Metody generování a vyhodnocování modelů zebřičky u lidských ledvinových onemocnění Část 2

Histologická analýza

Mutanti nemusí vždy vykazovat dostatečně informativní morfologické změny. Histologická analýza těchto embryí nebo orgánů dospělých může být nezbytná k určení rozdílu mezi mutanty a zvířaty divokého typu. Metody histologické analýzy pro larvy i dospělé zebřičky jsou dobře zavedené a lze je provádět vysoce výkonným způsobem (Sabaliauskas et al., 2006). Embrya zebrafish nebo dospělá tkáň mohou být zapuštěna do parafínu nebo JB-4 pryskyřice s následným rozřezáním mikrotomem ke studiu architektury tkáně (Sullivan-Brown et al., 2011; Copper et al., 2018). Kryořezání lze také provést s embryi zebrafish (Ferguson a Shive, 2019). Tyto tkáňové řezy se pak použijí pro imunofluorescenční barvení, imunohistochemické studie nebo H&E barvení. H&E barvení řezů dospělých ledvin ukázalo, že apikální strana proximálního tubulu byla zbarvena tmavě růžově a měla široký lumen, zatímco distální tubul měl světle růžovou skvrnu s úzkým lumen, což jasně označovalo rozdílný vzor barvení mezi segmenty ( McCampbell a kol., 2015). Technika barvení periodickou kyselinou-Schiff (PAS), která detekuje polysacharidy ve tkáních, má afinitu k epitelu kartáčkového lemu proximálního tubulu (McCampbell et al., 2015; McKee a Wingert, 2015). Methenaminové stříbro barví bazální membrány a může být použito pro barvení bazálních membrán nefrických tubulů a glomerulů (McCampbell et al., 2015). AKI model zebřičky inzultací gentamicinu ukázal zploštění epitelu, ztrátu apikálního kartáčkového lemu, tubulární distenzi a akumulaci úlomků v lumen, čímž podtrhuje užitečnost histologie při analýze modelů onemocnění zebřiček (Cianciolo Cosentino et al., 2013) .

V posledních letech získal velkou pozornost výzkum využití kmenových buněk a čínského bylinného léku pro léčbu onemocnění ledvin. Hlavním mechanismem těchto dvou terapií je podporovat opravu poraněných ledvinových tkání a chránit jezbývající renální funkce.

Čínský bylinný lék, cistanche, se používá v tradiční čínské medicíně k léčbě různých druhůchronická onemocnění ledvinod pradávna. Uvádí se, že cistanche má potenciál snížit zánět,snížit fibrózu ledvina podporují syntézu složek extracelulární matrice. Bylo zjištěno, že tyto účinky jsou způsobeny jeho bioaktivními složkami, včetně mnoha fenolických látek, triterpenoidů a kumarinů.

Na druhou stranu technologie kmenových buněk způsobila revoluci v lékařské praxi. Výzkum prokázal, že kmenové buňky se mohou diferencovat na různé typy ledvinových buněk a provádět terapeutické aktivity, včetně ochrany zbývajících funkčních ledvinových tkání, zpomalení tkáňové fibrózy a opravy poškozených tkání.ledvinové tkáně.

Klikněte na Jak užívat Cistanche

Další informace:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

V konečném důsledku by kombinace tradiční čínské medicíny s moderní vědou mohla být klíčem k léčbě různých druhůonemocnění ledvin. Tato strategie byla postupně přijata lékařskou komunitou a studie již ukázaly, že kombinovaná terapiecistanchea léčba kmenovými buňkami může značně snížit úmrtnost na onemocnění ledvin.

Na závěr použitícistanchea léčba kmenovými buňkami při léčbě onemocnění ledvin ukazuje velký potenciál a vyžaduje další výzkum. Kombinovaná terapie těchto dvou léčebných postupů by mohla poskytnout zlepšenou možnost léčby pro ty, kteří čelí onemocnění ledvin.

Identifikace defektů segmentace pronephros

Pronephros je rozdělen do různých segmentů, které plní různé funkce. Mechanismus této segmentace není jasně objasněn, ačkoli mnoho transkripčních faktorů bylo identifikováno jako regulátory segmentace. Rozdíly v segmentovém vzoru lze snadno identifikovat analýzou WISH s ribosondami, které specificky označují různé segmenty pronephros. Přesná poloha segmentů pronephros může být označena implementací dvojité in situ hybridizace segmentově specifických markerů a antisense ribosondy, která označuje somit (jako je smyhc1 a xirp2a). Nejběžnější segmentově specifické markery jsou slc20a1a pro PCT, trpm7 pro PST, slc12a1 pro DE, stcl pro CS a slc12a3 pro DL (obr. 2). Mutace v lidském HNF1b jsou spojeny s renálními abnormalitami, jako je renální dysplazie, glomerulocystická ledvina, oligomeganefronie a solitární funkční ledviny (Lindner, 1999; Bingham a kol., 2002; Bohn a kol., 2003). Naylor et al., (2013) analyzovali segmentaci pronephros pomocí WISH u hnf1b knock-out embryí zebrafish pomocí segmentově specifických markerových genů a zjistili, že markery proximálního a distálního tubulu u mutantů chyběly. Pomocí podobných experimentů bylo zjištěno, že gen 1 homeoboxu prázdných spirál transkripčního faktoru (emx1) podporuje distální pozdní osud a inhibuje distální časný osud během nefrogeneze (Morales et al., 2018). Wingert et al., (2007) provedli WISH analýzu embryí ošetřených RA a DEAB a zjistili, že léčba DEAB vedla ke ztrátě proximálních segmentů a expanzi distálních segmentů, zatímco léčba exogenní RA tento fenotyp zvrátila. Prokázali také spojení mezi kaudálním transkripčním faktorem (cdx) a RA při regulaci polohy a segmentace nefronu (Wingert et al., 2007). Ukázali jsme, že doména EF-hand obsahující 2 (efhc2) knockdown vede k expanzi distálních časných segmentů a redukci CS a distálních pozdních segmentů. Exprese odf3, která označuje multiciliované buňky pronefrických tubulů, byla také snížena u efhc2 morfantů (Barrodia et al., 2018).

