Doplněk při onemocnění ledvin jako potenciální přispěvatel k arteriální hypertenzi

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Lisa-Maren Fischer a kol

Abstraktní

Objektivní:Ukládání komplementu převládá v biopsiích ledvin pacientů s arteriální hypertenzí a hypertenzní nefropatií, ale spojení hypertenze a ukládání komplementu nebo zapojení komplementu do patogeneze hypertenzní nefropatie nebylo dosud prokázáno.

Metody:V této studii jsme analyzovali ukládání komplementu C1q a C3c na potkaním modelu přetížení a hypertenze pomocí subtotální nefrektomie (SNX) a v archivních lidských renálních biopsiích od 217 pacientů se známou hypertenzí a 91 kontrolních pacientů bez anamnézy hypertenze pomocí semikvantitativního skórování Imunohistochemie C1q a C3c a korelace s parametry funkce ledvin. Aby se zjistilo, zda byl komplement pouze pasivně deponován nebo aktivně exprimován renálními buňkami, byla dodatečně analyzována exprese C1q a C3 mRNA.

Výsledek:Glomerulární ukládání komplementu C1q a C3c bylo signifikantně vyšší v ledvinách hypertenzních potkanů ​​SNX a hypertoniků ve srovnání s nehypertenzními pacienty. Střední arteriální krevní tlak (BP) u SNX potkanů ​​dobře koreloval s množstvím glomerulární depozice C1q a C3c as hmotností levé komory, jako nepřímým parametrem vysokého TK. Kvantitativní analýza mRNA ukázala, že C3 byl nejen deponován, ale také aktivně produkován glomerulárními buňkami hypertenzních potkanů ​​SNX a v lidských renálních biopsiích. Je třeba poznamenat, že u pacientů stádium CKD významně korelovalo s intenzitou glomerulárního barvení C3c, ale ne s intenzitou C1q.

Závěr: Ukládání komplementu v ledvinách korelovalo s experimentální hypertenzí a také s přítomností hypertenze u různýchledvinovénemocí. K zodpovězení otázky, zda a jak přesně je renální komplement kauzální pro patogenezi arteriální hypertenze u mužů, jsou zapotřebí další studie.

klíčová slova:Ledviny, ukládání komplementu, hypertenze,Renálníchoroba

Cistanche umí léčitledvinovéchoroba

Úvod

The complement system and its regulatory proteins are components of the innate immune system consisting of >20 rozpustných faktorů, které hrají důležitou roli při (i) opsonizaci, (ii) stimulaci různých zánětlivých drah a (iii) osmotické lýze patogenů a poškozených buněk u řady onemocnění, zejména zánětlivýchledvinachoroba[1]. Systém komplementu se skládá ze 3 drah: (i) klasická dráha, aktivovaná jakoukoliv strukturou, která je rozpoznána C1q [2], (ii) lektinová dráha, aktivovaná, když jsou sacharidové vzorce rozpoznávány komplexy rozpoznávání vzorů [3] a (iii) alternativní cesta, aktivovaná spontánní hydrolýzou C3 [4].

Poslední 2 desetiletí prohloubila naše znalosti o komplementovém systému a jeho roli v patogenezi různých systémových aledvinovénemocíjako postinfekční glomerulonefritida (GN), IgA nefropatie (IgAN), lupusová nefritida (LN), membranoproliferativní GN a glomerulopatie C3 [1, 5]. Důležitá úloha komplementového systému a jeho dysfunkce je známa také v patogenezi trombotických mikroangiopatií, včetně atypického hemolyticko-uremického syndromu [6], IgA vaskulitidy (bývalá Henochova-Schönleinova purpura) [7] a maligní hypertenze [8]. Zatímco patomechanismy trombotické mikroangiopatie jsou již známy [6, 7], naše znalosti o významu komplementového systému ve vztahu k hypertenzi jsou stále poměrně vágní. Většina pacientů s CKD má zvýšený krevní tlak (TK) [9], ale přesná patogeneze hypertenze není známa. K dispozici je několik studií popisujících souvislost mezi plazmatickým C3 a hypertenzí [10, 11], zatímco jiná studie nemohla tato pozorování potvrdit [12]. U potkaního modelu DOCA-solné hypertenze byla glomerulární depozice C3 zvýšena u DOCA-solných potkanů ​​a snížena antihypertenzní terapií, tj. spironolaktonem a trojkombinací hydrochlorothiazidem, reserpinem a hydralazinem [13]. Nedávné studie využívající preklinické modely hypertenze naznačily roli komplementu v patogenezi hypertenze [14] zprostředkované různými imunitními buňkami, jako jsou makrofágy a regulační T-buňky (Tregs) [15–17], a aktivací systému renin-angiotenzin vedoucí k fenotypové změny v buňkách hladkého svalstva cév [18]. Detailní úloha ukládání komplementu v ledvinách ve vývoji zvýšeného TK je stále nejasná. Proto jsme v této studii zkoumali C1q jako štěpný produkt klasického štěpení a C3c jako společný marker všech 3 cest aktivace komplementu v renálních biopsiích od hypertenzních a normotenzních pacientů, stejně jako na zavedeném potkaním modelu přetížení a následného hypertenze subtotální nefrektomií (SNX).

