Vliv intravenózního glutaminu na expresi kaspázy-12 v apoptóze glomerulárních epiteliálních buněk samců potkanů vystavených cisplatině
Mar 17, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tamara Aulia Fakhrinnisal, Imam Susilo, Arifa Mustika, Miyayu Soneta Sofyan
Úvod
Prevalence metabolických onemocnění v Indonésii, zejména onemocnění ledvin, vykazuje vysoký trend. Na základě údajů Agentury pro správu zdravotního pojištění (BPJS) za rok 2017 stát pokryl 3 657 691 zaznamenaných případů dialyzačních procedur chronického onemocnění ledvin s celkovými náklady na pokrytí 3,1 bilionu IDR. Jednou z etiologií selhání ledvin je trvalé poškození nefronů toxiny.
Cisplatina je silný chemoterapeutický lék, který se široce používá pro širokospektrální terapii malignit, včetně rakoviny hlavy a krku, jícnu, močového měchýře, varlat, vaječníků, prsu a nemalobuněčných plic (Fillipski et al., 2008; Reck a kol., 2010). Klinická aplikace cisplatiny je však omezená kvůli účinkům vysoké orgánové toxicity, jako jsou nefrotoxické, neurotoxické, ototoxické a hepatotoxické účinky (Karasawa a Steyger, 2015; Guo et al., 2018). Cisplatina způsobuje apoptózu při nižších dávkách (10-100uM) a nekrotickou buněčnou smrt při vyšších dávkách （200-800 μM））(Hanigan a Devarajan, 2003）Více než 70 procent dětských pacientů, kteří dostávali cisplatinu, trpí dysfunkcí ledvin( Skinner a kol. 1998). Akutní poškození ledvin se navíc vyskytuje u 20-30 procent všech pacientů, kterým byl podáván (Miller et al., 2010). Renální dysfunkce obvykle začíná několik dní po podání standardní dávky cisplatiny（50-120 mg/m²）a je vyjádřena zvyšujícími se hladinami sérového kreatininu a dusíku močoviny v krvi (Akcay et al.2010), léčba cisplatinou indukuje masivní tubulární dilatace a formace odlitků v několika lumen tubulech. Občas je také pozorována fokální tubulární nekróza, ztluštění základní membrány ledvinových tubulů a Bowmanova pouzdra a fokální infiltrace mononukleárními buňkami. Dochází také k poškození ledvinných tubulů spolu s vakuolizací a deskvamací epiteliálních buněk. Některé glomeruly trpí nekrózou a normální reziduální glomeruly často vykazují zvětšené periglomerulární prostory.
akteosid v cistanche má dobré účinky na ledviny
Jedním z nefrotoxických mechanismů cisplatiny je apoptóza, což je dráha programované buněčné smrti aktivovaná cisplatinou prostřednictvím některých mechanismů. Cisplatina snižuje expresi Bcl{0}} v mitochondriální dráze, což pravděpodobně inhibuje vývoj proapoptotických molekul (Oltvai a Korsmeyer, 1994). V drahách receptoru smrti cisplatina aktivuje dráhy závislé na Fas a apoptózu, buď in vivo (Noga et al., 1998) nebo in vitro (Feldenberg et al., 1999). Cisplatina také aktivuje kaspázové dráhy. S úlohou kaspázy-3 se poprvé setkáváme v kultivovaných tubulárních proximálních buňkách, které reagují na cisplatinu zvýšením aktivity kaspázy-3 způsobem závislým na dávce (Fukuoka et al, 1998; Lau, 1999) . Následující studie odhalily aktivaci kaspázy{11}} a v menší míře aktivaci kaspázy{12}} (Kaushal et al.2001:Park et al., 2001).