Barvení a zobrazování pronefrických řasinek

Cilia jsou organely na bázi mikrotubulů, které jsou buď pohyblivé, nebo nepohyblivé. Lidské poruchy způsobené defekty ve struktuře a funkci řasinek se nazývají ciliopatie. Defekty řasinek přítomné u pronephros zebřičky často vedou ke zkroucení těla, tvorbě cyst a dilataci tubulů (Sullivan-Brown et al., 2008). Multiciliované buňky přítomné u zebrafish pronephros lze vizualizovat pomocí WISH nebo fluorescenční in situ hybridizace (FISH) pomocí antisense odf3b nebo rfx2 ribosond (Liu et al., 2007; Barrodia et al., 2018). Řasinky v embryích zebrafish lze obarvit pomocí a-acetylovaného tubulinu a g-tubulin lze použít k označení bazálních těl (Jaffe et al., 2010; Zaghloul a Katsanis 2011). Pohyb pohyblivých řasinek lze zaznamenat pomocí mikroskopu s vysokorychlostní kamerou za použití transgenních zebřiček, jako je Tg (Foxj1a: GFP) (Tavares et al., 2017). Byla vyvinuta kombinovaná technika FISH a imunitního fluorescenčního testu k označení multiciliovaných buněk, řasinek a bazálních tělísek (Marra et al., 2017). Různé mutanty zebrafish s defekty řasinek, jako jsou Locke, swt a curly, byly podrobně zkoumány a bylo zjištěno, že vykazují řadu defektů pohybu řasinek (Sullivan-Brown et al., 2008). Pohyb řasinek byl u Locke mutanta snížen a řasinky byly u swt nehybné, zatímco pohyby řasinek u curly se pohybovaly od nehybných po nepravidelné posuny. Imunobarvení pomocí a-acetylovaného tubulinu ukázalo, že délka řasinek byla normální u swt a kudrnatých, zatímco Locke vykazoval kratší řasinky (Sullivan-Brown et al., 2008). Zde popsané metody byly široce používány k identifikaci defektů řasinek u onemocnění ledvin zahrnujících řasinky.

Hodnocení funkce glomerulu

Hlavní funkcí ledvin je filtrovat krev a odstraňovat odpadní látky a přebytečné tekutiny z těla a zároveň zabránit ztrátě makromolekul v moči. Glomerulus může odfiltrovat molekuly o velikosti 5 kDa, ale neumožňuje vylučování větších molekul, jako je sérový albumin (Chang et al., 1976). Diagnostické metody běžně používané k hodnocení dysfunkce ledvin u lidí nelze u zebřiček použít kvůli jejich malé velikosti. Fluorescenční barviva o různých molekulových hmotnostech napodobujících molekuly, s nimiž se běžně setkává lidská ledvina, však mohou být injikována do zebřičky a posouzení jejich clearance nebo retence může být použito jako náhrada pro stanovení funkce ledvin (Christou-Savina et al., 2015 ). Bylo prokázáno, že injekce 10 kDa fluorescenčního dextranu do perikardiální dutiny embryí zebrafish má za následek ztrátu asi 85 procent barviva sekrecí z ledvin během 24 hodin po injekci (HPI) (Christou-Savina et al. , 2015). Barviva s vyšší molekulovou hmotností, jako je 70 kDa nebo vyšší, vyžadují injekci do vaskulatury a jsou zadržována v embryích divokého typu. Nicméně 70 kDa dextran mohl být detekován ve stěně proximálního tubulu, když byl injikován do vaskulatury cystinózových (ctn's) mutantních zebrafish, což naznačuje, že integrita glomerulových filtračních štěrbin je u cent-/- larev narušena (Elmonem et al., 2017) . Kramer-Zucker et al., (2005) vstříkli 500 kDa FITC-dextran do hlavní žíly 84 hpf embryí divokého typu a nefrinových a podocinových morfantů zebrafish a detekovali barvivo v pronephros, což ukazuje na dysfunkci nefronů u těchto morfantů.

Hodnocení reabsorpce metabolitů

Transmembránový endocytární receptor megalin/LRP2, jeho adaptér vyřazený2 (dab2) a coreceptor Dublin hrají ústřední roli v endocytózou zprostředkované clearance metabolitů z glomerulárního filtrátu (Anzenberger, 2006). Injekce 70 kDa fluorescenčně značeného dextranu nebo fluorescenčně konjugovaného proteinu asociovaného s receptorem (RAP), proteinu, který se fyzicky asociuje s megalinem/LRP2 v krevním řečišti embryí zebrafish, vede k příjmu těchto molekul pro reabsorpci. To slouží jako vhodná metoda pro hodnocení funkce reabsorpce metabolitů ledvinami. V souladu s jejich ústřední rolí při reabsorpci metabolitů vede knock-down buď megalinu/LRP2 nebo dab2 k úplnému selhání receptorem zprostředkovaného endocytického vychytávání indikátorů u morfantů (Anzenberger, 2006).

Posouzení dilatace tubulů

Pronefrický tubulus je vystlán jednou vrstvou polarizovaných epiteliálních buněk. Morfologie pronefrického tubulu a jeho pat přecházející do odlišných segmentů jsou řízeny proliferací diferencovaných epiteliálních buněk blízko distálního konce a jejich migrací směrem ke glomerulu. Tyto události jsou zase řízeny tekutinou proudící v pronephros, což poskytuje korelaci mezi orgánovou morfologií a funkcí (Vasilyev et al., 2009). Buňky na proximálním konci jsou svinuté a více sloupcové, zatímco buňky na distálním konci jsou kvádrové (Vasilyev et al., 2009). Snížení rychlosti glomerulární filtrace, obstrukce v tubulu nebo defekty ve vývoji a motilitě řasinek inhibují tuto kolektivní migraci buněk ze zadního do předního směru. Buňky na distálním konci však pokračují v proliferaci, což způsobuje dilataci pronefrických tubulů (Naylor a Davidson, 2017). Dilataci tubulů lze hodnotit buď přímým pozorováním celých embryí pod mikroskopem, nebo histologickou analýzou. Optiku DIC lze použít k zobrazení a výpočtu průměru pronefrického tubulu embryí zebřičky. Sullivan-Brown et al., (2008) porovnali dilataci tubulu u mutantů divokého typu a kudrnatých mutant s defekty v řasinkách a zjistili, že u divokého typu měl mediální tubul větší průměr ve srovnání se zadním tubulem a že průměr mediální tubuly se časem zmenšily. U kudrnatých mutantů byl průměr mediálních a zadních tubulů podobný jako u divokého typu při 26-30 hpf, ale u těchto mutantů byl pozorován konstantní nárůst průměru mediálního tubulu od 48 hpf výše. Dále bylo pozorováno, že počet buněk obklopujících mediální tubul se také zvýšil u mutantních embryí (Sullivan-Brown et al., 2008). Mutace v genu lidského MNX1 (motorický neuron a homeobox 1 slinivky břišní) způsobují Currarinův syndrom, vzácné vrozené onemocnění charakterizované sakrální agenezí a urogenitálními a renálními abnormalitami, jako jsou podkovovité ledviny, jediná ledvina, hydronefróza a anorektální stenóza (Currarino et al., 1981; Lee a kol., 2018; Dworschak a kol., 2021). Ott et al., (2016) vygenerovali morfanty mnx2b na pozadí Tg(-8cldnb.1:lynEGFP)zf106 pro zobrazení epiteliálních buněk ve vyvíjejícím se pronefros a zjistili, že morfanty vykazovaly zvětšené průměry proximálních tubulů ve srovnání s divokými -ovládání typu na 4 pdf. Další analýza odhalila, že tyto morfanty měly změněné funkce ledvin, dezorganizované pronefrické řasinky a deformované apikální mikroklky (Ott et al., 2016). Taková analýza pomocí zebřičky by nám nepochybně pomohla pochopit základní mechanismus lidských nemocí.

