Část 2: Echinakosid inhibuje uvolňování glutamátu potlačením napěťově závislého Ca2 plus vstupu a proteinkinázy C v terminálech cerebrokortikálních nervů potkana

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 a Su Jane Wang 3,*

Pls klikněte zde zpět na část 1

3.2 Terapeutické důsledky

Excitotoxicita, patologický proces způsobený nadměrným uvolňováním glutamátu a aktivací glutamátových receptorů, je hlavní příčinou smrti neuronů při akutních a chronických poruchách mozku, jako je mrtvice, traumatické poranění mozku, Parkinsonova a Alzheimerova choroba [13,41] a terapeutické strategie. zahrnující inhibici uvolňování glutamátu mohou být slibnými neuroprotektivními strategiemi pro léčbu takových onemocnění. Bylo potvrzeno, že echinakosid proniká hematoencefalickou bariérou (BBB) ​​a vykazuje neuroprotektivní účinky v různých in vivo modelech neurotoxicity [8,10–12,42]. Ačkoli mechanismus těchto neuroprotektivních účinků není zcela objasněn, bylo popsáno několik možných mechanismů včetně inhibice zánětlivé odpovědi, stabilizace mitochondriální funkce, antioxidace, vychytávání volných radikálů a napodobování neurotrofických funkcí [5,9,12,42]. V současné studii je schopnostechinakosidsnížení uvolňování glutamátu z nervových zakončení může také částečně vysvětlit jeho neuroprotektivní mechanismus. Zda však tento účinek přispívá ke zjevnému terapeutickému potenciáluechinakosidu poruch mozku spojených s glutamátovou excitotoxicitou vyžaduje další výzkum.

Neuroprotektivní účinkycistancon echinakosid

4.Materiály a metody

4.1. Chemikálie

Fura-2-acetoxymethylester (Fura-2-AM) a 3',3',3'-dipropylthiadikarbocyanin jodid [DiSC3(5)] byly zakoupeny od Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). o-konotoxin MVIIC, rotttlerin, 2-[1-(3-dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl)maleimid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro- 13-methyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ {27}}c]karbazol-12-propannitril (Go6976) a N-[2-(p-bromcinnamylamino)ethyl]-5-isochinolinsulfonamid (H89) byly zakoupeny od společnosti Tocris Bioscience (Bristol, UK ).Echinakosid, dantrolen, DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartát (DL-TBOA), 7-chlor-5-(2-chlorofen)-1,5-dihydro{ {10}},1-benzothiazepin-2(3H)-on (CGP37157), 2-(2-amino-3- methoxyfenyl)-4H -1-benzopyran-4-one) (PD98059), ethylenglykol bis(-aminoethylether)-N,N,N/,N/-tetraoctová kyselina (EGTA) a všechna ostatní činidla byla zakoupena od společnosti Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Zvířata

Byli použiti dvouměsíční samci potkanů ​​Sprague–Dawley. Zvířata byla chována ve standardizovaných podmínkách prostředí (22 ± 1 oC; 50% relativní vlhkost; 12h cyklus světlo/tma) a byl jim umožněn neomezený přístup k potravě a vodě. Zvířata byla usmrcena dekapitací a mozková kůra byla rychle odstraněna při 4 oC. Experimentální postupy byly schváleny Fu Jen Institutional Animal Care and Utilization Committee (A10259), v souladu s National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Bylo vynaloženo veškeré úsilí k minimalizaci utrpení zvířat a použití minimálního počtu zvířat nezbytného k dosažení spolehlivých výsledků.

