Lamivudin zlepšuje kognitivní úpadek u myší SAMP8: Integrace in vivo farmakologického hodnocení a síťové farmakologie Ⅱ

3|VÝSLEDEK

3,1|3TC zvrací úbytek tělesné hmotnosti způsobený stárnutím a zlepšuje skóre stárnutí

Změny tělesné hmotnosti myší v různých experimentálních skupinách jsou ukázány na obrázku 1D. Výsledky ukázaly, že všechny myši získaly tělesnou hmotnost za 4 týdny. Při standardní dietě myši SAMP8 léčené 3TC přibíraly na váze rychleji než myši léčené vehikulem. Výsledky skóre stárnutí před a po ošetření 3TC nebo vehikulem ukázaly, že průměrné skóre stárnutí myší SAMP8 bylo relativně vyšší, zatímco obráceného trendu bylo dosaženo ošetřením 3TC (obrázek 1E). Výsledky skóre související se stárnutím každé skupiny myší shromážděných v poslední den experimentu ukázaly, že myši SAMP8 ošetřené 3TC vykazovaly významné zlepšení v několika skóre stárnutí, včetně lesku kůže (p < 0. 01, t=3,901), zákal rohovky (p < 0,01, t=4,753) a vřed rohovky (p < 0,05 , t=6.125) (Doplňková tabulka S1).

Klikněte sem, abyste věděli, jak Cistanche ke kognitivní funkciA získejte produkty na prodej

3,2|3TC zlepšuje kognitivní pokles u myší SAMP8

Pro vyhodnocení byly provedeny Morrisovy testy vodního bludištěkognitivní účinky3TC (obrázek 2). Výsledky trajektorií a experimentů se směrovou navigací po dobu pěti po sobě jdoucích dnů ukázaly, že myši SAMR1 vykazovaly významně nižší únikové latence než myši SAMP8 (p < 0.05, t=3. 194) (obrázek 2A–B). Třetí a pátý den však byly únikové latence myší SAMP8 léčených 3TC významně kratší ve srovnání s myšmi SAMP8 léčenými vehikulem (p < 0,05, t=3 0,115), zatímco žádná statistická významnost byla odhalena ve srovnání se skupinou SAMR1. Ačkoli rychlost plavání myší SAMP8 léčených 3TC první den byla významně vyšší než u ostatních dvou skupin, nebyl mezi třemi experimentálními skupinami zjištěn žádný významný rozdíl v následujících 4 dnech experimentů (obrázek 2C).

Výsledky testů sondy a trajektorie 6. dne ukázaly, že jak skupina SAMR1, tak skupina SAMP8 léčená 3TC strávila více času v cílovém kvadrantu než skupina SAMP8 léčená vehikulem (p < 0.{{ 19}}5, t=4,512; obrázek 2D–E). Kromě toho byly počty křížení také vyšší u myší SAMR1 a skupiny SAMP8 léčené 3TC než ve skupině SAMP8 léčené vehikulem, přičemž statisticky významný rozdíl byl odhalen mezi skupinami s a bez léčby 3TC (p < 0.05, t=5.79; obrázek 2F). Skupina SAMP8 ošetřená vehikulem vykazovala nejvyšší latence při nalezení platformy pod vodou ze všech skupin se statisticky významným rozdílem odhaleným mezi skupinami léčenými a neléčenými 3TC (p < 0,05, t=4,415; obrázek 2G).

OBRÁZEK ​​2 Účinky léčby 3TC na zlepšení kognitivního poklesu u myší SAMP8. (A) Mapa trajektorie myší po vstupu do vody z druhého kvadrantu během navigačního testu polohy 5. den. (B) Úniková latence v experimentu určování polohy pro každou skupinu. (C) Rychlost plavání myší v každé skupině v testech chování. (D) Mapa trajektorie myší v experimentu průzkumu vesmíru. (E) Procento celkového času stráveného v cílovém kvadrantu během pokusů sondy v každé skupině. (F) Počet, kolikrát myši překročily platformu v každé skupině v testech sondy. (G) Čas úniku do cíle. Data jsou uvedena jako průměr ± SD. Studentův t-test: *p < 0.05, **p < 0,01 a ***p < 0,001. ns: žádná statistická významnost. Černé hvězdičky nebo „ns“ představují srovnání se skupinou vehikula SAMR1 plus. Červené hvězdičky nebo "ns" představují srovnání se skupinou SAMP8 plus vehikulum. Každá skupina sestávala z minimálně osmi zvířat