Metody

Zvířecí model

Ke zkoumání ukládání komplementu v ledvinách, poškození ledvin a srdečních změn u hypertenzních zvířat jsme použili model potkana, který se vyznačuje glomerulární hyperfiltrací a přetížením v důsledku redukce nefronů, fokální segmentální a globální glomerulosklerózou, tubulointersticiálním zjizvením a progresivním CKD s významně zvýšený TK. Potkani byli chováni ve specifickém zařízení bez patogenů v prostředí s řízenou teplotou a světlem a měli ad libitum přístup ke standardní potravě (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Německo) a vodě. Potkani byli chováni na klasické podestýlce z osikového dřeva (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Německo) v makrolonových klecích typu IV (Tecniplast Deutschland GmbH, Hohenpeißenberg, Německo) s maximální populací 3. Pro modelovou indukci bylo použito 12 samců Dark Agouti (DA/). HanRj, Janvier, Le Genest-Saint-Isle, Francie) krysy ve věku 12–14 týdnů byly SNX ve 2krokovém protokolu počínaje neinspirovanou tomií následovanou váhově standardizovanou resekcí horních a dolních pólů ze zbývající ledviny 1 týden později. Za tímto účelem byl zvířatům podán Buprenovet (Bayer, Leverkusen, Německo) v dávce 0.05 mg/kg tělesné hmotnosti sc před operací. Po anestezii isofluranem byl pravý bok oholen, dezinfikován tinkturou KO-DAN forte (Schülke & Mayr GmbH, Norderstedt, Německo), bok byl otevřen 1,5 cm řezem a ledvina byla opatrně vyjmuta a fixována 2 sterilními výtěry následované podvázáním renálního krevního zásobení a močovodu a odstraněním ledviny. Břišní řez byl uzavřen vstřebatelným stehem a kontinuálním švem, stejně jako kůže byla uzavřena švy s jedním knoflíkem. O týden později byla levá ledvina vyjmuta přesně tak, jak je popsáno pro pravou ledvinu. Poté byla renální tepna sevřena atraumatickou svorkou a horní a dolní pól ledviny byl resekován skalpelem a řezná plocha byla uzavřena kolagenovou houbou (Resorba medical GmbH, Nürnberg, Německo). Nakonec byla zbývající ledvina vrácena do původní polohy a břišní řez byl uzavřen, jak je popsáno výše. Byla hodnocena pooperační aktivita, příjem tekutin, hmotnost, struktura srsti a chování zvířat, ale nevykazovaly žádné známky pooperační bolesti. Analgezie však byla zachována alespoň 3 dny po operaci. Kontroly podstoupily falešnou operaci (sham, n=11). Na konci experimentu byla zvířata umístěna po dobu 24 hodin v metabolických klecích pro sběr moči pro měření proteinurie pomocí Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad Laboratories GmbH, Mnichov, Německo). Adsorpce byla měřena ve vzorcích moči zředěných PBS při 595 nm ve čtečce mikrodestiček a proteinurie byla vypočtena pomocí standardní křivky ze standardů hovězího sérového albuminu v rozsahu od 0,15 do 2 mg (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Po 12 týdnech byly krysy usmrceny po intraarteriálním měření BP po dobu 30 minut zavedením katétru do A. carotid za použití systému AD instrument power lab (ADInstruments Ltd., Oxford, UK). Nakonec byly odebrány ledviny a srdce a rozděleny na 2 části, jedna byla rychle zmražena pro analýzu RNA a druhá část byla zpracována pro imunohistochemii. Krev byla odebrána pro detekci sérového kreatininu pomocí autoanalyzátoru (Beck man Instruments, Brea, CA, USA).

Cistanche umí léčitledvinové choroba

Kvantitativní analýza mRNA

Celková RNA z krysích ledvin byla izolována pomocí kolon RNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Německo). Reverzní transkripční reakce a PCR v reálném čase byly provedeny pomocí Power SYBR Green na systému 7500 Fast Real-Time PCR (oba Applied Biosystems, Weiterstadt, Německo) podle pokynů výrobce. Data PCR v reálném čase byla analyzována pomocí softwaru SDS v1.3 (Applied Biosystems) a relativní exprese hladin mRNA cílového genu byla vypočtena pomocí srovnávací metody delta Ct [19]. Normalizace byla prováděna proti hladinám endogenní 18S rRNA aplikovaným na výsledné relativní násobky změn. Byly použity následující primery: 18 s (fw 5'TTGATTAAGTCCCTGC-CCTTTGT3'; rev 5'CGATCCGAGGGCCTCACTA3'); C3 (fw 5′ TGCGGCTGGAGAGTGAAG3′; rev 5′ TTACTGGCTGGAATC-TTGATGG3′) [20]; a C1qB (fw 5′TCATAGAACACGAGGAT TCCATACA3′; rev 5′GACCCAGTACAGCTGCTTTGG3′) [20].

Imunohistochemie

Pro imunohistochemické biopsie ledvin nebo SNX a falešnou ledvinu potkana byly vzorky fixovány ve formalínu, zality do parafínu a nařezány na řezy o tloušťce 1 μm a obarveny v barviči Ventana Benchmark (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Německo) za použití následujícího protokolu : získání antigenu bylo provedeno pomocí štěpení pronázou E po dobu 40 minut při 37 stupních. Po zablokování pomocí Avidin-Biotin Block (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) byly řezy normálního kozího séra a blotto (1:5) inkubovány po dobu 1 hodiny při 37 stupních s použitím následujících protilátek naředěných 1 procentem BSA v 50 mM Tris pH 7.4: Clq, králičí polyklonální protilátka proti lidskému Clq (A0126; DAKO Deutschland, Hamburg, Německo) a; C3c, králičí polyklonální protilátka proti lidskému C3c (A0062; DAKO Deutschland). Po promytí 50 mM Tris pH 7,4 byly navázané primární protilátky detekovány pomocí "ultra view Universal DAB Detection Kit" (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Německo). Negativní kontroly zahrnovaly buď deleci nebo substituci primární protilátky ekvivalentními koncentracemi irelevantní myší monoklonální protilátky nebo preimunního králičího IgG.

Vzorky lidské ledvinové tkáně

V prvním kroku byla neselektovaná kohorta 308 po sobě jdoucích archivních biopsií ledvin zalitých ve formalínu fixovaných v parafínu (Oddělení nefropatologie, Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg [FAU]) analyzována na ukládání komplementu v ledvinách pomocí imunohistochemie a srovnání případů s přítomností nebo nepřítomnost arteriální hypertenze podle klinických souborů, bez ohledu na primárníledvinovéchoroba. Zahrnuty byly pouze biopsie od hypertenzních a nehypertenzních pacientů s klinicky dobře zdokumentovaným TK. Kromě toho sloužilo jako kontrola 46 nulových biopsií z transplantovaných ledvinových aloštěpů darovaných od nehypertenzních žijících dárců.

Ve druhém kroku jsme se zaměřili na srovnání vybraných společných skupinledvinovénemocí, jmenovitě kontroly (nulové biopsie; n=46), IgAN (n=65), membranózní GN (MGN, n=18), LN (n=10), fokální segmentální glomeruloskleróza (FSGS, n=17) a diabetická nefropatie (DN, n=28), což vedlo k reprezentativní podskupině 184 biopsií. V této podskupině byl podrobněji analyzován vztah arteriální hypertenze a ukládání komplementu v kontextu různých běžných nefropatií. Základní charakteristiky pacientů jsou popsány v tabulce 1.

