DNA-dependentní proteinkinázová katalytická podjednotka (DNA-PKcs) řídí progresi chronického onemocnění ledvin u samců myší

Poranění ledvininiciuje epiteliální dediferenciaci a myofiaktivace broblastů běhemprogrese chronického onemocnění ledvin. Tady myfiže exprese DNA-PKcs je signifikantnífinepatrně vzrostl vledvinové tkáně u obou chronických onemocnění ledvinpacientů a myších samcůvyvolané jednostrannou ureterální obstrukcíajednostranné ischemicko-reperfuzní poškození. In vivo knockout DNA-PKcs nebo ošetření jeho specific inhibitor NU7441 bránírozvoj chronického onemocnění ledvinu samců myší. In vitro, DNA-PKcs deficiency zachovává fenotyp epiteliálních buněk a inhibujefiaktivace broblastů indukovaná transformujícím růstovým faktorem-beta 1. Naše výsledky navíc ukazují, že TAF7, jako možný substrát DNA-PKcs, zvyšuje aktivaci mTORC1 upregulací exprese RAPTOR, což následně podporuje metabolické přeprogramování v poškozených epiteliálních buňkách a myofibroblasty. Celkově vzato lze DNA-PKcs inhibovat, aby došlo ke korekci metabolického přeprogramování prostřednictvím signalizace TAF7/mTORC1 vchronické onemocnění ledvina slouží jako potenciální cíl pro léčbuchronické onemocnění ledvin. 

KLIKNĚTE ZDE, ABY STE SE DOZVĚDĚLI O BYLINNÉ FORMULACI CISTANCHE FORCHRONICKÉ ONEMOCNĚNÍ LEDVIN

Chronické onemocnění ledvin(CKD) celosvětově postihuje 10 % dospělých1. CKD představuje obrovskou zátěž pro globální veřejné zdraví, protože je vysoce pravděpodobné, že se do něj rozšíříonemocnění ledvin v konečném stádiu(ESRD), která vyžaduje dialýzu nebo transplantaci ledvin1,2. Renální intersticiální fibróza je jednou z hlavních patologických charakteristik CKD2–4. Mnohé z patofyziologických rysů fibrózy ledvin sdílejí další fibrotická onemocnění, jako je cirhóza jater a kardiomyopatie5. Neexistují žádné účinné způsoby léčby CKD, což zdůrazňuje naléhavou potřebu lépe porozumět patologickým mechanismůmpodkladové CKD.

U poraněných ledvin intersticiální fibróza zahrnuje abnormální expresi profibrotických faktorů, jako je transformující růstový faktor-beta 1 (TGF- 1), epiteliální dediferenciace a aktivace myofibroblastů2. Jako klíčový mediátor intersticiální fibrózy TGF- 1 nejen aktivuje expresi fibrotických genů, včetně -aktinu hladkého svalstva (-SMA), fibronektinu (FN) a kolagenů, ale také podporuje metabolické přeprogramování podobné Warburgovu efektu. ledvinové buňky6,7. Nedávno se objevující důkazy prokázaly vztah mezi metabolickou dysregulací a intersticiální fibrózou a odhalily, že metabolické přeprogramování probíhá v buňkách ledvin (renální tubulární epiteliální buňky8,9 a myofibroblasty10) během poškození ledvin a přispívá k rozvoji CKD. Metabolické přeprogramování v buňkách ledvin způsobuje drastické snížení oxidace mastných kyselin (FAO) a metabolický posun ke glykolýze, což přispívá k infiltraci imunitních buněk a intersticiální fibróze7,11,12. Kromě toho klinická data odhalila, že metabolické a zánětlivé dráhy jsou u pacientů s CKD dysregulovány7. Obnova FAO nebo inhibice glykolýzy genetickými nebo farmakologickými metodami zmírňuje fibrózu u různých zvířecích modelů renální fibrózy11,13–15.

V molekulárních mechanismech metabolického přeprogramování působí savčí cíl rapamycinu (mTOR), kterým je cytoplazmatická serin/threonin proteinkináza, na modulaci buněčného metabolismu a udržování metabolické homeostázy16,17. Dva odlišné funkční komplexy mTOR byly definovány podle jeho vazebných proteinů. MTOR complex 1 (mTORC1) interaguje se svým specifickým regulátorem RAP TOR a je citlivý na rapamycin18,19. mTOR komplex 2 (mTORC2) je regulován RICTOR20. Chronická aktivace mTORC1 podporuje metabolické přeprogramování u různých patologických stavů, včetně renální intersticiální fibrózy9,21–23, ale mechanismy, které regulují tuto aktivaci, zejména u intersticiální fibrózy, zůstávají do značné míry neznámé.