3,3|Cílové geny 3TC odhalené kvantitativní PCR v reálném čase

Předchozí studie ukázaly, že 3TC může snížit signály odezvy SASP a IFN-I do buněk hladkého svalstva stárnoucích myší, ale neexistují žádné zprávy o souvisejících genech neurologického degenerativního onemocnění v mozkové tkáni. Abychom prozkoumali účinek 3TC na mozek myší, zkoumali jsme expresi deseti kandidátních genů zájmu v hippocampu a mozkové kůře myší pomocí kvantitativní PCR v reálném čase. V hippocampu (obrázek 3A) významně upregulované geny pro stárnutí (skupiny SAMR1 vs. SAMP8 ošetřené vehikulem) zahrnovaly jeden gen související s transposonem (L1-ORF1, p < 0). 05), tři geny odezvy IFN-I (Ifna, Irf7 a Oas1, p < {{20}}.05), dva geny související s AD (PS{ {19}} a APP, p < 0.01) a tři reprezentativní geny SASP (Il6, Mmp3 a Pai1, p < 0.01), zatímco výrazně dolů -regulované geny pro léčbu 3TC (skupiny SAMP8 ošetřené vehikulem vs. SAMP8 ošetřené 3TC) zahrnovaly jeden gen související s transposonem (L1-ORF2, p < 0,05), dva geny odpovědi IFN-I (Ifna a Oas1, p < 0,001) a tři reprezentativní geny SASP (Il6, Mmp3 a Pai1, p < 0,01). Podobné výsledky byly získány v kortexu, i když up-regulace genu souvisejícího s AD byla snížena ošetřením 3TC v kortexu ve srovnání s hippocampusem (p < 0,05; obrázek 3B).

3,4|3TC zmírňuje morfologické abnormality a ztrátu neuronů v hipokampu myší SAMP8 způsobenou stárnutím

Ke zkoumání morfologických změn způsobených 3TC v hipokampu, což byla klíčová oblast kognice a paměti, jsme použili jak H&E, tak Nissl barvicí metody. Ve srovnání se skupinou SAMR1 ošetřenou vehikulem, skupina SAMP8 ošetřená vehikulem vykazovala zvýšenou rychlost clearance hipokampálních neuronů, mírně neuspořádané uspořádání buněk, jadernou koncentraci zjištěnou v některých neuronech a mírný hipokampální edém. Tato poškození se zlepšila ve skupinách léčených 3TC (obrázek 4A). Ztráty Nissl-pozitivních životaschopných neuronálních buněk s typickou neuropatologickou změnou byly pozorovány ve skupině SAMP8 na základě Nissl barvení, zatímco tyto změny byly částečně zvráceny ve skupině SAMP8 léčené 3TC (obrázek 4B–C). Smrt neuronů v hipokampu byla také detekována barvením TUNEL s největším a nejmenším množstvím TUNEL-pozitivních buněk (zeleně) pozorovaným ve skupině SAMP8 ošetřené vehikulem a skupině SAMR1 ošetřené vehikulem, v daném pořadí, zatímco skupina SAMP8 ošetřený 3TC byl odhalen významně méně než skupina SAMP8 ošetřená vehikulem (obrázek 4D–E).

3,5|Předpokládané cíle 3TC

Síťová farmakologická analýza odhalila celkem 269 proteinů jako předpokládané cíle pro 3TC, přičemž 164 bylo identifikováno databází Pharmmapper a 105 databází ChEMBL (doplňková tabulka S3). Síť PPI byla zkonstruována na základě cílových genů 3TC pomocí databáze String s celkem 32 základními uzly v síti identifikovanými jako klíčové cíle 3TC u myší SAMP8 (obrázek 5A). Použili jsme řetězec 9.1 k napodobení interakcí mezi klíčovými cílovými proteiny 3TC k identifikaci tří skupin proteinů s podobnými funkcemi (obrázek 5B).

3,6|Analýza obohacení klíčových cílových sítí 3TC

3.6.1|Analýza GO

Analýza obohacení GO cílových genů identifikovaných při léčbě 3TC pomocí STRING odhalila celkem 55 0 biologických procesů s p < 0,05 (obrázek 6A; doplňková tabulka S4), jako je reakce na kyselou chemickou látku, reakce na reaktivní formy kyslíku a negativní regulace apoptotického procesu. Analýza GO také identifikovala celkem 23 buněčných složek s p < 0,01, jako je endomembránový systém, cytoplazmatická vezikula, vezikula, cytoplazmatická část a část plazmatické membrány (doplňková tabulka S5), zatímco celkem 69 molekulárních funkcí identifikovaných GO analýzy byly seskupeny do celkem 19 kategorií (doplňková tabulka S6). Stálo za zmínku, že tau protein vázající termín, který byl považován za spojenýAlzheimerova chorobaukázal významný vztah s 3TC (p < 0,05).

