Význam různých limitů obsahu pro komponenty markerů Cistanche Deserticola a C. tubulofloris v čínské farmakopoeia založené na diferenciálních složkách ⅱ

Abstraktní

Objektivní:Studovat diferenciální komponenty a porovnat jejich obsah mezi Cistanche Tubulosa a C. Deserticola a analyzovat význam různých limitů obsahu pro komponenty markerů mezi dvěma rostlinami v čínské farmakopoeii (vydání 2020). Metody: Diferenciální složky byly identifikovány pomocí kapalné chromatographymassové spektrometrie kombinované s multivariační statistickou analýzou a obsah diferenciálních složek byl stanoven vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií. Výsledky: Diferenciální sloučeniny byly cistanosid A, isoacteosid, echinacosid a acteosid. Echinacoside měl nejvyšší obsah v obou rostlinách, následovaný akteosidem. Obsah echinakosidu, akteosidu a isoacteosidu v C. tubulosa byl vyšší než obsah C. deserticola (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Klíčová slova: Cistanche Deserticola;Cistanche Tubulosa; Cistanoside a;; isoacteoside;echinacoside; Acteoside

 

 

 

 

CiStanche Deserticolaje sušená masa stonku s šupinatými listy Cistanche Deserticola YC Ma nebo CiStanche Tubulosa (Schenk) Wight, rostlina rodiny Orobanchaceae [1]. Jedná se o tonikum a léčivé jídlo, známé jako „pouštní ženšen“. To je hlavně distribuováno ve vnitřním Mongolsku, Ningxii, Gansu, Xinjiangu a dalších regionech [2]. CiStanche Deserticola má teplé povahy, sladká a slaná chuť a vstupuje do ledvin a meridiánů ledvin a tlustého střeva. Má účinky vyživování jater a ledvin, prospěch z podstaty a krve a zvlhčení střev a usnadnění pohybů střev. Lze jej použít k léčbě nedostatku ledvin, impotence a neplodnosti, bolestivosti pasu a kolen, slabosti šlach a kostí a zácpy způsobené suchými střevami [1]. Moderní výzkum ukazuje, že masité stonky s listy měřítka Cistanche Desesterticola obsahují hlavně různé chemické složky, jako jsou fenyletanoidní glykosidy, iridoidní etherové terpeny a jejich glykosidy, lignany a cukry [3]. Mezi nimi jsou fenylethanoidní glykosidy nejdůležitějšími účinnými složkami, které mají farmakologické účinky, jako je anti-aging [4], antioxidant, anti-únava a laxativ [5].
Na světě je asi 20 druhů Cistanche a v mé zemi je 5 druhů: Cistanche Deserticola, CiStanche Tubulosa, C. Salsa (Comey.) G. Beck, C. Sinensis G. Beck a C. Salsa var. albiflora pf tu et zclou. Edice Pharmacopoeia z roku 2020 z Čínské lidové republiky (dále jen „čínská lékárna“) stanoví, že první dva druhy jsou původním druhem Cistanche Deserticola [6].

