Imunitní reakce hostitele na povrchové proteiny S-vrstvy (SLP) Clostridioides Difficile

Abstraktní:

Clostridioides difficile, nozokomiální patogen, je nově se objevující střevní patobiont způsobující průjem související s antibiotiky. Infekce C. difficile zahrnuje kolonizaci střeva a narušení střevní epiteliální bariéry, což vede k indukci zánětlivých/imunitních odpovědí. Exprese dvou hlavních exotoxinů, TcdA a TcdB, je hlavní příčinou patogenity C. difficile. Připojení bakteriálních proteinů buněčné stěny nebo povrchových proteinů S-vrstvy (SLP), jako je SlpA, s hostitelskými epiteliálními buňkami je kritické pro virulenci. Kromě toho, že jsou tyto povrchové složky toxiny, bylo prokázáno, že jsou vysoce imunogenní. Nedávné studie ukazují, že C. difficile SLP hrají důležitou roli v adhezi bakterií k buňkám střevního epitelu, narušení těsných spojení a modulaci imunitní odpovědi hostitelských buněk. Tyto proteiny mohou sloužit jako nové cíle pro vakcíny a nová terapeutická činidla. Tento přehled shrnuje naše současné chápání imunologické role SLP při navození imunity hostitele a jejich použití při vývoji vakcín a nových terapeutik pro boj s infekcí C. difficile.

cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

klíčová slova:

průjem související s antibiotiky; proteiny buněčné stěny; terapeutika; proteiny S-vrstvy; vakcína

1. Úvod

Clostridioides difficile, anaerobní bakterie produkující toxiny, je důležitým oportunním a nozokomiálním patobiontem ve střevě, který způsobuje symptomy onemocnění v důsledku poruch ve zdravém mikrobiomu v důsledku mnoha faktorů, včetně užívání antibiotik, genetických, exposomových, mikrobiálních, a další faktory hostitele [1]. Selekce a proliferace C. difficile spouští život ohrožující stav pseudomembranózní kolitidy [2,3]. Podle nejnovějších odhadů ze zprávy Centers for Disease Control and Prevention z roku 2019 způsobila C. difficile v roce 2017 223 900 infekcí a 12 800 úmrtí se ztrátou 1 miliardy dolarů jen ve Spojených státech [4]. Léčba první epizody infekce C. difficile (CDI) se dosahuje antibiotiky. Onemocnění má však vysokou míru recidivy – 20–30 % po první léčbě iniciální CDI a více než 50 % po první recidivě [5]. Proto je pro celosvětový boj proti CDI nutný naléhavý terapeutický zásah. Jedním z hlavních molekulárních faktorů patogeneze C. difficile je exprese a sekrece dvou hlavních toxinů, TcdA a TcdB, kódovaných geny umístěnými v lokusu patogenity o velikosti 19 6- kb (PaLoc) v C. difficile genom [6]. Regulace produkce toxinu a různé transkripční faktory podílející se na produkci toxinu byly podrobně přezkoumány Chandra et al. jinde [6].

Patogeneze CDI začíná požitím/klíčením spor C. difficile do vegetativních buněk, které klíčí ve střevě, kde proliferují a kolonizují střevní sliznici [1,6]. Střevní slizniční bariéra (IMB) je první linií přirozené obrany proti patobiontům. Hostitelská IMB se skládá z různých typů epiteliálních buněk, které jsou navzájem pevně spojeny těsnými spoji a pokryty silnou ochrannou vrstvou hlenu vylučovaného pohárkovými buňkami [1]. Narušení IMB umožňuje C. difficile uchytit se na povrchu epiteliálních buněk, kde rozvinutí jeho virulentních faktorů vede k poškození a manifestaci patogenity C. difficile [1,6]. Bakteriální buněčná stěna u mnoha grampozitivních a negativních druhů, včetně C. difficile, je spojena s hojnou povrchově exponovanou vrstvou proteinových molekul nazývaných proteiny povrchové vrstvy (proteiny S-vrstvy nebo SLP), tvořené převážně protein SlpA sestávající z domény s nízkou a vysokou molekulovou hmotností, které jsou uspořádány jako parakrystalické pravidelné dvourozměrné pole, jak je vidět elektronovou mikroskopií [7]. Další složky proteinu buněčné stěny (Cwp) vrstvy SLP jsou méně hojné a špatně charakterizované, ale také hrají důležitou roli v patogenitě CD. V posledních letech získal výzkum SLPs zvýšenou pozornost, protože se ukázalo, že tyto proteiny hrají klíčovou roli v povrchové adhezi, aktivaci Toll-like receptorů, indukci produkce cytokinů a aktivaci zánětlivých buněk jako součást imunitní odpovědi hostitele. roli v růstu a přežití bakterie [7–9].

