Víte, že oxidační stres může způsobit poškození ledvin?

Další informace:{0}}

Část Ⅰ: Oxidační stres po akutním poškození ledvin způsobuje narušení řasinek plicních buněk a jejich uvolňování do tekutiny bronchoalveolární laváže a poškození plic, které se zhoršuje delecí Idh2

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Úvod

Akutní poškození ledvin(AKI) se vyskytuje v různých klinických podmínkách, včetně šoku, sepse, transplantace orgánů a cévní chirurgie [1-3]. AKI (Akutní poškození ledvin) způsobuje poškození vzdálených orgánů, včetně plic, jater, srdce a mozku [4-9]. Toto poranění vzdáleného orgánu po AKI (Akutní poškození ledvin)je uznáván jako hlavní rizikový faktor špatných výsledků [5,9]; proto je pro zlepšení výsledku u pacientů s AKI důležitá vhodná léčba poranění vzdálených orgánů (Akutní poškození ledvin). Nicméně přesné mechanismy zahrnuté v AKI (Akutní poškození ledvin)-související poranění vzdálených orgánů je třeba definovat.

Klikněte na Cistanche pro akutní onemocnění ledvin a vedlejší účinky cistanche

Řasinky jsou výběžky z buněčného povrchu odvozené od centriolu, které obsahují cytoskelet na bázi mikrotubulů (axoném) obklopený řasinkovou membránou. Řasinky se vyznačují svou strukturou a pohyblivostí a jsou definovány buď jako nepohyblivé řasinky (primární řasinky) nebo pohyblivé řasinky. Primární řasinky jsou osamocené, nepohyblivé, mikrotubuly založené na 9 plus 0 axonemálních anténovitých organelách, které vyčnívají z buněčné membrány a přenášejí extracelulární signály do buňky prostřednictvím koordinace několika signálních drah [10-12 ]. Pohyblivé řasinky s mnohočetnou axonemální strukturou 9 plus 2 se nacházejí hlavně v dýchacím traktu a vejcovodu a slouží k transportu materiálů [10,13]. Stále více důkazů prokázalo, že defekty ve tvorbě a funkci řasinek jsou spojeny s různými lidskými chorobami, včetněpolycystický onemocnění ledvina primární ciliární dyskineze [14-20]. Nedávné studie navíc ukázaly, že k narušení řasinek dochází pod vlivem patologických stavů a ​​že toto narušení se podílí na zprostředkování buněčného poškození a dysfunkce [15-20].

Hromadné důkazy to prokázalyledvinaischemia-reperfusion (IR), příčina AKI (Akutní poškození ledvin), vyvolává poranění vzdálených orgánů [6-8,21]. Poranění vzdálených orgánů je spojeno se zánětlivými reakcemi, změnami v signálních drahách spojených s buněčnou smrtí a přežitím aoxidační stres [8,22-24]. Oxidační stresje přímo spojena s dysfunkcí buněčných složek, což může vést k poruchám orgánů, a je uznáváno jako jedna z hlavních příčinledvinaIR-indukované poškození vzdálených orgánů [21,25,26]. To jsme již dříve ukázaliledvinaIR-a cisplatinou indukovaná AKI (Akutní poškození ledvin)mění délku primárních řasinekledvinaepiteliálních buněk prostřednictvím sestavení, rozebrání a narušení (deciliace, uvolnění nebo fragmentace) řasinek [17-19]. Tyto procesy jsou spojeny s reaktivními formami kyslíku (ROS) aoxidační stres. v závislosti na koncentraci peroxidu vodíku a stupnioxidačnístres; nízká koncentrace H2O2 indukuje prodloužení délky primárních řasinek, zatímco vysoká koncentrace H2O2 vyvolává narušení [17-20]. Navíc jsme zjistili, že u zraněných došlo k porušení primárních řasinekledvinatubulární epiteliální buňky jsou vylučovány do moči a že tomuto narušení a vylučování lze zabránit antioxidační léčbou [17-20]. Rodriguez-Ribera a kol. také uvedli, že reaktivní karbonylové sloučeniny, jako je malondialdehyd, produktoxidační stresvyvolávají u člověka ztrátu primárních řasinekledvinabuňky proximálního tubulu [27]. Proto jsme předpokládali, že AKI (Akutní poškození ledvin)-indukované akutní poškození plic (ALD) a poškození buněk jsou spojeny s řasinkami a plicními buňkamioxidačnístresa ta prevenceoxidačnístressnižuje AKI (Akutní poškození ledvin)- indukované poškození plic. V této studii jsme zjišťovali, zdaledvinaIR-indukovaná AKI (Akutní poškození ledvin)způsobuje narušení řasinek a buněk plic, a pokud ano, zda jsou tyto poruchy spojeny soxidačníB. Za tímto účelem jsme použili farmakologické a genetické přístupy, včetně použití myší s delecí isocitrátdehydrogenázy 2(Idh2). IDH2 je enzym lokalizovaný v mitochondriích [28]. V mitochondriích IDH2 katalyzuje oxidační dekarboxylaci isocitrátu na -ketoglutarát, doprovázenou redukcí NADP na NADPH, což je kritický faktor v antioxidačním systému thioredoxinu a glutathionu [29-32]. Kromě toho jsme zkoumali, zda přítomnost ciliárních proteinů a fragmentů v tekutině bronchoalveolární laváže (BALF) svědčí o poškození plic. Poprvé zde hlásíme, že AKI (Akutní poškození ledvin)způsobuje narušení řasinek plicních buněk a jejich uvolnění do BALF a také poškození plic, které je umocněno delecí IDH2.

