Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Pls klikněte zde pro část 1

2.4. Vliv podmínek extrakce na CAI

Kolagen je nejhojnější protein u savců a hlavní strukturální složka extracelulární matrix s opakujícími se jednotkami gly-pro-hyp delšími než 1400 aminokyselin. Kolagenáza je enzym, který štěpí peptidové vazby kolagenu, které tvoří kůži, kosti, šlachy a vazy. Kolagen přítomný v dermis je rozkládán kolagenázou, která způsobuje kožní vrásky a snižuje elasticitu pokožky; proto je nutné snížit aktivitu kolagenázy, aby se zabránilo vráskám kůže [32,33]. Optimalizace podmínek SAE byla provedena za účelem maximalizace CAI extraktu z arašídových skořápek. Pro optimalizaci tří jednotlivých proměnných bylo zapotřebí celkem 17 běhů a experimentální data CAI získaná v rámci experimentálních souborů byla 25,2 % ~ 92,3 % (tabulka 2). Na základě 17 experimentálních běhů, použitím vícenásobné regresní analýzy na experimentální data, byly odezva a nezávislé proměnné spojeny pomocí následující kvadratické regresní rovnice ve smyslu kódovaných parametrů uvedených v tabulce 3. Poté byla použita ANOVA ke stanovení regresních koeficientů. , statistickou významnost a přizpůsobení matematickým modelům. Střední kvadratické hodnoty byly vypočteny vydělením součtu druhých mocnin každého zdroje variace jejich stupni volnosti a ke stanovení statistiky byla použita 95procentní úroveň spolehlivosti (= 0.05). význam v analýze kvadratického modelu. Výsledky ANOVA potvrdily, že R2 rovnice kvadratické regrese byla 0,8862 a že p-hodnota byla 0,0134, což je méně než hladina významnosti (p < 0,05),="" což="" ukazuje="" na="" dobrý="" model="" shody="" a="" statistické="" význam="" pro="" predikci="" hodnot="" cai.="" v="" primárním="" členu="" x2="" a="" x3="" vykazovaly="" významné="" účinky="" a="" členy="" interakčního="" účinku="" byly="" významné="" u="" x1x2="" a="" x2x3="" (p="">< 0,05).="" vliv="" podmínek="" sae="" na="" produkci="" cai="" byl="" potvrzen="" v="" pořadí:="" teplota="" extrakce="" (p="0,0236)"> koncentrace ethanolu (p=0,0240) > doba extrakce (p {{37 }}.8505), což ukazuje, že vliv teploty extrakce a koncentrace ethanolu byly významné na CAI.

Obrázek 1c ukazuje poruchový graf, ve kterém jsou fixovány dvě proměnné a vizualizuje vliv jedné proměnné na CAI. Ukázalo se, že účinky všech tří proměnných na CAI jsou podobné a tyto tři proměnné vykazovaly významné účinky a zvyšovaly a následně snižovaly CAI, jak se každá nezávislá proměnná zvyšovala. V naší studii byly vyvinuty 3D křivky povrchové odezvy pro vizualizaci interakce dvou nezávislých proměnných v CAI pomocí kvadratických regresních rovnic (obrázek 4). Když byla koncentrace ethanolu fixována ve středu, vliv doby extrakce a teploty na CAI byl vyhodnocen na obrázku 4A. Jak se obě proměnné měnily současně, CAI se zvýšil na

33,4 min a 76,8 C a opět poklesla po maximální CAI 92,8 procenta . Jak je znázorněno na obrázku 4B,C, CAI měl nejvyšší hodnotu při koncentraci ethanolu 64,3 procenta, což následně vykazovalo postupný klesající sklon, což naznačuje, že binární rozpouštědlo sestávající z 64,3 procenta ethanolu je vhodnější jako extrakční rozpouštědlo. Tento výsledek je v souladu s předchozím výzkumem, který uvedl, že binární rozpouštědlo vody a ethanolu vykazovalo vyšší CAI než voda při extrakci bioaktivních sloučenin z Orostachys japonica, což naznačuje, že 50 procent etanolu by bylo výhodnější při extrakci.kůže-bělení přísady [34]. Maximální CAI extraktu arašídové skořápky předpovězené kvadratickým regresním modelem bylo 94,5 procenta, což bylo získáno za podmínek doby extrakce 45,1 min, extrakční teploty 93,6 C a koncentrace ethanolu 42,3 procenta. CAI získaný v naší studii byl 94,5 procenta, což je více než dvojnásobek účinků 39,4 procenta a 40,3 procenta hodnot CAI extraktů ze zeleného čaje uváděných Oh et al. [35].