V tomto přehledu diskutujeme o imunitní odpovědi hostitele na hlavní složky SlpA a další méně hojné Cwps ve světle nedávných znalostí SLP C. difficile a zdůrazňujeme jejich potenciál pro použití jako nové vakcíny a terapeutického cíle vysoce relevantního v patogenezi CDI.

cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém

2. Hostit přirozené imunitní reakce proti CDI

Bylo ukázáno, že netoxické kmeny C. difficile (NTCD) po kolonizaci na zvířecích modelech poskytují ochranu proti patogenním kmenům C. difficile. Na počátku 80. let Wilson a Sheagren uvedli, že křečci kolonizovaní kmenem NTCD poté, co byli sterilizováni antibiotikem cefoxitin, byli chráněni, když byli vystaveni toxigennímu kmenu C. difficile (TCD) [10]. Avšak léčba jinými druhy, jako jsou C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes a teplem usmrceným netoxickým kmenem C. difficile NTCD, selhala v ochraně proti CDI. Kromě toho byla ochrana ztracena, když byl kolonizující NTCD před expozicí sterilizován pomocí ošetření vankomycinem [11]. Na základě těchto zjištění byly spory kmene NTCD-M1 použity u omezeného počtu klinických pacientů trpících rekurentní CDI (rCDI) se značným úspěchem (asi 50 %) [12]. V současnosti jsou možnosti léčby CDI omezené a silně závisí na použití antibiotik, jako je vankomycin, fidaxomicin a metronidazol [13,14]. Nadměrné užívání antibiotik vede k dysbióze zdravého mikrobiomu a dále napomáhá selekci patobiontů, jako je C. difficile, kteří mohou později recidivovat [1,15]. K účinnému překonání těchto problémů vyžadují alternativní léčebné metody okamžitou pozornost. Některé z těchto možností léčby zahrnují neutralizaci toxinů C. difficile pomocí monoklonálních protilátek proti TcdB, jako je infuze bezlotoxumabu, která zabraňuje poškození střevního epitelu zprostředkovanému toxiny [16]. Další fascinující metodou je obnova zdravého mikrobiomu pomocí transplantace fekální mikrobioty (FMT) od zdravého dárce z řad nejbližších rodinných příslušníků. FMT prokázala slibné výsledky proti recidivujícímu CDI s mírou úspěšnosti až 90 % [17,18]. Tyto studie se bohužel nezabývaly úlohou hostitelské imunitní odpovědi v ochraně těchto pacientů. Proto lze tvrdit, že živé NTCD secernují některé antigeny/složky buněčné stěny, které indukují silnou imunitní odpověď proti toxigennímu TCD. Podobně je špatně definována FMT ochrana. Pochopení toho, jak zavedení FMT indukuje reakce hostitele, by tedy mohlo pomoci při identifikaci klíčových antigenů, což zase může pomoci lépe porozumět imunitní odpovědi a vývoji nových vakcín proti CDI.

Ve střevě je vrozený imunitní systém hostitele první linií obrany proti invaznímu patogenu, který hraje klíčovou roli při utváření a vytváření robustní adaptivní imunitní reakce hostitele [1]. Vrozená odpověď se skládá hlavně ze tří částí: (i) střevní epitel a slizniční vrstva (fyzická bariéra), (ii) antimikrobiální peptidy, které jsou vylučovacím produktem epiteliálních buněk, Panethových buněk a některých členů střevní mikroflóry (chemické bariéra) a (iii) buněčné odezvy náborem vrozených imunitních buněk, jako jsou neutrofily, eozinofily, makrofágy, vrozené lymfoidní buňky (ILC) a dendritické buňky (DC), které jsou organizovány mnoha vrozenými signálními cestami k boji proti invaznímu patogenu [ 1]. Hostitelské buňky nesou na svém povrchu receptory pro rozpoznávání vzorů (Pattern Recognition Receptors, PRR), jako jsou TLR, které rozpoznávají určité konzervované bakteriální podpisy na mikrobech nazývané molekulární vzory asociované s patogeny (PAMP). Tyto PRR jsou také známé jako Toll-like Receptors (TLR). Po rozpoznání těchto nebezpečných signálů (PAMP) TLR hostitelská buňka spustí imunitní odpověď. V tomto ohledu se ukázalo, že Toll-like Receptor 4 (TLR4) rozpoznává nebezpečné signály C. difficile, což je akce, která se účastní iniciace zánětlivé reakce hostitele. V této souvislosti se ukázalo, že SLP C. difficile interagují s TLR hostitele-4, zatímco bičíky C. difficile interagují prostřednictvím TLR5 [19,20].