4.3. Synaptozomální přípravky

Synaptosomy byly purifikovány z mozkové kůry krys na diskontinuálních Percollových gradientech, jak bylo popsáno dříve [43,44]. Stručně, tkáň byla homogenizována v médiu obsahujícím 0,32 M sacharózu (pH 7,4), homogenát byl centrifugován 10 min při 3000×g (5{{25} }00 ot./min v rotoru JA 25,5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) a 4 oC a supernatant byl znovu centrifugován po dobu 12 minut při 14 500 x g (11, 000 ot./min v rotoru JA 25.5). Peleta byla jemně resuspendována v 0,32 M sacharóze (pH 7,4) a alikvot této synaptosomální suspenze (2 ml) byl umístěn na 3 ml Percoll diskontinuální gradient obsahující 0,32 M sacharózu, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-dithiothre, 3 procenta, 10 procent a 23 procent Percoll (pH 7,4). Po odstředění při 32 500 x g (16 500 ot./min v rotoru JA 20,5) po dobu 7 minut při 4 oC byly synaptozomy získány z pásů 10 % až 23 % Percoll a byly zředěny na konečný objem 30 ml HEPES pufrovací médium (140 mM NaCl, 5 mM KCI, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2﹒ 6H20, 1,2 mM Na2HP04, 10 mM glukóza a 10 mM HEPES (pH 7,4)). Po další centrifugaci při 27,000xg (15 000 ot./min v JA 25,5) po dobu 10 minut byla synaptosomová peleta resuspendována ve 3 ml HEPES pufrového média a obsah proteinu byl stanoven pomocí Bradfordova testu. Nakonec bylo 0,5 mg suspenze synaptozomů naředěno v 10 ml pufru HEPES a centrifugováno při 3000 x g (5000 ot./min v rotoru JA 20.1) po dobu 10 minut. Supernatant byl zlikvidován a pelety obsahující synaptozomy byly uloženy na ledu a použity během 4–6 hodin.

bylina cistanche

4.4. Uvolňování glutamátu

Uvolňování glutamátu bylo testováno online fluorimetrií, jak bylo popsáno dříve [45,46]. Synaptosomální pelety byly resuspendovány v pufrovém médiu HEPES (0,5 mg/ml) a preinkubovány při 37 oC po dobu 10 minut v přítomnosti 16 uM hovězího sérového albuminu, aby se navázaly jakékoli volné mastné kyseliny uvolněné ze synaptozomů během preinkubace. Alikvotní část 2-ml synaptozomů byla přenesena do míchané kyvety obsahující 2 mM NADP plus, 50 jednotek glutamátdehydrogenázy a 1,2 mM CaCl2 a fluorescence NADPH byla měřena v Perkin-Elmer LS{14 }} spektrofluorimetr (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) při excitačních a emisních vlnových délkách 340 a 460 nm. Protože synaptozomy nejsou přístupné elektrické stimulaci, byl ke stimulaci uvolňování glutamátu použit blokátor draslíkového kanálu 4-aminopyridin. 4-aminopyridin destabilizuje membránový potenciál a předpokládá se, že způsobuje opakovanou spontánní depolarizaci závislou na Na plus kanálu, která se těsně blíží in vivo depolarizaci synaptického zakončení, která vede k aktivaci napěťově závislých Ca2 plus kanálů a uvolňování neurotransmiterů [47 ]. Data byla získávána ve 2s intervalech. Na konci každého experimentu byl přidán standard exogenního glutamátu (5 nmol). Hodnota změny fluorescence produkovaná standardním přídavkem byla použita k výpočtu uvolněného glutamátu jako nanomolů glutamátu na miligram synaptosomálního proteinu (nmol/mg). Hodnoty uvolňování uvedené v textu jsou úrovně dosažené v ustáleném stavu po 5 min depolarizace (nmol/mg/5 min). Kumulativní data byla analyzována pomocí tabulek Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, USA) a MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Potenciál plazmové membrány

Plazmatický membránový potenciál byl stanoven barvivem citlivým na membránový potenciál, DiSC3(5) [48]. Synaptosomy byly resuspendovány v pufrovacím médiu HEPES a alikvoty o objemu 2 ml byly přeneseny do míchané kyvety obsahující 5 uM DiSC3(5) při 37 oC ve spektrofluorometru Perkin–Elmer LS{10}} (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA , USA). Poté, co se směs nechala ekvilibrovat po dobu 3 minut, byla stanovena fluorescence při excitačních a emisních vlnových délkách 646 a 674 nm. Data byla sbírána ve 2s intervalech. Kumulativní data byla analyzována pomocí MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) a vyjádřena ve fluorescenčních jednotkách.