DNA-dependentní proteinkináza (DNA-PK), trimerní komplex složený z katalytické podjednotky (DNA-PKcs) a heterodimeru Ku70/80, je aktivován dvouvláknovými zlomy DNA (DSBs)24,25 nebo ROS26. Dobře známou funkcí DNA-PK je zprostředkování nehomologického spojování konců (NHEJ), které spojuje naprogramované DSB vytvořené během rekombinace V(D)J a hraje klíčovou roli v rekombinaci lymfocytů25. V důsledku toho mutace v DNA-PKcs zastavují vývoj T a B lymfocytů v důsledku nedostatku V(D)J rekombinace27,28. Zpomalení růstu nebo vysoká frekvence rozvoje T buněčného lymfomu se však u myší s knock-out DNA-PKcs neobjevily28. Přestože se jedná o DNA DSB senzor, DNA-PKcs má některé neobvyklé vlastnosti, jako je akumulace v buňkách na úroveň daleko vyšší, než je pravděpodobně potřeba pro NHEJ29. Kromě toho se DNA-PKcs nachází jak v jádře, tak v cytoplazmě30. V souladu s jeho neobvyklými vlastnostmi nedávné důkazy naznačují, že DNA-PKcs má další funkce jiné než NHEJ31. Například DNA-PKcs zprostředkovaná fosforylace transkripčního faktoru USF-1 podporuje syntézu mastných kyselin indukovanou inzulínem32 a DNA-PKcs podporuje metabolický pokles během stárnutí33. Výzkum funkcí DNA PKcs mimo NHEJ, jako je metabolismus a stárnutí, se právě rozběhl a řada otázek zůstává nezodpovězena31. Navíc bylo zjištěno, že DNA-PK jako jedna z kináz souvisejících s fosfoinositid 3-kinázou (PI3K) reguluje aktivaci mTOR34.

V této práci naše výsledky ukazují, že DNA-PKcs zprostředkovává aktivaci signalizace RAPTOR/mTORC1 prostřednictvím fosforylace faktoru 7 asociovaného s TATA-box vazebným proteinem (TAF7) v CKD. Inhibice DNA-PKcs koriguje metabolické přeprogramování v poraněných epiteliálních buňkách a myofibroblastech u CKD. DNA-PKcs může sloužit jako nový potenciální cíl pro léčbu CKD.

Výsledek

DNA-PKcs je zvýšena v ledvinách pacientů s CKD a u myší s fibrózou ledvin

Aktivita DNA-PKcs byla analyzována imunohistochemickým barvením autofosforylace S2056 v DNA-PKcs (p-DNA-PKcs) ve zdravých a CKD lidských ledvinových tkáních. Nenádorové části vzorků z nefrektomie byly použity jako "zdravé" tkáně ledvin, které byly odebrány pacientům s karcinomem ledvin. Výsledky ukázaly, že p-DNA-PKcs byla téměř nedetekovatelná v těchto normálních ledvinových tkáních, ale hladiny proteinů p-DNA-PKcs byly výrazně zvýšené v CKD lidských ledvinových tkáních (obr. la). Pro stanovení relevance aktivity DNA-PKcs a renální fibrózy in vivo byla analyzována exprese fibronektinu (FN), klíčového genu souvisejícího s fibrózou ledvin, imunohistochemickým barvením a barvení Siriusovou červení bylo také provedeno pro analýzu stupně intersticiální fibrózy. u pacientů s CKD (obr. 1a). Naše výsledky odhalily pozitivní souvislost mezi hladinami proteinů p-DNA-PKcs a stupněm intersticiální fibrózy (P=0.005, obr. 1b, c). Kromě toho byly hladiny exprese DNA-PKcs také analyzovány pomocí dříve publikovaných datových sad lidských CKD microarray (Nephroseq). Zjistili jsme, že hladiny mRNA DNA-PKcs byly významně zvýšeny o více než 1{20}}násobek ve tkáních renální biopsie 48 pacientů s CKD ve srovnání s kontrolami (doplňkový obr. 1a), což vykazuje významnou pozitivní korelaci se stupněm fibróza ledvin u pacientů (doplňkový obr. 1b). Kromě toho výsledky imunofluorescenčního společného barvení p-DNA-PKcs s lektinem Lotus tetragonolobus (LTL) (marker renálních tubulů) nebo -SMA (marker myofibroblastů) ukázaly, že DNA-PKcs byla upregulována jak v tubulárních epiteliálních buňkách, tak v buňkách. myofibroblasty ledvinových tkání od pacientů s CKD (obr. 1d, e). Analýza dostupné online renální jednobuněčné RNA sekvenační databáze (http://humphreyslab.com/SingleCell/) 35 odhalila, že DNA-PKcs mRNA byla široce exprimována v ledvinových buňkách a upregulována v lidských diabetických ledvinách ve srovnání s kontrolními ledvinami (doplňkový obr. 1c).