cistanche výhody pro muže-posilují imunitní systém

3. Proteiny S-vrstvy (SLP) u C. difficile

V posledním desetiletí se proteinům povrchové vrstvy (S-vrstva) C. difficile dostalo značné pozornosti. SLP byly poprvé identifikovány Kawatou et al. v roce 1984 a tvoří asi 15 % celkové buněčné hmoty [21,22]. SLP se nacházejí v mnoha různých prokaryotických druzích. Většina SLP je uspořádána na vnějším povrchu buněk jako jeden protein ve dvourozměrném parakrystalickém poli [7]. U C. difficile se S-vrstva skládá hlavně z heterodimerních proteinů SlpA. SlpA je heterodimer sestávající z proteinu s vysokou molekulovou hmotností (HMW) a proteinu s nízkou molekulovou hmotností (LMW) kódovaného jedním genem slpA; LMW SLP tvoří odkrytou horní vrstvu, zatímco HMW SLP tvoří spodní vrstvu. LMW SLP je v C. difficile unikátní. V kmeni C. difficile 630 je lokus slpA oblast 36,6 kb, která nese 11 paralogů slpA. Kromě toho existuje dalších 17 paralogů, které jsou rozptýleny po celém genomu [23,24]. Tyto paralogové geny se nyní nazývají proteiny klostridiové buněčné stěny (CwpX), kde X označuje identifikované paralogové číslo (X=1–29) a jsou popsány v tabulce 1. Nicméně čtyři dříve charakterizované Cwps známé jako SlpA, Cwp66, Cwp84 a CwpV byly pojmenovány před přijetím této nové konvence [23]. Všechny Cwps jsou typické proteiny, které obsahují N-terminální signální peptid a tři domnělé domény vázající buněčnou stěnu s významnou podobností s HMW SLP [25,26]. Různé kmeny C. difficile vykazovaly variace v lokusu slpA a bylo dokumentováno asi 12 různých typů kazet S-vrstvy. Dalších 28 Cwps působí jako doplňkové komponenty, které jsou ukotveny v polymerované parakrystalické vrstvě, která tvoří ~5–20 % S-vrstvy [7].

Tabulka 1. Předpokládané funkce 29 genů pohárků nalezených v genomech Clostridium difficile 630.

Tabulka 1. Pokr.

4. Exprese a variace kmene proteinů buněčné stěny

U C. difficile kmene 630 bylo hlášeno, že je exprimováno asi devět genů kódujících Cwps [25]. Zatímco geny cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 a cwp25 jsou za normálních růstových podmínek exprimovány na povrchu buňky [44], geny cwp66 a cwp5 byly exprimovány, ale nebyly nalezeny v extraktech z buněčného povrchu. V samostatné studii Biazzo et al. analyzovali pohárky, které jsou rozptýleny po celém genomu C. difficile. Pozorovali, že geny cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 a cwp25 jsou exprimovány a mají dobře konzervované sekvence, zatímco hladiny cwp17, cwp26, cwp27, cwp29 a cwp29 měly signifikantní variace exprese mezi geny. ribotypy a byly méně konzervované [45]. Mnoho genů lokusu slpA vykazuje významné variace mezi kmeny, zejména povrchově exponované oblasti. Například se ukázalo, že slpA, cwp66, secA2 a cwp2 mají vysokou variabilitu v lokusu slpA (který tvoří kazetu 10-kb); dosud bylo nalezeno 12 divergentních variant této kazety jako výsledek homologní rekombinace mezi různými genotypy [46]. Podle Karjalainena a kol. vykazuje cwp66 pouze 33% identitu mezi kmeny [26]. Varianta cwp2 byla nahrazena 23,8 kb predikovaným genovým shlukem glykosylace S-vrstvy v lokusu slpA [46]. SlpA je nejhojnější SLP nacházející se v extraktech buněčného povrchu C. difficile a je hlavní složkou SLP C. difficile. Zralý protein je po sekreci na proteinové formy HMW a LMW štěpen působením proteázy Cwp84 za vzniku heterodimerního komplexu H/L komplexu, který polymerací vytváří S-vrstvu [47] (obrázek 1). Inaktivace genu cwp84 v C. difficile 630∆erm vedla k vytvoření S-vrstvy tvořené pouze nezralým jednořetězcovým SlpA se změněnou morfologií kolonií, což naznačuje důležitou roli Cwp84 při tvorbě zralé S-vrstvy [32]. Přítomnost genu secA2 v lokusu slpA je důležitá pro transport SlpA a dalších Cwps přes cytoplazmatickou membránu [48].

Obrázek 1. SLP C. difficile zprostředkovávají adhezi a aktivaci imunitních buněk. Nascentní peptid SlpA je štěpen proteázou Cwp84 na podjednotku LMW a HMW, která tvoří zralý komplex SlpA vrstvy SLP buněčné stěny [31–33]. SLP zprostředkovávají adhezi prostřednictvím TLR4 narušují těsné spojení buněk střevního epitelu a dále aktivují dendritické buňky/makrofágy, které zase produkují různé cytokiny a chemokiny vedoucí k indukci Th1/Th2 a humorální odpovědi [9,27]. Interleukin (IL), dendritické buňky (DC), nízká molekulová hmotnost (LMW), vysoká molekulová hmotnost (HMW), Toll-like receptor 4 (TLR4).