CiStanche Deserticola

Před vydáním čínské farmakopoeia z roku 2005 byl jediným původem odvozeným od Cistanche Deserticola CiStanche Deserticola. Vzhledem k vysoké poptávce na domácích a mezinárodních trzích a nedostatku zdrojů byla CiStanche Tubulosa přidána jako právní původ. Ceny dvou původů Cistanche Deserticola na trhu se však velmi liší, přičemž cena Cistanche Tubulosa je však pouze 1/4 až 1/6 z ceny Cistanche Deserticola [7]. Rozdíly ve složení a farmakologické účinky těchto dvou původů mají za dlouhodobý hloubkový výzkum a využití. Pokud jde o rozdíly v typech složek, Huang Xiongmei et al. [8] zjistili, že Cistanchside A byl hlavní diferenciační složkou prostřednictvím charakteristické studie spektra obou původů. Pokud jde o rozdíl v obsahu složky, Gao Yan et al. [9] zjistili, že obsahové poměry echinakosidu k verbaskosidu a verbascosid k isovallascosidu v Cistanche Deserticola a Cistanche tubulosa byly zcela odlišné prostřednictvím ultra vysoké výkonnosti kapalinové chromatografie; Zhuiang et al. [10] zjistili prostřednictvím analýzy otisků prstů, že obsah fenyletanoidních glykosidů v Cistanche Deserticola byl výrazně nižší než obsah tubulosa a obsah fenyletanoidních glykosidů v Cistanche tubulosa byl významně vyšší než obsah iridoidních glykosidů.
Naše výzkumná skupina použila spektrometrii kapalinové chromatografické hmoty kombinované s vícerozměrnou statistickou analýzou pro srovnání rozdílů v typech chemických složek mezi Cistanche Deserticola a Cistanche tubulosa, identifikovat diferenciální markery a stanovit jejich obsah, aby poskytoval odkaz na identifikaci počátečního pouštního a racionálního využití Cistanche. Kromě toho byla porovnáním rozdílů v obsahu složek indexu farmakopoeia (echinacosid a verbascosid) dvou původních cistanců vysvětlena nutnost stanovení kombinovaných limitů dvou složek cistanců a tubulosa Cistanches.

 

1 materiály

1.1 nástroje

Ultimate 3 000 Ultra-vysoká výkonná kapalinová fáze-elektrostatická pole Tandemová iontová pasti s vysokým rozlišením hmotnostního spektrometru (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, USA); 2695 vysoce výkonná kapalinová chromatograf, 2489 ultrafialový detektor (Waters, USA); BT125D 1/100 000 elektronický zůstatek (Sartorius Instrument Systems, Německo); KQ -500 DE CNC Ultrazvukový čistič (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Elektronický zůstatek PL2002 [Mettler-Toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche Tubulosa

1.2 Testovací léky

Od referenčních látek echinacosid, cistanchesid A, verbascosid a isoverbosaside (čistota větší než 98%, dávková čísla PS000867, PS010950, PS000683 a PS001059) byly zakoupeny od Chengdu Pusi BioTechnology Co., Ltd.; Methanol třídy hmotnostní spektrometrie (Fisher); Kyselina mravní maska ​​hmotnostní spektrometrie (čistota: 99%, Sigma Aldrich); Voda byla destilovaná voda.

 

1.3 Vzorky

Profesor Li Xiangri z Pekingské univerzity čínské medicíny jako sušené masité stonky s měřítkem listů Cistanche Deserticola YCMA a Cistanche Tubulosa (Schenk), rostlinných rodin, bylo identifikováno 10 šarží plátek Cistanche Deserticola a 10 šarží plátek Cistanche tubulosa. Podrobné informace jsou uvedeny v tabulce 1.

 

2 metody

2.1 Studie o různých složkách CiStanche Deserticola z různých původů

2.1.1 Příprava testovacího řešení

Take about 0.2 g of dry sample powder (passed through No. 4 sieve), accurately weigh and place in a 50 mL brown volumetric flask, add 25 mL of 50% methanol, weigh the mass, cold soak for 30 min, ultrasonically treat for 40 min (power 250 W, frequency 35kHz), and make up the weight loss with 50% methanol after cooling, shake and filter, and take the filtrate získat.

 

2.1.2 Chromatografické podmínky

Waters Acstupy UplctM BEH C18 Chromatografický sloupec (1 0 0 mm × 2,1 mm, 1,7 µm), teplota sloupce 35 stupňů, teplota vzorkové komory 1 {{0 stupeň, vzorek 3 μl, Gradint evoluce s methanolem (a) {-0. (B) Jako mobilní fáze (0 min, 10%a; 0 ~ 4 min, 10%~ 26%a; 4 ~ 18 min, 26%~ 40%A; 18 ~ 24 min, 40%~ 100%A; 24 ~ 28 minut, 100%A), detekční vlnová délka 330 nm, průtok 0,3 ml · min -1.

