Funkce Cistanche Pro Ledviny A Diabetes
Mar 11, 2022
Dysfunkce cirkadiánních hodin v ledvinových tubulech vede ke zvýšené glukoneogenezi ledvin a exacerbované hyperglykémii u diabetu
další informace:ali.ma@wecistanche.com
Camille Ansermet1,6, Gabriel Centeno1,6, Yohan Bignon1,6, Daniel Ortiz2,6, Sylvain Pradervand3, Andy Garcia1, Laure Menin2, Frede'ric Gachon1,4, Hikari AI. Yoshihara5 a Dmitri Firsov1
1Katedra biomedicínských věd, Univerzita v Lausanne, Lausanne, Švýcarsko;2Služba hmotnostní spektrometrie, Institut chemických věd a inženýrství, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lausanne, Švýcarsko;3Genomic Technologies Facility, University of Lausanne, Lausanne, Švýcarsko;4Institute for Molecular Bioscience, The University of Queensland, Queensland, Austrálie; a 5Institut fyziky, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lausanne, Švýcarsko
Thecirkadiánní hodinyje všudypřítomný molekulární časový mechanismus, který synchronizuje buněčné, tkáňové a systémové biologické funkce s 24-hodinovými environmentálními cykly. Místní cirkadiánní hodiny řídí rytmy specifické pro buněčný typ a tkáň a jejich dysregulace se podílí na patogenezi a/nebo progresi širokého spektra onemocnění. Avšak patofyziologická role vnitřnícirkadiánní hodinyv ledvinách diabetiků zůstává neznámá. Abychom tuto otázku vyřešili, vyvolali jsme typ Icukrovkase streptozotocinem u myší bez cirkadiánního transkripčního regulátoru BMAL1 v podocytech (myši cKOp) nebo vledvinatubule (myši cKOt). Mezi dysfunkcí cirkadiánních hodin a rozvojem diabetické nefropatie u cKOp a cKOt myší s diabetem nebyla žádná souvislost. Nicméně, cKOt myši scukrovkavykazovaly exacerbovanou hyperglykémii, zvýšenou frakcionaci glukózy v moči, zvýšenou polyurii a výraznější hypertrofii ledvin ve srovnání s kontrolními myšmi léčenými streptozotocinem. Analýza mRNA a proteinové exprese odhalila podstatné posílení glukoneogenní dráhy vledvinycKOt myší s diabetem ve srovnání s diabetickými kontrolními myšmi. Transkriptomická analýza spolu s funkční analýzou cKot myší scukrovkaidentifikovali změny ve více mechanizmech, které přímo nebo nepřímo ovlivňují glukoneogenní dráhu. Tím demonstrujeme tu dysfunkci vnitřníholedvinatrubičkacirkadiánní hodinyzhoršuje diabetickou hyperglykémii zvýšením glukoneogeneze vledvinaproximálního tubulu a dále zdůraznit význam cirkadiánního chování u pacientů scukrovka.