Histopatologické hodnocení

Diagnostiku renální biopsie provedli 3 velmi zkušení specializovaní neuropatologové během rutinního vyšetření s konsensuální diskusí o všech nejednoznačných případech (včetně MBH a KA). Posouzení podrobné morfologie lidských renálních biopsií bylo provedeno jedním velmi zkušeným vědcem (CD) pomocí dobře zavedeného semikvantitativního skóre glomerulosklerózy, skóre tubulárního poranění a skóre vaskulárního poranění (VSI) na parafínových řezech barvených PAS, jak bylo popsáno dříve [21]. Intersticiální fibróza/tubulární atrofie (IF/TA) byla hodnocena podle klasifikace BANFF pro biopsie ledvinového transplantátu [22].

Hodnocení retrospektivy

Klinická data Byly shromážděny klinické parametry, které byly k dispozici v časovém bodě renální biopsie. Pro korelační analýzu se skóre C1q a C3c, lokalizací komplementu a skóre poranění pomocí softwaru SPSS byly zahrnuty následující parametry: věk pacienta, přítomnost nebo nepřítomnost hypertenze a diabetu, proteinurie, sérový kreatinin, sérová močovina, sérový cholesterol, sérový protein a faktory komplementu C3 a C4 v séru. Bohužel informace o délce trváníledvinovéchorobaand current medication was not consistently available and could therefore not be systematically analyzed. In renal patients, BP is measured regularly and particularly before performing a kidney biopsy. BP measurements and grading was done according to the KDIGO guidelines for renal patients [23]. Proteinuria was measured by analysis of a 24 h urine collection and significant proteinuria was defined as urinary protein excretion >300 mg/den. Ve 2/3 všech případů byla proteinurie dána jako g/24 h moči. Pouze někteří pacienti měli proteinurii dokumentovanou bodovým měřením moči a pro velmi málo pacientů nebyly k dispozici žádné údaje o proteinurii. Vzhledem k tomu, že hodnoty 24h a spotové proteinurie lze jen stěží srovnávat, zařadili jsme pouze pacienty s 24hodinovým sběrem moči pro korelaci proteinurie s ukládáním komplementu. Abychom dále standardizovali naše nálezy, rozdělili jsme pacienty také podle různých tříd CKD pomocí vzorce CKD-EPI pro výpočet GFR [24] a tříd CKD podle klasifikace KDIGO 2012 [25].

Cistanche umí léčitledvinové choroba

Semikvantitativní hodnocení ukládání komplementu v renálních biopsiích

Barvení komplementu imunohistochemicky v renálních biopsiích bylo hodnoceno odděleně v glomerulech a tubulointersticiálním kompartmentu. Semikvantitativní skóre {{0}}–4 popisuje intenzitu pozorovatelných C3c nebo C1q v biopsiích ledvin při 200-násobném zvětšení. Skóre 0 znamená žádné usazeniny, skóre 1: slabé zabarvení postihující až 25 procent zkoumaného kompartmentu. Skóre 2: střední zabarvení postihující až 50 procent nebo silné zabarvení v<25% of="" the="" compartment.="" score="" 3:="" substantial="" staining="" affecting="" up="" to="" 75%="" of="" the="" investigated="" compartment.="" score="" 4:="" highest="" staining="" intensity="" affecting="">75 procent zkoumaného kompartmentu.

Clq a C3 mRNA v lidských renálních biopsiích

Údaje pro C1q a C3 v glomerulech a tubulointersticiu lidských renálních biopsií s různými onemocněními byly vyhodnoceny z databáze Nephroseq pomocí datového souboru Ju CKD [26].

Statistické analýzy

Po testování normální distribuce hodnot pomocí Kolmogorova-Smirnovova testu byla data analyzována pomocí Mann-Whitneyho testu pro srovnání 2 skupin a Kruskal-Wallisova testu s Dunnovým vícenásobným srovnávacím testem jako post hoc testem pro srovnání více skupin. Ve všech testech bylo p < 0.05="" přijato="" jako="" statisticky="" významné.="" k="" testování="" korelace="" ukládání="" komplementu="" se="" skóre="" poškození="" ledvin="" a="" klinickými="" údaji="" byl="" použit="" spearmanův="" test.="" statistické="" analýzy="" byly="" provedeny="" pomocí="" softwaru="" spss="" pro="" windows="" (verze="" 19.0="" spss,="" ibm,="" mnichov,="" německo)="" nebo="" softwaru="" graphpad="" prism="" 8="" pro="" windows="" (verze="" 8.3,="" graphpad="" software="" inc.,="" san="" diego,="" ca,="">

Výsledek

Ukládání komplementu ledvin C3c a C1q je přítomno u hypertenzního potkaního modelu stabilního CKD a koreluje se změnami ledvin a srdce