 

2.1.3 Podmínky hmotnostní spektrometrie

Byl použit zdroj iontů elektrospray (ESI), skenování negativního iontového režimu, kapilární teplota byla 350 stupňů, průtok objemu plynu v plášti byl 30 ARB, průtok objemu pomocného plynu byl 10 ARB, stříkací napětí bylo 3 kV, kapilární napětí bylo –35 V, skenovací rozsah byl M/Z100 ~ 1000.

Cistanche Tubulosa

2.1.4 Analýza hlavních komponent (PCA)

Po získání dvourozměrné matice přesných párů údajů o zadržování hmotnosti bude přístrojová deska zobrazovat všechny automaticky importované přesné informace o zachování a metoda PCA rozšířeného statistického modulu bude použita pro analýzu.

 

2.1.5 ortogonální částečná analýza nejmenších čtverců (OPLS-DA)

Provedením dvourozměrné analýzy dat s OPLS-DA bylo získáno velké množství ortogonalizovaných spekter, což může jasně ukázat rozdíly mezi dvěma skupinami vzorků. Ve formátu S-Plot, páry dat hmotnostní retence na obou koncích křivky tvaru S představují nejspolehlivější charakteristické ionty z každé skupiny vzorků.

 

2.2 Stanovení diferenciálních komponent

 

2.2.1 Příprava smíšeného referenčního řešení

 

Vezměte odpovídající množství echinacoside, cistancheside A, verbascosid a isoverascosid do 1 0 Ml Hnědá objemná baňka, rozpuštěna a zředěna na značku 5 0% Methanol a připravit smíšené zásobní řešení s hmotnostními koncentracemi {6}}}}}. 0,384 a 0,312 mg · ML - 1.

 

2.2.2 Příprava testovacího řešení

 

Metoda je stejná jako v 2.1.1.

 

2.2.3 Chromatografické podmínky

Agilent Eclipse XDB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used, with methanol (A)-0.1% formic acid aqueous solution (B) as the mobile phase, and gradient elution ({{10}} min, 15%A; 0~15 min, 15%~21%A; Bylo provedeno 15 ~ 20 minut, 21%~ 25%A;

 

2.2.4 Metodické vyšetřování

2.2.4.1 Vyšetřování lineárního vztahu

Precisely pipette {{0}}.1, 0.5, 1.0, 2.0, and 5.0 mL of the mixed reference solution into different 10 mL volumetric flasks, add 50% methanol to dilute to the scale, and obtain mixed reference solutions of a series of concentrations. Injekci vzorku pro stanovení použijte oblast chromatografického píku jako ordinátu (y) a koncentraci jako abscissa (x), nakreslete rozptylový graf a proveďte regresní analýzu, abyste získali lineární regresní rovnice různých referenčních látek.

 

2.2.4.2 Precizní experiment

Vezměte smíšené referenční roztok echinacosidu, cistanchesidu A, verbascosidu a isoverbackacsosidu, injekce 6krát nepřetržitě zaznamenejte oblast píku echinakosidu, cistanchesid A, verbascoside a reference isoverbaccaside a reference RSD každé komponenty.

 

2.2.4.3 Experiment stability

Vezměte stejný testovací řešení Cistanche Deserticola (číslo šarže: 16 0 901), vstříkněte jej při 0, 2, 4, 8, 12, 24 h, určete obsah echinacoside, cistanchosid A, verbascoside a isoverbaccide v testovacím řešení a vypočítejte hodnotu RSD každé komponenty.

 

2.2.4.4 Experiment opakovatelnosti

Vezměte stejný vzorek (dávkové číslo: 160901) prášek, připravte 6 testovacích řešení podle metody pod 2.1.1, vstřikujte a změřte, vypočítejte obsah echinakosidu, cistanchesid A, verbascosid a isoverbascosid v každém testovacím roztoku a vypočítejte RSD hodnotu každé komponenty.

 

2.2.4.5 Experiment pro zotavení vzorku

Přesně vážte 6 vzorků CiStanche Deserticola (dávkové číslo: 160901) se známým obsahem, přidejte referenční řešení ekvivalentní známému obsahu echinacosidu, cistancheside A, verbascoside a isoverbascoside, připravují testovací řešení podle 2.1.1, vstřikování a měření, měření a měření, průměrné zotavení vzorku.