Stanovení polarity epiteliálních buněk

Polarita epiteliálních buněk pronefrického tubulu je udržována proteinovými komplexy, které segregují buněčnou membránu na apikální a bazolaterální domény a organizují membránové subdomény pro specifické funkce, jako je sekrece, filtrace, absorpce a senzorická stimulace (Pieczynski a Margolis, 2011). Dislokace několika receptorů, transportérů a kanálů byla identifikována u mnoha chorobných stavů, jako je Na plus K plus -ATPáza, Na plus K plus 2Cl- kotransportér a EGFR u PKD a H plus -ATPáza u Dentovy choroby (Wilson, 2011). . Polaritu epiteliálních buněk lze zkontrolovat imunofluorescenčním barvením celých embryí pomocí protilátky proti Na plus /K plus -ATPáze, markeru těsného spojení ZO-1 nebo alkalické fosfatáze (AP) k identifikaci defektů v polarizaci epitel tubulů u mutantů ve srovnání s embryi divokého typu. Na plus /K plus -ATPáza je jedním z nejhojnějších proteinů v tubulárních epiteliálních buňkách, který udržuje homeostázu sodíku a draslíku a reguluje funkce dalších přenašečů přítomných v epiteliálních buňkách (Fernández a Malnic, 1998). Je lokalizován na bazolaterální plazmatické membráně a je důležitý pro polarizaci epiteliálních buněk a tvorbu a udržování těsných spojení (Rajasekaran et al., 2001). ZO-1 a AP se používají k označení apikálních povrchů pronefrických epiteliálních buněk. Drummond et al., (1998) analyzovali skupinu mutantů s mírným až závažným defektem pronephros. Zkontrolovali polaritu epiteliálních buněk u 2,5 pdf embryí imunofluorescenčním barvením s anti-Na plus /K plus -ATPázovou alfa podjednotkovou monoklonální protilátkou (a6F) s následným nařezáním tkáně. Tato analýza ukázala, že lokalizace Na plus/K plus -ATPázy byla změněna u většiny mutantních linií ve srovnání s její normální bazolaterální expresí. U mutantů s dvojitou bublinou (bb) a Fleer (flr) byla Na plus/K plus -ATPáza exprimována v apikálním povrchu, zatímco bazolaterální povrch vykazoval snížené barvení. Jiné mutanty měly více laterální barvení, s nebarveným apikálním a bazolaterálním povrchem (Drumond et al., 1998).

Detekce ledvinových kamenů

Ledvinové kameny jsou krystaly usazených solí, mezi nimiž jsou nejčastější vápenaté kameny (Evan, 2010). Ty se skládají z oxalátu vápenatého (CaOx) a fosforečnanu vápenatého (CaP) v různých poměrech. Vápníkové kameny lze očekávat u mutantů zebřiček se změněnou homeostázou vápníku. Vitální barviva, jako je alizarinová červeň (červená fluorescenční) a kalcein (zeleně fluorescenční), lze použít k detekci tkání obsahujících vápník a ledvinových kamenů u larev zebřičky. Elizondo et al., (2010) ukázali, že u 57 - 97 procent homozygotních mutantních embryí trpm7 se vyvinuly ledvinové kameny při 5 dpf, zatímco pouze u 0-1,4 procenta sourozenců divokého typu se takové kameny vyvinuly. Zobrazení homozygotních mutantních embryí trpm7 barvených alizarinovou červení v různých časových bodech ukázalo, že 2-4 embrya dpf neměla žádné kameny a kameny byly pozorovány při 5 dpf v lumen a ne v epitelu pronefrického tubulu (Elizondo et al. ., 2010).

Závěry a vyhlídky

Výskyt onemocnění ledvin celosvětově roste alarmujícím tempem. Existuje naléhavá potřeba identifikovat příčiny těchto onemocnění a vyvinout nové metody pro jejich diagnostiku a léčbu. Metanefrická ledvina savců je složitá, takže je obtížné porozumět patologii onemocnění ledvin. Pronephros u larev zebrafish je funkční a má pouze dva nefrony na každé straně notochordu se společným glomerulem na předním a kloakou na zadním konci. V tomto přehledu jsme diskutovali o různých metodách, které lze použít k vytvoření modelů zebřiček u lidských ledvinových onemocnění a jak analyzovat fenotyp těchto modelů onemocnění na morfologické, buněčné a molekulární úrovni. Pečlivý výzkum mnoha skupin zavedl tyto metody generování a analýzy modelů onemocnění v průběhu let. Tyto snahy nyní prokázaly, že embrya a dospělci zebrafish mohou být použity jako modely onemocnění lidských ledvin, které mohou věrně rekapitulovat různé aspekty dysfunkce ledvin pozorované u lidí. Toto úsilí také vytvořilo mnoho užitečných nástrojů a zdrojů, včetně mutantních a transgenních linií. To nabízí příležitost nejen porozumět mechanismům onemocnění ledvin pomocí zebřičky, ale využít je k objevu nových léků pro léčbu onemocnění ledvin. Diabetes je hlavním přispěvatelem komplikací souvisejících s ledvinami u lidí. Zebrafish nabízí příležitost, kde lze také studovat dysfunkci ledvin související s diabetem (Jör gens et al., 2012). Zebrafish má tedy vynikající základ jako model onemocnění a nabízí obrovský potenciál k nalezení nových řešení lidských nemocí.