Ukládání komplementu bylo zkoumáno na hypertenzním potkaním modelu CKD, tj. subtotálně nefrektomizovaných (SNX) potkanů ​​Dark Agouti, u kterých byl průměrný arteriální TK 12 týdnů po modelové indukci významně (p < 0.0="" 01)="" se="" zvýšil="" (175,7="" ±="" 21,0="" mm="" hg)="" ve="" srovnání="" s="" falešně="" operovanými="" kontrolami="" (135,8="" ±="" 2,8="" mm="" hg)="" (obr.="" 1a).="" proteinurie="" byla="" také="" signifikantně="" vyšší="" u="" snx="" ve="" srovnání="" s="" falešně="" operovanými="" kontrolami="" (78,5="" ±="" 16,6="" vs.="" 8,9="" ±="" 0,8="" mg/24="" h).="" tento="" model="" hypertenze="" a="" progresivní="" renální="" insuficience="" u="" potkanů="" ​​s="" přetížením="" se="" zdál="" být="" vhodný="" pro="" zkoumání="" změn="" v="" ukládání="" a="" expresi="" komplementu="" v="" ledvinách="" spojených="" s="" hypertenzí.="" glomerulární="" depozice="" c3c="" a="" c1q="" chyběla="" u="" normotenzních,="" falešně="" operovaných="" kontrolních="" potkanů="" ​​(obr.="" 1b,="" c)="" a="" významně="" se="" zvýšila="" u="" hypertenzních="" potkanů="" ​​snx="" (obr.="" 1d,="" e,="" g,="" h).="" u="" snx="" potkanů="" ​​se="" komplementový="" faktor="" c3c="" nejen="" ukládal="" v="" renální="" tkáni,="" ale="" také="" významně="" upreguloval="" na="" úrovni="" mrna="" (obr.="" 1f).="" renální="" exprese="" clq="" mrna="" vykazovala="" tendenci="" k="" vyšším="" hladinám="" u="" snx="" potkanů="" ​​než="" u="" kontrol,="" ale="" tento="" rozdíl="" nedosáhl="" významnosti="" (obr.="" 11).="" je="" zajímavé,="" že="" u="" krys="" jak="" glomerulární="" ukládání="" c3c,="" tak="" clq="" vysoce="" korelovalo="" s="" průměrným="" arteriálním="" tk="" (obr.="" 2a,="" d)="" a="" srdeční="" hypertrofií,="" jak="" bylo="" hodnoceno="" hmotností="" levé="" komory="" (obr.="" 2b,="" e).="" kromě="" toho="" v="" modelu="" snx="" koreluje="" ukládání="" komplementu="" v="" ledvinách="" s="" poškozením="" ledvin="" a="" také="" s="" funkcí="" ledvin.="" glomerulární="" c3c,="" stejně="" jako="" depozice="" c1q,="" vykazovaly="" silnou="" korelaci="" se="" sérovým="" kreatininem="" (obr.="" 2c,="" f)="" a="" proteinurií="" (obr.="" 2g,="" h).="" korelace="" sérového="" kreatininu="" a="" proteinurie="" s="" komplementem="" nebyla="" překvapivá,="" protože="" oba="" parametry="" také="" vykazovaly="" silnou="" vzájemnou="" korelaci="" v="" tomto="" modelu="" potkanů="" ​​(obr.="" 2i).="" naše="" data="" na="" potkaním="" modelu="" hypertenzní="" ckd="" v="" důsledku="" redukce="" hmoty="" ledvin="" a="" přetížení="" tedy="" naznačovala="" souvislost="" mezi="" ukládáním="" komplementu="" v="" ledvinách="" a="" hypertenzí.="" proto="" jsme="" se="" zaměřili="" na="" potvrzení="" těchto="" nálezů="" na="" lidské="" kohortě="" hypertoniků="" versus="" normotenzních="" pacientů,="" u="" kterých="" byla="" z="" různých="" důvodů="" provedena="" renální="">

Ukládání komplementu je nezávislé na základním onemocnění ledvin

Zde jsme použili dvoustupňový přístup: nejprve jsme zahrnuli všechny pacienty s hlášenou hodnotou TK nezávisle na základním onemocněníledvinachoroba(n=308, podrobnosti viz Tabulka 1). Je třeba poznamenat, že 217 z 308 pacientů (70,5 procenta) mělo hypertenzi. Za druhé, pro další analýzu jsme se zaměřili na podskupiny nejrozšířenějších forem GN, tj. IgAN, MGN a LN, a 2 neimunitních komplexů zprostředkovanýchledvinovénemocíjmenovitě DN a fokální segmentální glomeruloskleróza (FSGS). 46 nulových biopsií z aloštěpů transplantované ledviny darovaných od normotenzních žijících dárců sloužilo jako kontrolní skupina (viz tabulka 1).

Pro zkoumání potenciálního vztahu mezi hypertenzí a renálním komplementem byla depozice C1q a C3c v glomerulárním a tubulointersticiálním kompartmentu analyzována semikvantitativním skórováním imunohistologických barvení. Množství a intenzita barvení C1q a C3c se ve zkoumaných biopsiích velmi lišily (podrobnosti viz obr. 3). V tubulointersticiálním kompartmentu byl C3c uložen podél tubulárních bazálních membrán a v intersticiální matrici (obr. 3G), zatímco barvení C1q bylo obvykle slabé a omezené na intersticium (obr. 3H).

Glomerulární depozice C3c byla u mnoha zvýšenaledvinovénemocívčetně IgAN, MGN, LN a FSGS ve srovnání s normotenzními nulovými biopsiemi (obr. 4A). Celkově byla glomerulární depozice C1q slabší než glomerulární C3c. Byl významně zvýšen u IgAN, MGN, LN a DN, ale ne u FSGS ve srovnání s kontrolami s nulovou biopsií (obr. 4B). Je zajímavé, že komplement C3 a C1q se nejen ukládal v nemocných ledvinách, ale byla také zvýšena lokální renální exprese mRNA. Data Nephroseq ukázala, že exprese mRNA C3 i C1q byla významně upregulována u IgAN, LN, DN a FSGS ve srovnání s kontrolní skupinou, tj. zdravými žijícími dárci (obr. 4C, D). Exprese Clq mRNA byla nižší než exprese C3. Tubulointersticiální depozice C3c byla také u většiny zvýšena ve srovnání s nulovými biopsiemiledvinovénemocí(Obr. 4E), zatímco C1q se významně nelišil od kontrol s nulovou biopsií (data nejsou uvedena). Stručně řečeno, výrazná depozice komplementu ledvin je běžným nálezem u různýchledvinanemocí. Dále jsme zkoumali potenciální význam vysokého TK pro ukládání komplementu v ledvinách.

Obr. 3. Depozice C3c a C1q v renálních biopsiích. Lidské renální biopsie byly obarveny na C3c (A, C, E, G) a C1q (B, D, F, H) pomocí imunohistochemie (hnědé barvení). Reprezentativní obrázky glomerulární a tubulointersticiální depozice C3c a C1q ukazují příklady různých skóre depozice komplementu. Žádné barvení na C3c u nulových biopsií (A) a C1q u akutní tubulární nekrózy (B). Příklady glomerulární depozice C3c u hypertenzní/ischemické NP, skóre 1 (C) a depozice C1q ve třídě II LN, skóre 2 (D). Výraznější depozice C3c v IgAN, skóre 4 (E) a depozice C1q, skóre 4, v jiném případě třídy II LN (F). Ukládání C3c v tubulointersticiálním kompartmentu u intersticiální nefritidy, skóre 4 (G) a ukládání C1q, skóre 4 (H) v případě postinfekční GN. Měřítko představuje 100 um. LN, lupus nefritida; GN, glomerulonefritida.