IntravenózníGlutamin(Gln nebo Q) je -aminokyselina používaná při biosyntéze proteinů. Je to jedna ze složek pro výrobu glutathionu, což je silný antioxidant. Jedna dávkanitrožilní glutamin(0.15-0.75 g/kg) může zvýšit expresi HSP, snížit poranění koncových orgánů a zlepšit míru přežití u myší v důsledku septického šoku (Wischmeyer, 2002).IntravenózníGlutamintaké zvýšila vaskulární reaktivitu indukcí exprese HSP a inhibicí uvolňování zánětlivých cytokinů a biosyntézy peroxidu u LPS šokových myší (Jiang et al..2017).IntravenózníGlutaminmůže také snižovat apoptózu inhibicí oxidačního stresu, jak bylo pozorováno ve výsledcích studií s použitím myší s kolitidou vyvolanou kyselinou a2,4,6-trinitrobenzensulfonovou (Crespoet al.2012)
Hladiny kaspázy-12 v glomerulárním epitelu nebyly studovány, i když doba expozice toxinu přijatému do glomerulu je vysoká a epiteliální buňky jsou exponovány nejdříve než tubuly. Studie ukázala, že Bowmanovy kapsle hrají roli ve fyziologické funkci normálního glomerulu. Poškození podocytů stimuluje aktivaci parietálních buněk Bowmanova pouzdra, které se rozšiřují do glomerulárního svazku, což vede k segmentální a globální skleróze tím, že produkuje více matric a ničí lumen kapiláry glomerulu (Al Hussain et al., 2017).
Tato studie si klade za cíl analyzovat nefroprotektivní účineknitrožilní glutaminna apoptóze glomerulárních epiteliálních buněk zkoumáním exprese kaspázy-12, která je iniciátorem apoptózy ve stresové dráze endoplazmatického retikula. Pro-kaspáza-12 se nachází v endoplazmatickém retikulu, zejména v proximálních tubulech ledvin. Thenitrožilní glutaminOčekává se, že bude alternativním řešením selhání ledvin způsobeného chemoterapií cisplatinou.
Materiály a metody Zvířata a léčba
Tento výzkum byl schválen Etickou komisí pro výzkum zdraví Lékařské fakulty Universitas Airlangga (č. 25/C/KEPKFKUA/2020). V tomto výzkumu bylo získáno 30 samců bílých potkanů (Rattus norvegicus) ve věku 2-3 měsíců s tělesnou hmotností 150-200 gramů z experimentální zvířecí jednotky Fakulty veterinárního lékařství, Universitas Airlangga. Každý z nich byl držen samostatně v anaplastické krabici, na dně vystlané plevami a pak nahoře pokrytý tkanými dráty. Plevy byly vyměňovány každý den.
Chemikálie
TheIntravenózníGlutaminbyl získán od společnosti Serva (Německo). TheIntravenózníGlutaminroztok byl připraven v {{0}},9% NaCl, s dávkou 1g glutaminu v 10ml 0,9% NaCl. Dávka glutaminu je injikována 100 mg/kg tělesné hmotnosti (BW) a jedna injekce je podávána maximálně 0,2 ml IV. TheIntravenózníGlutaminbyl injikován intravenózně do ocasu potkana pomocí 1ml 27-stříkačky s kalibrem.
Materiál cisplatiny byl získán od Kalbe Farma (Indonésie) s dávkou 20 mg/kg tělesné hmotnosti, podávanou intraperitoneální injekcí pomocí 1 ml 27- stříkačky. Použili jsme také Primary AntibodiesCaspase-12 (Polyclonal Antibody PA5-27094 Thermo Scientific) a Apoptosis Detection Kit in Situ CellPOD (11684817910ROCHE).
Experimentální design
V tomto výzkumu bylo na začátku studie 30 samců bílých potkanů Wistar náhodně rozděleno do tří skupin. Kontrolní skupina (PO) byla utracena cervikální dislokací po anestezii etherem a poté byly odebrány ledviny pro imunohistochemickou přípravu.