oxidační stres způsobuje poškození ledvin

2. Materiály a metody

Příprava zvířat.

Všechny experimenty byly provedeny s použitím 8-10-týdenních samců myší C57BL/6 (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Korea), samic myší s odstraněným genem Idh2 (Idh2~/) a myší divokého typu (dh2 plus / )myši [28]. Myším byl umožněn volný přístup k vodě a standardnímu myšímu krmivu. Studie na zvířatech byla schválena Institutional Animal Care and Use Committee of Kyungpook National University, Korea. K vyvolání bilaterální renální ischemie se používáledvinybyly exponovány prostřednictvím bočních řezů pod anestetizací pentobarbitalem sodným (60 mg/kg tělesné hmotnosti) a poté pediklyledvinybyly zcela upnuty po dobu 35 minut pomocí svorek pro mikroaneuryzma. Stejný postup, s výjimkouledvinaupnutí pediklu, bylo provedeno při falešné operaci Tělesná teplota byla během chirurgických zákroků udržována na 36,5 °C -37 °C pomocí teplotně řízeného topného zařízení (FHC, Bowdoin, ME, USA). Některým myším bylo podáváno {{4 }}(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-1-ox-yl-4-arylamino)-2-oxoethyltrifenylfosfoniumchlorid (Mito--TEMPO,{{14 }}.7 mg/kg tělesné hmotnosti;Sigma, St.Louis, MO,USA) buď 17 a 1 h před operací (předběžná léčba) nebo 6 h po operaci (po léčbě).

Na konci experimentů byly plíce aledvinatkáně byly bleskově zmraženy v kapalném dusíku nebo perfuzí fixované roztokem PLP (4 procenta paraformaldehydu, 75 mM L-lysinu, 10 mM jodistanu sodného: Sigma) pro biochemické a histologické studie. Zmrazené tkáně byly skladovány při -70 stupních až do použití.

Kolekce BALF.

BALF byl odebrán po eutanázii myší injekcí předávkování pentobarbitalem sodným. Úniky plic byly hodnoceny stanovením koncentrace proteinu a počtu buněk v BALF. Pro odběr BALF byl bronchus levé plíce zcela sevřen pomocí svorek pro mikroaneuryzma. Do průdušnice byla zavedena jehla a do pravých plicních laloků bylo pomalu injikováno 0.8 ml studeného fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem (PBS). BALF byl odebrán jedním zatažením pístu injekční stříkačky. Celkový počet buněk a koncentrace proteinu v BALF byly okamžitě analyzovány pomocí hematocytometru a testovací soupravy BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA). BALF byl udržován na -70 stupni, dokud nebyl vyžadován pro analýzu westernovým přenosem.

ledvinyfunkce. Krev byla myším odebrána pomocí heparinizované injekční stříkačky. Koncentrace dusíku močoviny v krvi (BUN) v plazmě byla stanovena pomocí Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson& Johnson, New Brunswick, NJ, USA).

Kyselina jodistá-Schiff (PAS) a barvení hematoxylinem a eosinem (H&E).

Opraveno PLPledvinaa plicní tkáně byly zality v parafínu, nařezány na 3- μm silné řezy pomocí mikrotomu (Leica, Bensheim, Německo) a upevněny na sklíčka.ledvinya řezy plic byly obarveny PAS a H&E. Theledvinapoškozenískóre bylo hodnoceno naslepo výzkumnými pracovníky, jak bylo popsáno dříve [3,19].