3.6.2|Metabolické dráhy cílových sítí 3TC

Pomocí KEGG analýzy bylo vyšetřeno celkem 109 významných léčebných cest (p < 0.05; obrázek 6B; doplňková tabulka S7) s mnoha cestami spojenými s rakovinou, včetně dráhy u rakoviny, chemická karcinogeneze, rakovina prostaty, proteoglykany u rakoviny a mikroRNA u rakoviny. Ukázalo se, že tři cesty související s neurozánětem, buněčnou smrtí a transdukcí neuronového signálu zahrnují estrogenovou signalizaci (p < 0 0,0001), fosfor inositid 3-kinázu a proteinkinázu B (PI3K/Akt) (p < 0,0001) a signální dráhy neuroaktivní interakce ligand-receptor (p < 0,001).27–29

3.6.3|Režim vazby

Dokovací studie byly provedeny mezi 3TC a třemi vybranými potenciálními cíli, to znamená EGFR reprezentující estrogenní signální dráhu, AKT1 reprezentující signální dráhu P13K/Akt a ADRB2 představující signální dráhu neuroaktivní interakce ligand-receptor. Výsledky analýzy vazebného módu ukázaly (obrázek 6C), že aminokyselinové zbytky Thr854, Asn842, Arg841 a Glu762 receptorového proteinu EGFR interagovaly s malými molekulami 3TC ligandů za vzniku vodíkových vazeb, zatímco aminokyselinové zbytky Lys55, Val40, Ala53, Met111, Val158, Asn114, Leu168, Ser155, Asp169, Lys153, Asn156s a Gly35 vytvořily hydrofobní interakce s malými molekulami ligandu 3TC. Aminokyselinové zbytky Asp292, Glu191, His194, Glu198s a Thr195 receptorového proteinu AKT1 vytvořily vodíkovou vazbu s 3TC, zatímco aminokyselinové zbytky Phe179, Leu295, Glu198 a Lys179 vytvořily hydrofobní interakci s 3TC. Aminokyselinové zbytky Asp331 a Phe332 z ADRB2 interagovaly s 3TC za vzniku vodíkové vazby, zatímco aminokyselinové zbytky Phe336, Ala335, Val54, Ala57, Ile58, Leu64, Asn69, Ile72 a Pro330 z ABRB2 vytvořily hydrofobní interakci s ABRB2. Tyto výsledky dokovacích studií poskytly důkaz o vazbě 3TC na své cíle, což bylo důležité pro pochopení mechanismu účinku léku. Dále jsme provedli experimenty in vitro, abychom ověřili výsledky bioinformatické analýzy

OBRÁZEK ​​3 Účinky léčby 3TC na expresi kandidátních genů v myších mozkových tkáních. Myši byly ošetřovány vehikulem nebo 3TC nepřetržitě po dobu 4 týdnů. U všech podmínek byla exprese L1-ORF1 a L1-ORF2, tří reprezentativních genů odpovědi IFN-I (Ifna, Irf7 a Oas1), dvouGeny související s Alzheimerovou chorobou(PS{0}} a APP) a tři reprezentativní geny SASP (Il6, Mmp3 a Pai1) v hippocampu (A) a kortexu (B) byly hodnoceny pomocí kvantitativní PCR v reálném čase s profilováním exprese genů zobrazených v histogramu. Studentův t-test: *p < 0.05, **p < 0,01 a ***p < 0,001. ns: žádná statistická významnost. Černé hvězdičky nebo „ns“ představují srovnání se skupinou vehikula SAMR1 plus. Červené hvězdičky nebo "ns" představují srovnání se skupinou SAMP8 plus vehikulum.