Abychom dále identifikovali souvislost mezi aktivitou DNA-PKcs a rozvojem fibrózy ledvin, dále jsme zkoumali expresi a aktivitu DNA-PKcs na dvou myších modelech fibrózy ledvin, unilaterální ureterální obstrukce (UUO) a unilaterální ischemie-reperfuze (UIR). Imunohistochemické barvení p-DNA-PKcs ukázalo, že p-DNA PKcs byla výrazně indukována 3. den ve srovnání s falešnými kontrolami v modelu UUO a hladiny proteinů p-DNA-PKcs byly dále zvýšeny, když se fibróza ledvin rozvíjela ze dne 3 na den. 14 (obr. lf). Výsledky Western blot a qRT-PCR ukázaly, že hladiny celkového proteinu a mRNA DNA-PKcs byly také významně upregulovány v ledvinových tkáních myší UUO ve srovnání s falešnými kontrolami (obr. 1g a doplňkový obr. 1e). Podobné výsledky byly pozorovány u myší UIR (obr. 1h a doplňkový obr. ld, f). Potenciální spojení mezi DNA-PKcs a CKD nás přimělo k dalšímu zkoumání role a mechanistických důsledků DNA PKcs v CKD.

DNA-PKcs zprostředkovaná progrese CKD u myší

Dále jsme vytvořili DNA-PKcs knockout myši, ve kterých byl DNA-PKcs kódovaný gen Prkdc vyřazen pomocí CRISPR/cas9, jak je popsáno v metodách (doplňkový obr. 2a). DNA-PKcs heterozygotní (+/-) a homozygotní (-/-) knockoutované myši a myši divokého typu (WT) byly rozlišeny genotypizací, jak je znázorněno na doplňkovém obrázku 2a. Hladiny mRNA Prkdc (doplňkový obr. 2c) a proteinu DNA-PKcs (obr. 2e) nebyly detekovány v ledvinových tkáních myší DNA-PKcs-/-, což ukazuje na úspěšný knockout DNA-PKcs u myší. K vyhodnocení účinku strategie knockout DNA-PKcs na poškození ledvin a fibrózu byli dospělí (6–8 týdnů staří) kontrolní samci DNA-PKcs-/- a WT kontrolní samci myší podrobeni UUO a usmrceni 7 dní po operaci. Barvení PAS odhalilo, že stupeň tubulární atrofie a dilatace indukované UUO byl u myší DNA-PKcs−/− výrazně zlepšen ve srovnání s kontrolami WT (obr. 2a). Renální fibróza byla také výrazně zlepšena u DNA-PKcs-/- myší ve srovnání s WT myšmi, jak bylo pozorováno, a kvantifikováno Massonovým barvením (obr. 2b). Snímky imunitního značení pro intersticiální ukládání kolagenu I a -SMA ukázaly, že oba klasické profibrotické markery byly významně sníženy v ledvinách UUO myší DNA-PKcs−/− ve srovnání s kontrolami WT (obr. 2c, d). Hladiny proteinů profibrotických markerů, včetně FN a -SMA, byly také významně sníženy v ledvinách UUO DNA-PKcs-/- myší, jak bylo analyzováno Western blotem (obr. 2e). Analýza QRT-PCR ukázala, že vyřazení DNA-PKcs u myší výrazně snížilo hladiny exprese klíčových genů fibrózy ledvin, včetně Col1a1, Col3a1, Fn1 a Acta2, které byly výrazně upregulovány v ledvinách UUO. V souladu se sníženou fibrózou knockout DNA PKcs také snížil hladiny mRNA markeru poškození ledvin KIM-1 indukovaného UUO (doplňkový obrázek 2c). Kromě toho je zánět hlavním znakem fibrózy ledvin a hraje důležitou roli v patogenezi renální fibrózy. Analyzovali jsme tedy markery související se zánětem, včetně cytokinů 111, 116, Tnf a Mcp1, pomocí qRT-PCR. V modelu UUO jsme zjistili, že upregulace zánětlivých cytokinů indukovaná UUO byla výrazně snížena knockoutem DNA-PKcs (doplňkový obr. 2c). Protože jak klinické studie, tak zvířecí modely vykazují silnou korelaci mezi makrofágy a rozsahem renální fibrózy, byly infiltrované makrofágy ve tkáních ledvin hodnoceny imunohistochemickým barvením na makrofágový marker F4/80. Obrázky odhalily mnoho infiltrovaných makrofágů v ucpaných ledvinách WT myší 7 dní po UUO, které byly výrazně sníženy knockoutem DNA-PKcs (obr. 2f). Zajímavé, DNA-PKcs

