Část Ⅱ Srovnání chemických profilů a antioxidačních aktivit různých částí kultivovaných Cistanche Deserticola pomocí ultravýkonné kapalinové chromatografie-kvadrupólová hmotnostní spektrometrie doby letu a A 1,1-difenyl-2-pikrylhydrazyl-založený test

Pro více informací:emily.li@wecistanche.com

Kliknutím sem získáte více informací o Cistanche

Podrobná hmotnostní spektrální data a navrhované vzory fragmentace jsou uvedeny na obrázku 7. Struktury šesti PhG identifikovaných výše jsou rozděleny do tří skupin: I-kafeová kyselina (CA), II-aglykon a III-cukr (Glc a Rha). . Ve spektrech MS/MS dominují defekty hmoty odpovídající neutrálním štěpením kafeoylové skupiny a zbytkům Glc a Rha fragmentačním drahám PhGs a vytvářejí ionty diagnostických fragmentů (obrázek 8). Další MS/MS charakteristické fragmentové ionty při m/z 179, 161 a 135 dále naznačují, že v jejich strukturách existuje kofeoylový substituent. Pomocí těchto fragmentačních funkcí bychom mohli s jistotou navrhnout fragmentační cesty následovně.Akteosid(Obrázek 7c) produkoval fragment při m/z 461 prostřednictvím ztráty CA skupiny a poté produkoval ion při m/z 315 prostřednictvím další ztráty Rha. Skupina CA byla nalezena při m/z 179 a její fragmentové ionty nalezené při m/z 161 a m/z 135 byly produkovány ztrátou H20 a CO2, v daném pořadí. Isoakteosid (obrázek 7d) produkoval stejné ionty jako akteosid při m/z 461, 315, 179, 161 a 135. 20 -Acetylakteosid (obrázek 7e) produkoval fragment při m/z 623 prostřednictvím ztráty acetylu a poté generovaly ionty při m/z 461, 315, 179, 161 a 135, což bylo identické s fragmentačním vzorem akteosidu. Mezitím 20 -acetylakteosid také produkoval fragment při m/z 503 tím, že ztratil svou CA skupinu a následně ztratil svou skupinu Ac za vzniku iontu při m/z 461. Tubulosid B (obrázek 6f) vykazoval podobný vzor fragmentace jako 20 -acetylakteosid. Echinakosid (obrázek 7a) produkoval fragmentový ion při m/z 623 prostřednictvím ztráty své CA skupiny, a pak sekvenční ztráty Rha a Glc skupin poskytly fragmentové ionty při m/z 477 a 315. Fragmentový ion při m/z 461 byl vytvořen ztrátou CA a Glc skupin z prekurzorového iontu. Byly také nalezeny charakteristické ionty CA při m/z 179, 161 a 135. Cistanosid A (obrázek 7b) produkoval fragmentový iont při m/z 637 prostřednictvím ztráty své CA skupiny a poté generoval ionty při m/z 491 a 475 další ztrátou skupin Rha a Glc, v daném pořadí. Použití UPLC-PDA-QTOF/MS v kombinaci by proto mohlo významně přispět k přesnému objasnění chemických struktur sloučenin.

2.7. Korelace mezi antioxidanty a antioxidačními vlastnostmi.

Korelační analýza mezi celkovým obsahem antioxidantů a celkovou antioxidační aktivitou byla popsána v mnoha studiích [33–38]. Pokud je nám známo, chybí studie, které by porovnávaly antioxidační vlastnosti a obsah PhG v kultuřeC. deserticolačásti pomocí takovéto stručné charakterizační metody. Předběžné výsledky šesti obsahů PhG popsaných v části "Kvantitativní analýza" jsou shrnuty v tabulce 4 a antioxidační aktivita (IC50) stanovená pomocí testu DPPH, jak je popsáno v části "Antioxidační kapacita", jsou uvedeny v tabulce 5. Za prvé, celkový obsah antioxidantů a aktivity každé části jsou uvedeny na obrázku 9. Je zřejmé, že mezi různými částmi jsou patrné rozdíly. Ve skutečnosti získané výsledky ukázaly, že antioxidační aktivita kultivovanýchC. deserticolastonků byl srovnatelný s kmeny dostupnými na trhu. Tyto výsledky naznačují, že antioxidační aktivita extraktu stonku může korelovat s jeho obsahem PhG. Proto se fytochemikálie ve stonkovém extraktu pěstujíC. deserticolase navrhuje, aby hrály důležitou roli v jeho aktivitě zachycující radikály DPPH. Celkově naše výsledky ukázaly silnou korelaci mezi celkovým obsahem PhG a antioxidační aktivitou: r {{0}},92, ** p <>