4.6. Cytosolický Ca2 plus koncentrace ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C byl měřen pomocí indikátoru Ca2 plus fura-2. Synaptosomy (0,5 mg/ml) byly preinkubovány v HEPES pufrovém médiu obsahujícím 5 uM fura{6}} a 0,1 mM CaCl2 po dobu 30 minut při 37 oC v míchané zkumavce . Po nanesení fura-2 byly synaptozomy centrifugovány v mikrocentrifuze po dobu 30 s při 3000× g (5000 ot./min.). Synaptosomální pelety byly resuspendovány v HEPES pufrovacím médiu a synaptosomální suspenze byla míchána v termostatované kyvetě ve spektrofluorometru Perkin-Elmer LS{17}} (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Po 3 minutách byl přidán CaCl2 (1 mM) a další přídavky byly provedeny po dalších 10 minutách. Fluorescenční data byla shromážděna při excitačních vlnových délkách 340 a 380 nm (emisní vlnová délka 505 nm) ve 2s intervalech. [Ca2 plus]C (nM) byl vypočten pomocí kalibračních postupů [49] a rovnic popsaných dříve [50]. Kumulativní data byla analyzována pomocí MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western blotting

Synaptosomy byly homogenizovány v lyzačním pufru (10 mM HEPES pufr, pH 7,4), 1% Triton X-100 a směsi inhibitoru proteázy. Lyzáty byly vyčeřeny centrifugací a koncentrace proteinu byla stanovena pomocí soupravy pro stanovení proteinů (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Stejná množství proteinů byla oddělena elektroforézou na polyakrylamidovém gelu s dodecylsulfátem sodným (SDS-PAGE) a přenesena na nitrocelulózovou membránu. Membrány byly blokovány Tris-pufrovaným fyziologickým roztokem, který obsahoval 5 procent nízkotučného mléka a inkubovány s vhodnou primární protilátkou (fosfo-proteinkináza C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) přes noc při 4 oC. Po třech promytích v Tris-pufrovaném fyziologickém roztoku byla membrána poté ošetřena sekundární protilátkou konjugovanou s křenovou peroxidázou (1:3000) po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Membrány byly poté promyty alespoň třikrát Tris-pufrovaným fyziologickým roztokem a vizualizovány za použití vylepšeného chemiluminiscenčního systému (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikvot vzorků byl nanesen a sondován anti-PKC protilátkou pro detekci PKC jako kontrola nanášení. Úroveň exprese nebo fosforylace byla hodnocena hustotou pásu, která byla kvantifikována denzitometrií. Denzitometrická kvantifikace pásů byla analyzována pomocí softwaru Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Statistická analýza

Data byla získána z jednoho synaptosomálního preparátu a nebyla na sobě nezávislá. K testování významnosti účinku léku oproti kontrole byl použit dvoustranný Studentův t-test. Když bylo požadováno další srovnání (např. zda druhá léčba ovlivnila působení echinakosidu), byla použita jednocestná ANOVA následovaná Tukeyho testem. Analýza byla dokončena pomocí softwaru SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Data jsou vyjádřena jako průměr ± SEM; významnost byla vyhodnocena při p < 0,05="" pro="" všechna="" statistická="">

cistanche

5. Závěry

Toto je první studie prokazující, že echinakosid inhibuje uvolňování glutamátu z cerebrokortikálních synaptosomů potkana snížením Ca2 plus influxu přes kanály Cav2.2 a Cav2.1 a tato inhibice uvolňování je pravděpodobně závislá na supresi dráhy proteinkinázy C, alespoň v část. Toto zjištění je cenné, protože poskytuje nový pohled na mechanismy působení echinakosidu v mozku.