3,7|3TC chrání buňky HT22 před cytotoxicitou vyvolanou FA regulací různých molekul

Abychom prozkoumali účinky 3TC jako inhibitoru reverzní transkriptázy na senescentní neurony in vitro, indukovali jsme stárnutí v buňkách HT22 pomocí FA. Výsledky ukázaly, že LINE-1 byla aktivována v senescentních neuronech a tento trend byl zvrácen pomocí 3TC (obrázek 7A–B). Navíc 3TC vykazoval antagonistický účinek na buněčnou smrt indukovanou FA (obrázek 7C). Podle očekávání vedla stimulace buněk TH22 FA po dobu 24 hodin k významné inhibici exprese EGFR, p-AKT1 a ADRB2 (p < 0.001) ve srovnání s neošetřenou kontrolou zatímco společná léčba 3TC vedla k významně zvýšené expresi FA indukovaného EGFR, p-AKT1 a ADRB2 (p < 0,001; obrázek 7D,E).

4|DISKUSE

Pokles kognitivních funkcí, zejména ztráta paměti, je obvykle spojen s přirozeným stárnutím. Theúčinky stárnutíjsou zvláště výrazné v prefrontálním kortexu a hipokampu, mozkových oblastech, které se kriticky podílejí na poznávání a náladě.30 Myši SAMP8 byly odvozeny z linie SAM-P/2 jako rychle stárnoucí myší model demence. Předchozí studie ukázala, že myši SAMP8 vykazovaly s věkem související pokles kognitivních funkcí s krátkou délkou života, vykazovaly progresivní deficity učení a paměti, stejně jako neuropatologické znaky demence v prefrontálním kortexu a hipokampu.31 Životnost myší SAMP8 je téměř poloviční. SAMR1, které byly použity jako kontroly pro SAMP8.32 V naší studii byly myši SAMP8 vybrány jako ideální zvířecí model pro zkoumání poklesu kognitivních funkcí během stárnutí, přičemž homologní normálně se vyvíjející myši SAMR1 byly použity jako anti- kontrolní skupina stárnutí

OBRÁZEK ​​{{0}}TC snižuje poškození neuronů v hipokampu myší SAMP8. (A) Mikrofotografie řezů hippocampu obarvených H & E pro každou skupinu myší (sloupec=50 μm). Černé šipky označují koncentrovaná jádra a modré šipky označují oblasti, kde jsou neurony vážně ztraceny a neuspořádané. (B) Identifikace přežití neuronů pomocí Nissl barvení v hipokampu (sloupec=20 μm). (C) Množství zdravých neuronálních buněk v každém zorném poli s hustě obarvenými tělísky Nissl. (D) Obrázky apoptotických buněk označených testem TUNEL (Green) v každé skupině myší (sloupec=20 μm). (E) Kvantifikace buněk pozitivních na TUNEL v každém zorném poli. Data jsou uvedena jako průměr ± SD. Studentův t-test: ***p < 0,001. Černé hvězdičky představují srovnání se skupinou vehikul SAMR1 plus. Červené hvězdičky představují srovnání se skupinou SAMP8 plus vehikulum.

Stárnutí obvykle způsobuje, že tělo hubne v důsledku úbytku kostí, svalové atrofie a dysfunkce trávicího systému.33 Naše výsledky ukázaly, že 3TC částečně zmírnil trend hubnutí. Ve srovnání s neléčenými myšmi vykazovaly myši SAMP8 léčené 3TC tendenci zvyšovat svou tělesnou hmotnost s věkem. Tyto výsledky jsou v souladu s těmi, které byly uvedeny dříve, což naznačuje, že 3TC zlepšuje zdraví těl myší.34 Aby bylo možné objektivně a přesně vyhodnotit účinky léčby 3TC na zlepšenívlastnosti stárnutímyší jsme zaznamenali skóre stárnutí během léčby. Naše výsledky ukázaly, že se zvýšením doby léčby 3TC vykazovaly myši SAMP8 tendenci zpomalovat stárnutí. Konkrétně léčba 3TC hrála významnou roli ve zlepšení lesku kůže, zákalu rohovky a vředu rohovky způsobeného stárnutím u myší SAMP8. Tyto výsledky naznačují, že cíl 3TC proti stárnutí existuje na kůži a tkáních rohovky. Předchozí studie potvrdily, že L1 byl používán jako cíl pro zlepšení degenerativních onemocnění způsobených stárnutím, zatímco inhibitory reverzní transkriptázy včetně 3TC byly používány jako transponovatelné inhibitory L1.13 Dosud byl molekulární mechanismus role L1 v nervovém systému a možnost léčby onemocnění souvisejících s nervovým systémem, jako je AD, regulací LI nebyla přesvědčivě vysvětlena. Kromě toho studie naznačují, že genetická rekombinace v genu APP může být klíčovou událostí v patogenezi sporadické AD, což je typ demence.15 Rekombinace neuronových genů nebyla hlášena, zatímco její výskyt a poškození DNA a meziproduktů RNA vyžadují aktivity proteinových funkcí reverzní transkriptázy. Proto mohou inhibitory reverzní transkriptázy, jako je 3TC, hrát roli v prevenci a léčbě AD, která způsobuje kognitivní pokles. Tato spekulace byla potvrzena našimi výsledky experimentů s Morrisovým vodním bludištěm, které zkoumaly účinky 3TC na kognitivní schopnosti u myší SAMP8.