Obrázek 4. Grafy povrchu odezvy pro CAI extraktů z arašídových skořápek podle doby extrakce, extrakční teploty a koncentrace ethanolu. CAI jako funkce extrakční teploty a doby extrakce (A), doby extrakce a koncentrace ethanolu (B) a extrakční teploty a koncentrace ethanolu (C).

Cistanche mákůžebělící efekt

2.5. Optimální podmínky těžby

Antioxidant, kůže-bělenía účinky proti vráskám jsou všechny důležité funkce pro kosmetiku a je nutné odvodit podmínky, které mohou maximalizovat tyto tři funkce současně při optimalizaci podmínek SAE. Obrázek 5 ukazuje optimalizační postup, který může současně maximalizovat RSA (Y1), TAI (Y2) a CAI (Y3) překrýváním každé optimální podmínky vrstevnicového grafu odvozeného pomocí kvadratické regresní rovnice. Rozsahy nezávislých proměnných pro optimalizaci tří proměnných byly omezeny na dobu extrakce 5.0~55.0 min, teplota extrakce 26.{{10}} ~94.0 .C a koncentraci ethanolu 0,0 procenta ~99,5 procenta (tabulka 5). Podle individuálních optimálních extrakčních podmínek byly optimální podmínky SAE 31,2 min doby extrakce, 36,6 °C extrakční teploty, 93,2 procenta koncentrace ethanolu a za výše uvedených podmínek RSA 74,9 procenta, TAI 50,6 procenta a CAI { {28}}, 8 procent bylo předpovězeno. Když byly předpovězené hodnoty RSA, TAI a CAI porovnány s hodnotami získanými z experimentu pro validaci, hodnoty z ověřovacího testu byly podobné hodnotám předpokládaných hodnot, kde hodnoty byly 78,2 procenta, 52,3 procenta a 87,7 procenta. respektive.

Obrázek 5. Superponující vrstevnicová mapa pro současnou optimalizaci tří proměnných pro maximalizaci RSA ( procenta ), TAI ( procenta ) a CAI ( procenta ). Koncentrace ethanolu byla stanovena na optimální úrovni 93,2 procenta.

Tabulka 5. Srovnání RSA, TAI a CAI extraktu z arašídové skořápky získaného Soxhletovou extrakcí (SE) a ultrazvukem asistovanou extrakcí (UAE) za různých extrakčních podmínek.

1 Ultrazvuková extrakce skořápky arašídů pod středovým bodem CCD (Běh č. 15, 16, 17); 2 ultrazvukem asistované extrakce arašídové skořápky za optimálních podmínek extrakce.

2.6. Srovnání SE a SAE

Abychom potvrdili účinnost extrakce SAE, porovnáváme RSA, TAI a CAI extraktu z arašídových skořápek vyrobených pomocí technik SAE a Soxhletovy extrakce (SE). Když byla SE prováděna za obecných podmínek SE s použitím 99,5% etanolu při 70.C po dobu 4 hodin extrakce, RSA, TAI a CAI byly zjištěny jako 75,5 procenta, 60,2 procenta a 74,4 procenta, což se příliš nelišily od výsledků získaných za optimálních podmínek SAE. Nicméně, když byly SE podmínky nastaveny na stejné jako optimální podmínky SAE 31,2 min a 93,2 procenta etanolu, RSA, TAI a CAI se snížily o 62,0, 28,3 a 45,6 procent, v tomto pořadí, ve srovnání s SAE za optimálních podmínek. Výhoda ultrazvuku při výrobě užitečných materiálů ze skořápek arašídů byla hodnocena jako proces vhodný pro vysokou produktivitu a industrializaci díky nízké spotřebě rozpouštědla a krátké době extrakce.