Kromě toho některé vzorky s vyšším celkovým obsahem antioxidantů nevykazovaly vysoké antioxidační aktivity, jako je osa a květenství. Mezitím koruna, která měla nejvyšší aktivitu ze šesti částí, měla nižší celkový obsah antioxidantů než osa a květenství. Obrázek 4, jak je popsáno v části "Kvantitativní analýza", ukazuje relativní množství sloučenin PhG pro předběžné pochopení jejich jednotlivých příspěvků. V této studii byla také provedena regresní analýza parciálních nejmenších čtverců (PLS) [39–41] s cílem porovnat korelaci mezi množstvím každého antioxidantu a antioxidační aktivitou in vitro. Model PLS byl zkonstruován pomocí obsahu každého antioxidantu (jako deskriptorové matice X) v chromatogramech otisků prstů při 330 nm a antioxidačních aktivit (jako odezvové matice Y) všech částí. Grafy koeficientů a hodnoty proměnné důležitosti v projekci (VIP) získané pomocí softwaru SIMCA-P plus (verze 13.0, Umetrics, Umea, Švédsko) jsou znázorněny na obrázku 10. Pro vytvoření modelů byla jako proměnná Y vybrána inverzní hodnota k hodnotám IC50 (1/IC50), protože nižší hodnoty IC50 představují silnější antioxidační aktivitu. Podle získaného grafu regresních koeficientů na obrázku 10A modely lineární regrese ukazují, že všechny antioxidanty kromě akteosidu pozitivně korelovaly s 1/IC50. Získaný kalibrační model PLS je vyjádřen regresní rovnicí: Y=0.50X1 plus 0,57X2 − 0,11X3 plus 0,32X4 plus 0,58X5 plus 0,24X6. VIP hodnoty odrážejí důležitost proměnných v modelu. čím větší VIP, tím relevantnější pro klasifikaci vzorku. Jak ukázaly naše výsledky, 20 -acetylakteosid byl důležitým přispěvatelem k antioxidační aktivitě (obrázek 10B). Toto zjištění bylo v souladu se studií Yang et al [20].

3 Materiály a Metody

3.1 Závod Materiály.KultivovanýC. deserticolabyla štědře poskytnuta výsadbovou základnou Bencao Congrong v okrese Yongning v provincii Ningxia a byla ověřena profesorem Jun Chenem z Institutu vývoje léčivých rostlin, Čínská akademie lékařských věd, Peking, Čína. Šest různých částí kultivovanýchC. deserticola zahrnují sukulentní stonek (R1), osu květenství (R2), květenství (R3), květ (bez semen) (R4), stonek květenství (R5) a korunu (R6). Podrobné informace o vzorku jsou znázorněny na obrázku 11. Každá část byla sušena odděleně v sušičce, rozdrcena na prášek, proseta přes 40-síto a poté vložena do vzduchotěsných nádob a uložena v exsikátoru. Poukazové vzorky těchto vzorků byly uloženy v Institutu vývoje léčivých rostlin, Čínská akademie lékařských věd, Peking, Čína.

3.2. Chemikálie a činidla. Isoacteosid (šarže 130809), akteosid (šarže 130421) a echinakosid (šarže 121027) byly zakoupeny od společnosti Chengdu Pure-Chem Standard Co. Ltd. a očištěné od kultivovanýchC. deserticolav naší laboratoři s více než 98procentní čistotou (HPLC) a jejich struktura byla potvrzena také na základě HR-MS, 1H-NMR a 13C-NMR a ve srovnání s předchozí literaturou. Jejich struktury jsou uvedeny v tabulce 7. DPPH, kyselina L-askorbová a Trolox byly zakoupeny od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Rozpouštědla, acetonitril a methanol byly čistoty pro HPLC od Merck (Darmstadt, Německo) a kyselina mravenčí s čistotou 96 procent byla čistoty pro HPLC (Tedia, Fairfield, OH, USA). Deionizovaná voda (18 MΩ) byla připravena destilovanou vodou prostřednictvím systému Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA). Ostatní činidla a chemikálie byly analytické čistoty.