Obr. 4. Ukládání a exprese komplementu ledvin v různýchledvinanemocí. Semikvantitativní analýza glomerulárního C3c (A) a C1q barvení (B) u vybranýchledvinovénemocí. IgAN, MGN, LN, DN, FSGS a biopsie z transplantovaných ledvinových aloštěpů darovaných od nehypertenzních dárců (0-biopsie) sloužily jako kontroly. Data z databáze Nephroseq ukázala glomerulární expresi C3c (C) a C1q (D) mRNA v různýchledvinovénemocía příslušnou kontrolní skupinu, tj. HLD. V tubulointersticiálním kompartmentu byl detekován především C3c (E) v renálních biopsiích od pacientů s různými onemocněními. Významné rozdíly jsou označeny hvězdičkami: *p < 0.05;="" **p="">< 0,01="" a="" ***p="">< 0,001="" indikují="" významné="" rozdíly="" oproti="" nulovým="" biopsiím.="" gn,="" glomerulonefritida;="" mgn,="" membránový="" gn;="" ln,="" lupus="" nefritida;="" fsgs,="" fokální="" segmentální="" glomeruloskleróza;="" dn,="" diabetická="" nefropatie;="" hld,="" zdravý="" žijící="" dárce;="" igan,="" iga="">

Renální depozice C3c a C1q jsou významně zvýšené u hypertoniků ve srovnání s normotenzními pacienty

Abychom zjistili, zda je přítomnost vysokého TK u pacientů spojena s ukládáním komplementu v ledvinách, analyzovali jsme biopsie od normotenzních a hypertenzních pacientů s různýmiledvinanemocía porovnali je s ukládáním komplementu v nulových biopsiích z transplantovaných ledvinových aloštěpů darovaných od nehypertenzních dárců (nulové biopsie). U IgAN, nejrozšířenější GN v našem regionu [27], měly pouze biopsie od pacientů s hypertenzí významně vyšší glomerulární (obr. 5A) a tubulointersticiální C3c (obr. 5C), stejně jako glomerulární ukládání C1q (obr. 5E), ve srovnání s nulovou biopsií. Když jsme porovnávali ukládání C3c (Obr. 5B, D) a C1q (Obr. 5F) v renálních biopsiích celé kohorty, normotenzní i hypertenzní vzorky vykazovaly významně zvýšenou reaktivitu ve srovnání s kontrolami. Navíc v biopsiích glomerulárních a tubulointersticiálních pacientů s hypertenzí byl C3c významně vyšší než u normotenzních pacientů (obr. 5B, D). Protože tubulární depozice C1q byla ve všech zkoumaných biopsiích nízká, nepozorovali jsme žádné rozdíly mezi skupinami ani v IgAN (obr. 5G), ani v analýze všech vyšetřovaných případů (obr. 5H). Naše data proto naznačují, že zejména depozice C3c se zdá být relevantní u hypertenzeledvinovénemocí.

Obr. 5. Ukládání renálního komplementu v biopsiích ledvin od hypertenzních a normotenzních pacientů. Ukládání C3c bylo analyzováno v biopsiích od pacientů s IgAN (A, C) a všech vyšetřovaných biopsiích sledvinovénemocí(B, D) oddělené u pacientů s normálním TK a vysokým TK ve srovnání s biopsiemi z transplantovaných ledvinových aloštěpů darovaných od nehypertenzních dárců (nulové biopsie) jako kontroly v glomerulárním (A, B) a tubulointersticiálním (C, D) kompartmentu. Podobně byla depozice C1q analyzována také v biopsiích od pacientů s IgAN (E, G) a všech zkoumaných biopsiích sledvinanemocí(F, H) v glomerulárním (E, F) a tubulointersticiálním (G, H) kompartmentu. Významné rozdíly jsou označeny hvězdičkami: *p < {{0}}.05;="" **p="">< 0,01="" a="" ***p="">< 0,001="" indikují="" významné="" rozdíly.="" tk,="" krevní="">

Ukládání komplementu ledvin je spojeno s poškozením a funkcí ledvin

Hodnocení histopatologických změn, hodnocené podle glomerulosklerózy (obr. 6A), skóre tubulointersticiálního poranění (obr. 6B) a VSI (obr. 6C), ukázalo signifikantně vyšší poškození ledvin v biopsiích od pacientů s prokázanou hypertenzí než u normotenzních pacientů. Rozsah glomerulární depozice C3c pozitivně koreloval s glomerulosklerózou (obr. 6D) a tubulointersticiální C3c s tubulointersticiálním poškozením (obr. 6E) a VSI (obr. 6F), což ukazuje, že ukládání komplementu je spojeno s chronickým poškozením ledvin. Kromě toho byla intersticiální fibróza/tubulární atrofie (IF/TA) významně vyšší v renálních biopsiích pacientů s hypertenzí (obr. 6G) a dobře korelovala s rozsahem tubulární depozice C3c (obr. 6J). Funkce ledvin, jak byla hodnocena pomocí sérového kreatininu, byla také významně nižší u pacientů s hypertenzí (obr. 6H) a korelovala s glomerulární depozicí C3c (obr. 6K). Pokud jde o proteinurii, nebyl zjištěn významný rozdíl mezi normotenzními a hypertenzními pacienty (obr. 6I). Mezi proteinurií a glomerulárním C3c však byla slabá korelace (r=0.238; p=0.008; obr. 6L). Tyto výsledky potvrdily souvislost mezi poškozením ledvin, funkcí, ukládáním komplementu a hypertenzí.

Nakonec jsme zkoumali, do jaké míry byla depozice komplementu závislá na stadiu CKD. Jak se očekávalo, průměrný věk pacientů se zvyšoval s vyšším stádiem CKD (obr. 7A). Naproti tomu podíl pacientů s hypertenzí byl nezávislý na stadiu CKD (obr. 7B), což potvrzuje naše výše uvedená zjištění. Glomerulární (obr. 7C) a tubulární C3c (obr. 7D) byly významně nižší u CKD stadií 1 a 2 než u vyšších CKD stadií, zatímco u C1q nebyla pozorována žádná taková asociace (obr. 7E, F).