V den 7 byla skupině P1 podávána cisplatina v jediné dávce 20 mg/kg tělesné hmotnosti intraperitoneální injekcí a poté byla pozorována po dobu 72 hodin. Krysy byly usmrceny 10. den cervikální dislokací po anestezii etherem a poté byly odebrány ledviny pro imunohistochemickou přípravu. Doba provedení je způsobena apoptózou glomerulárních epiteliálních buněk po injekci cisplatiny v den 10 (Tsuruya et al..2003). Skupině P2 bylo podáváno sIntravenózníGlutaminv dávce 100 mg/kg tělesné hmotnosti jednou denně prostřednictvím intravenózní injekce ode dne 1 do dne 7 (Zhang et al.2009). V den 7 byla potkanům podávána cisplatina v jediné dávce 20 mg/kg tělesné hmotnosti intraperitoneální injekcí. Následně byly krysy pozorovány po dobu 72 hodin a poté byly 10. den usmrceny cervikální dislokací po anestezii etherem. Později byly odebrány i ledviny na imunohistochemický preparát.
Histopatologická příprava
Tkáň ledvin byla fixována v 10% formalínu po dobu15-24 h. Dehydratace byla prováděna po dobu 60 minut za použití série alkoholu (30 procent, 50 procent, 70 procent, 80 procent, 96 procent a absolutní koncentrace), aby se zabránilo jakýmkoli změnám v morfologii tkáně. Poté bylo dvakrát provedeno čištění pomocí xylolu (vždy 60 minut). Následně byla provedena infiltrace jemným parafinem po dobu 60 minut při 48 stupních. Později byl tvrdý parafín zablokován ve formě a skladován l den. Následující den bylo vytvrzené umístěno na držák a nařezáno na 4-5-um silné části pomocí rotačního mikrotomu. Poté byla provedena montáž na předmětové sklo s poly-L-lysinovým povlakem. Nasazená tkáň byla dvakrát ponořena do xylolu (vždy 5 minut). Poté byla provedena rehydratace s použitím série alkoholu (absolutní, 96 procent, 80 procent, 70 procent, 50 procent a 30 procent koncentrace) po dobu 5 minut, v daném pořadí. Poté se promývá v dH, O po dobu 5 minut.
Imunohistochemický test CSP12
Sklíčka byla třikrát promyta fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS) (Millipore 524650) při pH 7,4 po dobu 5 minut. Blokování endogenním peroxidem bylo prováděno pomocí 3% H202 po dobu 20 minut. Poté byla sklíčka znovu promyta stejným postupem před blokačním ošetřením. Nespecifické proteinové blokování bylo provedeno pomocí 5 procent PBS (Millipore 524650) obsahujícího 0,25 procenta TritonX-100 (Sigma-Aldrich T8787) a poté opakujte promývací postup. Inkubace primárních protilátek kaspázy-12(Polyclonal Antibody PA5-27094 Thermo Scientific) byla provedena přes noc při 40 stupních. Poté byla sklíčka promyta pomocí PBS (Millipore 524650), pH 7,4, třikrát po dobu 5 minut. Inkubace s použitím anti-myšího biotinu konjugovaného byla provedena po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti, poté byl promývací postup opakován. Inkubace za použití streptavidin-křenové peroxidázy (Thermo Fisher Scientific NI00) byla prováděna po dobu 40 minut a poté ještě jednou promyta. Na sklíčka byly poté přidány kapky s diam v benzidinu (DAB) (Thermo Fisher Scientific 3400) a inkubovány po dobu 10 minut a poté promyty podobným postupem. Kontrastní barvení bylo pomocí Mayerova hematoxylinového roztoku (Sigma-Aldrich MHS32) po dobu 10 minut, poté bylo promyto vodou z vodovodu, opláchnuto dH20 a vysušeno na vzduchu. Připravená sklíčka byla po nasazení a zakrytí skleněným krytem pozorována pomocí světelného mikroskopu při zvětšení 400×. Pozitivní molekulární exprese s primárními protilátkami by při pozorování vypadala hnědě. Vypočtené glomerulární epiteliální buňky byly lokalizovány v oblasti renálního tělíska označeného plochou vrstvou epiteliálních buněk v parietální části Bowmanova prostoru.
