Izolace a čištění fenylethanoidních glykosidů z Cistanche Deserticola pomocí vysokorychlostní protiproudé chromatografie
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b
Abstraktní
Pět fenylethanoidových glykosidů (PhGs), echinakosid, cistanosid A, akteosid, isoakteosid a 20-acetylakteosid, bylo izolováno a purifikováno zCistanche deserticolapoprvé pomocí vysokorychlostní protiproudé chromatografie (HSCCC) za použití dvou dvoufázových systémů, z nichž jeden se skládá z ethylacetátu-ethanolu-vody (5:0,5:4,5, v/v/v) a druhého ethylacetátu-n-butanolu-ethanolu-vody ({{10}}}.5:0.5:0,1:1, v/v/v/v). Celkem 28,5 mg echinakosidu, 18,4 mg cistanosidu A, 14,6 mg akteosidu, 30,1 mg isoakteosidu a 25,2 mg 20-acetylakteosidu bylo purifikováno ze 1412 mg n-butanolového extraktu C. v čistotě přes 92,5 procenta, jak bylo stanoveno pomocí HPLC. Struktury byly identifikovány jejich retenčním časem, UV, LC-ESI-MS v módu negativních iontů a potvrzeny NMR experimenty. Je diskutován charakteristický vzor fragmentace LC–ESI-MSn pěti sloučenin a bylo zjištěno, že je velmi specifickým a užitečným nástrojem pro strukturální identifikaci PhGs z této důležité léčivé rostliny.
klíčová slova:Cistanche deserticola; fenylethanoid; echinakosid; Cistanosid A; akteosid; isoacteosid; 20-Acetylakteosid; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR
1. Úvod
Cistanche deserticola YC Maje známý čínský bylinný lék a byl široce používán v tradičních přípravcích podobných dnešním funkčním složkám potravin nebo doplňkům stravy (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Hlavními bioaktivními složkami v C. deserticola jsou fenylethanoidní glykosidy (PhGs), včetně echinakosidu, akteosidu, isoakteosidu, 20-acetylakteosidu a cistanosidu A (Kobayashi, Karasawa a Miyase, 1984; Kobayashi et al.). PhG jsou široce distribuovány v rostlinné říši a byly rozsáhle studovány pro jejich různé biologické funkce, jako je hepatoprotektivní (Xiong et al., 1998), protizánětlivá, antinociceptivní aktivita (Schapoval et al., 1998) a antioxidační aktivita ( Cheng, Wei, Guo, Ni a Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li a But, 2000; Li, Wang a Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu a Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu a Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani a Namba, 1996), zlepšení sexuálních funkcí (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu a Chen, 1996) a sedativní účinek (Lu, 1998 ).
Vzhledem k výše uvedeným významným bioaktivitám je naléhavě zapotřebí velké množství čistých sloučenin jako referenčních standardů a pro různé studie in vitro a in vivo související s používáním tradiční čínské medicíny. Efektivní metody pro izolaci, purifikaci a strukturní charakterizaci PhG se proto stávají nezbytnými. Taková práce však obvykle vyžaduje použití vícenásobných chromatografických kroků pro čištění a izolaci vzorků (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin a Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), což obvykle vede k nízkým rychlostem obnovy v důsledku nevratných adsorpcí PhG na pevný nosič během separace (Lei et al., 2001). Naproti tomu vysokorychlostní protiproudá chromatografie (HSCCC) se stala účinnou alternativou ke konvenčním chromatografickým technikám pro separaci některých PhG z rostlinných extraktů (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei a kol. úspěšně oddělit akteosid a 20-acetylakteosidCistanches salsa(CA Mey.) G. Beck pomocí HSCCC (Lei et al., 2001). Autoři tohoto článku již dříve popsali separaci akteosidu a isoakteosidu z Plantago psyllium L. pomocí HSCCC (Li et al., 2005). Nebyla však publikována žádná zpráva o separaci a purifikaci mnoha PhG z C. deserticola pomocí HSCCC. Kvůli nedostatku standardů byly vyvinuty a použity metody LC-MS jako výkonný analytický nástroj pro rychlou charakterizaci a identifikaci některých PhG v rostlinném extraktu (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).
