pasteurella pneumotropica' jsou oportunní patogenní bakterie, které způsobují respirační onemocnění u myší a potkanů. Dříve byly řazeny do rodu Pasteurella a několik kmenů bylo předběžně navrženo jako biotypy. V roce 2017 byli kolektivně reorganizováni do rodu Rodentibacter. Kmeny MaM a MaR byly izolovány z myší a potkanů ​​kolem 80. let 20. století. V této studii jsme určili genomové sekvence obou kmenů a porovnali je se sekvencemi rodu Rodentibacter, materiály a metodyKmeny MaM a MaR byly získány z National Institute of Infectious Diseases (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Oba kmeny byly pěstovány v kapalné kultuře, aby se extrahovala genomová DNA, a genomové sekvence byly určeny pomocí Illumina Hiseq 2500 a PacBio Sequel. [Výsledky] Na základě genové sekvence 16S rRNA byl kmen MaM identifikován jako R.pneumotropicus a kmen MaR jako R. Ratti. Dále byla stanovena kompletní sekvence genomu (2 213 961 bp) kmene MaR (počet rRNA operonů byl 6 a počet genů byl odhadnut na 2 063). [Diskuse Kmeny MaM a MaR byly použity jako standardy pro identifikaci 'Pasteurella pneumotropica' v Japonsku. Z této analýzy jsme určili druhy obou kmenů následovně: kmen MaM je R.pneumotropicus a kmen MaR je R.ratti. Je pozoruhodné, že tyto výsledky ukazují, že R. Ratti může být izolován z krys v Japonsku.

Clostridium pili for me (CP) je vnímavé k infekčním u různých laboratorních zvířat včetně potkanů ​​a myší a vykazuje asymptomatické infekce s výjimkou zvířat s oslabenou imunitou. Je považována za hlavní diferenciální diagnózu pro udržování zařízení pro zvířata a je dobře známo, že ovlivňuje experimentální data ze studií na zvířatech. Sérodiagnostika (ELISA, IFA) a PCR se běžně používají pro diagnostiku CP, protože izolace v umělém živném médiu je pro CP obtížná. Existence nespecifické protilátky indikující zkříženou reaktivitu s CP pomocí sérodiagnostiky je však hlášena a v podobných případech je v našich zařízeních často rozpoznána. Metoda PCR má navíc limity jako spolehlivá diagnostická metoda s periodickým monitorováním, protože CP je ve stolici po zvyšujícím se titru protilátek nedetekovatelný. Nedávno jsme zkoumali jiný přístup, konzervování výkalů zvířat každý měsíc. PCR test na CP neovlivněný vlivem protilátek jsme přijali jako spolehlivější diagnostiku pomocí kontinuálně konzervované stolice. V tomto přehledu ukazujeme nedávný případ. (nespecifická protilátka) vést ke kontrole toku vyvíjejícího se v naší společnosti.