Vyšetření apoptózy
Deparafinizace tkáně byla provedena promýváním tkáně třikrát xylenem (Supelco 108297) po dobu 5 minut. Tkáň byla dvakrát namočena v absolutním ethanolu vždy na 5 minut a poté přenesena do 95% ethanolu a 70% ethanolu vždy na 3 minuty. Tkáň byla promývána PBS (Millipore 524650) po dobu 5 minut.
Absorpce antigenu byla provedena tak, že se do vzorku podala proteináza K (Sigma-Aldrich 70663) po dobu 15 minut. Poté byla tkáň dvakrát promyta H20 ve zkumavce Coplin po dobu 2 minut. Endogenní peroxidáza byla odstraněna nakapáním 3 procent H, O, PBS a ponechána po dobu 5 minut při teplotě místnosti. Poté byla tkáň dvakrát promyta PBS (Millipore 524650) vždy 2 minuty ve zkumavce Coplin. Přebytečná kapalina byla vysušena pomocí papíru. Asi 75 ul ekvilibračního pufru bylo nakapáno na tkáň a poté inkubováno po dobu 10 minut při teplotě místnosti. Kapalina kolem hedvábného papíru byla poté vysušena pomocí papíru. Enzymová aktivita byla snížena o 55 ul/5 cm v tkáni TdT (Sigma-Aldrich SAB5600268). a poté byla tkáň inkubována při 37 stupních ve vlhké nádobě po dobu 1 hodiny. Preparáty byly umístěny do nádoby Coplin obsahující silný pufr/čištění a poté inkubovány po dobu 10 minut při teplotě místnosti. Preparáty byly čtyřikrát promyty PBS (Millipore 524650) po dobu 2 minut v nádobě Coplin při teplotě místnosti. Přebytečná kapalina kolem hedvábného papíru byla vysušena pomocí papíru. Anti-digoxigeninový konjugát (Roche 11333089001), který byl předem vyjmut ze skladu a zahřát na teplotu místnosti, byl nakapán na povrch tkáně 65 ul/5 cm2 a poté inkubován po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Přípravek byl čtyřikrát promyt PBS (Millipore 524650) v nádobě Coplin po dobu 2 minut při teplotě místnosti. Poté byla přebytečná tekutina kolem hedvábného papíru vysušena pomocí papíru. Barva byla exponována poté, co peroxidázový substrát (Sigma-Aldrich CPS160） kapal 75 ul/5 cm2 na povrch tkáně a nechal se 10 minut při pokojové teplotě. Preparáty byly třikrát promyty DH, O po dobu 1 minuty v nádobách Coplin a poté inkubovány v nádobách DH, Oin Coplin po dobu 5 minut při teplotě místnosti. Kontrastní barvení methylovou zelení (Sigma-Aldrich M8884) bylo prováděno po dobu 30 s při teplotě místnosti. Poté byl přípravek třikrát promýván dH.O po dobu 1 minuty v Coplin ar Preparáty byly vyčištěny xylenem (Supelco 108297) a přebytečná tekutina kolem tkáně byla vysušena papírem.Preparáty byly pozorovány pomocí světelného mikroskopu při zvětšení 400× a byly spočítány hnědé epiteliální buňky z epitelu glomerulární ledviny v každém zorném poli.
Statistická analýza
Poměr byl použitou škálou dat pro buňky exprimující kaspázu{0}} a apoptotické buňky, takže bylo nutné provést test normality pomocí Shapiro-Wilkova testu (=0.05) a test homogenity pomocí Leaven test ( =0.05). Pokud byly výsledky v normální distribuci a byly homogenní, pak byl proveden jiný test s použitím jednocestné ANOVA (= 0.05). Pokud byly výsledky normální, ale heterogenní, pak byl provedený test Kruskal-Wallis (=0.05). Pokud byl rozdíl v získaných datech. poté po analýze následoval Mann-Whitney U test (= 0.05). Nakonec byl proveden Pearsonův korelační test, aby se zjistila korelace mezi buňkami exprimujícími kaspázu{15}} a apoptotickými buňkami.