3.3. Příprava roztoků

3.3.1. Standardní roztoky. Smíšený standardní zásobní roztok obsahujícíechinakosid(501 µg/ml), cistanosid A (64 µg/ml), akteosid (239 µg/ml), isoakteosid (22,6 µg/ml), 20 -acetylakteosid (278 µg/ml) a tubulosid B (46,2 µg /ml) byl připraven v methanolu. Zásobní roztoky byly zředěny methanolem pro získání řady vhodných koncentrací, které byly použity jako pracovní roztoky pro vytvoření kalibrační křivky a byly před použitím skladovány při 4 °C.

3.3.2. Vzorová řešení. Přesně zvážený prášek (40 mesh, 1 g) ze šesti různých částí kultivaceC. deserticolabylo přidáno 5 0 ml methanolu, v daném pořadí. Po ponoření na 30 minut při teplotě místnosti byly směsi zváženy a poté extrahovány v ultrazvukové vodní lázni (40 kHz, 250 W, Kunshan, Čína) při teplotě místnosti po dobu 40 minut. Po ochlazení byl přidán další methanol, aby se kompenzovala ztráta hmotnosti. Všechny roztoky byly před injekcí filtrovány přes 0,22 um membránové filtry. Alikvot (3 ul) roztoku supernatantu byl injikován do UPLC pro analýzu. Každý extrakt byl injikován třikrát.

3.3.3. Řešení DPPH. Zásobní roztok radikálů DPPH (5 × 10−3 mol/L) byl připraven rozpuštěním přesně zváženého vzorku DPPH v methanolu bezprostředně před experimenty a byl chráněn před světlem. Poté byl zásobní roztok čerstvě zředěn methanolem, aby se získal standardní roztok (1 x 10-4 mol/l).

3.4. Podmínka analýzy UPLC-PDA. UPLC analýza byla provedena na systému Waters Acquity UPLC (Waters, Milford, MA, USA) obsahujícím ohřívač kolony, správce vzorků, správce binárních rozpouštědel a detektor fotodiodového pole. Chromatografická separace byla provedena na koloně Acquity UPLC BEH C18 (1,7 um, 2,1 mm × 1{{10}}}0 mm; Waters) fixací ohřívače kolony na 30 ◦C. Mobilní fáze sestávala z acetonitrilu (A) a vody obsahující 0,2 procenta kyseliny mravenčí (B) při průtoku 0,4 ml/min. Program gradientové eluce byl použit následovně: 5 procent A v 0–2 minutách, 5–15 procent A v 2–4 minutách, 15 procent A v 4–6 minutách, 15–20 procent A v 6–10 minutách, 20 –35 procent A za 10–15 minut, 35 procent A za 15–18 minut a 35–5 procent A za 18–18,1 minut. Kompozice byla poté udržována při 5 procentech A po dobu dalších 10 minut pro opětovné uvedení do rovnováhy. Detekční vlnová délka byla nastavena na 330 nm.

3.5. Analýza UPLC-ESI-Q/TOF-MS. Podmínka Podmínky UPLC byly stejné jako podmínky popsané v části 3.4. MS analýza byla provedena na hmotnostním spektrometru Waters Xevo G2-XS QTOF (Waters MS Technologies, Manchester, UK) vybaveném elektrosprejovým rozhraním (ESI) v režimu negativních iontů s úplným skenovacím MS spektrem přes m/ z rozmezí 50–1200. Ve zdroji bylo kapilární napětí 2000 V, teplota zdroje 120 ◦C, desolvatační teplota 450 ◦C, kuželové napětí 40 V, kuželový plyn 30 l/h a průtok desolvatačního plynu 600 L/h. Experimenty MS/MS byly prováděny pomocí MSE a srážková energie byla 20–40 V. Všechna data MS byla shromážděna pomocí systému Lock Spray, aby byla zajištěna hmotnostní přesnost a reprodukovatelnost. [M − H]− iont leucin-enkefalinu při m/z 554,2615 byl použit jako hmota zámku v negativním ESI módu. Data byla získána, analyzována a zpracována pomocí softwaru Waters Mass Lynx 4.1 (Waters MS Technologies, Manchester, UK).