KLÍČOVÁ SLOVA:cirkadiánní hodiny; cukrovka; glukoneogeneze; proximálního tubulu
Klikněte na Cistanche v Urdu a Cistanche pro diabetes
Přechodný Stamement
vcukrovka,ledvinapřispívá k rozvoji diabetické hyperglykémie zvýšením reabsorpce glukózy z primární moči a upregulací glukoneogeneze v proximálním tubulu. Tyto2 procesy jsou však také řízenycirkadiánní hodiny, mechanismus, který synchronizuje různé specifické renální funkce s denními cykly světlo-tma. Zde prokazujeme, že dysfunkce vnitřních cirkadiánních hodin v renálním tubulu může zhoršit diabetickou hyperglykémii prostřednictvím zvýšení renální glukoneogeneze. Tyto výsledky zdůrazňují význam cirkadiánních účinků u diabetických pacientů s potenciálními důsledky pro léčbu glukózy
Diabetesje systémové onemocnění, ve kterém hrají ledviny zvláštní roli. Při cukrovce,ledvinapřispívá k rozvoji diabetické hyperglykémie zvýšením reabsorpce glukózy z primární moči1 a zvýšením produkce glukózy prostřednictvím glukoneogeneze.2,3Nicméně dlouhodobé zvýšení hladiny glukózy v krvi může naopak způsobit diabetickou nefropatii (DN), jednu z nejzávažnějších komplikací diabetes, vyznačující se glomerulárním, tubulárním a vaskulárním poškozením v ledvinách. Ačkoli je metabolický stres primárním faktorem zapojeným do patogeneze a progrese DN, samotná hyperglykémie nevede u většiny diabetických pacientů k torenální insuficienci.4 To naznačuje, že k zahájení může být zapotřebí kombinace s interkurentním onemocněním nebo přítomností environmentálních, genetických nebo epigenetických „druhých zásahů“. a/nebo zrychlená progrese DN. Nedávný výzkum naznačil, že cirkadiánní hodinový mechanismus je na průsečíku několika (pato)fyziologických procesů vledvina.5 Podmíněnécirkadiánní hodinyu různých typů renálních buněk na zvířecích modelech vede k narušení cirkadiánních rytmů inglomerulární filtrace (GFR),6 částečné ztrátě kontroly krevního tlaku,7,8 podstatným změnám v renálních metabolických drahách9,10 a zrychlené progresi chronickénemoc ledvin.11 U lidí je cirkadiánní nesoulad mezi biologickými hodinami a krmením a rytmem aktivity související s prací na směny spojen se sníženou GFR,12 zvýšeným vylučováním albuminu močí,13 nykturií a zvýšenou tvorbou ledvinové moči14 a zvýšeným rizikem chronického onemocnění ledvin.15
Zajímavé je, žecirkadiánní hodinyvledvinařídí nebo je propojen s mnoha buněčnými cestami, které se podílejí na patogenezicukrovkaa/nebo DN. Například vyřazení transkripčního aktivátoru BMAL1 (také nazývaného ARNTL), centrálního prvku cirkadiánního hodinového mechanismu, specifického pro renální tubuly, vede k výraznému zvýšení hladin exprese mRNA kódujících proteiny zapojené do renální glutaminové glukoneogeneze, včetně glutaminových transportérůSNAT3 (SLC38A3), glutamináza (GLS) a glutamátdehydrogenáza 1 (GLUD1).9 Ještě důležitější je, že tyto změny exprese se vyskytují u normoglykemických knockout zvířat. Slominskiet al. prokázali, že protein cirkadiánních hodin PER1 se účastní transkripční regulace glukózového transportéru Sglt1 (Slc5a1) v buňkách proximálního tubulu16 a Ansermetet al. ukázali, že cirkadiánní hodiny v podocytech řídí expresi genu Arhgap24 spojeného s predispozicí k DN u diabetu 1. i 2. typu.6 Ukázalo se, že jak vysoké hladiny glukózy, tak tubulární deficit BMAL1 silně indukují expresi inhibitoru cyklin-dependentní kinázy p21CIP1 (Cdkn1a ), kritický faktor při spouštění buněčné senescence v diabetické ledvině.9,17 Nikotinamidadenin dinukleotid-dependentní deacetyláza sirtuin 1 (SIRT1), jeden z klíčových regulátorů poškození podocytů v DN,18 byl identifikován jako hlavní regulátor energetické zpětnovazební smyčky. v rámci sítě základních hodin.19 Další celulární mechanismus, který spojuje DN scirkadiánní hodinyje savčí cíl rapamycinu, kinázy, která koordinuje buněčný metabolismus s cirkadiánním měřením času20. . Souhrnně tato pozorování naznačují, že poruchy cirkadiánních hodin vledvinamůže ovlivnit rozvoj diabetické hyperglykémie stimulací renální tubulární glukoneogeneze a/nebo reabsorpce glukózy nebo působením jako „druhý zásah“ přispívající k patogenezi DN. K vyřešení těchto hypotéz jsme vytvořili a charakterizovali myši se streptozotocinem (STZ) indukovaným typem Icukrovkaa konkrétní vymazánícirkadiánní hodinykoordinátor Bmal1 v glomerulárních podocytech nebo v renálním tubulu.