Poděkování

Děkujeme Tarique Anwar a Supriya Borah za jejich diskuse a komentáře. SF je příjemcem DBT (DBT/2015/ILS/361) a UR je příjemcem stipendia DST-Inspire. Výzkum v laboratoři RKS je podporován SERB-EMR (EMR/2016/003780) a intramurálními fondy ILS, což je autonomní institut DBT, indické vlády.

Autorský příspěvek

SF počala a napsala první rukopis. OSN a RKS projednaly a upravily rukopis.

Reference

1. AMSTERDAM A, BURGESS S, GOLLING G, CHEN W, SUN Z, TOWNSEND K, FARRINGTON S, HALDI M, HOPKINS N (1999). Rozsáhlá inzerční mutageneze u zebřiček. Genes Dev 13: 2713–2724.

2.ANZENBERGER U (2006). Objasnění procesů endocytického transportu závislých na megalinu/LRP2- u larvy zebřičky pronephros. J Cell Sci 119: 2127–2137.

3.BARRODIA P, PATRA C, SWAIN RK (2018). EF-hand doména obsahující 2 (Efhc2) je klíčová pro distální segmentaci pronephros u zebřiček. Cell Biosci 8: 53.

4.BEGEMANN G, SCHILLING TF, RAUCH GJ, GEISLER R, INGHAM PW (2001). Bezkrká mutace zebrafish odhaluje požadavek na raldh2 v mezodermálních signálech, které vzorují zadní mozek. Vývoj 128: 3081–3094.

5. BIKBOV B, PURCELL CA, LEVEY AS, SMITH M, ABDOLI A, ABEBE M, ADEBAYO OM, AFARIDEH M, AGARWAL SK, AGUDELO-BOTERO M, et al., (2020). Globální, regionální a národní zátěž chronickým onemocněním ledvin, 1990–2017: systematická analýza pro studii Global Burden of Disease 2017. Lancet 395: 709–733.

6. BILL BR, PETZOLD AM, CLARK KJ, SCHIMMENTI LA, EKKER SC (2009). Základní nátěr pro použití morfolina u zebřiček. Zebřička 6: 69–77.

7. BINGHAM C, ELLARD S, COLE TRP, JONES KE, ALLEN LIS, GOODSHIP JA, GOODSHIP THJ, BAKALINOVA-PUGH D, RUSSELL GI, WOOLF AS, NICHOLLS AJ, HATTERSLEY AT (2002). Samostatně fungující ledviny a různé malformace genitálního traktu spojené s mutacemi hepatocytárního jaderného faktoru-1b. Kidney Int 61: 1243–1251.

8.BOCH J, BONAS U (2010). Efektory Xanthomonas AvrBs3 Family-Type III: Objev a funkce. Annu Rev Phytopathol 48: 419–436.

9. BOHN S, THOMAS H, TURAN G, ELLARD S, BINGHAM C, HATTERSLEY AT, RYFFEL GU (2003). Odlišné molekulární a morfogenetické vlastnosti mutací v lidském genu HNF1b, které vedou k defektnímu vývoji ledvin. J Am Soc Nephrol 14: 2033–2041.

10.CANTAGREL V, SILHAVY JL, BIELAS SL, SWISTUN D, MARSH SE, BERTRAND JY, AUDOLLENT S, ATTIÉ-BITACH T, HOLDEN KR, DOBYNS WB, et al., (2008). Mutace v genu řasinek ARL13B vedou ke klasické formě Joubertova syndromu. Am J Hum Genet 83: 170–179.

11.CAO Y, SEMANCHIK N, LEE SH, SOMLO S, BARBANO PE, COIFMAN R, SUN Z (2009). Obrazovka chemických modifikátorů identifikuje inhibitory HDAC jako supresory modelů PKD. Proč Natl Acad Sci 106: 21819–21824.

12. CARNEY EF (2020). Vliv chronického onemocnění ledvin na globální zdraví. Nat Rev Nephrol 16: 251–251.

13. CHAMBERS BE, WINGERT RA (2016). Renální progenitory: Role při onemocnění ledvin a regeneraci. World J Stem Cells 8: 367–375.

14. CHANG RLS, DEEN WM, ROBERTSON CR, BENNETT CM, GLASSOCK RJ, BRENNER BM, TROY JL, UEKI IF, RASMUSSEN B (1976). Permselektivita glomerulární kapilární stěny. Studie experimentální glomerulonefritidy u potkanů ​​s použitím neutrálního dextranu. J Clin Invest 57: 1272–1286.

15. CHRISTOU-SAVINA S, BEALES PL, OSBORN DPS (2015). Hodnocení funkce ledvin zebrafish pomocí fluorescenčního testu clearance. J Vis Exp 96: e52540.

16.CIANCIOLO COSENTINO C, ROMAN BL, DRUMMOND IA, HUKRIEDE NA (2010). Intravenózní mikroinjekce larev zebrafish ke studiu akutního poškození ledvin. J Vis Exp 42: e2079.

17.CIANCIOLO COSENTINO C, SKRYPNYK NI, BRILLI LL, CHIBA T, NOVITSKAYA T, WOODS C, WEST J, KOROTCHENKO VN, MCDERMOTT L, DAY BW, DAVID SON AJ, HARRIS RC, DE CAESTUKRIECKER NA MP, HARRIS RC (210 MP, H). Inhibitor histonové deacetylázy zlepšuje zotavení po AKI. J Am Soc Nephrol 24: 943–953.

18. COPPER JE, BUDGEON LR, FOUTZ CA, VAN ROSSUM DB, VANSELOW DJ, HUBLEY MJ, CLARK DP, MANDRELL DT, CHENG KC (2018). Srovnávací analýza technik fixace a zalévání pro optimalizovanou histologickou preparaci zebřičky.

19. Comp Biochem Physiol Part C Toxicol Pharmacol 208: 38–46. POSÁDKY DC, BELLO AK, SAADI G (2019). Zátěž, přístup a disparity u onemocnění ledvin. Rev Nefrol Dial y Traspl 39: 1–11.