Western blot analýza.

Western blotting byl proveden, jak bylo popsáno dříve [3]. Protilátky použité pro western blotting byly následující: anti-4-hydroxy nominální (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, USA), anti- -tubulin (Santa Cruz, CA, USA) , anti-acetylovaný -tubulin (ac{6}}tubulin, Sigma), anti-mangan-dependentní superoxiddismutáza (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, USA), anti-kataláza (Fitzgerald, Concord, MA, USA) , protein podobný anti-ADP-ribosylačnímu faktoru 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, USA), anti-isocitrát dehydrogenáza 2 (IDH2; Santa Cruz), anti-optická atrofie 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), anti-štěpení 1 (Fis1; Sigma), anti-dynaminový protein 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) a anti-glyceraldehyd 3-fosfátdehydrogenáza (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, USA).

Imunofluorescenční barvení.

Po deparafinizaci byly řezy inkubovány v PBS obsahujícím {{0}},2 % Triton X-100 (Sigma) po dobu 1 minuty a poté promyty v PBS po dobu 10 minut. Pro expozici antigenního epitopu byly řezy vařeny v 10 mm pufru citrátu sodného (pH 6,0) po dobu 10 minut, ochlazeny po dobu 20 minut a poté třikrát promyty PBS po dobu 5 minut při každém promytí. Řezy byly blokovány 3% hovězím sérovým albuminem v PBS (blokovací pufr) po dobu 30 minut a poté inkubovány s anti-Arll3b protilátkou při 4 stupních přes noc. Po promytí byly řezy inkubovány s FITC-konjugovaným kozím anti-králičím IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) po dobu 60 minut a poté třikrát promyty PBS po dobu 5 minut. Buněčná jádra byla obarvena pomocí 4'-6-diamidino-2-fenylindolu (DAPI; Sigma).

Měření superoxidu v plicní tkáni.

Hladiny superoxidu byly měřeny pomocí dihydroethidia (DHE; Sigma), jak bylo popsáno dříve 【33,34】. Stručně, 10 uM DHE v 1 ml předehřátého (37 stupňů) PBS bylo přidáno do 96-jamkové destičky obsahující 20 ul lyzátu plicní tkáně. Destička byla odečítána každých 10 minut po dobu celkem 30 minut na excitačních/emisních filtrech 530 nm/620 nm.

Měření IL-6.

Hladiny IL-6 v plazmě a BALF byly stanoveny pomocí testu ELISA pomocí testovací soupravy ELISA podle pokynů výrobce (BD Bioscience).

Statistika.

Všechna data byla analyzována pomocí softwaru GraphPad Prism 7 (San Diego, CA, USA). Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± standardní chyba průměru (SEM). Statistická analýza byla provedena pomocí Studentova t-testu a jednosměrné analýzy rozptylu s Tukeyho post hoc postupem. Rozdíly byly považovány za statisticky významné, když byly p-hodnoty<>

3. Výsledky

1. IR ledvin způsobuje poškození plic.

Jak se očekávalo, významné morfologické poškozeníledviny(Obr. 1A a B) a zvýšení plazmatického BUN (Obr. 1C) bylo pozorováno 4 a 24 hodin po 35 minutách oboustrannéholedvinaischemie. V plicích bylo pozorováno zvýšení neutrofilů a zesílení alveolární stěny 4 a 24 hodin poledvinaischemie (obr. 1D). Navíc bylo pozorováno zvýšení exprese lokusu G6D komplexu lymfocytárního antigenu 6 (Ly6G, marker pro monocyty, granulocyty a neutrofily) v plicní tkáni způsobem závislým na čase reperfuze (obr. 1E a F). Koncentrace interleukinu-6 (IL-6) v plazmě se poté zvýšilaledvinaIR, vrcholící 4 hodiny po ischemii (obr. 1G). Koncentrace I-6 a proteinu a také celkový počet buněk v BALF se postupně zvyšovaly 4 a 24 hodin po ischemii ledvin (obr. 1H-J). Míra přežití ve 24 h po 35 minledvinaIR bylo přibližně 92 procent (data neuvedena).

Kdyžledvinaischemická doba byla prodloužena na 45 minut, postischemické zvýšení koncentrace BUN v plazmě a koncentrace celkového proteinu a počet buněk v BALF byly větší než po 35 minutách ischemie (obr. 1K-M). Tato data ukazují, že poškození plic vyvolanéledvinaIR poranění závisí na stupniledvinazranění.