3.6. Offline test DPPH na zachycování radikálů. Celková antioxidační aktivita rostlinných extraktů byla hodnocena pomocí offline testu vychytávání radikálů DPPH. Roztoky vzorků (2 ml) v různých koncentracích byly smíchány s 2 ml 1 x 10-4 mol/L roztoku DPPH (v methanolu). Všechny vzorky byly protřepány a ponechány stát ve tmě při pokojové teplotě po dobu 60 minut. Snížení volných radikálů DPPH bylo měřeno odečtením absorbance při 517 nm proti slepému pokusu (methanol bez vzorku) na čtečce ELISA (TECAN, Growing, Rakousko). Jako kontrola tohoto experimentu byl použit samotný methanol (2 ml). Trolox a kyselina L-askorbová byly použity jako pozitivní kontroly. Aktivita vychytávání radikálů (procento inhibice) testovaných vzorků, která byla vyjádřena jako procento vychytávání DPPH, byla vypočtena pomocí následujícího vzorce: procento inhibice=[(kontrola – vzorek)/kontrola] × 100. Celková antioxidační aktivita byla vypočtena vynesením procenta inhibice proti koncentraci vzorku a byla reprezentována jako koncentrace vzorku potřebná k zachycení 50 procent DPPH radikálů (IC50). Všechny testy byly provedeny trojmo a hodnoty IC50 byly uvedeny jako průměr ± SD.

3.7. UPLC-PDA ve spojení s pre-kolonovým DPPH testem. V této studii byly po smíchání 2 ml roztoku DPPH (3 × 10-3 mol/L) a 1 ml roztoků vzorků (12 mg/ml) různých částí kultivované C. deserticola použito UPLC-PDA k dalšímu prozkoumejte profily antioxidantů a identifikujte antioxidační složky detekcí změn charakteristických píku roztoků vzorků před a po reakci vychytávání volných radikálů DPPH. Pro každou odlišnou část rostliny byly 10 ul alikvoty roztoku vzorku před a po testu DPPH odděleně injikovány do systému UPLC za stejných podmínek, jaké jsou popsány v části 3.4. Po smíchání roztoků vzorků s roztokem DPPH byly detekovány změny charakteristických píku roztoků vzorků při 330 nm.

3.8. Analýza dat. Analytická data jsou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (SD) trojitých nezávislých měření. Byla provedena bivariační korelační analýza pro studium vztahu mezi celkovým obsahem PhG a antioxidační aktivitou stanovením Pearsonova korelačního koeficientu (r) pomocí IBM SPPS Statistics (verze 19; International Business Machines Corp., New York, NY, USA). Hodnoty IC50 byly také vypočteny pomocí probitových analýz pomocí SPPS Statistics 19. Rychlost vychytávání volných radikálů DPPH a celkový obsah PhG byly vyneseny do grafu pomocí OriginPro 8.5.1 (Origin Lab Corp., Northampton, MA, USA). Regrese parciálních nejmenších čtverců (PLS) byly stanoveny pomocí softwaru SIMCA-P plus (verze 13.0, Umetrics, Umea, Švédsko).