Klikněte naCistanche k léčbě onemocnění ledvin
METODY
Zvířata byla chována ad libitum na standardní laboratorní dietě (KLIBA NAFAG dieta 3800). Všechny experimenty byly provedeny na samcích myší.
Modely myší
Inaktivace genu Bmal1 (Arntl) byla indukována 2-týdenním léčením doxycyklinem (DOX; 2 mg/ml v pitné vodě)8-týdenního Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA /LC1 myši (myši cKOp) nebo 8-týdenní myši Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC1 (myši cKOt). Jejich kontroly ze stejného vrhu (myši Bmal1lox/lox) dostaly stejnou léčbu DOX. Oba modely byly již dříve popsány a ověřeny.6,9 Týden po ukončení léčby DOX, typ Icukrovkabyla indukována ip injekcemi STZ (50 mg/kg tělesné hmotnosti [BW]; denně po dobu 5 dnů). Myši ošetřené vehikulem dostaly injekce vehikula fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem. Všechny experimenty byly provedeny 8 týdnů po poslední injekci STZ nebo vehikula. Ve všech experimentech byl proveden odběr tkáně a krve od myší usmrcených v ZT9 (ZT označuje časové jednotky Zeitgeber; ZT0 je doba svícení a ZT12 je doba zhasnutí světla).
Metabolické klece
Myši byly umístěny v individuálních metabolických klecích (Tecniplast). Odběr moči byl prováděn 24 hodin po 4-denním adaptačním období.
Chemie plazmy a moči
Koncentrace a osmolalita Naþ, Kþ, Ca2þ, Mg2þ, fosfátu, kreatininu, glukózy, urátů a močoviny v moči a plazmě byly měřeny Laboratoire de prestations de Chimie Clinique z Centre Hospitalier Universitaire Vaudois. pH moči bylo stanoveno pH metrem (Metrohm). pH krve a krevní plyny byly měřeny na smíšené arteriální-venózní krvi pomocí epického krevního analyzátoru (Siemens Healthcare). Amonium v moči bylo měřeno Berthelotovou metodou. Titrovatelná kyselina v moči byla měřena metodou Chan.25 Plazmatické hladiny aldosteronu byly měřeny radioimunoanalýzou (DPC). Plazmatický inzulín byl stanoven pomocí soupravy od Mercodia
GFR
GFR byla měřena na zvířatech v anestezii inzulin-fluorescein isothiokyanátem, jak bylo popsáno dříve.26
Ip glukózový toleranční test
Po 15 hodinách hladovění byla kontrolním zvířatům ošetřeným vehikulem nebo STZ a cKotmicím ip injikována glukóza (1 g/kg tělesné hmotnosti). Glykemie byla měřena pomocí čtečky glykémie v kapce krve z ocasu (Contour NextOne; Bayer) před (čas ¼ 0) a 15, 30, 60, 90, 120 a 180 minut po injekci glukózy.
Inzulinový toleranční test
Po 4 hodinách omezení potravy bylo kontrolním myším a cKot ošetřeným vehikulem nebo STZ ip injikováno 0,5 U inzulínu (lidský rekombinantní inzulín; Sigma) na kg tělesné hmotnosti. Glykemie byla měřena před injekcí inzulínu (čas ¼ 0) a 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 a 180 minut po injekci inzulínu. Pokud se glykémie snížila pod 2 mM, myši byly zachráněny ip injekcí 30 mg glukózy a byly z analýzy vyloučeny.
