Dendritické buňky typu 1 (DC) u onemocnění ledvin

další informace:ali.ma@wecistanche.com

Konvenční dendritické buňky typu 1 (cDC1) u onemocnění lidských ledvin: klinicko-patologické korelace

Titi Chen, Qi Cao a kol.

ABSTRAKTNÍ

Pozadí: Dendritické buňky typu 1(cDC1) je podskupina konvenčních DC, jejichž nejuznávanější funkcí je křížová prezentace CD8 plus T lymfocytům. Tuto studii jsme provedli, abychom prozkoumali počet a umístěníDendritické buňky typu 1(cDC1s) u různých lidíonemocnění ledvinstejně jako jejich korelaci s klinicko-patologickými rysy a CD8 T buňkami.

Metody: Analyzovali jsme 135ledvinavzorky biopsie.Onemocnění ledvinzahrnovaly: akutní tubulární nekrózu (ATN), akutní intersticiální nefritidu (AIN), proliferativní glomerulonefritidu (GN) (IgA nefropatie, lupusová nefritida, pauci-imunitní GN, anti-GBM onemocnění), neproliferativní GN (onemocnění s minimálními změnami, membránová nefropatie ) a diabetická nefropatie. Nepřímé imunofluorescenční barvení bylo použito ke kvantifikaci cDC1 (Dendritické buňky typu 1), CD1ct DC a CD8 plus T buňky.

Výsledek:Dendritické buňky typu 1(cDC1s) byly zřídka přítomny v normálním stavuledviny. Jejich počet se významně zvýšil v ATN a proliferativní GN, proporcionálně mnohem více než CD1ct DC. cDC1s (Dendritické buňky typu 1)byly nalezeny hlavně v intersticiu, kromě lupusové nefritidy, pauci-imunitní GN a anti-GBM onemocnění, kde byly výrazné v glomerulech a periglomerulárních oblastech. Počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)korelovala se závažností onemocnění u ATN, počtem srpků u pauci-imunitní GN, intersticiální fibrózou u lgA nefropatie a lupusovou nefritidou, stejně jako s prognózou u IgA nefropatie. Počet CD8 plus T buněk se také významně zvýšil za těchto podmínek a cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreloval s počtem CD8 plus T-buněk u lupusové nefritidy a pauci-imunitní GN, přičemž mnoho z nich je úzce ko-lokalizovaných. Závěry: cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreloval s různými klinickopatologickými rysy a prognózou odrážející možnou roli v těchto stavech. Jejich spojení s CD8 plus T buňkami naznačuje kombinovaný mechanismus v souladu s výsledky na zvířecích modelech.

ÚVOD

Dendritické buňky(DC) jsou ústředními organizátory účinné imunity. Tyto buňky jsou heterogenní a lze je rozdělit do odlišných podskupin na základě jejich fenotypu a funkce. Dendritické buňky mohou být široce kategorizovány do plazmacytoidních DC (Dendritické buňky)(pDC) a konvenční DC (Dendritické buňky)(cDC).cDC se skládá ze dvou hlavních podskupin: cDC1 (Dendritické buňky typu 1)(CD141* DCs (Dendritické buňky) u lidí a CD103t nebo CD8ot DC u hlodavců) a cDC2 (CD1c DC u lidí a CD1 lbt DC u hlodavců) (1).cDC1 (Dendritické buňky typu 1)byly objeveny nejprve u myší a poté u lidí a jsou charakterizovány svou vynikající schopností fagocytovat nekrotické buňky prostřednictvím receptoru Clec9A spojeného s poškozením (DAMP) a křížově prezentovat CD8 plus T buňky. Na rozdíl od toho jsou cDC2 účinnými aktivátory CD4* T buněk, ale jsou horší při aktivaci CD8t T buněk (2).