4. závěr

Různé části kultivované C. deserticola, široce používaného bylinného léku, byly zkoumány pro jejich vlastnosti. Za prvé, charakteristické otisky prstů šesti různých částí kultivaceCistanchedeserticolavzorky byly vytvořeny a vyhodnoceny pomocí SES a simultánní analýzy obsahu šesti markerových sloučenin. Za druhé, kvantifikace šesti hlavních sloučenin pomocí UPLC prokázala distribuční charakteristiky těchto sloučenin v různých částech. Výsledky však nemohly přímo souviset s činností bylinné medicíny. Proto byla nutná lepší metoda pro současné stanovení kvality a aktivity kultivovaných vzorků C. deserticola. Nejprve jsme použili offline test vychytávání radikálů DPPH k vyhodnocení antioxidačních aktivit kultivovaných rostlinCistanchedeserticolaextraktů a nejvyšší aktivitu našel v extraktu stonku. Kromě toho byl UPLC-PDA spojený s testem DPPH před kolonou aplikován na screening a hodnocení antioxidantů v kultivovanýchCistanchedeserticolastonkové extrakty. Tato metoda nejenže poskytla více chemických informací, ale také poskytla některé antioxidační informace, které by mohly být použity k identifikaci a hodnocení rostlinných léčiv. Za druhé, aktivní složky v extraktech stonků byly separovány a identifikovány pomocí UPLC-PAD-QTOF/MS pro potvrzení počtu a polohy substitučních skupin a pro zlepšení přesnosti strukturní analýzy. Nakonec byl stanoven vztah mezi chemickými složkami a antioxidační aktivitou in vitro a ověřen pomocí modelu PLS.

Na závěr jsme poprvé porovnali profily chemického složení a antioxidační aktivity různých částí kultivovaných vzorků C. deserticola. Tato zjištění byla zvláště zajímavá, protože distribuce sloučenin PhG, obsah PhG a jejich příspěvek k antioxidantu v různých částech kultivovaných vzorků C. deserticola nebyly do této studie popsány. Kromě toho byla poprvé provedena PLS analýza, aby poskytla předběžné pochopení šesti jednotlivých příspěvků PhG k antioxidační aktivitě. Tento přístup nám může poskytnout nové pohledy na komplexní hodnocení kvality kultivované C. deserticola. Konečně tato práce představuje první zprávu o silné korelaci mezi aktivitou vychytávání radikálů DPPH a celkovým obsahem PhG v různých částech kultivované C. deserticola (r=0.92). Mezi těmito různými částmi bylo zjištěno, že stonky jsou bohaté na PhG a mají silnou antioxidační aktivitu. Zejména vyřazené části kultivované C. deserticola také obsahovaly některé bioaktivní sloučeniny a mohly by být použity jako alternativní doplněk stravy. Doufáme, že výsledky poskytnou užitečné informace pro budoucí využití kultivované C. deserticola. Podle našich nejlepších znalostí se jedná o první zprávu o rychlé identifikaci a kvantifikaci přírodních antioxidantů v různých částech pěstovaných plodin.Cistanchedeserticolapomocí UPLC-PAD-QTOF/MS, offline metody DPPH a metody UPLC-PAD-pre-columnDPPH. Podle našich výsledků by zde vyvinutá metoda mohla poskytnout silný a smysluplný nástroj pro komplexní kontrolu kvality komplexních rostlinných léčiv. V naší zemi by se pod vedením iniciativy „One Belt, One Road“ dala tato tradiční plodina s přínosem pro zdraví využít k navrhování nových produktů s celosvětovou aplikací.

Poděkování

Autoři vděčně oceňují finanční podporu Čínské akademie lékařských věd (CAMS) Innovation Fund for Medical Sciences (CIFMS) (č. 2016-I2M-1-012) a NationalNatural Science Foundation of China (č. 31570344).

Autorské příspěvky

Na návrhu výzkumu se podíleli Yue Shi a Xiaoming Wang. Za provedení experimentů byli zodpovědní Xiaoming Wang, Jinfang Wang, Huanyu Guan, Rong Xu, Xiaomei Luo, Meifeng Su, Xiaoyan Chang, Wenting Tan a Jun Chen. Yue Shi, Xiaoming Wang a Jinfang Wang provedli analýzu dat. Yue Shi a Xiaoming Wang přispěli k psaní a úpravě rukopisu. Střet zájmů: Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

Reference

Wang, T.; Zhang, X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, "Pouštní ženšen": Recenze. Dopoledne. J. Chin. Med. 2012, 40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, Z.; Lin, H.; Gu, L.; Gao, J.; Tzeng, C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jeden z nejlepších farmaceutických darů tradiční čínské medicíny. Přední. Pharmacol. 2016, 7, 41. [CrossRef] [PubMed]