Obr. 6. Ukládání komplementu v ledvinách v lidských biopsiích koreluje s poškozením a funkcí ledvin. Renální poškození hodnocené pomocí GSI (A), TSI (B) a VSI (C) bylo významně zvýšeno u pacientů s vysokým TK a GSI korelovalo s glomerulární depozicí C3c (D), TSI korelovalo s tubulointersticiálním C3c (E) a VSI koreluje s tubulointersticiálním C3c (F). IF/TA (G) a sérový kreatinin (H) byly zvýšeny u hypertoniků, zatímco proteinurie byla podobná v obou skupinách (I). Tubulární C3c korelovala s IF/TA (J) a glomerulární C3c se sérovým kreatininem (K) a ve slabší míře glomerulární C3c s proteinurií (L). Významné rozdíly jsou označeny hvězdičkami: **p < 0.01="" a="" ***p="">< 0,001="" označují="" významné="" rozdíly="" mezi="" pacienty="" s="" normálním="" tk="" a="" vysokým="" tk="" nebo="" významné="" korelace.="" bp,="" krevní="" tlak;="" gsi,="" glomeruloskleróza;="" tsi,="" tubulointersticiální="" poranění;="" vsi,="" poranění="" cév;="" if/ta,="" intersticiální="" fibróza/tubulární="">

Obr. 7. Renální depozice C3 v lidských biopsiích, ale ne hypertenze, koreluje se stádiem CKD. Průměrný věk pacientů s CKD se zvyšoval se zvyšujícím se stádiem CKD (A), zatímco procento pacientů s hypertenzí nesouviselo se stádiem CKD (B). C3c (C, D), ale ne C1q (E, F), pěkně korelovaly s různými stádii CKD. Glomerulární C3c (C), tubulární C3c (D), glomerulární Clq (E) a tubulární Clq (F). Významné rozdíly jsou označeny hvězdičkami: *p < 0.{{10}}5;="" **p="">< 0,01;="" a="" ***p="">< 0,001="" označují="" významné="" rozdíly="" mezi="" skupinami="" spojenými="">

Diskuse

ProgreseledvinovéchorobaBylo prokázáno, že zejména tubulointersticiální poškození je zprostředkováno, alespoň částečně, aktivací komplementu [28], ale úloha ukládání komplementu u hypertenze a poškození ledvin je stále nejasná. V naší studii jsme zjistili zvýšenou renální depozici faktorů komplementu, zejména C3c, která silně korelovala se zvýšeným poškozením ledvin a horší funkcí ledvin. Navíc velmi častoledvinachorobaje spojena s výskytem hypertenze, která sama o sobě souvisí se zvýšeným rizikem kardiovaskulárních onemocnění a progresí CKD [9]. Zde jsme prokázali vyšší renální ukládání produktů štěpení komplementu C1q, jako marker klasické aktivační dráhy, a C3c, součást všech 3 aktivačních drah, v ledvinách od hypertoniků s různýmiledvinovénemocínež normotenzní pacienti. Existují určité důkazy, že komplement hraje důležitou roli v rozvoji a zhoršování hypertenze, ale role ukládání komplementu ledvinami v tomto procesu není známa. V lidských renálních biopsiích a na našem potkaním modelu hypertenzního přetížení se ukázalo, že C3c je detekovatelný častěji než C1q, což naznačuje, že klasická cesta není výhradně zodpovědná za aktivaci komplementu vledvinové choroba. Nicméně bylo zjištěno, že C1q se kriticky podílí na hypertenzní arteriální remodelaci prostřednictvím aktivace -kateninové signalizace [29]. Otázka, zda komplement indukuje hypertenzi nebo hypertenze aktivuje komplement, zůstává dodnes nejasná. V této studii jsme pozorovali silnou korelaci ukládání renálního komplementu, zejména faktoru C3c, se stupněm renálního poškození a funkcí. Hypertenze s největší pravděpodobností vede k další aktivaci systému komplementu, ale existují zprávy podporující hypotézu, že komplement není pouze sekundární k hypertenzi, ale je také příčinou hypertenze. V longitudinální studii se sledováním 15 let byla incidence hypertenze významně vyšší u pacientů se zvýšenými hladinami C3 komplementu v plazmě na začátku studie, což naznačuje roli plazmatického C3 v patogenezi hypertenze [10]. Navíc pacienti s arteriální hypertenzí rezistentní na terapii měli významně vyšší plazmatické hladiny C3 ve srovnání s pacienty s kontrolovanou hypertenzí [11]. Naproti tomu v populační kohortové studii byla zvýšená hladina C3 v plazmě spojena se zvýšeným výskytem první hospitalizace v důsledku CKD, ale nezávisle na TK [12]. Poslední studie se však omezila na zkoumání plazmatických hladin C3, zatímco lokální exprese faktorů komplementu a aktivace komplementu nebyly zkoumány. Produkty štěpení C3, tj. C3c, byly nejen pasivně uloženy, ale C3 mRNA byla také lokálně exprimována v nemocných ledvinách od pacientů s hypertenzí a SNX potkanů. Zdroj renálního C3 jsme však neurčili, ale existují zprávy, že kromě jater je většina C3 mRNA exprimována v monocytech a makrofázích [30]. Kromě toho byly fibroblasty, epiteliální a endoteliální buňky také popsány jako potenciální extrahepatální zdroje C3- [31]. Aktivace komplementu byla také pozorována v modelu hypertenze indukované angiotensinem II u myší. U spontánně hypertenzních potkanů ​​by nedostatek C3 mohl zrušit hypertenzi citlivou na sůl [18], což naznačuje, že C3 je kriticky zapojen do drah indukujících hypertenzi. Tyto účinky však mohou být také zprostředkovány dále po směru v kaskádě komplementu. Pomocí myší s deficitem C5a receptoru (C5aR) Zhang et al. [32] prokázali, že C5aR-signalizace hraje patologickou roli při srdečním zánětu a remodelaci. Ačkoli inhibice C5aR neovlivnila zvýšený TK indukovaný angiotensinem II, poškození srdce, jak bylo hodnoceno srdeční hypertrofií, zánětem a perivaskulární fibrózou, mohlo být sníženo [33]. V našem modelu hypertenze u potkanů ​​SNX jsme potvrdili, že ukládání komplementu v ledvinách dobře koreluje s poškozením ledvin, ale také se srdeční hypertrofií a TK. Hypertenze vyvolaná komplementem byla zprostředkována prostřednictvím receptorů komplementu pro C3a a C5a. Regulační Tregs mohou inhibovat aktivaci efektorových Tregs a mají protizánětlivé účinky. V modelu hypertenze indukované angiotenzinem II se ukázalo, že Tregs je důležitým modulátorem TK a prevencí poškození koncových orgánů [15, 34]. Léčba angiotensinem II stimulovala expresi C3a a C5a receptoru na Tregs, což vedlo ke snížení počtu Tregs u myší divokého typu, ale ne u myší s dvojitým knockoutem C3a a C5a receptorů [35]. Navíc se u těchto myší s dvojitým knockoutem vyvinula tupá hypertenze a méně renální fibróza a glomerulární poškození [35]. Asociace aktivace komplementu a glomerulárního poškození a renální fibrózy, jak bylo hodnoceno pomocí glomerulosklerózy a IF/TA, byla také potvrzena v naší bioptické studii. Mechanicky bylo zvýšení TK indukováno C3- zprostředkovanou aktivací systému renin-angiotensin v buňkách hladkého svalstva cév s downstream molekulami, jako je TGF-ß/PDGF-A, a změnou fenotypu mezenchymálních buněk a indukcí epiteliálních -k-mezenchymální přechod [31]. Komplementová signalizace byla zaměřena i na další hypertenzní onemocnění. V normálním těhotenství je aktivace komplementu přítomna, ale je nadměrná u hypertenzních poruch v těhotenství a zdá se, že genetické polymorfismy proteinů komplementu predisponují k preeklampsii [36]. Inhibice signalizace komplementu léčbou solubilním receptorem komplementu 1 vedla k oslabení hypertenze v modelu placentární ischemie preeklampsie [37].