V tomto článku popisujeme metodu HSCCC vyvinutou pro přípravu echinakosidu, cistanosidu A, akteosidu, isoakteosidu a 20-acetylakteosidu z C. deserticola. Charakterizace a analýza pěti oddělených PhG byla provedena pomocí LC spojené s in-line ESI hmotnostní spektrometrií a NMR experimenty. Retenční čas, molekulová hmotnost a charakteristické fragmentové ionty pěti PhG jsou uvedeny a diskutovány v tomto článku. Struktury pěti PhG identifikovaných v tomto výzkumu jsou znázorněny na obr. 1.
Účinné složky Cistanche deserticola
2. Experimentální
2.1. Chemikálie a činidla
Akteosid byl zakoupen od Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), echinakosid byl zakoupen od ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoakteosid byl izolován z P. psyllium L. (Li et al., 2005). C. deserticola byla zakoupena od Beijing TongRenTang Medicinal Store (Čína). Všechna rozpouštědla byla čistoty pro HPLC a byla zakoupena od Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).
2.2. příprava vzorků
C. deserticola (20 g) byla pětkrát extrahována při teplotě místnosti po dobu 12 hodin vždy 100 ml 80% vodného ethanolu. Pokaždé byla extrakční směs přefiltrována přes filtrační papír Whatman č. 1 (Whatman International Ltd., Maidstone, Anglie). Spojený filtrát byl zakoncentrován na 100 ml ve vakuu při < 40="" °c.="" výsledný="" vodný="" roztok="" byl="" dvakrát="" odtučněn,="" vždy="" 100="" ml="" hexanu,="" a="" poté="" postupně="" pětkrát="" extrahován,="" vždy="" 100="" ml="" n-butanolu.="" vrstvy="" n-butanolu="" byly="" spojeny="" a="" zahuštěny="" do="" sucha="" ve="" vakuu="" při="">< 40="" stupních,="" čímž="" bylo="" získáno="" 2,2="" g="" n-butanolového="" extraktu.="" extrakt="" byl="" skladován="" při="" -20="" stupních="" před="" separací="">
2.3. Postup separace HSCCC
Preparativní HSCCC se provádělo na vysokorychlostní protiproudé chromatografii Model CCC{{0}} (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Toto zařízení mělo tři preparativní cívky, zapojené do série (celkový objem 325 ml). Otáčky zařízení lze regulovat mezi 0 a 2000 ot./min. Systém HSCCC byl vybaven HPLC pumpou (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), UV detektorem Model 450 (Alltech, USA), plochým zapisovačem Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), sběrač frakcí (Advantec MFS Inc., USA) a ventil pro vstřikování vzorku s 10-ml vzorkovou smyčkou.
Směs ethylacetát-ethanol-voda (5:0 0,5:4,5, obj./obj./obj.) byla důkladně protřepána v dělicí nálevce a ponechána stát a oddělit při teplotě místnosti. Tyto dvě fáze byly použity v HSCCC poté, co dosáhly rovnováhy. Celá stočená kolona byla nejprve naplněna horní vrstvou, která slouží jako stacionární fáze. Spodní vrstva (mobilní fáze) byla potom pumpována do hlavy kolony rychlostí průtoku 1,5 ml/min. Rychlost otáčení byla nastavena na 1050 ot./min. Vzorek (pokaždé cca 230 mg) rozpuštěný v 8 ml směsi ethylacetát-ethanol-voda (5:0,5:4,5, obj./obj./obj.) byl vložen do vstřikovacího ventilu poté, co systém dosáhl hydrodynamického stavu. rovnováha. Tento dvoufázový systém rozpouštědel byl vybrán na základě rozdělovacího koeficientu (K), který byl 0,87, 1,11 a 1,32 pro akteosid, isoakteosid a 20 acetylakteosid. Hodnota K byl poměr koncentrací v horní a spodní vrstvě stejné sloučeniny, jak bylo stanoveno pomocí HPLC (obr. 2). Výtok z výstupu kolony byl nepřetržitě monitorován UV detektorem při 254 nm a shromažďován do zkumavek se sběračem frakcí nastaveným na 4 minuty pro každou zkumavku.