3. Gu, C.; Yang, X.; Huang, L. Cistanches Herba: Neuropharmacology Review. Přední. Pharmacol. 2016, 7, 289. [CrossRef] [PubMed]

4. Xu, X.; Zhang, Z.; Wang, W.; Yao, H.; Ma, X. Terapeutický účinek Cistanosidu A na kostní metabolismus ovariektomizovaných myší. Molekuly 2017, 22, 197. [CrossRef] [PubMed]

5. Wang, D.; Wang, H.; Gu, L. Antidepresivní a kognitivní zlepšení aktivity tradiční čínské byliny Cistanche. Doplněk založený na důkazech. Alternativní. Med. 2017, 2017, 1.–9. [CrossRef] [PubMed]

6. Xue, Z.; Yang, B. Fenylethanoidní glykosidy: Výzkumné pokroky v jejich fytochemii, farmakologické aktivitě a farmakokinetice. Molekuly 2016, 21, 991. [CrossRef] [PubMed]

7. Jiang, Y.; Tu, P. Analýza chemických složek u druhů Cistanche. J. Chromatogr. A 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

8. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T. Antioxidační účinky fenylethanoidů z Cistanche deserticola. Biol. Pharm. Býk. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

9. Ma, Z.; Yang, Z.; Li, P.; Li, C. Současné stanovení osmi fenylethanoidních glykosidů v různých druzích rodu Cistanche pomocí vysoce výkonné kapalinové chromatografie. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2008, 31, 2838–2850. [CrossRef]

10. Jiang, Y.; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Diferenciace Herba Cistanches pomocí otisku prstu s vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií-detekce diodového pole-hmotnostní spektrometrie. J. Chromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

11. Lu, D.; Zhang, J.; Yang, Z.; Liu, H.; Li, S.; Wu, B.; Ma, Z. Kvantitativní analýza Cistanches Herba pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie spojené s detekcí diodového pole a hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením v kombinaci s chemometrickými metodami. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]

12. Píseň, Q.; Li, J.; Liu, X.; Zhang, Y.; Guo, L.; Jiang, Y.; Song, Y.; Tu, P. Domácí online dělení slov o tlakové kapalinové extrakci, turbulentní průtokové chromatografii a vysokovýkonné kapalinové chromatografii, Cistanche deserticola jako případová studie. J. Chromatogr. 2016, 1438, 189–197. [CrossRef] [PubMed]

13. Han, L.; Boakye-yiadom, M.; Liu, E.; Zhang, Y.; Li, W. Strukturní charakterizace a identifikace fenylethanoidních glykosidů z Cistanches deserticola YC Ma pomocí UHPLC/ESI–QTOF–MS/MS. Phytochem. Anální. 2012, 23, 668–676. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, S.; Jiang, X.; Wu, L.; Wang, Z.; Huang, L. Chemická a genetická diskriminace cistanches Herba na základě UPLC-QTOF/MS a čárových kódů DNA. PLoS ONE 2014, 9, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Song, Y.; Song, Q.; Li, J.; Zhang, N.; Zhao, Y.; Liu, X.; Jiang, Y.; Tu, P. Integrovaná strategie pro kvantitativní rozlišení heřmánku mezi Cistanche deserticola a C. tubulosa pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie-hybridní trojité kvadrupólové-lineární iontové pasti hmotnostní spektrometrie. J. Chromatogr. 2016, 1429, 238–247. [CrossRef] [PubMed]

16. Niu, Y.; Yin, L.; Luo, S.; Dong, J.; Wang, H.; Hashi, Y.; Chen, S. Identification of the Anti-oxidants in Flos Chrysanthemi by HPLC-DAD-ESI/MSN and HPLC Coupled with Post-column Derivatisation System. Phytochem. Anální. 2013, 24, 59–68. [CrossRef] [PubMed]