Omezení studie

I když jsme se snažili posílit naše nálezy v lidských renálních biopsiích různýchledvinovénemocís arteriální hypertenzí a bez ní začleněním vhodného zvířecího modelu k prokázání spojení mezi ukládáním komplementu v ledvinové tkáni a hypertenzí, musíme uznat několik omezení a výběrových zkreslení. V lidské studii čelíme omezení variabilní kohorty s mnoha různými zmatky, které nelze jasně identifikovat nebo vyloučit. Abychom se zabývali tímto aspektem a harmonizovali studijní skupinu, analyzovali jsme také korelaci komplementu s renální fibrózou (IF/TA) jako náhradního markeru ztráty nefronů a progrese základního onemocnění.ledvinovéchorobastejně jako u stádií CKD, kde bychom mohli prokázat podobné nálezy. Navíc údaje o délce trvání příslušných onemocnění nebo současné lékařské léčbě nebyly systematicky dostupné, takže tyto aspekty jsou dalším potenciálním matoucím faktorem, který musíme zmínit. Vzhledem k tomu, že jsme formálně vyloučili těch několik pacientů bez klinicky dobře zdokumentovaného BP, je pravděpodobné, že tito pacienti nemusí mít buď žádnou hypertenzi, nebo kontrolovanou hypertenzi do té míry, že by mohli chodit do pravidelného sledování, což by mohlo potenciálně způsobit výběrové zkreslení. Na rozdíl od experimentu na zvířatech v naší lidské kohortě nebyla proteinurie v době renální biopsie konzistentně hlášena u všech pacientů, takže jsme mohli do příslušných analýz zahrnout pouze 2/3 všech pacientů, což může ovlivnit některé výsledky. Je třeba poznamenat, že proteinurie nebyla významně vyšší u pacientů s ledvinami s vysokým TK a bez něj, takže signifikantní zkreslení proteinurie je nepravděpodobné.

Závěr

Celkově naše studie zdůrazňuje silnou souvislost ukládání komplementu s hypertenzí, ale také poškozením ledvin u lidí a experimentálníchledvinovéchoroba. Přestože jsme nedokázali odpovědět na otázku, zda je ukládání komplementu příčinou rozvoje hypertenze, data podporují účast aktivace komplementu v patogenezi nebo progresi hypertenze u různýchledvina nemocí, což naznačuje potenciální roli strategií inhibujících komplement pro budoucí léčbu případů hypertenze a refrakterních na terapiiledvinovéchoroba. K řešení přesné úlohy komplementu v patogenezi hypertenzních onemocnění jsou však zapotřebí další studie.

Cistanche umí léčitnemoc ledvin

Od: 'Doplňte vRenálníChorobajako potenciální přispěvatel k arteriální hypertenzi' byLisa-Maren Fischer a kol

---Kidney Blood Press Res 2021;46:362–376

Reference

1 Couser WG. Základní a translační koncepty imunitně zprostředkovaných glomerulárních onemocnění. J Am Soc Nephrol. březen 2012;23(3):381–99.

2 Kojouharova M, Reid K, Gadjeva M. Nové poznatky o molekulárních mechanismech klasické aktivace komplementu. Mol Immunol. Srpen 2010;47(13):2154–60.

3 Dobo J, Pal G, Červeňák L, Gal P. Objevující se role serinových proteáz spojených s lektinem (MASP) vázající manózu v lektinové dráze komplementu a mimo ni. Immunol Rev. 2016 Nov;274(1):98–111.

4 Pangburn MK, Schreiber RD, Muller-Eber tvrdý HJ. Tvorba počáteční C3 konvertázy alternativní dráhy komplementu. Získání aktivit podobných C3b spontánní hydrolýzou domnělého thioesteru v nativním C3. J Exp Med. 1981 1. září;154(3):856–67.

5 Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Doplněk: klíčový systém pro imunitní dozor a homeostázu. Nat Immunol. 2010 září;11(9):785–97.

6 Nozal P, Lopez-Trascasa M. Autoprotilátky proti proteinům alternativní dráhy komplementu u renálních patologií. Nefrologie. 2016 září-říjen;36(5):489–95. 7 Lau KK, Suzuki H, Novak J, Wyatt RJ. Patogeneze Henoch-Schönleinovy ​​purpury ne phritis. Pediatr Nephrol. leden 2010;25(1):19–26.

8 Wenzel U, Turner JE, Krebs C, Kurts C, Harrison DG, Ehmke H. Imunitní mechanismy u arteriální hypertenze. J Am Soc Nephrol. březen 2016;27(3):677–86.

9 Drawz PE, Beddhu S, Kramer HJ, Rakotz M, Rocco MV, Whelton PK. Měření krevního tlaku: perspektiva KDOQI. Am J Kidney Dis. březen 2020;75(3):426–34.

10 Engstrom G, Hedblad B, Berglund G, Janzon L, Lindgarde F. Plazmatické hladiny komplementu C3 jsou spojeny s rozvojem hypertenze: longitudinální kohortová studie. J Hum Hypertens. 2007 duben;21(4):276–82.

11 Magen E, Mishal J, Paskin J, Glick Z, Yosefy C, Kidon M a kol. Rezistentní arteriální hypertenze je spojena s vyššími hladinami komplementu C3 a C-reaktivního proteinu v krvi. J Clin Hypertens. 2008 září;10(9):677–83.

12 Bao X, Borne Y, Muhammad IF, Schulz CA, Persson M, Orho-Melander M, et al. Doplněk C3 a incidentní hospitalizace z důvodu chronickéledvinachoroba: populační kohortová studie. BMC Nephrol. 21. února 2019; 20(1):61.