K dalšímu posouzení dopadu renální tubulární DNA-PKcs na renální fibrózu jsme zkonstruovali proximální renální tubulární epiteliální buňku se specifickým knockoutem DNA-PKcs in vivo pomocí myší CRISPR/cas9 knockin (doplňkový obrázek 2e, f). Po subkapsulární injekci adeno-asociovaného viru (AAV) obsahujícího vodící RNA (gRNA) pro DNA-PKcs po dobu tří týdnů byly myši s knockoutem DNA-PKcs specifické pro proximální renální tubulární buňky podrobeny UUO a usmrceny 7 dní po operaci. Imunofluorescenční barvení DNA-PKcs ukázalo nepřítomnost DNA-PKcs v renálních tubulárních buňkách (obr. 2h), ale stále byla exprese v -SMA pozitivních myofibroblastech (doplňkový obr. 2g) myší cas9, kterým byla injikována AAV-gRNA, ve srovnání s ty u myší cas9, kterým byl injikován AAV bez gRNA pro DNA PKcs. Analýza Western blot ukázala, že hladiny proteinů DNA PKcs a profibrotických markerů, včetně FN a -SMA, byly také významně sníženy v ledvinách UUO myší cas9, kterým byla injikována AAV-sgRNA, ve srovnání s hladinami v kontrolní skupině (obr. 2g). . Podobně jako u modelu UUO byly knockoutované myši DNA-PKcs také chráněny před CKD vyvolaným UIR (doplňkový obr. 2h–m). Tyto výsledky společně naznačují, že delece DNA-PKcs zmírňuje progresi CKD u myší.

Aby se určilo, zda je nadměrná exprese DNA-PKcs v ledvinách dostatečná k řízení fibrózy ledvin, byly plazmidy s nadměrnou expresí DNA-PKcs (Addgene: 83317) dodány do myších ledvin pomocí vysokotlaké injekční metody ocasní žíly, jak bylo popsáno v několika předchozích studiích36. Třicet šest hodin po injekci plazmidu DNA-PKcs byla myším podána operace UUO po dobu 7 dnů. Souhrnně naše výsledky naznačují, že ektopická exprese lidské DNA-PKcs je dostatečná k řízení progrese renální fibrózy in vivo (doplňkový obr. 3).