Poděkování: Tato práce byla podpořena grantem Ministerstva vědy a technologie (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autorské příspěvky: Tzu Yu Lin a Su Jane Wang vymysleli a navrhli experimenty; Cheng Wei Lu provedl experimenty; Cheng Wei Lu a Shu Kuei Huang analyzovali data; Su Jane Wang napsala noviny.

Konflikt zájmů: Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

bylinný extrakt cistanche

Reference

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analýza fenylethanoidových glykosidů Herba cistanchis pomocí RP-HPLC. Acta Pharm. Hřích. 1997, 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Synergické antioxidační účinky alkamidů, derivátů kyseliny kávové a polysacharidových frakcí z Echinacea purpurea na in vitro oxidaci lidských lipoproteinů s nízkou hustotou. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulace zprostředkovaná bylinným sirupem obsahujícím standardizovaný extrakt z kořene Echinacea: Pilotní studie na zdravých lidských subjektech na expresi cytokinového genu. Fytomedicína 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. On, WJ; Fang, TH; Tu, PF Pokrok ve výzkumu farmakologických aktivit echinakosidu. Čína J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinakosid zachraňuje neuronální buňky SHSY5Y před apoptózou vyvolanou TNFalfa. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotektivní aktivity fenylethanoidních glykosidů z Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinakosid chrání před 6-mitochondriální dysfunkcí indukovanou hydroxydopaminem a zánětlivými reakcemi v buňkách PC12 prostřednictvím snížení produkce ROS. Evid. Založený doplněk. Alternativní. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Přechodná expozice echinakosidu je dostatečná k aktivaci signalizace Trk a ochraně neuronových buněk před rotenonem. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotektivní účinky echinakosidu v myším MPTP modelu Parkinsonovy choroby. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Účinky echinakosidu na histio-centrální hladiny aktivní hmoty u krys s uzávěrem střední mozkové tepny. Biomed. Environ. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, ČR; Lin, HC; Su, MH Reverze pomocí vodných extraktů z Cistanche tubulosa z behaviorálních deficitů v modelu potkanů ​​podobných Alzheimerově chorobě: Relevance pro ukládání amyloidu a funkci centrálního neurotransmiteru. Doplněk BMC. Alternativní. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofické a neurozáchranné účinky echinakosidu v subakutním MPTP myším modelu Parkinsonovy choroby. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamát jako neurotransmiter v mozku: přehled fyziologie a patologie. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; No, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koenzym Q10 inhibuje glutamátovou excitotoxicitu a mitochondriální alteraci zprostředkovanou oxidačním stresem na myším modelu glaukomu. Vyšetřování. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Vápník a excitotoxické neuronální poškození. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamátové receptory, neurotoxicita a neurodegenerace. Pflugerové. Oblouk. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekulární mechanismy excitotoxické smrti neuronových buněk zprostředkované glutamátovým receptorem. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotekce antagonisty glutamátového receptoru proti záchvatům indukované excitotoxické buněčné smrti ve stárnoucím mozku. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Neuroprotektivní účinky NMDA a antagonistů metabotropního glutamátového receptoru skupiny I proti neurodegeneraci indukované homocysteinem v hippocampu potkana: Studie in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Role excitotoxicity u neurodegenerativních onemocnění: důsledky pro terapii. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Terapeutické přístupy založené na glutamátu: Klinické studie s antagonisty NMDA. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordán, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotektivní minocyklin tlumí glutamátergní neurotransmisi a signalizaci Ca2 plus v hipokampálních neuronech. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantin potlačuje uvolňování glutamátu prostřednictvím inhibice napěťově závislého vstupu Ca2 plus a proteinkinázy C v nervových zakončeních mozkové kůry potkana: Mechanismus nezávislý na NMDA receptoru. Neurochem. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekompetitivní antagonista metabotropního glutamátového 5 receptoru (E)-2-methyl-6-styryl-pyridin (SIB1893) potlačuje uvolňování glutamátu prostřednictvím inhibice napěťově závislého Ca2 plus vstupu do cerebrokortikálních nervových zakončení potkana (synaptosomy). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Rychlá metoda pro izolaci synaptozomů na Percollových gradientech. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE protein-dependentní uvolňování glutamátu z astrocytů.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Terapeutické přístupy založené na glutamátu: Cílení na transportní systém glutamátu.

Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Ca2 plus kanál/ryanodinový receptor sarkoplazmatického retikula: Modulace endogenními efektory, léky a chorobnými stavy. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteinkinázou C delta zprostředkovaná cytotoxicita 6-hydroxydopaminu prostřednictvím trvalé aktivace kinázy 1/2 regulované extracelulárním signálem v buňkách PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, nový inhibitor proteinkinázy. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Na vápníku závislé a nezávislé uvolňování glutamátu ze synaptozomů monitorované kontinuální fluorometrií. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Spojení neurotransmiterových receptorů s iontovými kanály v mozku. Science 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptická inhibice vyvolaného uvolňování neurotransmiteru. Trendy Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmakologická charakterizace presynaptických kalciových kanálů pomocí subsekundových biochemických měření synaptosomální neurosekrece. Neurofarmakologie 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferenciální spojení vápníkových kanálů typu N a P/Q s glutamátovou exocytózou v mozkové kůře potkana. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vázquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presynaptická modulace uvolňování glutamátu se zaměřuje na různé vápníkové kanály v cerebrokortikálních nervových zakončeních potkana. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN Nervový terminál GABAA receptory aktivují signalizaci závislou na Ca2 plus/kalmodulinu k inhibici napěťově řízeného přítoku Ca2 plus a uvolňování glutamátu. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; Černá, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL PKC-dependentní regulace transepiteliální rezistence: Role MLC a MLC kinázy. Dopoledne. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Regulace sekrece neurotransmiterů proteinkinázou C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforylace synapsinu I a MARCKS v nervových zakončeních je zprostředkována vstupem Ca2 plus přes kanál Ca2 plus citlivý na Aga-GI, který je spojen s exocytózou glutamátu. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]

41. Obrenovič, TP; Urenjak, J. Změněný glutamátergní přenos u neurologických poruch: Od vysokého extracelulárního glutamátu k nadměrné synaptické účinnosti. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinakosid inhibuje amyloidní fibrilaci HEWL a chrání před neurotoxicitou indukovanou A. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin inhibuje uvolňování glutamátu v cerebrokortikálních nervových zakončeních potkana. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin inhibuje uvolňování glutamátu a uplatňuje neuroprotekci proti excitotoxicitě vyvolané kyselinou kainovou v hippocampu krys. Neurotoxikologie 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS synaptosomy mají exocytotickou zásobu glutamátu. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistaminikum, inhibuje uvolňování glutamátu v cerebrokortikálních nervových zakončeních potkanů. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Repetitivní akční potenciály v izolovaných nervových zakončeních v přítomnosti 4-aminopyridinu: Účinky na cytosolický volný Ca2 plus a uvolňování glutamátu. J. Neurochem. 1989, 53,1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Iontová závislost membránového potenciálu a odezvy spojené s glutamátovým receptorem v synaptoneuzosomech, měřené pomocí cyaninového barviva, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokalizovaný vstup Ca2 plus přednostně ovlivňuje proteinovou defosforylaci, fosforylaci a uvolňování glutamátu. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Nová generace indikátorů Ca2 plus s výrazně zlepšenými fluorescenčními vlastnostmi. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]