Výsledek
Morfologie glomerulárních epiteliálních buněk
Před pozorováním buněk exprimujících kaspázu{0}} a apoptotických buněk byla nejprve pozorována morfologie renálního epitelu Bowmanova pouzdra pomocí barvení hematoxylinem-eosinem (HE) při 400násobném zvětšení. Pozorovaný objekt byl vybrán náhodně, aby reprezentoval histologický obraz každé skupiny. Cisplatina byla příležitostně nalezena při fokální tubulární nekróze, ztluštění bazální membrány v ledvinových tubulech a Bowmanových pouzdrech a infiltraci fokálních mononukleárních buněk v glomerulu. Některé glomeruly trpí nekrózou a normální reziduální glomeruly často vykazují zvětšené periglomerulární prostory.
Exprese kaspázových{0}} proteinů a apoptotické buňky v glomerulárních epiteliálních buňkách
Výsledky imunohistochemicky barvené ledvinové tkáně vykazovaly změny v expresi kaspázy-12 v každé skupině. Podání injekce cisplatiny ve skupině P1 vykazovalo vyšší průměrnou expresi kaspázy-12 po 72 hodinách (4,1±0.86) ve srovnání s kontrolní skupinou (P{{9} }). Podání injekce glutaminu a injekce cisplatiny (P2) vykazovalo nižší průměrnou expresi kaspázy-12 po 72 hodinách (2,54± 0,72) ve srovnání s P1 (tabulka 1).
Kromě toho injekce cisplatiny ve skupině PI vykazovala vyšší rychlost buněčné apoptózy po 72 hodinách (52,7 ± 17.06) ve srovnání s kontrolní skupinou (P0). Podání injekce glutaminu a injekce cisplatiny v P2 vykazovalo nižší průměrnou expresi kaspázy-12 po 72 hodinách (31,5±6,73) ve srovnání s PI (tabulka 1). Kruskal-Wallisův test ukázal rozdíly v počtu glomerulárních epiteliálních buněk exprimujících kaspázu-12 a v počtu apoptotických buněk ve třech léčených skupinách. Následně Mann-Whitney U test dospěl k závěru, že existují rozdíly v počtu parietálních epiteliálních buněk exprimujících kaspázový-12 protein a v počtu apoptotických buněk mezi skupinami P1 a P2 s kontrolní skupinou a mezi skupinami Pl a skupiny P2. Rozdíly byly také v počtu parietálních epiteliálních buněk exprimujících kaspázový-12 protein a počtu buněčné apoptózy (tabulka 2).
Korelace mezi expresními buňkami Capase{0}} a apoptotickými buňkami
Výsledky Pearsonova korelačního testu ukázaly, že existuje významná korelace mezi glomerulárními epiteliálními buňkami exprimujícími kaspázu{{0}} a počtem buněk podléhajících apoptóze s korelačním koeficientem 0,707, což je silné a pozitivní. Lze tedy usoudit, že pokud se sníží počet proteinových expresních buněk, sníží se i počet apoptotických buněk a naopak.
Tabulka 1. Popisná statistika exprese kaspázy{1}} a apoptotických buněk. P0: kontrolní skupina. P1:cisplatinainjekce 7. den. P2 byl ošetřenintravenózníglutaminuinjekce 7 dní v řadě před injekcícisplatina7. den. | Tabulka 2. Výsledky Mann–Whitney U testu |
 |  |
Diskuse
V této studii byla léčba prováděna na experimentálních zvířatech, která byla rozdělena do tří skupin: kontrolní skupina (PO); skupina PI, která dostala intraperitoneální injekci cisplatiny; a skupina P2, která dostávala intraperitoneální injekci cisplatiny anitrožilní glutamininjekce. Odpověď na léčbu byla pozorována po dobu 72 hodin po léčbě, protože apoptóza byla zjevná po 72 hodinách injekce cisplatiny (Tsuruya et al..2003). Místo pozorované v této studii byl glomerulární epitel. Dosud nebyl proveden žádný výzkum nefrotoxicity cisplatiny v glomerulárním epitelu. Glomerulus je proximálnější než tubuly, a proto se předpokládá, že je ovlivněn nefrotoxicitou cisplatiny dříve než tubuly.