DC (Dendritické buňky)byly studovány u člověkanemoc ledvina jejich počet se zvýšil u glomerulonefritidy (GN)(3, 4). Po objevení cDCI ukázaly hromadící se studie na zvířatech, že hrají klíčovou roli vonemocnění ledvin, jako například u adriamycinové nefropatie a srpkovité GN, prostřednictvím interakce s T buňkami (5-8). Takové studie však u člověka chybínemoc ledvin, přičemž pouze jedna studie prokázala zvýšený počet cDC (KonvenčníDendritické buňky)v GN (9). Tuto studii jsme provedli, abychom poskytli analýzu klíčových podskupin cDC, cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a cDC2 u širokého spektra lidíonemocnění ledvinvčetně neglomerulárních onemocnění [akutní tubulární nekróza (ATN), akutní intersticiální nefritida (AIN)], proliferativní GN (IgA nefropatie, lupusová nefritida, pauci-imunitní GN, anti-GBM onemocnění), neproliferativní GN (onemocnění s minimálními změnami ( MCD), membranózní nefropatie) a diabetická nefropatie. Zjistili jsme, že cDC významně koreluje s patologickými rysy včetně závažnosti ATN, tvorby srpku u pauci-imunitní GN a intersticiální fibrózy u imunitně zprostředkované GN. Navíc v souladu s jejich specializovanou schopností aktivovat CD8 plus T buňky u zvířat V těchto vzorcích jsme také prokázali jejich korelaci s CD8t T buňkami. Tato zjištění poskytují impuls k prozkoumání nových terapeutických cílů, které manipulují s těmito buňkami pro léčbuledvinanemocí.

Klikněte na kmen Cistanche pro onemocnění ledvin

MATERIÁLY A METODY

Pacienti a vzorky tkání

Studie byla provedena v souladu se zásadami Helsinské deklarace a byla schválena Etickou komisí lidského výzkumu místní zdravotní oblasti Western Sydney. Byl získán informovaný souhlas pacienta. Analyzovali jsme 176 zmrazených diagnostikledvinabiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 let) mezi 18. červnem 2016 a 30* červnem 2017 ve Westmead Hospital, Sydney, Austrálie.ledvinytkáně byly bleskově zmraženy v OCTcompound (Tissue-Tek Sakura, USA) a skladovány při -80 stupni. Čtyřicet jedna(41) vzorků mělo špatnou kvalitu tkáně a byly ze studie vyloučeny. Základní údaje o pacientech včetně věku, pohlaví, odhadované rychlosti glomerulární filtrace (eGFR) a stupně proteinurie byly shromážděny v doběledvinabiopsie.eGFR byla vypočtena pomocí vzorce CKD-EPI. Diagnózu stanovil renální patolog na základě světla, imunofluorescence (IF) a elektronové mikroskopie a také klinické anamnézy.

Byla analyzována řada onemocnění, včetně neglomerulárních onemocnění (ATN, AIN), proliferativní GN (IgA nefropatie, lupusová nefritida, pauci-imunitní GN, anti-GBM onemocnění), neproliferativní GN (MCD, membranózní nefropatie) a diabetické nefropatie. U ATN jsme zahrnuli pouze neseptické případy, protože septická ATN má odlišnou patofyziologii. ATN byla dále kategorizována na mírné až středně těžké onemocnění (definované jako<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 procent kortikálních tubulů vykazujících poranění). IgA nefropatie byla klasifikována podle Oxford MEST skóre (M mezangiální hypercelularita, E endokapilární hypercelularita, S segmentální glomeruloskleróza, T tubulární atrofie/intersticiální fibróza). Také jsme analyzovali korelaci mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Lupusová nefritida byla dále klasifikována do 2 skupin podle úrovně intersticiální fibrózy.<25%,>=25 procent postižení kortikální intersticiální části). Pauci-imunitní GN byla klasifikována do 2 skupin podle procenta glomerulů se srpky (<40%,>=40 procent).

Jako normálněledvinakontroly, použili jsme 5 normálních ledvinových kůr ze vzorků nefrektomie a také 2 dárceledvinynení vhodný k transplantaci. U nádorových nefrektomií byly vzorky odebírány z pólu opačného k nádoru a alespoň 5 cm od okraje nádoru. Tyto tkáně měly normální makroskopický vzhled. Mikroskopicky nic z toholedvinavzorky měly známky významného glomerulárního nebo tubulointersticiálního zánětu nebo poranění. Použili jsme normální tkáň sleziny dospělého dárce jako pozitivní kontrolu pro testování protilátek.