2.7. Exprese mRNA MMP-3 a TRP-1

V melanocytech savců je melanogeneze a hydrolýza kolagenu řízena geny TRP a MMP, v daném pořadí, a TRP{0}} a MMP-3 jsou známy jako hlavní geny pro regulaci melanogeneze a hydrolýzy kolagenu ; proto byla provedena analýza RT-PCR na celobuněčných lyzátech B16-F0 buněk a účinek extraktu z arašídových skořápek vyrobených ze SAE za optimálních podmínek (31,2 min, 36,6 C, 93,2 procenta) na mRNA expresi MMP-3 a TRP-1. Jak ukazuje obrázek 6, extrakt z arašídové skořápky významně snížil expresi MMP-3 a TRP-1 v B16-F0 buňkách, když byly experimenty s genovou expresí prováděny s arašídy rozsah koncentrace extraktu z lastur 0~1 mg/ml. Extrakt z arašídové skořápky významně snížil expresi MMP-3 a TRP-1 o 6,{24}}krát a 8{26}}krát, v uvedeném pořadí, při dávce 1,{30}} mg /ml. Tyto výsledky naznačují, že extrakt z arašídových skořápek inhibuje degradaci kolagenu v buňkách B16F0 inaktivací MMP-3 na inaktivaci MMP-1 a narušuje spolupráci MMP-9 [36]. Stávající studie ukázaly, že ošetření rostlinnými extrakty inhibovalo expresi transkripčního faktoru spojeného s mikroftalmií (MITF) fosforylací proteinkinázy regulované extracelulárním signálem (ERK). Inhibiční účinek na produkci melaninu extraktem z arašídových skořápek je tedy připisován inhibici aktivity tyrosinázy prostřednictvím inhibice exprese ERK a MITF [37]. Extrakty z arašídových skořápek tedy snížily hladiny mRNA exprese TRP-1 a MMP-3, což naznačuje, že extrakt ze skořápek arašídů má silné inhibiční účinky na kolagenolýzu a melanogenezi, což z něj činí vynikající kosmetický materiál s kůžíbělenía účinky proti vráskám.

Obrázek 6. Účinek extraktu z arašídové skořápky na expresi TRP-1 a MMP-3 mRNA. B16-F0 buňky byly ošetřeny různými koncentracemi extraktu z arašídových skořápek po dobu 24 hodin. Hladiny mRNA MMP-9 a TRP-1 byly měřeny pomocí RT-PCR (a). Intenzity pásů byly odhadnuty pomocí softwaru Quantity One a normalizovány na -aktin (* p < 0,05).="" všechna="" data="" jsou="" vyjádřena="" jako="" průměr="" o="" sd="" ze="" tří="" samostatných="" experimentů="" provedených="" v="" triplikátech.="" nt="neošetřený" vzorek,="" kvantifikace="" exprese="" trp-1="" mrna="" (a),="" kvantifikace="" exprese="" mmp-3="" mrna="">

cistanche phelypaes prospívá pleti

3. Materiály a metody

3.1. Materiály a činidla

Arašídové skořápky byly zakoupeny od Nonghyup mart (Gochang, Jeonbuk, Korea) v březnu 2019 a skořápky byly sušeny při 60 °C v suché sušárně (FC 49, Lab House, Soul, Korea) po dobu 24 hodin, dokud suchá hmotnost zůstala konstantní. Sušené arašídové skořápky byly rozdrceny pomocí kuchyňského robotu (Hanil HMF-3800, Soul, Korea) a poté protlačeny přes 600 um síto. Ethanol byl zakoupen od Samchun chemical (95,0 procent v/v, Soul, Korea). Folin-Ciocalteuovo činidlo, kyselina gallová (97 procent) a kvercetin byly zakoupeny od společnosti Merck (Kenilworth, NJ, USA). 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), kyselina askorbová a 3,{13}}dihydroxy-L-fenylalanin (L-DOPA) byly zakoupeny od společnosti Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Všechny ostatní chemikálie použité v tomto experimentu byly analytické čistoty a byly zakoupeny od Sigma-Aldrich. Všechny zásobní roztoky byly připraveny čištěnou deionizovanou vodou za použití čistícího systému Milli-Q (Millipore, Burlington, VT, USA).