Rozdíly v hladině exprese kaspázy-12 byly přímo úměrné hladině podávání glutaminu při každé léčbě. Tyto výsledky jsou podpořeny studií, která uvádí, že glutamin může indukovat vysoké hladiny exprese HSP ve všech orgánech, včetně ledvin (Zhang et al., 2009). Jedna dávkanitrožilní glutaminmůže zvýšit expresi HSP, snížit poranění koncových orgánů a zlepšit přežití ze septického šoku u celých myší (Wischmeyer, 2002). Cytoprotektivní a antioxidační vlastnosti glutaminu mohou být klíčové v situacích vysokého katabolismu, kde je modulována aktivita a exprese zánětlivých drah zprostředkovaných NF-kB (Cruzat et al., 2014). Bylo popsáno, že snížená dostupnost plazmatického glutaminu způsobuje snížení proliferace lymfocytů, zhoršuje expresi povrchových aktivačních proteinů a produkci cytokinů a vyvolává apoptózu v buňkách (Roth. 2008). To je důvod, proč může glutamin v této studii zabránit buňkám směrem k apoptóze.
Jak je uvedeno ve výsledcích, podávání glutaminu snížilo apoptózu buněk ošetřených cisplatinou. Ve studii Kadri et al. (2017), kde potlačení metabolismu glutaminu může zvýšit cytotoxický potenciál některých terapeutických léků, jako je cisplatina, a tím umožnit snížení dávky chemoterapeutických sloučenin, aby se minimalizovala toxicita a nežádoucí reakce.
Mechanismus buněčné smrti závisí na dávce podání cisplatiny, buď nekrózou nebo apoptózou (Lieberthal et al, 1996). V experimentech in vitro způsobují nízké koncentrace cisplatiny apoptózu buněk, zatímco nekrózu při vysokých koncentracích (Megyesi et al. 1998: Ramesh a Reeves. 2003). V tomto výzkumu byla dávka dostatečná k tomu, aby epiteliální buňky podstoupily apoptózu.
V této studii injekce cisplatiny do P1 vykazovala vyšší rychlost buněčné apoptózy po 72 hodinách ve srovnání s kontrolou (PO). Také jsme zjistili, že injekce glutaminu a cisplatiny v P2 exprimovaly nižší expresi kaspázy-12 po 72 hodinách ve srovnání s P1.
Apoptóza po léčbě cisplatinou může také zahrnovat ER-stresovou dráhu. Iniciátorem kaspázy v dráze ER je kaspáza-12, která je lokalizována na cytosolické ploše ER a je aktivována tlakem ER (Boyce a Yuan, 2006). Kaspáza-12 je aktivována během léčby cisplatinou v buňkách LLC-PK1 (Liu a Baliga, 2005). Pozorování in vitro byla nedávno rozšířena na myší modely nefrotoxicity cisplatiny, kde ER zdůrazňuje a související signalizaci, jako je štěpení kaspázy-12, byly pozorovány (Peyrou et al., 2007).
Lze uzavřít, že k apoptóze v důsledku podávání cisplatiny dochází v důsledku zvýšené exprese kaspázy-12, která indukuje apoptózu v renálních glomerulárních epiteliálních buňkách. Po 72 hodinách pozorovánínitrožilní glutaminpodáním byl výskyt apoptózy v renálních glomerulárních epiteliálních buňkách významně inhibován (str<0.0001)between the="" groups="" and="" was="" directly="" proportional="" to="" the="" effect="" of="" glutamine,="" which="" inhibited="" the="" expression="" of="">
Závěrem lze říci, že na základě výsledků došlo ke snížení exprese kaspázy-12 a apoptotických buněk v glomerulárních epiteliálních buňkách samců bílých potkanů vystavených cisplatině ponitrožilní glutaminspráva. Snížená exprese kaspázy-/2 innitrožilní glutaminpodání je následováno poklesem apoptózy v glomerulárním epitelu. Předpokládá se tedy, že imunohistochemické vyšetření na renálním glomerulárním epitelu lze použít jako marker nefrotoxického účinku cisplatiny.