Imunofluorescenční barvení

Sériové kryostatové řezy byly nařezány na 5 μm a umístěny na sklíčka Superfrost Ultra Plus (Thermo Scientific, USA). Snímky byly uloženy při -80 stupních . Tkáňové řezy byly fixovány 100% methanolem při -20 stupni po dobu 10 minut a poté vysušeny na vzduchu. Nepřímé imunofluorescenční barvení bylo prováděno za použití následující metody: tkáňové řezy byly promyty v DPBS (Lonza, USA) a blokovány 2% bovinním sérovým albuminem (Sigma-Aldrich, USA) po dobu 15 minut; poté byly obarveny primární protilátkou při 4 stupních přes noc a následně sekundárními protilátkami po dobu 40 minut při teplotě místnosti. Tabulka 1 je seznam použitých primárních a sekundárních protilátek a jejich ředění. Jádra byla obarvena pomocí DAPI (1:250,000, ThermoFisher, USA) předtím, než byly vzorky připevněny na krycí sklíčka s fluorescenčním montážním médiem (Dako, USA). Nespecifické barvení a zkřížená reaktivita mezi různými primárními a sekundárními protilátkami byly zkontrolovány a vyloučeny.

TABULKA 1|Primární a sekundární protilátky použité ve studii

cDCI byly identifikovány barvením na marker Clec9A. U lidí je exprese Clec9A vysoce omezena na cDCI v krvi a tkáních (10, 11). Chcete-li to potvrdit vledvinyjsme provedli dvojité barvení Clec9A a HLA-DRB1 a také Clec9A a CD1lc ve vybraných normálních a nemocných stavech. Většina, pokud ne všechny, Clec9A se překrývaly s HLA-DRB1 (doplňkový obrázek 1) a CD1lc (doplňkový obrázek 2).

OBRÁZEK ​​1|Normální ledvina cDC1 (Dendritické buňky typu 1)cDC2 a CD8 plus T buňky.

DC (Dendritické buňky)byly zřídka přítomny v norměledvinya počty cDC2 byly přibližně 7krát větší než počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1). (Sloupec=100 mm).

VÝSLEDEK

Základní charakteristiky pacienta.Základní charakteristiky pacientů v kontrolních a nemocných kohortách jsou shrnuty v tabulce 2. Do studie bylo zahrnuto celkem 135 pacientů.ledvinanemocíbyly analyzovány včetně neglomerulárních onemocnění[ATN (22), AIN (10)], proliferativní GN[gA nefropatie (44), lupusové nefritidy (12), pauci-imunitní GN(12), anti-GBM onemocnění(4)] , neproliferativní GN[MCD(5), membranózní nefropatie(5)] a diabetická nefropatie (21). Ve skupině s lupusovou nefritidou bylo více žen a jejich věk byl ve srovnání s ostatními spíše mladšíledvinanemocí, což je v souladu s literaturou(12). Pacienti s pauci-imunitním GN a anti-GBM onemocněním měli nejnižší eGFR. Hladina proteinurie byla nejvyšší u MCD a membranózní nefropatie.

TABULKA 2|Základní charakteristiky.

Počet a umístění DC (Dendritické buňky)in Control and Disease.cDCI byly zřídka přítomny v normálním stavuledviny(Obrázek 1) a počty cDC2 byly přibližně 7krát větší než počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)Počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)se významně zvýšil v ATN a proliferativní GN (obrázek 2A), zatímco jejich počet zůstal nezměněn ve srovnání s kontrolou u AIN, membránové nefropatie, MCD a diabetické nefropatie (doplňkový obrázek 3). Počet cDC2 se také významně zvýšil v ATN a proliferativní GN (obrázek 2B). Došlo ke snížení cDC2 (Dendritické buňky typu 2)/cDC1 (Dendritické buňky typu 1)poměr udávající cDCI (Dendritické buňky typu 1)zvýšil úměrně více než cDC2 (obrázek 2C).

OBRÁZEK ​​2|Počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a cDC2, poměr cDC2/cDC1 a CD8 plus T buňka u kontrolních a vybraných onemocnění.