3.2. Ultrazvukem asistovaná extrakce a Soxhletova extrakce

Prášková skořápka arašídů (1 g) byla umístěna do extrakční nádoby, každá s 10 ml rozpouštědla a míchána pomocí vortexového mixéru (VM-10, Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) po dobu 1 min. Extrakce byla prováděna cirkulací vody v ultrazvukovém extraktoru (250 W, SD-D250H, Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) za použití externího chlazeného lázeňového cirkulátoru (CDRC8, Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) s digitálním časovačem a regulátorem teploty. Extrakce byla provedena pomocí ultrazvukového zařízení vybaveného digitálním časovačem a regulátorem teploty. Vzorky byly sonikovány po různé doby trvání experimentu a teploty při pracovní frekvenci 40 kHz. Poté byl extrakt centrifugován při 10,{10}} otáčkách za minutu po dobu 10 minut (236R, Labogene, Soul, Korea). Po centrifugaci byly objemy vzorků doplněny na 5 ml a před analýzou přefiltrovány přes 0,2 um membránový filtr. Pro Soxhletovu extrakci byly práškové arašídové skořápky (5 g) kontinuálně extrahovány 100 ml za použití 99,5% ethanolu po dobu 4 hodin (8 cyklů) při maximální teplotě 70 °C v Soxhletově přístroji. Ultrazvuková extrakční technika se ukázala jako velmi účinná při extrakci oleje z hroznových semen, výhoda ultrazvuku ve srovnání s konvenčními extrakčními metodami pro olej i polyfenoly byla podobná, protože výtěžnost oleje/polyfenolů byla získána s nižším rozpouštědlem spotřeba a kratší doba extrakce.

extrakt z cistanche tubolosa

3.3. Experimentální design

Experimentální design byl proveden pomocí CCD, typu RSM, aby se minimalizoval počet experimentálních běhů a studovala se interakce mezi faktory. Software Design-Expert® 8.0 (State-Ease, City, MN, USA) byl použit pro návrh experimentů, analýzu dat a optimalizaci extrakčních podmínek pro maximalizaci extrakce bioaktivních sloučenin majících antioxidant, kůže -bělenía účinky arašídové skořápky proti vráskám. Experimenty byly navrženy podle CCD, hodnoty rozsahu a středu tří prezentovaných nezávislých proměnných vycházely z výsledků předběžných experimentů (tabulka 1). CCD bylo použito k predikci optimálních podmínek SAE pro maximalizaci reakcí včetně RSA, TAI a CAI ze skořápek arašídů. Jako nezávislé proměnné byly vybrány tři proměnné doba extrakce (X1), teplota extrakce (X2) a koncentrace ethanolu (X3). Pro odhad reprodukovatelnosti bylo vytvořeno celkem 17 experimentálních běhů se třemi replikacemi v centrálních bodech. Kvadratický regresní model byl použit k přizpůsobení experimentálních dat a použit k predikci proměnných odezvy, jak ukazuje rovnice (1):

Y= 0 plus 1X1 plus 2X2 plus 3X3 plus 11X12 plus 22X22 plus 33X32 plus 12X1X2 plus 13X1X3 plus 23X2X3 (1)

kde Y je předpokládaná odezva; 0 je konstanta (intercept); 1, 2 a 3 jsou regresní koeficienty pro členy lineárního účinku; 11, 22 a 33 jsou členy kvadratického efektu; a 12, 13 a 23 jsou termíny účinku interakce. Analýza povrchu odezvy a ANOVA byly použity ke stanovení regresních koeficientů a statistické významnosti modelových členů ak přizpůsobení matematickým modelům experimentu [38].

3.4. DPPH Radical Scavenging Activity (RSA)

RSA extraktu z arašídových skořápek byl popsán v publikaci Pereira-Caro et al. [39]. Byl připraven roztok 0.01 mM DPPH v methanolu (95 procent) a 1,25 ml bylo přidáno k 0,25 ml zředěného extraktu. RSA byla stanovena pro měření absorbance při 517 nm pomocí UV-Vis spektrofotometru (UV1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japonsko) po 20 minutách inkubace. Blank byl připraven s použitím destilované vody a RSA byla vypočtena podle níže uvedeného.