RNA sekvenování
Sekvenování RNA bylo provedeno tak, jak je popsáno v Ansermet et al. 6 Byla použita anotace genu Musmusculus GRCm38.92. Počty genů byly škálovány pomocí normalizace TMM a log-transformovány na počty na milion (CPM) pomocí funkce „CPM“ z balíčku R limma. STZ) podmínky a interakce mezi 2. Pro každé ze 3 srovnání byly vybrány geny s mírou falešných objevů (FDR) < 5="" procent="" pro="" analýzu="" obohacení="" genové="" ontologie="" „biologický="" proces“="" s="" „profilem="" klastrů“.28="" termíny="" s="">< 0.01="" were="" considered="" as="" significant="" and="" further="" processed="" with="" the="" function="" "simplify"="" with="" default="" parameters="" to="" remove="">
Statistická analýza
Všechna data jsou vyjádřena jako průměr ± SEM. Statistické testy jsou popsány v legendách obrázků a v doplňkové tabulce S10. P < 0,05="" bylo="" považováno="" za="" významné.="" statistická="" analýza="" byla="" provedena="" pomocí="" softwaru="" graphpad="" prism="" (verze="">
Kapilární Western bloty
Kapilární Western bloty byly provedeny na Univerzitě v Lausanne Protein Analysis Facility (https://www.unil.ch/paf/home/menuinst/technologies/western-in-capillaries.html). Jejich kvantifikaci provedl naslepo technik z tohoto zařízení.
Cistanche může zlepšit funkci ledvin
VÝSLEDEK
Inaktivace Bmal1 v podocytech nevede k indukci DN u myší léčených STZ
Podocytově specifická inaktivace Bmal1 (Arntl) byla indukována 2-týdenním působením DOX (2 mg/ml v pitné vodě) 8-týdenního Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA/ Myši LC1 (dále označované jako myši cKOp).6 Jejich kontroly ze stejného vrhu (myši Bmalllox/lox; dále označované jako kontrolní myši) dostávaly stejnou léčbu DOX. Jak je znázorněno na obrázku la, léčba STZ (viz Metody) vedla k hyperglykémii, která se nelišila mezi kontrolními a cKOp myšmi. BW byla nižší u zvířat ošetřených STZ, ale tento účinek byl podobný u obou genotypů (obrázek 1b). GFR, měřená pomocí clearance isothiokyanátu inzulinu-fluoresceinu, se nelišila mezi kontrolami léčenými STZ a myšmi s cKOp (obrázek 1c). Diabetická zvířata vykazovala glukosurii (obrázek 1d), polyurii (obrázek 1e), proteinurii s nízkou molekulovou hmotností (obrázek lf) a mírnou albuminurii (obrázek 1f). Nebyl však žádný rozdíl v těchto parametrech mezi kontrolou ošetřenou STZ a myší cKOp
Myši bez BMAL1 v renálním tubulu vykazují exacerbovanou hyperglykémii s diabetem
Jak je znázorněno na obrázku 2a, BW se nelišila u diabetických kontrolních myší a myší bez BMAL1 v renálním tubulu (myši Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC19 léčené DOX9; dále označované jako myši cKot). Analýza krevní plazmy odhalila, že hyperglykemie vyvolaná STZ je u cKOt myší exacerbována jak při nasycení, tak nalačno (obrázek 2b a c, v tomto pořadí). koncentrace urátu a aldosteronu se mezi kontrolou léčenou STZ a c Kotmicemi lišily, s výjimkou zvýšených hladin močoviny v plazmě u myší cKOt (doplňková tabulka S1). Hladiny inzulínu v plazmě se nelišily mezi kontrolami ošetřenými STZ a myší nalačno cKot (obrázek 2d). Testy glukózové a inzulínové tolerance hodnocené jako sklon klesající koncentrace glukózy neodhalily