P-hodnota se vypočítá pro každé onemocnění versus kontrola. Oba cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a cDC2 se významně zvýšily u ATN, IgA, lupusové nefritidy, pauci-imunitní GN a anti-GBM onemocnění (A, B)

s cDC1 (Dendritické buňky typu 1)se zvýšil proporcionálně více než cDC2 u ATN, lupusové nefritidy, pauci-imunitní GN a anti-GBM onemocnění (C).

CD8 plus T buňky byly významně zvýšeny u ATN, IgA, lupusové nefritidy, pauci-imunitní GN a anti-GBM onemocnění (D).

Většina cDCI se nacházela v intersticiu, s výjimkou lupusové nefritidy, pauci-imunitní GN a anti-GBM onemocnění, kde byly také nalezeny v periglomerulárních a intraglomerulárních oblastech (obrázek 3A). počet CD8t T buněk v periglomerulárních a intraglomerulárních oblastech (obrázek 3A) a mnoho z nich lokalizovaných společně s cDCI (obrázek 3B). Na druhé straně byly cDC2 zřídka nalezeny v intraglomerulárních oblastech a byly minimální společná lokalizace s CD8 plus T buňkami.

OBRÁZEK ​​3|(A) cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a CD8 plus T buňky v intraglomerulárních oblastech. (B) cDC1 společná lokalizace s CD8 plus T buňkami. (Sloupec=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Asociace mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1)S klinicko-patologickými rysy a CD8 plus T buňkami Analyzovali jsme korelaci mezi cDCI (Dendritické buňky typu 1)a klinickopatologické znaky, stejně jako CD8 plus T buňky. Vyskytlo se 22 případů ATN (mírné onemocnění n=12, těžké onemocnění n=10). Závažnější onemocnění bylo spojeno s vyšším počtem cDC1 (Dendritické buňky typu 1)(p=0.032), ale ne cDC2 (obrázek 4A).cDC1 (Dendritické buňky typu 1)vzrostl proporcionálně více než cDC2 (poměr cDC2/cDC1 2,5, p=0,019). Počet CD8 plus T buněk se také významně zvýšil v ATN(p=0,005) (tabulka 3, obrázek 2D). Počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)nekoreloval s počtem CD8* T buněk v ATN.

TABULKA 3|CD8 plus počet T buněk a korelační koeficient mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a počet CD8 plus T buněk v kontrolních a nemocných ledvinách.

Bylo analyzováno 44 případů IgA nefropatie. Při použití skóre MEST podle Oxfordské klasifikace (M mezangiální hypercelulárnost, E endokapilární hypercelularita, S segmentální glomeruloskleróza, T tubulární atrofie/intersticiální fibróza) vyšší počet cDC1 (Dendritické buňky typu 1)bylo spojeno s vyšším skóre T (p=0,008), ale nikoli skóre MES (obrázek 4B). Vyskytlo se 7 případů se srpky a počet cCD1 nebyl spojen s počtem srpků. PočetledvinaCD8* T buňky byly významně vyšší u IgA nefropatie než u kontroly (str<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Dendritické buňky typu 1) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20procentní snížení eGFR. Rozdělení pacientů do 2 skupin podle cDCl (Dendritické buňky typu 1) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), tím vyšší cDC1 (Dendritické buňky typu 1)číselná skupina byla spojena s horšími výsledky (obrázek 4E).

OBRÁZEK ​​4|Korelace mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1)cDC2 a CD8 plus počet T buněk a závažnost onemocnění (A–D).

Kaplan Meierova křivka přežití IgA nefropatie (E). T skóre 0 označuje procento oblasti vykazující tubulární atrofii/intersticiální fibrózu <=25>

T skóre 1 označuje procento plochy vykazující tubulární atrofii/intersticiální fibrózu 26 - 50 procent, T skóre 2 označuje procento plochy vykazující tubulární atrofii/intersticiální fibrózu > 50 procent.

Přežití bylo definováno jako > 20% snížení eGFR do 31. prosince 2019 nebo dříve. NS, nevýznamné.