2.4. Podmínky LC
statický auto-sampler a detektor fotodiodového pole (DAD) byly použity pro analýzu PhGs v n-butanolovém extraktu C. deserticola a frakcích odebraných ze separace HSCCC. Separace byla provedena na koloně Phenomenex ODS-C18 (250 x 4,6 mm, 5 lm) s ochrannou kolonou C18. Binární mobilní fáze sestávala z acetonitrilu (rozpouštědlo A) a vody obsahující 2 procenta kyseliny octové (rozpouštědlo B). Všechna rozpouštědla byla přefiltrována přes a
{{0}},45 lm filtr před použitím. Průtok byl udržován konstantní na 1,{6}} ml/min po celkovou dobu běhu 25 minut. Systém byl spuštěn s gradientním programem: 0–20 min: 90 procent B až 60 procent B; 20–22 min: 60 procent B až 0 procent B; a 22–25 min, 0 procent B až 90 procent B. Objem nástřiku vzorku byl 10 l. Píky zájmu byly monitorovány při 320 nm detektorem DAD.
2.5. LC–ESI-MS experimenty
Experimenty LC-MS byly prováděny za použití hmotnostního spektrometru Finnigan LCQ DECA s iontovou pastí (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) vybaveného zdrojem elektrosprejové ionizace (ESI). Vzorky byly analyzovány za stejných chromatografických podmínek. Pro sběr dat byl použit negativní model. Plášťový plyn a pomocné průtoky byly nastaveny na 96 a 7 (libovolná jednotka). Napětí kapiláry bylo nastaveno na 29 V a její teplota byla regulována na 350 stupňů. Napětí vstupní čočky bylo fixováno na 40 V a multipólová RF amplituda byla nastavena na 540 V. Napětí ESI jehly bylo řízeno na 4,5 kV. Offset tubusové čočky byl 16 V, offset multipólové čočky 1 byl 8,20 V a offset multipólové čočky 2 byl 10,5 V. Napětí elektronového násobiče bylo nastaveno na 980 V pro detekci iontů.
2.6. NMR pro identifikaci
NMR spektra byla zaznamenána na spektrometru Bruker Avance{0}} (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Pouze sloučeniny 2 a 5 (žádné dostupné standardy) byly podrobeny NMR experimentům. Vzorky byly rozpuštěny v CD3OD.
Aktivní složky cistanche: echinakosid a akteosid
3. Výsledky a diskuse
Úspěšná separace HSCCC závisí do značné míry na vhodném dvoufázovém rozpouštědlovém systému, který poskytuje ideální rozdělovací koeficient (K) kolem 1 pro požadovanou sloučeninu. Takový dvoufázový systém by měl také poskytnout přiměřeně krátkou dobu ustálení (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). V našem experimentu jsme vybrali čtyři série systémů rozpouštědel podle rozpustnosti cílových sloučenin v C. deserticola. K měření koncentrace v každé fázi byla použita HPLC, ze které byly vypočteny hodnoty K cílových sloučenin. Dva systémy, ethylacetát – n-butanol – ethanol – voda (4:0,6:0,6:5, v/v/v/v) a ethylacetát-voda (1:1, v/v), byly dříve používány v HSCCC k oddělení akteosidu a 20-acetylakteosidu
C. salsa a akteosid a isoakteosid z P. Psyllium,
respektive (Lei a kol., 2001; Li a kol., 2005). Ačkoli první systém měl relativně krátkou dobu usazování, měl špatnou výkonnost při separaci PhG z C. deserticola kvůli nízkým hodnotám K pro sloučeniny 1 a 2 a vysokým hodnotám K pro sloučeniny 3–5. Hodnoty K byly velmi nízké pro sloučeniny 1–4 ve druhém systému, ale velmi vysoké pro sloučeninu 5 (tabulka 1). Modifikovaný systém obsahující ethylacetát-ethanol-voda (5:0,5:4,5, obj./obj./obj.) poskytl ideální hodnotu K pro sloučeniny 3–5 při 0,87, 1,11 a 1,32 a vedl k dobré separaci. z těchto tří sloučenin (obr. 3A a B). Tento systém však produkoval
příliš malá hodnota K pro sloučeniny 1 a 2, což způsobuje, že obě sloučeniny se společně eluují blízko čela rozpouštědla (frakce 1 na obr. 3A). Další modifikace systému (ethylacetát–n-butanol–ethanol–voda (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) zvýšilo hodnoty K pro sloučeninu 1 a 2 na 0,52 a 0,92, v daném pořadí, a vedlo k úplné separaci (obr. 3C). vzorek obsahující 230 mg n-butanolového extraktu C. deserticola za použití směsi ethylacetát-ethanol-voda (5:00,5:4,5, v/v/v). Frakce, které byly potvrzeny pomocí HPLC, aby obsahovaly pouze sloučeniny 3, 4 nebo 5, byly spojeny odděleně a ty, které obsahovaly sloučeniny 3 a 4, byly spojeny, lyofilizovány a znovu podrobeny HSCCC pro další separaci (obr. 3B). Výše popsaná separace HSCCC poskytla celkem 14,6 mg, 30},1 mg a 25,2 mg sloučenin 3–5 ze 1412 mg n-butanolového extraktu Obr. 3C ukazuje separaci HSCCC vzorku obsahujícího sloučeniny 1 a 2 (frakce 1 v první separaci) za použití směsi ethylacetát-n-butanol-ethanol-voda (0,5:0,5:0,1:1, v/v/v/v). Celkem 28,5 a 1 Bylo získáno 8,4 mg sloučenin 1 a 2. Chromatografické čistoty lyofilizovaných sloučenin 1–5 byly přes 92,5 procenta, které byly přímo použity pro LC–ESI-MS a NMR analýzy.