(Rovnice (2)):

3.5. Inhibice aktivity tyrosinázy (TAI)

TAI byla provedena podle modifikované metody s použitím L-DOPA jako substrátu od Jo et al. [40]. Vzorky byly smíchány s 200 ul L-DOPA a 200 ul pufru fosforečnanu draselného (pH 6,8) a do zkumavky bylo přidáno 200 ul tyrosinázy (125 U/ml) a inkubovány při 37 °C po dobu 20 minut. Absorbance vzorku byla měřena při 475 nm pomocí UV-Vis spektrofotometru a výsledky byly porovnány s kontrolou. Pro každou koncentraci byla enzymová aktivita vypočtena jako procento ve srovnání s aktivitou testu s použitím pufru bez jakéhokoli inhibitoru a TAI byla vypočtena na základě následujícího vzorce. (Rovnice (3)):

kde Abs (kontrola) je absorbance pufru plus kolagenázy; Abs (vzorek) je absorbance pufru plus kolagenázy plus vzorku/standardu.

3.6. Inhibice aktivity kolagenázy (CAI)

Měření CAI extraktů bylo provedeno modifikací metod Wünsche a Heindricha [41]. Substrát, 4-fenylazobezyloxylkarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-Arg (FALGPA), byl rozpuštěn v 10 ml pufru na 1,2 mg/ml a poté bylo přidáno 125 ul roztoku a inkubováno po dobu 60 minut při 37 °C. Kolagenáza byla rozpuštěna v pufru na 0,4 mg/ml a do roztoku pufru bylo přidáno 75 ul roztoku enzymu. Směs enzym-substrát byla inkubována ve vodní lázni při 37 °C po dobu 30 minut a reakce byla zastavena přidáním 75 ul 20% kyseliny citrónové (w/v). Po přidání 1,5 ml ethylacetátu se oddělila ethylacetátová vrstva a měřila se absorbance při 320 nm. Procento inhibice bylo vypočteno podle následujícího vzorce.

w

kde Abs (kontrola) je absorbance pufru plus kolagenázy; Abs (vzorek) je absorbance pufru plus kolagenázy plus vzorku/standardu.

3.7. Údržba a kultivace buněčných linií

Melanomová buňka B16-F0 produkující melanom byla získána z Korea Cell Line Bank (KCLB, Chongno, Soul, Korea) a byla kultivována v Dulbeccově modifikovaném Eagleově médiu (DMEM, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) doplněné fetálním bovinním sérem (FBS, 10 procent, Welgene, Gyeongsan, Korea) a antibiotickým roztokem penicilin-streptomycin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Trypsin-EDTA (Gibco, Grand Island, NY, USA) byl použit pro trypsinizaci buněk. Všechny použité materiály byly třídy pro buněčnou kulturu.

3.8. Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR)

RT-PCR byla provedena za účelem měření změn v hladinách genové exprese MMP-3 a TRP-1 spojených sbělenía proti vráskám byly B16-F0 buňky kultivovány v 24-jamkové destičce ošetřené různými koncentracemi extraktu z arašídových skořápek v DMEM bez séra a inkubovány po dobu 24 hodin . Neošetřená buněčná kontrola byla udržována pod

stejné podmínky jako u testované skupiny během experimentu. Izolace RNA z buněk byla provedena pomocí AccuPrep® Universal RNA Extraction Kit (Bioneer, Daejeon, Korea). Komplementární DNA byla syntetizována pomocí AmfiRiert Platinum cDNA Synthesis Master Mix (GenDEPOT, Barker, TX, USA). Analýza RT-PCR byla provedena za použití systému CFX 96 touch PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) pro stanovení hladin mRNA. Použité primery byly následující: MMP-3 sense, 5/-AGTTTGGTGTCGCGGAGCAC-3/ a antisense, 5/- TACATGAGCGCTTCCGGCAC-3/; a TRP{{10}} smysl, 5/-GCTGCAGGAGCCTTCTTTCTTC- 3/ a antisense, 5/-AAGACGCTGCACTGCTGGTCT-3/. K amplifikaci příslušných genů za následujících podmínek cyklování byla použita vhodná sada primerů uvedená výše k amplifikaci příslušných genů: 94 °C po dobu 5 minut, poté následovalo 25 cyklů při 95 °C po dobu 5 s, 60 °C po dobu 30 s (pro MMP-3 ) a 60 °C po dobu 30 s (pro TRP-1) a 72 °C po dobu 30 s. Produkty PCR byly podrobeny elektroforéze na 1% agarózovém gelu, obarveny ethidiumbromidem a vizualizovány pomocí Gel Doc TM XR plus System a softwaru Quantity One 2.0 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Provozní protein, -aktin, byl použit jako kontrola nanášení s předpokladem, že hladiny exprese těchto proteinů zůstanou konstantní.