Vyskytlo se 12 případů lupusové nefritidy. Stejně jako u IgA nefropatie byl vyšší počet cDCI spojen se závažnější fibrózou (p=0.020) (obrázek 4C). Kromě toho se významně zvýšil také počet CD8 plus T buněk (P<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Dendritické buňky typu 1)a CD8t T buňky byly nalezeny v periglomerulárních i intraglomerulárních, což naznačuje, že mohou hrát roli v tomto stavu. Za druhé, u imunitně zprostředkovaného onemocnění spojeného s intersticiální fibrózou (IgA nefropatie a lupusová nefritida) jsme zjistili, že cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreloval se závažností fibrózy, stejně jako s prognózou u IgA nefropatie, zatímco žádná taková korelace nebyla nalezena u neimunitně zprostředkovaného fibrotického onemocnění (diabetická nefropatie). Za třetí, existovala silná korelace mezi počtem cDCI a tvorbou srpku u pauci-imunitního GN a cDCI byly přítomny ve velkém množství v periglomerulárních a intraglomerulárních oblastech, což ukazuje na jejich možnou roli při tvorbě srpku. Za čtvrté, počet cDC1 koreloval s počtem CD8 plus T buněk u lupusové nefritidy a pauci-imunitního GN, s četnými cDCI lokalizovanými společně s CD8 plus T buňkami, což naznačuje jejich možnou interakci. To je v souladu s našimi zjištěními na zvířecích modelechledvinachorobakteré vykazují myší homology cDC1 (Dendritické buňky typu 1)buňky přednostně aktivují CD8t T buňky. Celkově vzato tato zjištění naznačují, že cDCI hraje důležitou roli v celé řaděledvinanemocívčetně ATN, intersticiální fibrózy u imunitně zprostředkovaného onemocnění a tvorby srpku a že mohou potenciálně působit prostřednictvím aktivace CD8t T buněk.

cDC1 (Dendritické buňky typu 1)Číslo korelované se závažností onemocnění v ATN. V neseptické ATN jsme poprvé prokázali výrazně zvýšený počet DC (Dendritické buňky)zejména cDCI ve srovnání s cDC2. Důležité je, že cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreluje se závažností onemocnění. Kromě toho byl také zvýšen počet CD8 plus T buněk. ATN je obvykle způsobena ischemicko-reperfuzním poškozením (IRI), nefrotoxiny nebo sepsí. Tradičně IRI a toxiny způsobují sterilní záněty a vrozená imunita, kde jsou DC a T-buňky méně důležité, byla považována za dominantní roli. Přibývající důkazy ze studií na zvířatech však ukázaly, že cDCI i CD8 plus T buňky jsou důležitými hráči. Předchozí studie na zvířecí IRI a nefrotoxicitě cisplatiny zjistily, že se zvýšil celkový počet DC a T buněk (13-17). Naše předchozí studie ukázaly, že u adriamycinové nefropatie se počty cDCl významně zvýšily (5). U IRI vykazuje podskupina aktivovaných dendritických buněk zvýšenou kapacitu pro křížově přítomný antigen vůči CD8t T buňkám (18). U adriamycinové nefropatie jsme také zjistili, že cDCI vyvolávají CD8 plus T buněčnou odpověď vedoucí k poranění (5). Chybějící korelace mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a CD8* T buňky v lidské ATN na rozdíl od zjištění na zvířecích modelech mohou odrážet různé neimunologické dráhy poškození v lidské ATN ve srovnání s IRI u myších modelů, kde cDCI hrají významnou roli prostřednictvím CD8* T buněk. Kromě toho bylo u hlodavců prokázáno, že cDCl je rekrutován do tkáně chemoatraktantem XCLl produkovaným přirozenými zabíječi (19). Proto by možná stálo za to si to prostudovat dáleledvinachoroba.