OBRÁZEK ​​7 Experimenty in vitro potvrdily klíčové molekuly 3TC proti neuronální degeneraci. Senescence buněk myšího neuronu HT22 je indukována formaldehydem (FA). (A) Imunofluorescenční detekce LINE-1 ORF1p v kontrolních skupinách, FA a FA plus 3TC (sloupec=20 μm). (B) Kvantifikace imunofluorescenční analýzy v (A). (C) Kvantifikace přeživších neuronů na ×40}0 pole v různých skupinách. (D) EGFR, p-AKT1 a ADRB2 byly detekovány analýzou Western blot. (E) Kvantifikace analýzy Western blot v (D). Studentův t-test: ***p < 0,001. Černé hvězdičky představují srovnání s kontrolní skupinou. Červené hvězdičky představují srovnání se skupinou FA

Naše výsledky Morrisových testů ve vodním bludišti ukázaly, že po 5 dnech plaveckého tréninku byly myši SAMP8, které perorálně užívaly 3TC, schopny najít skrytou platformu rychleji než neléčené myši SAMP8. Vzhledem k tomu, že myši léčené 3TC vykazovaly větší tělesnou hmotnost, což může souviset s počtem kosterních svalů, zaznamenali jsme rychlost plavání každé skupiny myší, abychom eliminovali účinek svalové síly. Přestože myši užívající 3TC plavaly první den plaveckého tréninku rychleji než jiné skupiny, rozdíl nepřetrvával ani v dalších 4 dnech. Proto vylučujeme vliv svalové síly na výsledky testů ve vodním bludišti. Podobně výsledky experimentu s průzkumem vesmíru 6. den ukázaly, že myši SAMP8 ošetřené 3TC vykazovaly tendenci nacházet původní platformu aktivněji než neléčené myši. Tyto výsledky naznačují, že léčba 3TC zlepšuje kognitivní a paměťové poklesy způsobené stárnutím u myší SAMP8. Abychom prozkoumali potenciální molekulární mechanismy 3TC zlepšující stárnutí mozku, použili jsme kvantitativní PCR v reálném čase k měření hladin mRNA kandidátních genů v hipokampálních a kortikálních tkáních každé skupiny myší. Naše výsledky naznačují, že léčba 3TC inhibovala L1 indukovanou stárnutím v mozku a snížila expresi genů souvisejících s IFN, SASP a AD, což naznačuje, že signální dráhy aktivované stárnutím byly potlačeny léčbou 3TC. Naše výsledky naznačují, že 3TC může zlepšit inteligenci a fenotypy stárnutí inhibicí transpozice L1, aby se nakonec zlepšil chronický zánět v mozku způsobený stárnutím. Poznamenáváme, že je zapotřebí více studií, které by poskytly silnou podporu těmto molekulárním mechanismům zlepšování stárnutí mozku léčbou 3TC odhalenou v této studii. V současné době probíhá v naší laboratoři výzkum farmakologického mechanismu inhibitorů reverzní transkriptázy na nervových buňkách s využitím in vitro stárnoucích modelů gliových a neuronových buněk.

Naše výsledky experimentů barvení HE a Nissl ukázaly, že 3TC napravil ztrátu neuronů v hipokampu způsobenoustárnutí, v konečném důsledku zmírnění neurodegenerace záchranou neuronů před smrtí. Kromě toho jsme pozorovali více apoptotických buněk v hipokampu myší SAMP8 ve srovnání s myšmi SAMR1. Naše výsledky dále ukázaly, že léčba 3TC významně snížila počet apoptotických buněk, pravděpodobně v důsledku přímého účinku 3TC na proteiny související s apoptotickou dráhou nebo jiné upstream molekuly.