Inhibice aktivity DNA-PKcs zmírňuje vývoj CKD u myší

Tato zjištění nás vedla k úvaze o možnosti, že by inhibitory DNA PKcs mohly být použity k ochraně před renální fibrózou. Abychom otestovali naši hypotézu, dospělí samci myší WT (ve věku 6–8 týdnů) byli denně léčeni vysoce specifickým inhibitorem DNA-PKcs NU7441 počínaje 1 den po operaci UUO. Myši léčené NU7441-a kontrolní myši byly usmrceny 7 dní po operaci UUO a aktivita DNA-PKcs byla analyzována imunohistochemickým barvením a výsledky ukázaly, že léčba NU7441 výrazně inhibovala aktivaci DNA-PKcs v tkáních ledvin UUO ( Obr. 3a). Stupeň tubulární atrofie a dilatace indukované UUO se výrazně zlepšil po léčbě NU7441 ve srovnání s kontrolou s vehikulem, jak ukazuje barvení PAS (obr. 3b). Histopatologické analýzy Massonova barvení odhalily přibližně 50% snížení renální intersticiální fibrózy v ledvinách s obstrukcí (UUO) u myší léčených NU7441- ve srovnání s ledvinami s kontrolním UUO vehikulem (obr. 3c). Snímky imunofluorescenčního barvení ukázaly, že ukládání intersticiálního kolagenu I indukované UUO bylo výrazně sníženo ošetřením NU7441 (obr. 3e). Hladiny proteinů profibrotických markerů, včetně FN a -SMA, analyzované Western blotem, byly také významně sníženy v UUO ledvinách myší léčených NU7441- ve srovnání s kontrolami s vehikulem (obr. 3f). QRT-PCR analýza ukázala, že léčba NU7441 výrazně snížila hladiny exprese klíčových genů fibrózy ledvin, včetně Col1a1, Col3a1, Fn1 a Acta2, v ledvinových tkáních myší UUO ve srovnání s kontrolami s vehikulem (doplňkový obrázek 4a). Kromě toho byla infiltrace makrofágů v tkáních ledvin UUO myší značně snížena po léčbě NU7441 ve srovnání s kontrolami s vehikulem (obr. 3d). NU7441 také snížil hladiny exprese markerů souvisejících se zánětem, včetně cytokinů 111, 116, Tnf a Mcp1, v ledvinových tkáních myší UUO, jak bylo analyzováno pomocí qRT-PCR (doplňkový obrázek 4a). Kromě toho byly DNA PKcs knockout myši také ošetřeny NU7441, aby se prozkoumal možný off-target NU7441. Naše výsledky ukázaly, že NU7441 neměl žádný zřejmý antifibrotický účinek u DNA-PKcs knockout myší (obr. 3g, h), což naznačuje specifický účinek NU7441 na DNA-PKcs v tomto experimentálním uspořádání.

Ochranný účinek NU7441 proti poškození ledvin indukovanému UUO a renální fibróze byl rozšířen na CKD indukovaný UIR. Jak se očekávalo, léčba NU7441 také chránila před poškozením ledvin a fibrózou indukovaným UIR ve srovnání s kontrolami s vehikulem (doplňkový obr. 4b–h). Společně tyto výsledky ukazují, že inhibice aktivity DNA-PKcs pomocí NU7441 zmírňuje progresi CKD u myší.

Obr. 3|Inhibice aktivity DNA-PKcs zmírňuje vývoj CKD u UUO myší. a Imunohistochemické barvení p-DNA-PKcs v ledvinách myší léčených NU7441 (40 mg/kg) nebo vehikulem vystaveným UUO (den 7), měřítko: 20 um. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). b PAS barvení ledvin myší léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO, měřítko: 50 μm. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). c Massonovo barvení ledvin myší léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO, měřítko: 50 μm. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). d Imunohistochemické barvení F4/80 v ledvinách myší léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO, stupnice: 20 μm. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). e Imunofluorescenční barvení COL1A1 v ledvinách myší léčených NU7441 nebo vehikulem vystaveným UUO, stupnice: 20 μm. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). f Hladiny proteinu FN a -SMA v ledvinách myší léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). g Hladiny proteinu FN a -SMA v ledvinách myší DNA-PKcs-/- nebo WT léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). h Barvení ledvin myší DNA-PKcs-/- nebo WT léčených NU7441 nebo vehikulem vystavených UUO červení Sirius. Sloupce představují výsledky kvantifikace (průměr ± SD, n=6 myší z každé skupiny). Ke stanovení p-hodnot pro a, c, e byl použit dvoustranný nepárový t-test. Pro stanovení p-hodnot pro b, d, h byla použita jednocestná ANOVA následovaná Tukeyho testem vícenásobného srovnání. Ke stanovení p-hodnot pro f,g byly použity dvoucestné ANOVAs následované Šídákovým vícenásobným srovnávacím testem. Zdrojová data jsou poskytována jako soubor zdrojových dat.