Předběžná identifikace sloučenin 1, 3 a 4 byla dosažena kongruentními retenčními časy a UV spektrálními údaji s údaji autentického echinakosidu, akteosidu a isoakteosidu (obr. 2). Sloučeniny 2 a 5 byly neznámé, nicméně UV spektra všech pěti sloučenin byla velmi podobná, což ukazuje na podobné strukturní rysy.
K dalšímu zkoumání struktur těchto pěti sloučenin byly provedeny pokusy LC–ESI-MSn a výsledky jsou uvedeny na obr. 4 a v tabulce 2. Sloučeniny související s píky (1–5) na obr. 2 vykazovaly intenzivně deprotonované molekulární ionty [MH]— při m/z 785, 799, 623, 623 a 665, v tomto pořadí, v negativním módu. Dimerní [2M H]— ionty byly také pozorovány pro píky 1–4 na obr. 2. Ty potvrdily molekulové hmotnosti píku 1–5 na 786, 800, 624, 624 a 666, v tomto pořadí. Údaje LC-MSN (tabulka 2) poskytly velmi užitečné strukturní informace pro pět PhG, jako je neutrální ztráta experimentálního postupu: přibližně 1 mg každého vzorku byl zvážen v 10ml zkumavce, do které byl 1 ml každé fáze. předem ekvilibrovaného dvoufázového rozpouštědlového systému. Zkumavka byla uzavřena a intenzivně třepána po dobu 1 minuty a ponechána stát, dokud se úplně neoddělila. Odebral se alikvot 100 l z každé vrstvy a odděleně se odpařil do sucha ve vakuu při<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">
LC–ESI-MS píku 1 je znázorněno na obr. 4A. Deprotonovaný molekulární ion [MH] — při m/z 785 s vysokým výskytem a dimerní deprotonovanou molekulou.ion [2M H]— při m/z 1571 byl pozorován v negativním módu, což naznačuje molekulovou hmotnost 786, která byla stejná jako u echinakosidu. Další zkoumání v experimentu LC–MS2 s ionty m/z 785 poskytlo jeden hlavní dceřiný ion při m/z 623 (obr. 4B) produkovaný přímo z m/z 785 ztrátou kafeoylové skupiny nebo hexózové skupiny jako [M 162 H]—. Spektrum LC-MS3 m/z 623 vykazovalo dva hlavní ionty při m/z 477 a 461 a dva vedlejší ionty při m/z 315 a 179 (obr. 3C, tabulka 2). Hmotnostní rozdíly mezi m/z 623 a fragmentovými ionty m/z 477 a 461 byly 146 a 162, v tomto pořadí, což odpovídá ztrátě rhamnózové jednotky a glukózové skupiny nebo kofeoylové skupiny [M 162 H]—. Ionty m/z 623 také ztratily caffeoylovou skupinu a rhamnózovou skupinu za vzniku iontů m/z 315. Iont při m/z 179 byl produkován štěpením kafeoylového zbytku, přičemž záporný náboj zůstal na straně kafeoylového zbytku. Experiment LC–ESI-MSN na autentickém echinakosidu ukázal stejný vzor fragmentace. Pík 1 byl tedy potvrzen jako echinakosid.