20.CURADO S, STAINIER DYR, ANDERSON RM (2008). Nitroreduktázou zprostředkovaná buněčná/tkáňová ablace u zebřiček: prostorově a časově řízená ablační metoda s aplikacemi ve vývojových a regeneračních studiích. Nat Protoc 3: 948–954.

21.CURRARINO G, COLN D, VOTTELER T (1981). Triáda anorektálních, sakrálních a presakrálních anomálií. Am J Roentgenol 137: 395-398.

22.DESGRANGE A, CEREGHINI S (2015). Vzorování nefronů: Lekce ze studií Xenopus, Zebrafish a Myší. Buňky 4: 483–499.

23.DIEP CQ, MA D, DEO RC, HOLM TM, NAYLOR RW, ARORA N, WINGERT RA, BOLLIG F, DJORDJEVIC G, LICHMAN B, ZHU H, IKENAGA T, ONO F, ENGLERT C, COWAN CA, HUKRIEDE NA, HANDIN RI, DAVIDSON AJ (2011). Identifikace dospělých progenitorů nefronů schopných regenerace ledvin u zebřiček. Příroda 470: 95–100.

24.DIEP CQ, PENG Z, UKAH TK, KELLY PM, DAIGLE R V., DAVIDSON AJ (2015). Vývoj mezonephros zebřičky. geneze 53: 257–269.

25. DRUMMOND I (2003). Výroba ledviny zebrafish: příběh o dvou trubkách. Trends Cell Biol 13: 357–365.

26.DRUMMOND IA, MAJUMDAR A, HENTSCHEL H, ELGER M, SOLNICA-KREZEL L, SCHIER AF, NEUHAUSS SCF, STEMPLE DL, ZWARTKRUIS F, RANGINI Z, DRIEVER W, FISHMAN MC (1998). Časný vývoj pronephros zebřičky a analýza mutací ovlivňujících funkci pronefriky. Vývoj 125: 4655–4667.

27.DWORSCHAK GC, REUTTER HM, LUDWIG M (2021). Currarinův syndrom: komplexní genetický přehled vzácné vrozené poruchy. Orphanet J Vzácný Dis 16: 167.

28. EISEN JS, SMITH JC (2008). Kontrola experimentů s morfolinem: nepřestávejte vytvářet antisense. Vývoj 135: 1735–1743.

29.EL-BROLOSY MA, STAINIER DYR (2017). Genetická kompenzace: Fenomén při hledání mechanismů Ed. C Moens. PLOS Genet 13: e1006780.

30.ELIZONDO MR, BUDI EH, PARICHY DM (2010). Trpm7 Regulace in vivo kationtové homeostázy a funkce ledvin zahrnuje stanniokalcin 1 a Fgf23. Endokrinologie 151: 5700–5709.

31.ELMONEM M, BERLINGERIO S, VAN DEN HEUVEL L, DE WITTE P, LOWE M, LEVTCHENKO E (2018). Genetická onemocnění ledvin: Vznikající role modelů zebřičky. Buňky 7:130.

32. ELMONEM MA, KHALIL R, KHODAPARAST L, KHODAPARAST L, ARCOLINO FO, MORGAN J, PASTORE A, TYLZANOWSKI P, NY A, LOWE M, DE WITTE PA, BAELDE HJ, VAN DEN HEUVEL LP, LEVTCHENKO E (20017KO E). Mutant Cystinosis (ctn's) zebrafish vykazuje pronefrickou glomerulární a tubulární dysfunkci. Sci Rep 7: 42583.

33.ENE-IORDACHE B, PERICO N, BIKBOV B, CARMINATI S, REMUZZI A, PERNA A, ISLAM N, BRAVO RF, ALECKOVIC-HALILOVIC M, ZOU H, et al., (2016). Chronické onemocnění ledvin a kardiovaskulární riziko v šesti regionech světa (ISN-KDDC): průřezová studie. Lancet Glob Heal 4: e307–e319.

34. EVAN AP (2010). Fyziopatologie a etiologie tvorby kamenů v ledvinách a močových cestách. Pediatr Nephrol 25: 831–841.

35. FERGUSON JL, SHIVE HR (2019). Sekvenční imunofluorescence a imunohistochemie na kryosekciovaných embryích zebrafish. J Vis Exp 147: e59344.

36.FERNÁNDEZ R, MALNIC G (1998). H plus ATPáza a Cl − Interakce při regulaci pH buněk MDCK. J Membr Biol 163: 137–145.

37. FOREMAN KJ, MARQUEZ N, DOLGERT A, FUKUTAKI K, FULLMAN N, McGaughey M, PLETCHER MA, SMITH AE, TANG K, YUAN CW, et al., (2018). Prognóza očekávané délky života, ztracených let života a úmrtnosti ze všech příčin a specifických příčin pro 250 příčin smrti: referenční a alternativní scénáře pro období 2016–40 pro 195 zemí a území. Lancet 392: 2052–2090. 38.GELDSETZER P, MANNE-GOEHLER J, THEILMANN M, DAVIES JI, AWASTHI A, VOLLMER S, JAACKS LM, BÄRNIGHAUSEN T, ATUN R (2018). Diabetes a hypertenze v Indii. JAMA Intern Med 178: 363.

39.HANKE N, STAGGS L, SCHRODER P, LITTERAL J, FLEIG S, KAUFELD J, PAULI C, HALLER H, SCHIFFER M (2013). "Zebafishing" pro nové geny relevantní pro bariéru glomerulární filtrace. Biomed Res Int 2013: 1–12.

40. HELLMAN NE, LIU Y, MERKEL E, AUSTIN C, LE CORRE S, BEIER DR, SUN Z, SHARMAN, YODER BK, DRUMMOND IA(2010). Transkripční faktor zebrafish foxj1a reguluje funkci řasinek v reakci na poranění a natažení epitelu. Proč Natl Acad Sci USA 107: 18499–18504.

41.HENTSCHELDM,PARKM,CILENTIL,ZERVOSAS,DRUMMONDI,BONVENTRE J V. (2005). Akutní selhání ledvin u zebrafish: nový systém pro studium komplexního onemocnění. Am J Physiol Physiol 288: F923–F929.

42. HILL NR, FATOBA ST, OKE JL, HIRST JA, O'CALLAGHAN CA, LASSERSON DS, HOBBSFDR(2016). Globální prevalence chronického onemocnění ledvin – ASystematický přehled a metaanalýza Ed. G Remuzzi. PLoS One 11: e0158765.