17. Chen, LX; Hu, DJ; Lam, SC; Ge, L.; Wu, D.; Zhao, J.; dlouhý, ZR; Yang, WJ; Fan, B.; Li, SP Porovnání antioxidačních aktivit různých částí chryzantémy sněžné (Coreopsis tinctoria Nutt.) a identifikace jejich přirozených antioxidantů pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie spojené s detekcí diodového pole a hmotnostní spektrometrií a 2,20 -azinobis({ {4}}ethylbenzthiazolin-sulfonová kyselina) test na bázi diamonné soli. J. Chromatogr. 2016, 1428, 134–142. [PubMed]

18. Fu, M.; Xu, Y.; Chen, Y.; Wu, J.; Yu, Y.; Zou, B.; An, K.; Xiao, G. Hodnocení bioaktivních flavonoidů a antioxidační aktivity v Pericarpium Citri Reticulate (Citrus reticulata "Chachi") během skladování. Food Chem. 2017, 230, 649–656. [CrossRef] [PubMed]

19. Zhang, X.; Xu, M.; Zhang, J.; Wu, L.; Liu, J.; Si, J. Identifikace a hodnocení antioxidačních složek v květech pěti druhů Chimonanthus. Ind. Crop. Prod. 2017, 102, 164–172. [CrossRef]

20. Yang, J.; Hu, J.; Rena, K.; Ka, S.; Du, N. Vztahy mezi strukturou a aktivitou fenylethanoidních glykosidů v rostlinách Cistanche salsa na antioxidační aktivitu. J. Chin. Med. Mater. 2009, 32, 1067–1069.

21. He, W.; Fang, T.; Tu, P. Pokrok ve výzkumu farmakologických aktivit echinakosidu. Čína J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

22. Li, Y.; Chen, J.; Li, Y.; Li, P. Identifikace a kvantifikace lapačů volných radikálů v květních poupatech druhu Lonicera pomocí online testu HPLC-DPPH spojeného s elektrosprejovou ionizační kvadrupólovou tandemovou hmotnostní spektrometrií s časem letu. Biomed. Chromatogr. 2012, 26, 449–457. [CrossRef] [PubMed]

23. Yao, H.; Chen, Y.; Shi, P.; Hu, J.; Li, S.; Huang, L.; Lin, J.; Lin, X. Screening a kvantitativní analýza antioxidantů v plodech Livistona Chinensis R. Br za použití HPLC-DAD-ESI MS spojené s předkolonovým DPPH testem. Food Chem. 2012, 135, 2802–2807. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, Y.; Hao, H.; Wang, G.; Tu, P.; Jiang, Y.; Liang, Y.; Dai, L.; Yang, H.; Lai, L.; Zheng, C.; a kol. Přístup k identifikaci sekvenčních metabolitů typického fenylethanoidního glykosidu, echinakosidu, založený na analýze hmotnostní spektrometrie kapalinové chromatografie-iontové pasti-čas letu. Talanta 2009, 80, 572–580. [CrossRef] [PubMed]

25. Qi, M.; Xiong, A.; Li, P.; Yang, Q.; Yang, L.; Wang, Z. Identifikace akteosidu a jeho hlavních metabolitů v moči potkanů ​​ultravýkonnou kapalinovou chromatografií v kombinaci s elektrosprejovou ionizační kvadrupólovou tandemovou hmotnostní spektrometrií s časem letu. J. Chromatogr. B 2013, 940, 77–85. [CrossRef] [PubMed]

26. Li, W.; Sun, X.; Píseň, H.; Ding, J.; Bai, J.; Chen, Q. Identifikace absorbovaných složek a jejich metabolitů v potkaním séru a moči na bázi HPLC/Q-TOF-MS po perorálním podání extraktu z Cistanche deserticola. J. Food Sci. 2015, 80, H2079–H2087. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, Y.; Zhou, G.; Xing, S.; Xing, S.; Tu, P.; Li, X. Identifikace echinakosidových metabolitů produkovaných lidskými střevními bakteriemi pomocí ultravýkonné kapalinové chromatografie-kvadrupólová hmotnostní spektrometrie doby letu. J. Agric. Jídlo. Chem. 2015, 63, 6764–6771. [CrossRef] [PubMed]