Učení a paměť jsou důležité kognitivní schopnosti, které zahrnují komplexní síť funkčních oblastí mozku, které spolupracují na správě a zpracování informací. Jakékoli sloučeniny vykazující účinky na mozek by proto měly být brány obezřetně a jejich potenciální cíle by měly být plně známy. Síťový farmakologický přístup je systematická analytická technologie používaná ke zkoumání interakčních sítí mnoha faktorů, jako jsou nemoci, léky, geny a proteinové cíle. Provedli jsme síťové farmakologické analýzy, včetně PPI a analýzy obohacení, na základě celkem 269 potenciálních cílů (s 32 základními cíli) 3TC anotovaných pomocí databází Pharmmapper a ChEMBL. Naše výsledky ukázaly, že 3TC může hrát důležitou roli při udržování normálních funkcí nervového systému prostřednictvím signalizace estrogenu a signálních drah PI3K/Akt a neuroaktivní interakce ligand-receptor, což dále vysvětluje účinky 3TC na ochranu normálních nervových funkcí. a inhibici smrti neuronových buněk. Reprezentativní molekuly v příslušných drahách byly vybrány k provedení molekulárního dokování a in vitro experimentů k potvrzení výsledků bioinformatické analýzy. Aby bylo možné poskytnout více důkazů na podporu těchto spekulovaných molekulárních mechanismů 3TC pracujících synergicky s nervovým systémem, jsou nutné další studie k identifikaci přesných složek zahrnutých a regulovaných v těchto drahách.

Jako součástantiretrovirová terapie(ART), 3TC byl v posledních letech rozsáhle studován a byl schválen pro léčbu chronické hepatitidy B (HBV).35 Je třeba poznamenat, že pokud se 3TC používá k léčběneurodegenerativní léze související se stárnutím, je nutné uvážit jeho farmakologickou toxicitu způsobenou slabým imunitním systémem u starší populace a onkologických pacientů. Studie ukázaly, že běžné nežádoucí reakce 3TC zahrnují infekce horních cest dýchacích, nevolnost, zvracení, bolesti břicha a průjem. Klinická aplikace 3TC by proto měla být extrémně opatrná. V současné době lze 3TC použít jako farmakologický nástroj ke studiu molekulárních mechanismů, ale ne jako domnělou terapii. Stručně řečeno, naše studie poprvé prokázala, že 3TC zlepšuje kognitivní funkce myší SAMP8 zvrácením stárnutí mozku, což poskytuje experimentální důkazy pro použití inhibitorů reverzní transkriptázy jako potenciální léčby neurodegenerativních onemocnění.

POTVRZENÍ

Tato práce byla podpořena Národní nadací přírodních věd Číny (81670942, 81470704 a 81972057).

KONFLIKT ZÁJMŮ Autoři prohlašují, že nemají žádný střet zájmů.

REFERENCE

1. Baulac S, Lu H, Strahle J, et al. Zvýšená exprese DJ-1 při oxidačním stresu a inMozek Alzheimerovy choroby. Mol Neurodegener. 2009;4:12.

2. Delgado-Lara DL, González-Enríquez GV, Torres-Mendoza BM, et al. Vliv podávání melatoninu na hodinové geny PER1 a BMAL1 u pacientů sParkinsonova choroba. Biomed Pharmacother. 2020;129:110485.

3. Agatonovic-Kustrin S, konvice C, Morton DW. Molekulární přístup ve vývoji léků pro Alzheimerovu chorobu. Biomed Pharmacother. 2018;106:553-565.

4. Khosla S, Farr JN, Tchkonia T, Kirkland JL. Role buněčného stárnutí při stárnutí a endokrinních onemocněních. Nat Rev Endocrinol. 2020; 16:263-275.

5. Zolfaghari MA, Karimi A, Kalantari E, et al. Srovnávací studie imunoreaktivity proteinu dlouhého rozptýleného prvku-1 u kožních malignit. BMC rakovina. 2020; 20:567.

6. Sae-Lee C, Biasi J, Robinson N, a kol. Vzorce methylace DNA LINE-1 a Alu pro presymptomatickou demenci u diabetu 2. typu. PLoS One. 2020;15:e0234578. 7. Baeken MW, Moosmann B, Hajieva P. Aktivace retrotranspozonu narušenými mitochondriemi v neuronech. Biochem Biophys Res Commun. 2020;525:{11}}. 8. Jones RB, Garrison KE, Wong JC, Duan EH, Nixon DF, Ostrowski MA. Nukleosidové analogové inhibitory reverzní transkriptázy odlišně inhibují retrotranspozici lidské LINE-1. PLoS One. 2008;3:e1547