Inhibice DNA-PKcs zachovává fenotyp tubulárních epiteliálních buněk a reguluje aktivaci intersticiálních fibroblastů in vitro

Poškození epitelu a aktivace myofibroblastů jsou ústředními událostmi v patogenezi CKD2. Imunobarvení odhalilo, že p-DNAPKcs byly zjevně indukovány stimulací TGF 1 jak v buňkách HK -2 (obr. 4a), tak v buňkách primárního tubulárního epitelu (doplňkový obr. 5a). Výsledky Western blot ukázaly, že fosforylace a hladiny celkového proteinu DNA-PKcs byly také významně upregulovány v buňkách HK-2 ošetřených TGF1 nebo H2O2 (obr. 4i a doplňkový obr. 5b). Kromě toho byly pomocí CRISPR–Cas9 vytvořeny DNA-PKcs knockout HK-2 buňky a kultivovaly se WT a DNA-PKcs−/− myší primární tubulární epiteliální buňky. Úspěšná konstrukce DNA-PKcs knockout HK-2 buněk byla potvrzena Western blotováním (doplňkový obrázek 5c). Naše výsledky ukázaly, že knockout DNA-PKcs nebo inhibice DNA-PKcs pomocí NU7441 zlepšily dediferenciaci renálních epiteliálních buněk, jak ukazují nižší hladiny produkce FN a Col1A1 po expozici TGF 1 v DNA-PKcs knockout nebo NU{{27 }}ošetřené buňky (obr. 4b–d, k, l). Nicméně knockout KU80 posílil produkci FN indukovanou TGF 1 v buňkách tubulárního epitelu (obr. 4m). Stejně jako model UUO, knockout DNA-PKcs nezhoršil zlomy DNA v buňkách HK-2 indukované H2O2 (doplňkový obrázek 5d). KU70/80 nejprve rozpozná zlomené konce DNA na DSB, poté rekrutuje DNA-PKcs za účelem vytvoření DNA-PK, která je nezbytná při opravě DSB prostřednictvím NHEJ37. Tyto výsledky naznačují, že DNA-PKcs zvyšuje profibrotické působení renálních epiteliálních buněk u CKD nezávisle na její opravné funkci DSB.

Aby se zjistilo, zda se DNA-PKcs podílí na aktivaci a proliferaci intersticiálních fibroblastů, byly kultivovány. Výsledky Western blot ukázaly, že hladiny fosforylovaného a celkového proteinu DNA-PKcs byly také významně upregulovány v TGF 1 ošetřených NRK-49F buňkách NRK-49F (obr. 4j). Imunobarvení odhalilo, že aktivita DNA-PKcs byla výrazně indukována působením TGF 1 v NRK-49F buňkách (obr. 4e), ale byla výrazně inhibována působením NU7441. Ošetření buněk NRK-49F pomocí TGF1 indukovalo aktivaci fibroblastů a diferenciaci myofibroblastů s upregulací COL1, -SMA a FN, zatímco předléčení s NU7441 značně otupilo profibrotický fenotyp (obr. 4f, g, n). Kromě toho léčba NU7441 významně inhibovala proliferaci NRK-49F buněk indukovanou TGF1 ve srovnání s kontrolami s vehikulem, jak ukazuje barvení EdU (obr. 4h). Celkově vzato tato data naznačují, že inhibice DNA-PKcs zachovává fenotyp tubulárních epiteliálních buněk a reguluje aktivaci intersticiálních fibroblastů indukovanou TGF 1 in vitro.

Kromě toho jsme také zkoumali mechanismus exprese DNA-PKcs indukované TGF 1-. Za prvé jsme našli více možných vazebných míst SMAD2 v promotorové oblasti DNA-PKcs pomocí analýzy vazebných profilů transkripčního faktoru JASPAR 38. Za druhé, výsledky luciferázového testu ukázaly, že nadměrná exprese SMAD2 zvýšila transkripční aktivaci DNA-PKcs (doplňkový obrázek 5e) . Kromě toho byl také analyzován účinek DNA-PKcs na aktivaci signalizace SMAD. Výsledky ukázaly, že knockout DNA-PKcs inhiboval aktivaci SMAD2/SMAD3 v myším modelu UUO (doplňkový obrázek 5f). Tyto výsledky naznačují, že SMAD2/SMAD3 upreguloval expresi DNA PKcs, zatímco DNA-PKcs aktivoval SMAD2/SMAD3 (doplňkový obrázek 5g), čímž se vytvořila pozitivní smyčka.

Supporting Service Of Wecistanche-Největší vývozce cistanche v Číně:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Nakupujte pro další specifikace Podrobnosti:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIKNĚTE ZDE A ZÍSKEJTE PŘÍRODNÍ BIO EXTRAKT CISTANCHE S 25 % ECHINAKOSIDU A 9 % AKTEOSIDU NA LEDVINY