5. Funkce proteinů S-vrstvy

SLP se podílejí na různých funkcích v biologii C. difficile (viz tabulka 1), jako je buněčná integrita, transport, tvorba pórů a kotev, degradace, adheze/invaze hostitelské buňky, únik imunitního systému a ochrana před konkurenčními mikroorganismy [22] . Pechineet al. detekovali protilátky proti N-terminální a C-terminální doméně antigenu Cwp66 v séru pacientů s Clostridium difficile-associated disease (CDAD) [49]. V jiné studii Wright et al. oddělili Cwps pomocí 2D-PAGE a identifikovali několik Cwp (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), které reagovaly se séry pacientů infikovaných kmenem C. difficile ribotyp 017, což naznačuje indukci silné imunitní odpovědi proti SLP [50]. Nedávno Kirk a kol. identifikovali dva kmeny C. difficile, které postrádaly S-vrstvu a které nebyly citlivé na bakteriocin, který tvoří póry a depolarizuje konkurenční bakteriální buňky. Tyto kmeny C. difficile však vykazovaly signifikantně zvýšenou citlivost k lysozymu a antimikrobiálnímu peptidu LL-37 a nevyvolaly žádné symptomy onemocnění CDI na modelu infekce křečka [51]. Nedávná studie zkoumala účinky SlpA izolovaného ze tří toxikogenních kmenů (RT126, RT001, RT084) na expresi proteinů těsného spojení (TJ) a indukci prozánětlivých cytokinů v buněčné linii lidského karcinomu tlustého střeva HT-29 . Léčba SlpA významně snížila hladiny exprese rodiny claudinů a proteinů s úzkým spojením JAM-A (obrázek 1) [9]. Kromě toho protein SlpA zvýšil hladiny exprese TLR-4 a indukoval sekreci TNF-, IL-1 a IL-8. Tyto výsledky ukazují, že patogeneze zprostředkovaná proteinem SlpA a indukované zánětlivé reakce ve střevě [9]. Proto je rozumné tvrdit, že SLP jsou nezbytné pro patogenitu C. difficile a imunitní reakce.

cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém

6. Imunitní odpověď na SLP

Nedávné výzkumy poukázaly na důležitou roli SlpA nejen při přežití a růstu bakterií, ale také při utváření imunitní odpovědi hostitele. Imunoproteomické přístupy prokázaly přítomnost anti-SLP protilátek v séru šesti pacientů infikovaných C. difficile ribotypem 017, což naznačuje, že proteiny SLP jsou imunodominantní a exprimované během infekce [50]. Studie vedená Bruxelles et al. prokázali zvýšenou hladinu anti-SlpA protilátek u pacientů s CDI ve srovnání se zdravými pacienty [52]. V jiné studii Negm et al. detekovali IgG protilátky v sérech celkem 327 jedinců s CDI proti extraktům SLP z různých kmenů C. difficile [53]. Kromě SlpA je exponovaná C-koncová doména druhého nejhojnějšího proteinu Cwp66 vysoce variabilní, zatímco N-koncová doména je dobře konzervovaná. Ukázalo se, že variabilní C-terminální domény Cwp66 a Cwp84 jsou imunogenní u lidí [49,54]. Navíc u pacientů s CDI byly průměrné celkové hladiny anti-Cwp66 a anti-Cwp84 nižší než u zdravé kontrolní skupiny, což naznačuje ochrannou povahu protilátek. Proto SLP, konkrétně SlpA, a další složky mají důležitou roli v imunitní obraně a jsou potenciálními cíli pro imunoterapeutický vývoj a vývoj vakcín, jak je popsáno v následujících částech.

7. SLP zprostředkovávají adhezi C. difficile

C. difficile iniciuje infekci přilnutím k buňkám střevního epitelu, což vede ke kolonizaci. V tomto ohledu hrají bakteriální SLP, jako je SlpA a Cwp66, rozhodující roli v adhezi. Bylo publikováno, že variace v SLP specificky SlpA v izolovaných kmenech C. difficile vykazovala změny v adherenci [55]. Bylo ukázáno, že SLP vážou různé buněčné linie, jako jsou lidské gastrointestinální buněčné linie Hep-2 a Vero buněk a mnoho proteinů extracelulární matrix. Dále léčba anti-HMW-SLP protilátkami inhibovala adherenci C. difficile. Kromě toho předběžné ošetření hostitelských buněk buď purifikovanými SlpA podjednotkami nebo anti-SlpA protilátkami také zabránilo adherenci C. difficile [55]. Největší člen homologu rodiny proteinů SlpA je protein CwpV, který je exprimován fázově proměnným způsobem. V samostatné studii se ukázalo, že C-terminální repetitivní doména proteinu CwpV zprostředkovává agregaci C. difficile. Kromě toho se tato doména mezi kmeny liší a bylo identifikováno pět antigenně odlišných typů repetic [40].

Ukázalo se, že další imunogenní protein nazvaný Cwp66 má adhezní vlastnosti. Purifikovaný Cwp66 a protilátky proti N-terminální a C-terminální doméně inhibovaly adherenci C. difficile ke kultivovaným Vero buňkám, což naznačuje adhezní vlastnosti Cwp66 [29].