13 Klanke B, Cordasic N, Hartner A, Schmieder RE, Veelken R, Hilgers KF. Krevní tlak versus přímé mineralokortikoidní účinky na zánět ledvin a fibrózu u DOCA-solné hypertenze. Transplantace nefrolového číselníku. 2008 List;23(11):3456–63.

14 Chen L, Fukuda N, Shimizu S, Kobayashi H, Tanaka S, Nakamura Y, et al. Úloha komplementu 3 při tvorbě reninu během diferenciace mezenchymálních kmenových buněk na buňky hladkého svalstva. Am J Physiol Cell Physiol. 1. května 2020; 318(5): C981–C990.

15 Kvakan H, Kleinewietfeld M, Qadri F, Park JK, Fischer R, Schwarz I, et al. Regulační T-buňky zlepšují poškození srdce vyvolané angiotensinem II. Oběh. 9. června 2009;119(22): 2904–12.

16 Ruan CC, Ge Q, Li Y, Li XD, Chen DR, Ji KD a kol. Komplementem zprostředkovaná polarizace makrofágů v perivaskulární tukové tkáni přispívá k vaskulárnímu poškození u myší s deoxykortikosteronacetátem. Arterioscler Thromb Vasc Biol. březen 2015;35(3):598–606.

17 Carney EF. Hypertenze: role C3aR a C5aR v buňkách Treg. Nat Rev Nephrol. 2018 duben; 14(4):214.

18 Negishi E, Fukuda N, Otsuki T, Katakawa M, Komatsu K, Chen L a kol. Zapojení komplementu 3 do hypertenze citlivé na sůl aktivací renálního systému renin-angiotensin u spontánně hypertenzních potkanů. Am J Physiol Renální Physiol. 1. prosince 2018; 315(6):F1747–F1758.

19 Dimmler A, Haas CS, Cho S, Hattler M, Forster C, Peters H a kol. Laserová záchytná mikrodisekce a PCR v reálném čase pro analýzu exprese genu glomerulárního endotelinu-1 při mesangiolýze krysí anti-Thy 1.1 a myší glomerulonefritidy Habu Snake Venom. Diagn Mol Pathol. červen 2003;12(2):108–17.

20 Diez M, Abdelmagid N, Harnesk K, Strom M, Lidman O, Swanberg M a kol. Identifikace genových oblastí regulujících zánětlivou mikrogliální odpověď v CNS potkana po poranění nervu. J Neuroimmunol. 25. července 2009;212(1–2):82–92.

21 Hainz N, Thomas S, Neubert K, Meister S, Benz K, Rauh M, et al. Inhibitor proteazomu bortezomib zabraňuje lupusové nefritidě u myšího modelu NZB/W F1 zachováním glomerulární a tubulointersticiální architektury. Nephron Exp Nephrol. 2012; 120(2):e47–58.

22 Solez K, Racusen LC. Přehodnocena Banffova klasifikace. Kidney Int. únor 2013;83(2):201–6.

23 Směrnice klinické praxe KDIGO pro management krevního tlaku u chronickýchledvinachoroba. Kidney Int Suppl. prosinec 2012; 2(5):343.

24 Levey AS, Stevens LA, Schmid CH, Zhang YL, Castro AF 3rd, Feldman HI, et al. Nová rovnice pro odhad rychlosti glomerulární filtrace. Ann Intern Med. 5. května 2009;150(9):604–12.

25 Skupina KCW. Směrnice klinické praxe KDIGO 2012 pro hodnocení a léčbu chronickýchledvinachoroba. Kidney Int Suppl. 2013;3:1–150.

26 Ju W, Greene CS, Eichinger F, Nair V, Hodgin JB, Bitzer M a kol. Definování specifity buněčného typu na transkripční úrovni u lidských onemocnění. Genome Res. 2013 Nov;23(11):1862–73.

27 Barratt J, Feehally J, Smith AC. Patogeneze IgA nefropatie. Semin Nephrol. 2004 květen;24(3):197–217.

28 Hsu SI, Couser WG. Chronická progrese tubulointersticiálního poškození u proteinuriíledvinovéchorobaje zprostředkována aktivací komplementu: terapeutická úloha inhibitorů komplementu? J Am Soc Nephrol. 2003 Jul;14(7 Suppl 2): ​​S186–91.

29 Sumida T, Naito AT, Nomura S, Nakagawa A, Higo T, Hashimoto A, et al. Aktivace -catenin signalizace indukovaná komplementem C1q způsobuje hypertenzní arteriální remodelaci. Nat Commun. 2015;6:6241.

30 od Bruijn MH, Fey GH. Složka lidského komplementu C3: cDNA kódující sekvence a odvozená primární struktura. Proč Natl Acad Sci USA A. 1985 únor;82(3):708–12.

31 Chen L, Fukuda N, Matsumoto T, Abe M. Role komplementu 3 v patogenezi hypertenze. Hypertens Res. 2020 duben; 43(4):255–62.

32 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Cui W, Miwa T a kol. Receptor komplementu 5a zprostředkovává angiotensin II-indukovaný srdeční zánět a remodelaci. Arterioscler Thromb Vasc Biol. června 2014;34(6):1240–8.

33 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Du J. Antagonista C5aR zabraňuje srdeční remodelaci u hypertenze vyvolané angiotensinem II. Am J Hypertens. června 2014;27(6):857–64.

34 Barhoumi T, Kasal DA, Li MW, Shbat L, Lau rant P, Neves MF a kol. T regulační lymfocyty zabraňují angiotensinem II indukované hypertenzi a vaskulárnímu poškození. Hypertenze. březen 2011;57(3):469–76.

35 Chen XH, Ruan CC, Ge Q, Ma Y, Xu JZ, Zhang ZB a kol. Nedostatek receptorů komplementu C3a a C5a zabraňuje hypertenzi indukované angiotensinem II prostřednictvím regulačních T buněk. Circ Res. 30. března 2018;122(7):970–83.

36 Regal JF, Burwick RM, Fleming SD. Systém komplementu a preeklampsie. Curr Hypertens Rep. 2017 Oct 18;19(11):87.

37 Regal JF, Lund JM, Wing CR, Root KM, Mc Cutcheon L, Bemis LT a kol. Interakce mezi komplementovým a endotelinovým systémem v normálním těhotenství a po placentární ischemii. Mol Immunol. říjen 2019;114: 10–8.