Omezením této studie je, že nebyly pozorovány různé proměnné. Výzkumník neprovedl pozorování provádějící kaspázy (kaspázy-3), protože chtěl vidět význam léčby, která byla provedena v iniciační kaspáze. Tato studie také nezaznamenala výskyt apoptózy dvěma nebo více cestami. V tomto případě se chce výzkumník pokusit nejprve projít jednou cestou a není třeba studovat více než jednu cestu, pokud jsou výsledky významné. Rovněž se doporučuje provést další výzkum aplikacenitrožilní glutaminintravenózně lidem, kteří dostávají chemoterapii cisplatinou, a také při léčbě u zvířat s rakovinou, takže lze pozorovat účinek glutaminu ve skupině s rakovinou a bez rakoviny.
Obrázek 1. Morfologie glomerulárních epiteliálních buněk po CSP-12 protilátce. P0:kontrolní skupina. P1:injekce cisplatiny v 7" dennitrožilní glutamininjekce po dobu 7 dnů v řadě před infikováním cisplatinou v den 7". Pozitivní výsledek indikován hnědou cytoplazmou. | Obrázek 2. Morfologie glomerulárních epiteliálních buněk po soupravě pro detekci apoptózy. PO: kontrolní skupina. P1: injekce cisplatiny v den 7".nitrožilní glutamininjekci po dobu 7 dnů v řadě před injekcí cisplatiny v těchto 7 dnech. Pozitivní výsledek indikován hnědou cytoplazmou. |
 |  |
Reference
AkcayA, Turkmen K, Lee D, Edelstein CL(2010). Aktualizace diagnostiky a léčby akutního poškození ledvin. Int J Nephrol Renovasc Dis, 3, 129-40
Al Hussain T, Al Mana H, Hussein M, Akhtar M (2017). Interakce podocytů a parietálních epiteliálních buněk ve zdraví a nemoci. Ady Anat Pathol,24,24-34.
Bovce M. Yuan J (2006). Buněčná reakce na stres endoplazmatického retikula; otázka života nebo smrti. CellDeathDiffer, 13,363-73
Crespo I, San-Miguel B, Prause C. et al (2012). Léčba glutaminem zmírňuje stres endoplazmatického retikula a apoptózu u kolitidy vyvolané TNBS. PLoS One, 7,50407 Cruzat VF, BittencourtA, Scomazzon SP, et al (2014) .Orální volné a dipeptidové formy suplementace glutaminu zmírňují oxidační stres a zánětlivé ionty vyvolané endotoxémií. Výživa, 30,602-11
Feldenberg LR, Thevananther S, Del Rio M, De Leon M, Devarajan P (1999). Částečná deplece ATP indukuje apoptózu zprostředkovanou Fas a kaspázou v buňkách MDCK.Am.J/ Physiol (renální Physiol),276.837-46.
Fillipski KK, Loos WJ, Verweij J, Sparreboom A (2008). Interakce cisplatiny s lidským přenašečem organických kationtů 2. Clin Cancer Res,15,3875-80
Fukuoka K, Takeda M, Kobayashi M et al (1998). Odlišné proteázy rodiny enzymů konvertujících interleukin-1 - zprostředkovávají apoptózu myších buněk proximálního tubulu indukovanou cisplatinou a staurosporinem. Life Sei, 62.1125-38.
Guo Y, Wang M, MouJ, etal (2018). Předběžná úprava extraktu huaiqihuang chrání před nefrotoxicitou vyvolanou cisplatinou. Sci Rep, 8, 7333
Hanigan MH. Devarajan P (2003). Nefrotoxicita cisplatiny: Molekulární mechanismy. Cancer Ther,1,47-61
Jing L, Wu O, Wang F (2017). Glutamin vyvolává protein tepelného šoku a chrání před Escherichia coli
Poznámka:výše uvedené není úplný seznam referencí