8. Vyvolání zánětlivých reakcí

Bianco a kol. prokázali roli SLP v zánětlivém procesu. V této studii byly SLP z hypervirulentních a epidemických (H/E) nebo non-H/E kmenů C. difficile purifikovány a studovány na lidských monocytech a dendritických buňkách odvozených od monocytů (MDDC) z hlediska indukce imunomodulačních cytokinů [interleukin (IL)-1 , IL-6 a IL- 10] [56]. Studie prokázala, že SLP nejen indukovaly zrání MDDC se zvýšenou aktivitou prezentující antigen, ale také indukovaly sekreci vysokých hladin IL-10. Nebyly však zjištěny žádné významné rozdíly v aktivaci monocytů a MDDC přípravky SLP z kmenů H/E a non-H/E, což naznačuje, že SLP nepřispívají ke zvýšené závažnosti onemocnění [56]. V jiné studii Ausiello et al. extrahovaly SLP z klinického izolátu C253 a ukázaly, že SLP indukovaly sekreci zvýšených hladin IL-1 a IL-6 prozánětlivých cytokinů v klidových monocytech a indukovaly dozrávání lidských MDDC a zvýšenou proliferaci T buňky [57]. Dále tyto ošetřené MDDC také uvolňovaly zvýšená množství IL-10 a IL-12p70 a indukovaly smíšenou Th1/Th2 imunitní odpověď. TLR-4 hrál důležitou roli v aktivaci DC zprostředkované SLP. Bylo prokázáno, že SLP nemohly aktivovat DC izolované z TLR4-mutantních C3H/HeJ myší a nedokázaly vyvolat následnou Th imunitní odpověď, což naznačuje, že SLP aktivují vrozenou a adaptivní imunitu zprostředkovanou receptorem TLR4 [19]. V jiné studii bylo na makrofázích prokázáno, že SLP z C. difficile vyvolaly odezvu clearance ve smyslu sekrece prozánětlivých cytokinů a chemokinů se zvýšenou migrací makrofágů a fagocytotickou aktivitou [58]. Léčba inhibitorem p38 tyto odpovědi zvrátila, což naznačuje roli signálních molekul v odpovědích zprostředkovaných SLP [58]. Velmi nedávná studie uváděla aktivaci zánětu C. difficile SLP v závislosti na dávce. Dále bylo prokázáno, že mikrodomény bohaté na cholesterol (lipidové rafty) na buněčných membránách pomáhají při vazbě SLP na buněčnou membránu. To bylo založeno na fluorescenční mikroskopii, kde bylo prokázáno, že léčba methyl- -cyklodextrinem (M CD), který vyčerpává membránový cholesterol, snižuje vazbu SLP, což naznačuje, že SLP rekrutují lipidové rafty, kritické pro kolonizaci C. difficile a aktivaci zánětu [59] ]. Tyto studie tvrdí, že C. difficile SLP mohou aktivovat vrozené a adaptivní imunitní reakce, které jsou částečně zprostředkovány TLR4, což naznačuje důležitou roli SLP při indukci imunitní reakce. Proto tyto výsledky také naznačují potenciál SLP jako kandidátů vakcíny proti CDI.

9. Protilátkové odezvy proti CDI

Několik imunologických studií ukazuje, že infekce a výsledek C. difficile závisí na intenzitě imunitní odpovědi hostitele, což je klíčový faktor patogenity CDI. Neschopnost vyvinout robustní protilátkovou odpověď tedy může být prognózou závažnosti a recidivy onemocnění [60]. V tomto ohledu hladiny protilátek proti hlavním toxinům korelovaly s recidivou a závažností onemocnění [61,62]. Protilátky proti povrchovým složkám C. difficile byly popsány v séru pacientů s CDI také v dřívějších studiích [63]. Drudy a kol. hodnotili humorální imunitní odpovědi na extrakty SLP C. difficile u kohorty 146 pacientů zahrnujících 55 pacientů s průjmem spojeným s C. difficile (CDAD), 34 pacientů s asymptomatickými nosiči a 57 kontrolních subjektů [64]. Studie izolovala extrakci frakcí s vysokou a nízkou molekulovou hmotností SLP, které obsahovaly hlavně hojný protein SlpA. V této kohortě měřili sérové ​​protilátky pomocí ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) a nezjistili žádné významné rozdíly v hladinách protilátek IgM, IgA nebo IgG v séru. Je zajímavé, že pacienti s rekurentními epizodami CDAD měli významně nižší hladiny IgM-anti-SLP než pacienti s jednotlivými epizodami. Studie dospěla k závěru, že by měly být provedeny další studie ke stanovení specifických odpovědí protilátek proti SLP a studie ochrany s použitím SLP C. difficile [64].