Obr. 1. Histologické a funkční poškození plic po IR ledvin. Samci myší C57BL/6 byli podrobeni 35 (A–M) a 45 (K–M) minutám bilaterální ischemie ledvin nebo falešné operaci. ledviny4 a 24 hodin po operaci byly odebrány plíce, krev a BALF. BALF byl odebrán tak, jak je popsáno v části Materiály a metody. (A–J) Myši byly usmrceny buď 4 nebo 24 hodin po 35 minutách ischémie. (A, B)ledvinyřezy (3 μm) byly obarveny PAS aledvinabylo zaznamenáno poškození trubek. Koncentrace (C, K) BUN byly měřeny v plazmě. (D) Řezy plic (3 μm) byly obarveny H&E. (E, F) Exprese Ly6G v plicní tkáni byla analyzována westernovým přenosem. GAPDH byl použit jako kontrola zatížení. Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru ImageJ. (G, H) Koncentrace IL-6 byla měřena v plazmě a BALF. (I, J, L, M) Koncentrace proteinu a celkový počet buněk byly měřeny v BALF. (K–M) Myši byly usmrceny 4 hodiny po 35 nebo 45 minutách ischemie. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" vs.="" podvod.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" po="" ischemii="" nebo="" ischemii="" po="" dobu="" 35="">

2. IR ledvinzpůsobuje narušení řasinek plicních epiteliálních buněk a tyto fragmenty se uvolňují do BALF.

Řezy plicní tkáně a sklíčka naplněná BALF byly imunobarveny protilátkou proti proteinu podobnému ADP-ribosylačnímu faktoru 13B (Arl13B, marker řasinek). Arll3B pozitivní signály byly pozorovány na luminální části alveol a terminálních bronchiolů plic (obr. 2A). Ztráta Arl13B-pozitivního signálu byla pozorována v plicíchledvinaMyši podrobené IR (obr. 2A). Tato ztráta Arll13B-pozitivního signálu se poté postupně zvyšovalaledvinaischemie v průběhu času (obr. 2A). V BALF byly pozorovány různé délky Arl13B-pozitivních částic po ischémii ledvin a počet Arl13B-pozitivních částic v BALF se v průběhu času po ischemii postupně zvyšoval (obr. 2B a C). Exprese Arl13B, acetylovaného -tubulinu (ac{8}}tubulin, granulocyty a neutrofily) v plicní tkáni byla pozorována způsobem závislým na čase reperfuze (obr. 1E a F). Koncentrace interleukinu-6 (IL-6) v plazmě se poté zvýšilaledvinaIR, vrcholící 4 hodiny po ischemii (obr. 1G). Koncentrace I-6 a proteinu a také celkový počet buněk v BALF se postupně zvyšovaly 4 a 24 hodin po ischemii ledvin (obr. 1H-J). Míra přežití po 24 hodinách po 35 minutách IR ledvin byla přibližně 92 procent (data nejsou uvedena).

Kdyžledvinaischemická doba byla prodloužena na 45 minut, postischemické zvýšení koncentrace BUN v plazmě a koncentrace celkového proteinu a počet buněk v BALF byly větší než po 35 minutách ischemie (obr. 1K-M). Tato data ukazují, že poškození plic vyvolanéledvinaIR poranění závisí na stupniledvinazranění.

Obr. 2. Porušení řasinek plicních buněk a jejich fragmentů a proteinů uvolněných do BALF po IR ledvin.Samci myší C57BL/6 byli podrobeni buď 35minutové bilaterální ischemii ledvin nebo simulované operaci. Plicní tkáň a BALF byly odebrány 4 a 24 hodin po operaci, jak je popsáno v části Materiály a metody. (A) Plicní řezy (5 μm) byly podrobeny imunofluorescenčnímu barvení pomocí anti-Arl13B protilátky; zelená označuje Arl13B-pozitivní. Barvivo DAPI (4′,6-diamidino-2-fenylindol; modrá) bylo použito k vizualizaci jader buněk. Šipky označují řasinky. (B) BALF (10 ul) byl umístěn na podložní sklíčko, které bylo imunofluorescenčně obarveno pomocí protilátky anti-Arl13B; zelená označuje Arl13B-pozitivní (n=3). (C) Počet Arl13B-pozitivních částic byl spočítán pod fluorescenčním mikroskopem (n=3). (D–G) Exprese Arl13B, acetylovaného - -tubulinu (ac{25}}tub) a -tubulinu ( -tub) v BALF byly analyzovány westernovým přenosem. Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru ImageJ. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (n=3). *p < 0.05="" vs.="" podvod.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" hodiny="" po="" ischemii.="" a:="" alveoly,="" tbc:="">