cDC1 (Dendritické buňky typu 1)Číslo korelované s Imunitně zprostředkovanou intersticiální fibrózou. Druhým významným zjištěním v této studii je, že počet cDCl koreloval se závažností intersticiální fibrózy spojené s imunitně zprostředkovaným onemocněním (IgA nefropatie a lupusová nefritida), ale nikoli u neimunitně zprostředkovaného fibrotického onemocnění (diabetická nefropatie), jak ukázala Předchozí studie zvýšený počet cDCl a cDC2 u intersticiální fibrózy(9). Poprvé jsme ukázali, že to platí pouze u imunitně zprostředkovaných onemocnění a cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet se zvýšil úměrně více než cDC2. Kromě toho jsme také demonstrovali cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreloval s prognózou a počet CD8* T buněk se také významně zvýšil u IgA nefropatie. To podporují studie na zvířatech ukazující DC (Dendritické buňky)přímo přispívají k fibróze. Například amfiregulin odvozený od DC podporoval fibrózu(20). Je také možné, že cDCI přispěly k fibróze prostřednictvím CD8 plus T buněk, o kterých je známo, že přispívají k fibróze v jiných orgánech (21-23). Protože intersticiální fibróza je spojena s progresí chronickýchledvinachoroba, není překvapením, že jsme našli cDC1 (Dendritické buňky typu 1)jako dobrý prognostický marker u IgA nefropatie. Jiné studie ukázaly, že CD8t T buňky korelují s prognózou IgA nefropatie (24), která může být výsledkem zkřížené prezentace z cDCI. U lupusové nefritidy jsme prokázali korelaci mezi cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet a intersticiální fibróza, stejně jako počet CD8t T buněk. Předchozí studie také ukázaly zvýšeníledvinacDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet u lupusové nefritidy(25), zejména lupusové nefritidy třídy III a VI, s odpovídajícím snížením jejich počtu v oběhu (26). Tato zjištění jsme rozšířili tím, že jsme ukázali, že také korelují s chronickými změnami. Je dobře známo, že intersticiální zánět, který se skládá z T buněk, B buněk, dendritických buněk a makrofágů, má dominantní roli v progresi lupusové nefritidy (27). cDCI mohou přispívat k progresi lupusové nefritidy u různých způsobů. Za prvé, aktivace interferonu hraje klíčovou roli v patogenezi lupusové nefritidy (28-30) a cDCI jsou významným producentem IFN-入.（31）Za druhé, cDC1 (Dendritické buňky typu 1)může přispívat k progresi lupusové nefritidy prostřednictvím CD8t T buněk (32-37) a naše zjištění korelace mezi cDCI a CD8 plus T dále podporuje jejich možnou interakci. Úloha CD8 plus T buněk při lupusové nefritidě byla již dříve prokázána. CD8 plus T buňky kontrolují autoreaktivní imunitu uvolňováním cytotoxických molekul. Bylo zjištěno, že CD8 plus T buňky u lupusové nefritidy mají utlumenou cytotoxickou funkci, která může spustit autoimunitu (38). Kromě toho mohou tyto buňky také generovat autoantigeny lupusu(39). Existuje mnoho důkazů, že CD8* T buňky v obouledvina(32,33) a moč (34-36) korelují s aktivitou onemocnění a histologickým poškozením u lupusové nefritidy. Navíc se ukázalo, že vyčerpání CD8* T-buněk předpovídá příznivou prognózu(37).

cDC1 (Dendritické buňky typu 1)Počet koreluje s počtem půlměsíců v Pauci-Immune GN. U pauci-imunitního GN jsme našli cDCI agregované v periglomerulárních a intraglomerulárních oblastech a jejich počet koreloval s počtem srpků a CD8 plus T buněk. Předchozí studie ukázaly, že DC (Dendritické buňky)jsou vzácně přítomny uvnitř glomerulu(3,4,9) nebo jen ve velmi malém počtu(40). Na druhou stranu T buňky byly prominentní v intersticiu, periglomerulární a intraglomerulární oblasti ({{6} }). Zjistili jsme, že cDCI i CD8* T buňky jsou prominentní v periglomerulárních a intraglomerulárních oblastech, přičemž mnohé z nich jsou lokalizovány společně. Kromě toho cDC1 (Dendritické buňky typu 1)počet koreloval s počtem půlměsíců a CD8 plus T buněk. Všechna tato zjištění naznačují roli cDCI při tvorbě srpku prostřednictvím interakce s CD8* T buňkami. Patogenní role CD8t T buněk v pauci-imunitní tvorbě GN a srpku již byla prokázána na zvířecích modelech (45,46). V souladu s našimi zjištěními u lidí, u zvířat srpkovité GN, cDC1 (Dendritické buňky typu 1)a CD8* T buňky byly nalezeny zejména v periglomerulární oblasti(47,48). Bylo prokázáno, že Bowmanovo pouzdro poskytuje chráněnou imunologickou niku tím, že brání přístupu DC a cytotoxických CD8 plus T buněk do Bowmanova prostoru a tím i podocytů (45,47). Když však bylo porušeno Bowmanovo pouzdro, tyto zánětlivé buňky získaly přístup a zničily podocyty, což mělo za následek rychle progresivní GN(47).