Pasivní a aktivní imunizace s použitím izolovaných extraktů HMW a LMW SLPs ukázala povzbudivé výsledky se zvýšenou mírou přežití v modelech letální provokace křečků. O'Brien a kol. prokázali ochrannou odpověď anti-SLP protilátek na infekci C. difficile u křečků, kde bylo přežití významně prodlouženo ve skupinách léčených anti-SLP ve srovnání s kontrolními skupinami [65]. Bylo prokázáno, že ochranný účinek antiséra spočívá ve zvýšení fagocytózy C. difficile [65]. Eidhin et al. pomocí aktivní imunizace testovali surový extrakt SLP obsahující ekvimolární množství složek LMW a HMW peptidů SlpA jako vakcínu s různými systémovými a slizničními adjuvans na myších modelech Golden Syrian a BALB/c. Studie uváděla mírnou až špatnou protilátkovou stimulaci v rámci různých režimů a myší modely vykazovaly silnější protilátkové odpovědi na SLP ve srovnání s křečci [66]. V jiné studii Brunet al. zkoumali in vivo adjuvantní aktivitu dvou peptidů sestávajících z receptor-vazebné domény toxinu A (TxA (C314)) a fragmentu SLP-36 kDa z C. difficile kmene C253 proti fibronektin-vazebnému proteinu A (FnbpA ), ochranný vakcinační antigen proti Staphylococcus aureus [67]. Hodnotili odpověď pomocí intranazální a subkutánní cesty a zjistili, že oba fragmenty zvyšují produkci cirkulujících anti-FnbpA IgG a IgA. Došli k závěru, že tyto fragmenty, když jsou použity jako adjuvancia, odlišně ovlivňují a polarizují imunitní systém [67]. V jiné studii Shirvan et al. vytvořili a exprimovali specifické rekombinantní protilátky proti SLP, jako je Cwp66 a SlpA, z proteinů C. difficile 630 pomocí fágového displeje a ukázali, že tyto rekombinantní protilátky reagovaly na SLP a jejich složky kmenově specifickým způsobem s vysokou specificitou [68].

Imunitní odpověď a ochrana v křeččím modelu s použitím proteázy Cwp84 jako antigenu byla hodnocena několika imunizačními cestami [69]. Studie zjistila rozdílné titry protilátek na základě imunizačních cest. Nejlepší ochrana byla pozorována prostřednictvím rektální cesty imunizace. Dále, imunizované skupiny křečků vedly k o 26 % slabší a pomalejší střevní kolonizaci C. difficile po expozici C. difficile s významně vyšší mírou přežití (o 33 % vyšší) než u neimunizovaných skupin [69].

rostlina cistanche zvyšující imunitní systém

10. Anti-C na bázi SLP. difficile Therapeutics

Účinnou strategií mohou být specifická terapeutika na bázi protilátek k neutralizaci C. difficile. Kandalaft a kol. použili jednodoménové protilátky k cílení SLP [70]. Skupina připravila panel SLP-specifických jednodoménových protilátek (VHH) z C. difficile hypervirulentního kmene QCD-32g58 (027 ribotyp). Jejich výsledky prokázaly řadu VHH vázaných na QCD-32g58 epitopy lokalizované na LMW podjednotce SLP s vysokou afinitou. Dále uvedli, že tyto VHH mají vazebnou specificitu k ribotypům 001 a 027 a podskupina těchto VHH protilátek byla široce zkříženě reaktivní k ribotypům 012, 017, 023 a 078. Bylo také prokázáno, že tyto VHH inhibují motilitu QCD-32g58 C. difficile in vitro [70].

Vývoj dalšího precizního antibakteriálního činidla Av-CD291.2 Kirkem et al. bylo popsáno, že specificky zabíjí C. difficile a zabraňuje kolonizaci u myší [51]. Ukázalo se, že Av-CD291.2 zabíjí různé izoláty C. difficile na základě přítomnosti sekvencí SLP v kmenech C. difficile. Autoři tvrdí, že identifikovali nulové mutanty SLP obsahující bodovou mutaci v genu slpA, které jsou rezistentní vůči látkám Av-CD291.2. Tito mutanti měli také defekty sporulace, ale byli schopni kolonizovat střevní trakt navzdory oslabení virulence v modelu křečka [51]. Kromě toho vytvořili panel avidocinových CD, které zabíjejí různé kmeny C. difficile způsobem závislým na sekvenci SLP, což naznačuje důležitou roli těchto antibakteriálních látek založených na SLP při prevenci CDI [51].

11. Závěrečné poznámky a kritické nezodpovězené otázky

Hostitel vyvíjí silnou specifickou imunitní odpověď proti toxinům a povrchovým složkám C. difficile. Bylo ukázáno, že SLP hrají roli v buněčné adhezi, indukci různých cytokinů prostřednictvím aktivace TLR4 a aktivaci jak vrozených, tak humorálních imunitních odpovědí. K dalšímu rozboru role CD4 a CD8 buněk jsou však zapotřebí studie o aktivaci odpovědí T-buněk pomocí SLP. Na základě aktivace humorální odpovědi mohou tyto neutralizační protilátky proti toxinům a povrchovým složkám zabránit klinickým příznakům CDI. Studie využívající aktivní nebo pasivní imunizaci proti SLP ukázaly slibné výsledky, což naznačuje, že strategii lze dále rozvinout do nových terapeutik proti patogenitě CDI. Velká pozornost byla věnována SlpA jako kandidátovi na vakcínu; avšak vzhledem k vysoké sekvenční variabilitě SlpA mezi kmeny nemusí být vakcína účinná proti všem ribotypům. Proto mohou být k obejití tohoto problému zapotřebí vakcíny založené na epitopech. V tomto ohledu jsou životaschopnými možnostmi protilátky s jednou doménou (VHH) proti SLP, které se vážou na podjednotku LMW-SLP C. difficile s vysokou specificitou a bylo prokázáno, že inhibují motilitu kmenů C. difficile. V současné době je pochopení mechanistické role SLP a jejich paralogů v patogenezi CDI, adhezi a odpovědi T-buněk stále v počátečních stádiích a z velké části zůstává neprozkoumané. Jsou zapotřebí další studie k rozboru molekulárních funkcí a specifických imunitních odpovědí SLP, které pomohou podpořit rychlý vývoj nových cílů vakcín/léků a terapeutik pro boj s infekcemi C. difficile.