cistanche deserticola mábělenía účinky proti vráskám

4. závěr

V této studii byl komplementární přístup použit pro obnovu a použití bioaktivních látek ze zemědělských vedlejších produktů arašídových skořápek za účelem vývoje přísad s přidanou hodnotou s vícenásobným použitím. Nejprve jsme se pokusili zvýšit účinnost extrakce bioaktivních látek antioxidačními, kožnímibělenía účinky proti vráskám díky optimalizaci procesu SAE. Tato studie proto využila SAE pro účinnou produkci bioaktivních sloučenin s kůžíbělenía protivráskové účinky z arašídových skořápek a aplikovaná statisticky založená optimalizace pro maximalizaci RSA, TAI a CAI současně. Podmínky SAE byly optimalizovány pomocí CCD a bylo potvrzeno, že při extrakci bioaktivních sloučenin ze skořápek arašídů je třeba zvážit volbu rozpouštědla a koncentrace. Překrytím reakčních ploch byly stanoveny křivky tří závislých proměnných, doba extrakce 31,2 min, teplota extrakce 36,6 C, koncentrace ethanolu 93,2 procenta jako optimální podmínky SAE. Bylo potvrzeno, že RSA extraktů z arašídových skořápek je velmi vysoká a lze očekávat zvýšení TAI a CAI, což jsou indikátory kožního onemocnění.bělenía protivráskové účinky, resp. Optimalizace podmínek SAE potvrdila zvýšení produkce bioaktivních látek ve skořápkách arašídů.bělenía protivráskové aktivity extraktu z arašídových skořápek prostřednictvím snížení aktivity tyrosinázy a kolagenázy. Na základě toho byl hodnocen účinek arašídových skořápek na hladiny exprese MMP a TRP, aby se posoudilo, zda majíbělenía účinky proti vráskám na úrovni genové exprese.Bělenía účinky extraktů z arašídových skořápek proti vráskám byly potvrzeny snížením exprese mRNA a také inhibicí proteinových expresí MMP-3 a TRP-1. Proto se ukázalo, že extrakt ze skořápek arašídů je účinný vbělenía zlepšení vrásek na úrovni exprese proteinů a genů. Extrakt z arašídových skořápek s použitím SAE má vysokou antioxidační aktivitu a vynikající kožníbělenía účinky proti vráskám, což dává skořápce arašídů velký potenciál jako přírodní kosmetická a potravinářská složka. Kromě toho se má za to, že výroba bioaktivních sloučenin pomocí SAE může být aplikována na proces komercializace pro výrobu kosmetických, potravinářských a farmaceutických materiálů, vzhledem k vyššímu výtěžku produkce a sníženým nákladům na zpracování ve srovnání s konvenčními procesy.

Autorské příspěvky: Jednotlivé příspěvky autorů jsou specifikovány následovně: psaní- příprava původního návrhu, získávání finančních prostředků, supervize, psaní, editace, JWK; validace, analýza, metodika, DHG; Vyšetřování, metodologie, zpracování dat, editace, JWH; analýza, metodika, revize, JHK; Všichni autoři si přečetli publikovanou verzi rukopisu a souhlasí s ní.

Financování: Tento výzkum neobdržel žádné externí financování.

Prohlášení institucionální revizní komise: Neuplatňuje se.

Prohlášení o informovaném souhlasu: Neuplatňuje se.

Prohlášení o dostupnosti dat: V této studii nebyla vytvořena ani analyzována žádná nová data. Sdílení dat se na tento článek nevztahuje.

Konflikt zájmů: Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

Dostupnost vzorků: Vzorky sloučenin nejsou u autorů k dispozici.