43. HOWE K, CLARK MD, TORROJA CF, TORRANCE J, BERTHELOT C, MUFFATO M, COLLINS JE, HUMPHREY S, MCLAREN K, MATTHEWS L, et al., (2013). Referenční genomová sekvence zebřičky a její vztah k lidskému genomu. Příroda 496: 498–503.

44. JAFFE KM, THIBERGE SY, BISHER ME, BURDINE RD (2010). Zobrazování Cilia v Zebrafish. In Methods in Cell Biology (ed. Cassimeris L, Tran P). Vol.97. Academic Press, str. 415-435.

45. JAIN S (2014). Vývoj ledvin a související anomálie. In Pathobiology of Human Disease Elsevier, s. 2701–2715.

46. ​​JHA V, GARCIA-GARCIA G, ISEKI K, LI Z, NAICKER S, PLATTNER B, SARAN R, WANG AYM, YANG CW (2013). Chronické onemocnění ledvin: Globální rozměr a perspektivy. Lancet 382: 260–272.

47.JOBST-SCHWAN T, HOOGSTRATEN CA, KOLVENBACH CM, SCHMIDT JM, KOLB A, EDDY K, SCHNEIDER R, ASHRAF S, WIDMEIER E, MAJMUNDAR AJ, HILDEBRANDT F (2019). Léčba kortikosteroidy zhoršuje nefrotický syndrom u modelu zebrafish knockout magi2a. Kidney Int 95: 1079–1090.

48.JOHNSON CS, HOLZEMER NF, WINGERT RA (2011). Laserová ablace pronephros zebrafish ke studiu renální epiteliální regenerace. J Vis Exp 54: 2845.

49.JÖRGENS K, HILLEBRANDS JL, HAMMES HP, KROLL J (2012). Zebrafish: Model pro pochopení diabetických komplikací. Exp Clin Endocrinol Diabetes 120: 186–187.

50.KAMEI CN, LIU Y, DRUMMOND IA (2015). Regenerace ledvin u dospělých zebřiček poraněním vyvolaným gentamicinem. J Vis Exp 102: e51912.

51.KAUFMAN CK, BÍLÁ RM, ZON L (2009). Chemický genetický screening v embryu zebřičky. Nat Protoc 4: 1422–1432.

52.KAWASUMI M, NGHIEM P (2007). Chemická genetika: Objasnění biologických systémů pomocí malomolekulárních sloučenin. J Invest Dermatol 127: 1577–1584.

53.KIM BH, ZHANG GJ (2020). Generování stabilních knockout linií zebrafish delecí velkých chromozomálních fragmentů pomocí více gRNA. Geny G3, genomy, Genet 10: 1029–1037.

54.KRAMER-ZUCKER AG (2005). Pro normální organogenezi je nutný tok tekutiny řízený řasinkami v pronephros, mozku a Kupfferově vezikulu zebřičky. Vývoj 132: 1907–1921.

55.KRAMER-ZUCKER AG, WIESSNER S, JENSEN AM, DRUMMOND IA (2005). Organizace pronefrického filtračního aparátu u zebřiček vyžaduje Nefrin, Podocin a protein domény FERM Mosaic eyes. Dev Biol 285: 316–329.

56. KRISHNAMURTHY VG (1976). Cytofyziologie Stanniových tělísek. Int Rev Cytol 46: 177–249.

57. KROEGER PT, DRUMMOND BE, MICELI R, MCKERNAN M, GERLACH GF, MARRA AN, FOX A, MCCAMPBELL KK, LESHCHINER I, RODRIGUEZ-MARI A, BREMILLER R, THUMMEL R, DAVIDSON AJ, POSTLETHSLERTING J RA (2017). Zeppelin ledvinového mutantu zebrafish odhaluje, že brca2/fancd1 je nezbytný pro vývoj pronephros. Dev Biol 428: 148–163.

58. LAWSON ND, WOLFE SA (2011). Přední a zpětné genetické přístupy pro analýzu vývoje obratlovců u zebřičky. Dev Cell 21: 48–64.

59. LEE S, KIM EJ, CHO SI, PARK H, SEO SH, SEONG MW, PARK SS, JUNG SE, LEE SC, PARK KW, KIM HY (2018). Spektrum patogenních variant MNX1 a souvisejících klinických rysů u korejských pacientů se syndromem Currarino. Ann Lab Med 38: 242–248.

60. LEVEY AS, ASTOR BC, STEVENS LA, CORESH J (2010). Chronické onemocnění ledvin, cukrovka a hypertenze: Co se skrývá pod názvem? Kidney Int 78: 19–22.

61.LINDNER TH, NJOLSTAD PR, HORIKAWA Y, BOSTAD L, BELL GI, SOVIK O (1999). Nový syndrom diabetes mellitus, renální dysfunkce a genitální malformace spojený s částečnou delecí pseudo-POU domény hepatocytárního jaderného faktoru-1beta. Hum Mol Genet 8: 2001–2008.

62. LIU K, PETREE C, REQUENA T, VARSHNEY P, VARSHNEY GK (2019). Rozšíření CRISPR Toolbox v Zebrafish pro studium vývoje a nemocí. Front Cell Dev Biol 7: 13.

63.LIU Y, LUO D, LEI Y, HU W, ZHAO H, CHENG CHK (2014). Vysoce účinný přístup zprostředkovaný TALEN pro cílené narušení genů u Xenopus tropicalis a zebrafish. Metody 69: 58–66.

64. LIU Y, PATHAK N, KRAMER-ZUCKER A, DRUMMOND IA (2007). Notch signalizace řídí diferenciaci transportních epitelů a multiciliovaných buněk v pronephros zebrafish. Vývoj 134: 1111–1122.

65. LUNT SC, HAYNES T, PERKINS BD (2009). Mutanty intraflagelárního transportu zebrafish ift57, ift88 a ift172 narušují řasinky, ale neovlivňují signalizaci ježků. Dev Dyn 238: 1744–1759.

66. MANGOS S, LAM P y., ZHAO A, LIU Y, MUDUMANA S, VASILYEV A, LIU A, DRUMMOND IA (2010). Geny ADPKD pkdla/b a pkd2 regulují tvorbu extracelulární matrix. Dis Model Mech 3: 354–365.