Jedním z omezení této studie je, že technika barvení IF umožňuje použití pouze omezeného počtu markerů. Bylo by prospěšné rozšířit naše poznatky pomocí technologie, jako je průtoková cytometrie, která může kombinovat více markerů pro další analýzu fenotypu těchto DC (Dendritické buňky)a jejich relevantní cytokinové a chemokinové profily. Informace o poloze však budou ztraceny. Další techniky, jako je multiplexní imunohistochemie a Nanostring, mohou být také zváženy v budoucích studiích pro další zkoumání těchto buněkledvinachoroba. Navíc při barvení cDC2 pomocí CD1c, HLA-DRB1 a CD1lc může existovat malé procento B buněk, které také exprimují tyto markery, což nebylo vyloučeno.

ZÁVĚRY

I když cDC1 (Dendritické buňky typu 1)obsahuje menší podmnožinu DC (Dendritické buňky)za homeostatických podmínek tato studie prokazuje významnou korelaci mezi touto buněčnou populací a klinicko-patologickými rysy u lidíledvinachoroba. To odráží jejich pravděpodobnou důležitost v chorobných procesech, jako je ATN, tvorba srpku u proliferativní GN a intersticiální fibróza u imunitně zprostředkované GN. Kromě toho jejich společná lokalizace a korelace s CD8t T buňkami může poskytnout vysvětlení jejich mechanismu účinku, což potvrzuje data ze zvířecích modelů. Tato zjištění poskytují impuls k prozkoumání nových terapeutických cílů, které manipulují s těmito buňkami pro léčbuledvinanemocí, jak jsme to provedli ve studiích na zvířatech(6), a prozkoumat jejich použití jako prognostického markeru. K prozkoumání role cDC1 jsou zapotřebí další studie na lidech i zvířatech (Dendritické buňky typu 1), jejich mechanismus účinku a jak je nejlépe terapeuticky zacílit.

REFERENCE

1. Pakalniskyte D, Schraml BU. Tkáňově specifická diverzita a funkce konvenčních dendritických buněk. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. The Dendritic Cell Lineage: Ontogeny a funkce dendritických buněk a jejich podskupin v ustáleném stavu a v zaníceném stavu. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/annual immunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovici D, et al. Specifická exprese markerů dendritických buněk u lidské glomerulonefritidy.ledvinyInt (2008)74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW, et al. Kvantifikace podskupin dendritických buněk v lidské ledvinové tkáni za normálních a patologických podmínek.ledvinyInt (2007)71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW a kol. Cd103 plus dendritické buňky vyvolávají odezvy Cd8 plus T buněk ke zrychleníledvinyZraněníu Adriamycinové nefropatie. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q a další. Inhibice Flt3 zmírňujeChronickýledvinyChorobapotlačením CD103 plus aktivace T buněk zprostředkované dendritickými buňkami. Transplantace nefrolových čísel(2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C a další Cd103 plusledvinyDendritické buňky chrání před srpkovitým GN udržováním il{0}}produkce regulačních T buněk. J Am Soc Nephrol (2016) 27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Kitching AR, Ooi JD. Renální dendritické buňky: Dlouhá a klikatá cesta. J Am Soc Nephrol (2018)29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Zvýšený tubulointersticiální nábor lidských CD141(hi)CLEC9A(plus) a CD1c(plus)podskupin myeloidních dendritických buněk u renální fibrózy a BledvinyB. Am J Physiol Renal Physiol (2013)305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S, et al. Vysokorozměrná analýza bez dozoru zarovnává dendritické buňky napříč tkáněmi a druhy. Imunita (2016) 45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J, et al. Jednobuněčná RNA-seq odhaluje nové typy lidských krevních dendritických buněk, monocytů a progenitorů. Věda(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Aktualizace o lupusové nefritidě. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Poznámka:výše uvedené není úplný seznam referencí