Pro vrchol 2 LC-ESI-MS ukázala m/z 799 jako deprotonovaný molekulární ion [MH]— a m/z 1599 jako jeho dimerní iont, což naznačuje molekulovou hmotnost 800. Během experimentů MS2 m/z 799 iontů vytvořilo tři dcery při m/z 637, 623 a 475 (tabulka 1). Iont při m/z 637 byl produkován přímo z mateřského iontu m/z 799 opět díky neutrální ztrátě kafeoylu [M-162-H]- nebo glukózové skupiny [M-162-H]-. Iont při m/z 623 je výsledkem ztráty radikálu CH2. Iont při m/z 475 se vytvořil z neutrální ztráty jak kafeoylové části [M 162 H], tak glukózové části z mateřského iontu. Experiment MS3 na m/z 637 produkoval tři ionty při m/z 619, 491 a 475, odpovídající ztrátám jedné vody, jednotky rhamnózy a glukózové skupiny. Dceřiný ion m/z 623 produkoval m/z 461 a 315 ve studii MS3, která sledovala stejné fragmentační dráhy jako echinakosid, jak bylo diskutováno výše. Data LC–ESI-MSN podporovala předběžnou identifikaci píku 2 jako cistanosidu A. Oba píky vykazovaly stejný iont [MH]- při m/z 623 a dimer při m/z 1247 v negativním módu (tabulka 1), což naznačuje jsou to možná izomery se stejnou molekulovou hmotností
624, stejně jako akteosid a isoakteosid. MS2 spektra [MH]— iontů také ukázala jeden stejný dceřiný ion m/z 461, který indikoval ztrátu kafeoylového zbytku z mateřského iontu m/z 623 (tabulka 1). Pro tyto dvě sloučeniny byla získána podobná MS3 spektra. Pro vrchol 3 spektrum MS3 iontu při m/z 461 vytvořilo tři ionty při m/z 315, 161 a 135. m/z 315 se tvoří po ztrátě rhamnózy, jak bylo diskutováno dříve. Ion m/z 161 byl produkován štěpením kafeoylového zbytku, následovaným další ztrátou jedné vody; náboj zůstal na části kafeoylové skupiny. Iont při m/z 135 [aglykon 18 H]— vznikl štěpením glykosidické vazby v poloze C1 s další ztrátou jedné vody, přičemž náboj zůstal na straně aglykonové skupiny. MS3 spektrum píku 4 sledovalo stejnou fragmentační dráhu jako pík 3 s výjimkou chybějícího iontu při m/z 135. Molekulární ion a fragmentační profily těchto dvou sloučenin jsou v souladu s literárními údaji o akteosidu a isoakteosidu (Wang et al. ., 2000), i když byl nalezen další iont m/z 153 a data protonové NMR cistanosidu A a 20-acetylakteosidu byla přiřazena jako [aglykon H] — Wang et al. (Wang a kol., 2000). Tento iont mohl být nestabilní a ztrácel vodu, aby v našem experimentu poskytl m/z 135. Na základě MS dat a kongruentních retenčních časů píku 3 a 4 se standardy jsou proto identifikovány jako akteosid a isoakteosid, v daném pořadí.
Údaje LC–ESI-MS píku 5 jsou uvedeny v tabulce 2. Deprotonovaný molekulární ion [MH]— (m/z 665) byl jediným iontem nalezeným v negativním módu, což znamená molekulovou hmotnost 666. Tři dceřiné ionty byly pozorovány při m/z 623, 503 a 461 v experimentu MS2 (tabulka 2). Dceřiné ionty při m/z 623 a 503 byly vytvořeny přímo z rodičovského iontu ztrátou COCH2 skupiny a případně kávové skupiny. Iont při m/z 461 pochází ze ztráty jak kafeoylové, tak COCH2 části [M 162 42 H]— z mateřského iontu. V experimentu MS m/z 623 produkovala m/z 461 a m/z 503 poskytla tři ionty při m/z 485, 461 a 315. MS3 spektrum dceřiného iontu m/z 461 dalo dva ionty při 443 a 315. Porovnáním LC–MSN fragmentačního vzoru píku 5 s jinými sloučeninami uvedenými v této studii a s dalšími uvedenými (Li et al., 2005; Wang et al., 2000) jsme došli k závěru, že pík 5 je strukturálně vysoce příbuzný na akteosid, přičemž jediným rozdílem je jednotka COCH3 na pozici R3. Proto byla píku 5 dána předběžná identita jako 20-acetylakteosid (obr. 1).