67.MARRA AN, ULRICH M, WHITE A, SPRINGER M, WINGERT RA (2017). Vizualizace multiciliovaných buněk u zebřičky prostřednictvím kombinovaného protokolu celomountové fluorescenční in situ hybridizace a imunofluorescence. J Vis Exp 129: 56261.

68. MCCAMPBELL KK, SPRINGER KN, WINGERT RA (2015). Atlas buněčné dynamiky při regeneraci ledvin dospělého zebřička. Stem Cells Int 2015: 1–19.

69.MCKEE RA, WINGERT RA (2015). Renální patologie zebrafish: vznikající modely akutního poškození ledvin. Curr Pathobiol Rep 3: 171–181.

70. MINGEOT-LECLERCQ MP, TULKENS PM (1999). Aminoglykosidy: Nefrotoxicita. Antimicrob Agents Chemother 43(5): 1003–1012.

71. MORALES EE, HANDA N, DRUMMOND BE, CHAMBERS JM, MARRA AN, ADDI EGO A, WINGERT RA (2018). Homeogenní emx1 je vyžadován pro vývoj distálního segmentu nefronu u zebřiček. Sci Rep 8: 18038.

72.MULLINS MC, HAMMERSCHMIDT M, HAFFTER P, NÜSSLEIN-VOLHARD C (1994). Rozsáhlá mutageneze u zebřiček: při hledání genů řídících vývoj u obratlovců. Curr Biol 4: 189–202.

73. NAYLOR RW, CHANG H-HG, QUBISI S, DAVIDSON AJ (2018). Nový mechanismus tvorby žláz u zebřiček zahrnující transdiferenciaci renálních epiteliálních buněk a extruzi živých buněk. Elife 7: e38911.

74. NAYLOR RW, DAVIDSON AJ (2017). Tvorba pronefrických tubulů u zebřiček: morfogeneze a migrace. Pediatr Nephrol 32: 211–216.

75.NAYLOR RW, PRZEPIORSKI A, REN Q, YU J, DAVIDSON AJ (2013). HNF1 bis je nezbytný pro segmentaci nefronů během nefrogeneze. J Am Soc Nephrol 24: 77–87.

76.OTT E, WENDIK B, SRIVASTAVA M, PACHO F, TÖCHTERLE S, SALVENMOSER W, MEYER D (2016). Morfogeneze pronefrických tubulů u zebřiček závisí na represi irx1b zprostředkované Mnx v intermediálním mezodermu. Dev Biol 411: 101–114.

77.OUTTANDY P, RUSSELL C, KLETA R, BOCKENHAUER D (2019). Zebrafish jako model pro funkci ledvin a onemocnění. Pediatr Nephrol 34: 751–762.

78.PALMYRE A, LEE J, RYKLIN G, CAMARATA T, SELIG MK, DUCHEMIN AL, NOWAK P, ARNAOUT MA, DRUMMOND IA, VASILYEV A (2014). Kolektivní epiteliální migrace podporuje opravu ledvin po akutním poranění Ed. AJ Kabla. PLoS One 9: e101304.

79.PATTON EE, ZON LI (2001). Umění a design genetických clon: zebrafish. Nat Rev Genet 2: 956–966.

80.PIECZYNSKI J, MARGOLIS B (2011). Proteinové komplexy, které řídí polaritu renálního epitelu. Am J Physiol Physiol 300: F589–F601.

81.POUREETEZADI SJ, WINGERT RA (2016). Malá ryba, velký úlovek: zebřička jako model pro onemocnění ledvin. Kidney Int 89: 1204–1210.

82.RAJAPURKAR MM, JOHN GT, KIRPALANI AL, ABRAHAM G, AGARWAL SK, ALMEIDA AF, GANG S, GUPTA A, MODI G, PAHARI D, PISHARODY R, PRAKASH J, RAMAN A, RANA DS, SHARMA RK, SAHOO R SAKHUJA V, TATAPUDI RR, JHA V (2012). Co víme o chronickém onemocnění ledvin v Indii: první zpráva z indického registru CKD. BMC Nephrol 13:10.

83.RAJASEKARAN SA, PALMER LG, MOON SY, PERALTA SOLER A, APODACA GL, HARPER JF, ZHENG Y, RAJASEKARAN AK (2001). Aktivita Na,K-ATPázy je nutná pro tvorbu těsných spojení, desmozomů a indukci polarity v epiteliálních buňkách Ed. G Guidotti. Mol Biol Cell 12: 3717-3732.

84. ROBERTS RJ, ELLIS AE (2012). Anatomie a fyziologie teleostů. In Fish Pathol Fourth Ed (ed. Roberts RJ) Wiley, s. 17–61.

85.ROBU ME, LARSON JD, NASEVICIUS A, BEIRAGHI S, BRENNER C, FARBER SA, EKKER SC (2007). str. 53 Aktivace od Knockdown Technologies Ed. M Mullins. PLoS Genet 3: e78.

86.ROSSI A, KONTARAKIS Z, GERRI C, NOLTE H, HÖLPER S, KRÜGER M, STAINIER DYR (2015). Genetická kompenzace je vyvolána škodlivými mutacemi, ale ne knockdowny genů. Příroda 524: 230–233.

87.SABALIAUSKAS NA, FOUTZ CA, MEST JR, BUDGEON LR, SIDOR AT, GERSHENSON JA, JOSHI SB, CHENG KC (2006). Vysoce výkonná histologie zebrafish. Metody 39: 246–254.

88. SERTORI R, TRENGOVE M, BASHEER F, WARD AC, LIONGUE C (2016). Editace genomu v zebrafish: praktický přehled. Brief Funct Genomics 15: 322–330.

89. SHAH AN, DAVEY CF, WHITE BIRCH AC, MILLER AC, MOENS CB (2016). Rychlý reverzní genetický screening pomocí CRISPR u zebrafish. Zebřička 13: 152–153.

90. SHAO W, ZHONG D, JIANG H, HAN Y, YIN Y, LI R, QIAN X, CHEN D, JING L (2020). Nový aminoglykosid gentamicin vykazuje nízkou nefrotoxicitu a ototoxicitu u embryí zebřičky. J Appl Toxicol 41:1063-1075.

91.SHARMA KR, HECKLER K, STOLL SJ, HILLEBRANDS JL, KYNAST K, HERPEL E, PORUBSKY S, ELGER M, HADASCHIK B, BIEBACK K, HAMMES HP, NAWROTH PP, KROLL J (2016). ELMO1 chrání renální strukturu a ultrafiltraci při vývoji ledvin a při diabetických stavech. Sci Rep 6: 37172.