3. Ledvina IR zvyšuje hladiny superoxidu a oxidačního stresu jak v plicní tkáni, tak v BALF.

ledvinyIR zvýšila hladinu superoxidu v plicní tkáni (obr. 3A), zatímco snížila expresi IDH2 (obr. 3B a C), ale ne MnSOD a katalázu (obr. 3B. DE). Tato zjištění naznačují, že poškození plic indukované IR ledvin je spojeno se zvýšením hladin ROS aoxidační stresv plicích. Na podporu toho se hladina 4-hydroxynominálu (4-HNE), produktu peroxidace lipidů, v plicní tkáni významně zvýšila 4 a 24 hodin poledvinaischemie(Obr.3F-D). 4-HNE byla pozorována téměř ve všech oblastech plicní tkáně, včetně alveolů a průdušinek (obr. 3H a D. Kromě toho exprese 8-hydroxy-2}'-deoxyguanosinu ({{ 7}}OhdG), dobře známý marker oxidace DNA jako oxidovaný derivát deoxyguanosinu, zvýšený jak v cytosolu, tak v jádrech v buňkách plicního epitelu poledvinaischemie (obr. 3J a K. V BALF se exprese 4-HNE také zvýšila poledvinaischemiezpůsobem závislým na čase reperfuze (obr. 3L, M). Navíc, když byla doba ischemie ledvin prodloužena na 45 minut, postischemické zvýšení exprese 4-HNE v plicích bylo větší než po 35 minutáchledvinaischemie (obr. 3N, O). Tyto výsledky naznačují, že jak mitochondriální DNA, tak jaderná DNA jsou oxidačně poškozeny zvýšenou tvorbou ROS a poškozením systémů odstraňování, což naznačuje, že poškození řasinek plicních epiteliálních buněk je spojeno soxidační stres.

Obr. 3. Oxidační stres v plicní tkáni po IR ledvin. Samci myší C57BL/6 byli podrobeni 35 (A–O) a 45 (N, O) minutám bilaterální ischemie ledvin nebo falešné operaci.Plíce aledvinabyly sklizeny 4 a 24 hodin po 35 minutách nebo 45 minutách ischemie. (A–M) Myši byly usmrceny buď 4 nebo 24 hodin po 35 minutách ischémie. (A) Hladina superoxidu v plicní tkáni byla měřena podle popisu v části Materiály a metody (n=3–5). (B–E) Exprese IDH2, katalázy a MnSOD v plicní tkáni byly analyzovány westernovým přenosem (n {{10}}). GAPDH byl použit jako kontrola zatížení. (C–E) Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru ImageJ. (F, G) 4-Exprese HNE v plicích byla analyzována westernovým přenosem a hustota pásu byla měřena pomocí ImageJ (n=4). (H–K) řezy plic (3 μm) byly imunohistochemicky obarveny pomocí anti-4-HNE a 8-OHdG protilátek a kontrastně barveny pomocí hematoxylinu; hnědá označuje 4-HNE- a 8-OHdG-pozitivní (n {{20}}). (I, K) Intenzity 4-HNE- a 8-OHdG-pozitivních signálů byly měřeny pomocí programu i-Solution (n=3). (L, M) 4-Exprese HNE v BALF byla analyzována westernovým přenosem a hustota pásu byla měřena pomocí ImageJ (n=3). (N, O) Myši byly usmrceny 4 hodiny po 35 minutách nebo 45 minutách ischemie. 4-Exprese HNE v plicích byla analyzována westernovým přenosem a hustota pásu byla měřena pomocí ImageJ (n=3). Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" vs.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" hodiny="" po="" ischemii="" nebo="" 35="" minutách="" ischémie.="" (pro="" výklad="" odkazů="" na="" barvu="" v="" této="" legendě="" obrázku="" se="" čtenář="" odkazuje="" na="" webovou="" verzi="" tohoto="">