Reference

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Slunce, X.; Shukla, P. Patobionti: Mechanismy přežití, expanze a interakce s hostitelem se zaměřením na Clostridioides difficile. Střevní mikroby 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Reklasifikace Clostridium difficile jako Clostridioides difficile (Hall a O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Oznámení o změnách v taxonomickém stanovisku dříve publikovaném mimo IJSEM. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Centra pro kontrolu a prevenci nemocí. Antibiotic Resistance Threats in the United States, 2019. 2019. Dostupné online: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (vstup 8. září 2022).

5. Štíty, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Recidivující infekce Clostridium difficile: Od kolonizace k vyléčení. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. Regulační transkripční faktory patogeneze Clostridioides difficile se zaměřením na regulaci toxinů. Crit. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; a kol. Struktura a montáž S-vrstvy v C. difficile. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Charakteristika a imunologické role proteinů povrchové vrstvy u Clostridium difficile. Ann. Laboratoř. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Protein A povrchové vrstvy z hypervirulentních ribotypů Clostridioides difficile indukuje významné změny v genové expresi těsných spojení a zánětlivou odpověď v lidských střevních epiteliálních buňkách. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Antagonismus toxigenního Clostridium difficile netoxigenním C. difficile. J. Infect. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Ochrana křečků proti ileokolitidě Clostridium difficile předchozí kolonizací nepatogenními kmeny. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Pečeť, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Léčba recidivujícího průjmu Clostridium difficile podáváním netoxického kmene. Eur. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Pokyny pro klinickou praxi od Infectious Diseases Society of America (IDSA) a Society for Healthcare Epidemiology of America (SHEA): 2021 Focused Update Guidelines on Management of Clostridioides difficile Infection in Adult. Clin. Infikovat. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutová, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; a kol. Evropská společnost klinické mikrobiologie a infekčních nemocí: Aktualizace dokumentu s pokyny pro léčbu infekce Clostridioides difficile u dospělých z roku 2021. Clin. Microbiol. Infikovat. 2021, 27 (Suppl. 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Selhání léčby a rekurence infekce Clostridium difficile po léčbě vankomycinem nebo metronidazolem: Systematický přehled důkazů. Int. J. Antimicrob. Agenti 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Nově se objevující terapie monoklonálními protilátkami pro prevenci rekurentní infekce Clostridium difficile. Biologie 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Systematický přehled s metaanalýzou: Dlouhodobé výsledky transplantace fekální mikroflóry pro infekci Clostridium difficile. Potrava. Pharmacol. Ther. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Kurajši, MN; Widlák, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Cena, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Systematický přehled s metaanalýzou: Účinnost transplantace fekální mikroflóry pro léčbu rekurentní a rezistentní infekce Clostridium difficile. Potrava. Pharmacol. Ther. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; a kol. Role TLR4 v infekci Clostridium difficile a rozpoznávání proteinů povrchové vrstvy. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Bičíky Clostridium difficile aktivují převážně TLR5-spojenou NF-κB dráhu v epiteliálních buňkách. Anaerob 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Demonstrace a předběžná charakterizace pravidelného pole v buněčné stěně Clostridium difficile. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, proteiny UB S-Layer. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Navrhovaná nomenklatura pro proteiny buněčné stěny Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Reanotace sekvence genomu kmene Clostridium difficile 630. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Molekulární charakterizace proteinů povrchové vrstvy z Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Molekulární a genomová analýza genů kódujících povrchově ukotvené proteiny z Clostridium difficile. Infikovat. Immun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Ochotný, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; Povrchové proteiny Fairweather, NF Clostridium difficile jsou ukotveny k buněčné stěně pomocí motivů CWB2, které rozpoznávají aniontový polymer PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Svítil, CC; Acharya, KR Cwp2 z Clostridium difficile vykazuje prodlouženou třídoménu a buněčnou adhezi in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Charakterizace buněčného povrchového proteinu Clostridium difficile s adhezivními vlastnostmi. Infikovat. Immun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Ahoj.; Yu, W.; Cui, G.; a kol. Gen cwp66 ovlivňuje buněčnou adhezi, toleranci stresu a odolnost vůči antibiotikům u Clostridioides difficile. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Storck, EM; Heal, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Chemické sondy biogeneze povrchové vrstvy u Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, cysteinová proteáza spojená s povrchem, hraje roli při zrání povrchové vrstvy Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, povrchově asociovaný protein Clostridium difficile, je cysteinová proteáza s degradační aktivitou na proteiny extracelulární matrix. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Mihelič, M.; Lindič, N.; Borisek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. Modul pro ukotvení buněčné stěny CWB2 je odhalen krystalovými strukturami proteinů buněčné stěny Clostridium difficile Cwp8 a Cwp6. Struktura 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Pravděpodobnostní model lokálního zarovnání sekvencí, který zjednodušuje odhad statistické významnosti. PLoS výpočet. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Krystalová struktura enteropatogenního komplexu intimin-receptor Escherichia coli. Příroda 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Ochotný, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Role cysteinových proteáz Cwp84 a Cwp13 v biogenezi buněčné stěny Clostridium difficile. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domény: Složitost s mírou. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Nové role domén SH2 a SH3 ve vazbě lipidů. Buňky 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF Protein buněčné stěny Clostridium difficile CwpV je antigenně variabilní mezi kmeny, ale vykazuje konzervativní funkci podporující agregaci. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Svítil, CC; Acharya, KR Molekulární struktura glykosidové hydrolázové domény Cwp19 z Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; Ahoj.; Sun, X. Cwp22, nový peptidoglykan síťující enzym, hraje pleiotropní role v Clostridioides difficile. Environ. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; a kol. Databáze rodin proteinů Pfam: Směrem k udržitelnější budoucnosti. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Počkejte, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Proteomická analýza proteinů buněčného povrchu z Clostridium difficile. Proteomika 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Ciocada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Diverzita cwp lokusů v klinických izolátech Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; a kol. Rekombinační přepínání S-vrstvy Clostridium difficile a nový glykosylační genový shluk odhalený sekvenováním celého genomu ve velkém měřítku. J. Infect. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Strukturální pohledy na molekulární organizaci S-vrstvy z Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile má dva paralelní a základní sekreční systémy Sec. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, M.; Collignon, A. Imunologické vlastnosti povrchových proteinů Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Imunoreaktivní proteiny buněčné stěny Clostridium difficile identifikované lidským sérem. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Nová třída přesných antimikrobiálních látek nově definuje roli S-vrstvy Clostridium difficile ve virulenci a životaschopnosti. Sci. Přel. Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Brusel, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Imunogenní vlastnosti prekurzoru povrchové vrstvy Clostridium difficile a vakcinační testy na zvířecích modelech. Anaerob 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Svítil, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; a kol. Profilování humorálních imunitních odpovědí na antigeny specifické pro Clostridium difficile pomocí proteinové mikročipové analýzy. Clin. Vaccine Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Variabilita povrchových proteinů Clostridium difficile a specifická protilátková odpověď séra u pacientů s onemocněním spojeným s Clostridium difficile. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Protein A povrchové vrstvy (SlpA) je hlavním přispěvatelem k adherenci Clostridium difficile k hostitelské buňce. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Imunomodulační aktivity proteinů povrchové vrstvy získaných z epidemických a hypervirulentních kmenů Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Proteiny povrchové vrstvy z Clostridium difficile indukují zánětlivé a regulační cytokiny v lidských monocytech a dendritických buňkách. Infikují mikroby. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Proteiny povrchové vrstvy izolované z Clostridium difficile indukují odezvy clearance v makrofázích. Infikují mikroby. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ Membránový cholesterol je rozhodující pro Clostridium difficile navázání proteinů na povrchovou vrstvu a spouštění aktivace zánětu. Přední. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Můžeme identifikovat pacienty s vysokým rizikem opakované infekce Clostridium difficile? Clin. Microbiol. Infikovat. 2012, 18 (Suppl. 6), 21–27. [CrossRef]

61. Wullt, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. Protilátková odpověď IgG na toxiny A a B u pacientů s infekcí Clostridium difficile. Clin. Vaccine Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; a kol. Sérová protilátka proti toxinu B koreluje s ochranou před rekurentní infekcí Clostridium difficile (CDI). Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Imunoblotová analýza reakce sérového imunoglobulinu G na povrchové proteiny Clostridium difficile u pacientů s průjmem spojeným s antibiotiky. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Lidská protilátková odpověď na proteiny povrchové vrstvy při infekci Clostridium difficile. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Pasivní imunizace křečků proti infekci Clostridium difficile pomocí protilátek proti proteinům povrchové vrstvy. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktivní imunizace křečků proti infekci Clostridium difficile pomocí proteinu povrchové vrstvy. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palů, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 a SLP-36kDa zesilují imunitní odpověď na společně podávaný antigen. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Izolace rekombinantních protilátek namířených proti povrchovým proteinům Clostridium difficile. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Imunizace křečků proti infekci Clostridium difficile s použitím proteázy Cwp84 jako antigenu. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Cílení na proteiny povrchové vrstvy protilátkami s jednou doménou: Potenciální terapeutický přístup proti onemocnění spojenému s Clostridium difficile. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]