Struktury dvou předběžně identifikovaných sloučenin, vrchol 2 (jako cistanosid A) a vrchol 5 (jako 20-acetyl-akteosid), byly potvrzeny pomocí1H NMR. Chemické posuny a vazebné konstanty všech protonů ve sloučeninách 2 a 5, jak je uvedeno v Tabulce 3, odpovídaly uváděným NMR datům pro cistanosid A a 20-acetylakteosid, v daném pořadí (Kobayashi et al., 1984, 1987). . V této studii byly také provedeny 2D NMR experimenty (dlouhodosahové COSY, ROESY a CH korelace), které dále potvrdily identifikaci (data nejsou uvedena).
Acteosid z Cistanche deserticola
4. závěr
V tomto článku byl HSCCC úspěšně použit pro izolaci a purifikaci echinakosidu, cistanosidu A, akteosidu, isoakteosidu a 20-acetylakteosidu z n-butanolového extraktu C. deserticola. Jde tedy o osvědčený prostředek pro semipreparativní separaci bioaktivních látek. Mezitím byly pomocí LC–ESI-MSN zkoumány struktury pěti PhG v C. deserticola; byly nalezeny některé charakteristické rysy PhG, které nám umožnily určit funkční skupiny ve strukturách. Metoda LC–ESI-MSN je proto mocným nástrojem pro rychlou identifikaci fenylethanoidů a jejich glykosidů v extraktech C. deserticola, zejména pokud je doložena NMR daty.
Potvrzení
Autoři by rádi poděkovali Jun Gu z Centra nukleární magnetické rezonance, University of Guelph, Ontario, Kanada za její pomoc při experimentech NMR. Tento projekt byl částečně podpořen finančními prostředky z provincie Jilin, Čína (č. 20060904).
Reference
Chen, LJ, Games, DE a Jones, J. (2003). Izolace a identifikace čtyř flavonoidních složek ze semen Oroxylum indicum pomocí vysokorychlostní protiproudé chromatografie. Journal of Chromatography A, 988, 95–105.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005). Suspenzní kultury buněk Cistanche deserticola: Biosyntéza fenylethanoidních glykosidů a antioxidační aktivita. Process Biochemistry, 40, 3119–3124.
Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Protiproudá chromatografie: přístrojové vybavení, výběr rozpouštědla a některé nedávné aplikace pro čištění přírodních produktů. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.
Gross, G.-A., Lahlouba, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucriosid, fenylpropanoidní glykosid z Teucrium Chamaedrys. Fytochemie, 27, 1459–1463.
On, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000). Antioxidační aktivita fenylethanoidových glykosidů z Brandisia šance. Journal of Ethnopharmacology, 71, 483–486.
Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Studie o složkách Cistanchis Herba. III. Izolace a struktury nových fenylpropanoidních glykosidů, Cistanosidu A a B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.
Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Nové fenylethanoidní glykosidy od Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.
Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001). Preparativní izolace a purifikace akteosidu a 2'-acetyl-akteosidu z Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck protiproudovou chromatografií. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.
Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Izolace a purifikace akteosidu a isoakteosidu z Plantago psyllium L. vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.
Li, LL, Wang, XW a Wang, XF (1997). Antilipidová peroxidace a antiradikálové působení glykosidů v herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.
Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Ochrana fenylpropanoidních glykosidů z Pedicularis proti oxidativní hemolýze in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.
Lu, MC (1998). Studie o sedativním účinku Cistanche deserticola. Journal of Ethnopharmacology, 59, 161–165.
Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Devět fenethylalkoholových glykosidů od Stachys szeboldzz. Fytochemie, 30, 965–969.
Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Systematické hledání vhodných dvoufázových rozpouštědlových systémů pro vysokorychlostní protiproudovou chromatografii. Journal of Chromatography, 538, 99–108.
Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Fenolické sloučeniny z Plantago Asiatica. Fytochemie, 29, 3627–3631.
Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Protizánětlivé a antinociceptivní účinky extraktů a izolovaných sloučenin ze Stachytarpheta cayennensis. Journal of Ethnopharmacology, 60, 53–59.
Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Fenolické glykosidy z nemocných kořenů Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Fytochemie, 26, 983–986.
Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY a Wang, XF (2001). Vychytávací účinek glykosidů Cistanche deserticola na volné radikály a jeho ochrana před poškozením DNA indukovaným OH in vitro. Journal of Chinese Pharmacology, 36, 29–31.