92.SMYTH IM, CULLEN-MCEWEN LA, CARUANA G, BLACK MJ, BERTRAM JF (2017). Vývoj ledvin. In Fetální a neonatální fyziologie Elsevier, str. 953-964.e4.

93. SULLIVAN-BROWN J, BISHER ME, BURDINE RD (2011). Zalévání, sériové řezání a barvení embryí zebřičky pomocí pryskyřice JB-4. Nat Protoc 6: 46–55.

94.SULLIVAN-BROWN J, SCHOTTENFELD J, OKABE N, HOSTETTER CL, SERLUCA FC, THIBERGE SY, BURDINE RD (2008). Mutace zebrafish ovlivňující motilitu řasinek sdílejí podobné cystické fenotypy a naznačují mechanismus tvorby cyst, který se liší od pkd2 morfantů. Dev Biol 314: 261–275.

95. SUMMERTON J (1999). Morfolino antisense oligomery: případ strukturního typu nezávislého na RNáze H. Biochim Biophys Acta - Gene Struct Expr 1489: 141–158.

96.SUN, Z. AMSTERDAM, A. PAZOUR, GJ COLE, DG MILLER SM (2004). Genetický screening u zebřiček identifikuje geny řasinek jako hlavní příčinu cystických ledvin. Vývoj 131: 4085–4093.

97.TAHARA T, OGAWA K, TANIGUCHI K (1993). Ontogeneze Pronephros a Mesonephros u jihoafrické drápaté žáby, Xenopus laevis Daudin, se zvláštním odkazem na vzhled a pohyb Renin-imunopozitivních buněk. Exp Anim 42: 601–610.

98. TALLAFUSS A, GIBSON D, MORCOS P, LI Y, SEREDICK S, EISEN J, WASHBOURNE P (2012). Zapnutí a vypnutí funkce genu pomocí snímacích a protismyslových fotomorfolinů u zebřiček. Vývoj 139: 1691–1699.

99.TAVARES B, JACINTO R, SAMPAIO P, PESTANA S, PINTO A, VAZ A, ROXO-ROSA M, GARDNER R, LOPES T, SCHILLING B, HENRY I, SAÚDE L, LOPES SS (2017). Signalizace Notch/Her12 moduluje poměr pohyblivých/nehybných řasinek po proudu od Foxj1a v organizéru zebrafish levý-pravý. Elife 6: e25165.

100.THOMAS R, KANSO A, SEDOR JR (2008). Chronické onemocnění ledvin a jeho komplikace. Prim Care - Clin Off Pract 35: 329–344.

101.VARMA PP (2015). Prevalence chronického onemocnění ledvin v Indii – kam směřujeme? Indian J Nephrol 25: 133–135.

102.VARSHNEY GK, BURGESS SM (2014). Zdroje mutageneze a fenotypování u zebřiček pro studium vývoje a lidských nemocí. Brief Funct Genomics 13: 82–94.

103.VARSHNEY GK, CARRINGTON B, PEI W, BISHOP K, CHEN Z, FAN C, XU L, JONES M, LAFAVE MC, LEDIN J, SOOD R, BURGESS SM (2016). Vysoce výkonný funkční genomický pracovní postup založený na cílené mutagenezi u zebřiček zprostředkované CRISPR/Cas9-. Nat Protoc 11: 2357–2375.

104.VARUGHESE S, ABRAHAM G (2018). Chronické onemocnění ledvin v Indii. Clin J Am Soc Nephrol 13: 802–804.

105.VASILYEV A, LIU Y, MUDUMANA S, MANGOS S, LAM PY, MAJUMDAR A, ZHAO J, POON KL, KONDRYCHYN I, KORZH V, DRUMMOND IA (2009). Kolektivní migrace buněk pohání morfogenezi ledvinového nefronu Ed. DL Stemple. PLoS Biol 7: e1000009.

106.VERLANDER JW (1998). Normální funkce ledvin a změny funkce ledvin ve stavech nefrotoxicity Normální ultrastruktura ledvin a dolních močových cest. Toxicol Pathol 26: 1–17.

107.WILSON PD (2011). Apiko-bazální polarita v epitelu polycystického onemocnění ledvin. Biochim Biophys Acta - Mol Basis Dis 1812: 1239–1248.

108.WINGERT RA, DAVIDSON AJ (2011). Nefrogeneze zebrafish zahrnuje dynamické časoprostorové změny exprese v renálních progenitorech a esenciálních signálech z kyseliny retinové a irx3b. Dev Dyn 240: 2011–2027.

109.WINGERT RA, SELLECK R, YU J, SONG HD, CHEN Z, SONG A, ZHOU Y, THISSE B, THISSE C, MCMAHON AP, DAVIDSON AJ (2007). Geny cdx a kyselina retinová řídí umístění a segmentaci pronephros zebřičky. PLoS Genet 3: 1922–1938.

110.YAKULOV TA, TODKAR AP, SLANCHEV K, WIEGEL J, BONA A, GROSS M, SCHOLZ A, HESS I, WURDITSCH A, GRAHAMMER F, et al., (2018). CXCL12 a MYC řídí energetický metabolismus pro podporu adaptivních reakcí po poškození ledvin. Nat Commun 9: 1–15.

111.YAMAGUCHI T, HAMPSON SJ, REIF GA, HEDGE AM, WALLACE DP (2006). Vápník obnovuje normální proliferační fenotyp v epiteliálních buňkách lidského polycystického onemocnění ledvin. J Am Soc Nephrol 17: 178–187.

112.ZAGHLOUL NA, KATSANIS N (2011). Zebrafish Assays of Ciliopathies. In Methods in Cell Biology (Ed. Detrich HW, Westerfield M, Zon L. I). sv. 105. Academic Press, str. 257-272.

113.ZHAO C, MALICKI J (2007). genetické defekty pronefrických řasinek u zebřiček. Mech Dev 124: 605–616.

114.ZHOU W, DAI J, ATTANASIO M, HILDEBRANDT F (2010). Nefrocystin-3 je nezbytný pro ciliární funkci u embryí zebřičky. Am J Physiol Physiol 299: F55–F62.

115.ZHOU W, HILDEBRANDT F (2012). Indukovatelné poškození podocytů a proteinurie u transgenních zebřiček. J Am Soc Nephrol 23: 1039–1047.

Další informace: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501