V buňkách, mitochondriích. hlavní intracelulární organela produkující ROS normálně podléhá fúzi a štěpení, aby se přizpůsobila fyziologickým a patologickým podmínkám. Porucha těchto procesů fúze a štěpení může vyvolat buněčnou dysfunkci a poškození[36]. Předchozí studie to prokázalyoxidačnístresnarušuje normální dynamiku mitochondriální fúze a štěpení, což vede k mitochondriální dysfunkci a poškození buněk [32,36-38]. Snažili jsme se vyhodnotit mitochondriální dynamiku stanovením exprese proteinů regulujících mitochondriální štěpení a fúzi. Exprese Fis1 a Drp1, které regulují mitochondriální štěpení, byly významně zvýšeny v plicích myší sledvinaischemie(Obr. 4A-C). Exprese OPA1, který reguluje mitochondriální fúzi, však nebyla významně změněna IR ledvin (obr. 4A, D). Tyto údaje naznačují, že rovnováha mitochondriální fúze a štěpení v plicních buňkách je narušena v důsledku AKI (Akutní poškození ledvin).

Obr. 4. Změna dynamiky mitochondrií v plicích po IR ledvin. Samci myší C57BL/6 byli podrobeni buď 35minutové oboustranné renální ischemii nebo simulované operaci.Plíce byly odebrány 4 a 24 hodin po ischemii. (A–D) Exprese Drp1, Fis1 a OPA1 v plicních tkáních byly analyzovány westernovým přenosem. GAPDH byl použit jako kontrola zatížení. Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru ImageJ. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (n=4). *p < 0.05="" vs.="" podvod.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" hodiny="" po="">

4. Antioxidační léčba specifická pro mitochondrie snižuje poškození plic indukované IR ledvin a narušení plicních řasinek.

Potvrdit roli mitochondriíoxidačnístresnaledvinaPoškození plic vyvolané IR a narušení řasinek plicních epiteliálních buněk jsme testovali, zda předléčení (obr. 5A-D nebo po léčbě (obr. 5J-L) pomocí Mito-TEMPO, antioxidantu specifického pro mitochondrie, inhibuje ledviny indukované IRoxidačnístres, I-6 produkce a deciliace v plicích samců myší C57BL/6. Předléčení (obr. 5A-D), ale ne po léčbě (obr. 5J-L), pomocí Mito-TEMPO, významně inhibovalo zvýšení koncentrací BUN a IL-6 v plazmě (obr.5A a B). stejně jako koncentrace IL-6, celková koncentrace proteinu a celkový počet buněk v BALF (obr. 5C-E). Exprese Arl13B, ac{15}}tubulinu a -tubulinu v BALF myší předem ošetřených Mito-TEMPO byly nižší než u myší ošetřených vehikulem (obr. 5F-I). V této studii 6-h po léčbě nechrání plíce předledvinaIR (obr. 5J-L). Tyto výsledky naznačují, že časná produkce ROS, jeho akumulace aoxidačnístresmůže významně přispět k AKI (Akutní poškození ledvin)- indukované poškození plic. Hladiny superoxidu a exprese 4-HNE v plicní tkáni (obr. 6A-C) a v BALF (obr. 6D a E) byly nižší u myší předem ošetřených Mito-TEMPO než u myší ošetřených vehikulem. Tyto výsledky tomu nasvědčujíledvinaIR-indukované poškození plic a deciliace plicních epiteliálních buněk jsou spojeny s mitochondriálnímioxidačnístres.

Obr. 5. Prevence IR-indukovaného poškození plic a narušení řasinek pomocí Mito-TEMPO, antioxidantu cíleného na mitochondrie. Samci myší C57BL/6 byli podrobeni 35minutové bilaterální ischemii ledvin.Některým myším byl podáván Mito-TEMPO (Mito-T, 0,7 mg/kg tělesné hmotnosti, ip) buď 17 a 1 hodinu před ischemií, dvakrát (A–I) nebo 6 hodin po ischemii (J– L). Plíce, BALF a krev byly odebrány 24 hodin po ischemii. (A, J) Byla měřena koncentrace BUN v plazmě. Koncentrace (B, C) IL-6 v plazmě a BALF byly měřeny pomocí testovací soupravy ELISA. (D, E, K, L) Byla měřena koncentrace proteinu a počet buněk v BALF. (F–I) Arl13B, acetylovaný {{10}}}tubulin (ac- -tub) a -tubulin ( -tub) v BALF byly analyzovány westernovým přenosem. Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru ImageJ. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (n=4). *p < 0,05="" vs.="">

PRO ČÁST KLIKNĚTE ZDE Ⅱ