signifikantní rozdíly mezi myšmi žádného genotypu v obou léčebných podmínkách (obrázek 2e, resp. f).Diabetes-indukovanýledvinahypertrofie byla výraznější u diabetických cKOt myší než u diabetických kontrol (obrázek 2g). GFR se nelišila mezi myšmi obou genotypů léčených STZ (obrázek 2h). Zvýšení příjmu vody a objemu moči vyvolané STZ bylo výraznější u myší c Kot (obrázek 3a a b), zatímco osmolalita moči se u diabetických myší obou genotypů nelišila (obrázek 3c). Frakční exkrece glukózy byla vyšší a frakční exkrece sodíku byla nižší u cKOtmyší léčených STZ ve srovnání s kontrolami léčenými STZ (obrázek 3d a e), zatímco hodnoty frakční exkrece fosfátu (obrázek 3f), hořčíku (obrázek 3g) a vápníku (obrázek 3h) se mezi diabetickými myšmi obou genotypů nelišily. Kontrolní i cKot myši ošetřené STZ měly podobnou proteinurii s nízkou molekulovou hmotností, ale žádnou albuminurii (doplňkový obrázek S1). Nebyly nalezeny žádné velké histologické rozdíly mezi ledvinami kontrolních myší ošetřených vehikulem nebo STZ a myší cKot (doplňkový obrázek S2).
Obrázek 1|Obecné charakteristiky kontrolních a cKOp myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ). (a) Glykemie nalačno. (b) Tělesná hmotnost (BW). (c) Rychlost glomerulární filtrace (GFR) (clearance inzulínu). (d) Glukóza v moči. (e) Objem moči. (f) Barvení proteinů v moči Coomassie modří. U všech myší bylo 0,3 procenta (obj.) 24-hodinové moči naneseno na gel pro elektroforézu natrium-dodecylsulfát-polyakrylamidový gel. Udává se průměr ± SEM. n=9 v každé skupině, s výjimkou měření GFR, kde n=6 a n{9}} myší bylo použito v kontrolní skupině léčené STZ a ve skupinách cKOp, v daném pořadí. Všechny výsledky byly získány od 19-týdenních zvířat. Byla použita dvoucestná analýza rozptylu s vícenásobným porovnávacím testem Sidak. *P < 0.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" alb,="" albumin="" (65="" kda);="" lmwp,="" nízkomolekulární="">
Obrázek 2|Obecné charakteristiky kontrolních a c Kot myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ). (a) Tělesná hmotnost. n=8 pro kontrolu ošetřenou vehikulem a myši c Kot a n=9 pro kontrolu ošetřenou STZ a myši c Kot. (b) Glykemie nalačno. n ¼ 8 a n=9 pro kontrolu ošetřenou vehikulem a STZ a myši c Kot, v daném pořadí. (c) Glykemie nalačno (16 hodin hladovění). n=9 pro kontrolu ošetřenou vehikulem a myši c Kot a n=7 a n{15}} pro kontrolu ošetřenou STZ a myši c Kot, v daném pořadí. (d) Hladiny inzulínu v kontrolních myších ošetřených vehikulem nebo STZ a c Kot. n=9 an=6 pro kontrolní skupinu léčenou vehikulem a myši c Kot, v daném pořadí, a n=10 a n{23}} pro kontrolní skupinu s injekcí STZ a myši c Kot, v daném pořadí. Plazmatické hladiny inzulínu byly měřeny při ZT18, uprostřed neaktivní fáze. (e) Hladiny glukózy v krvi byly měřeny v průběhu testu glukózotolerance u kontroly ve vehikulu nebo u myší ošetřených STZ a c Kot. n=9 pro kontrolu léčenou vehikulem a myši c Kot a n=7 a n{32}} pro kontrolu léčenou STZ a myši c Kot, v daném pořadí. (f) Hladiny glukózy v krvi byly měřeny v průběhu testu inzulínové tolerance u kontrolních myší ošetřených vehikulem nebo STZ a c Kot. n=5 pro kontrolní myši léčené vehikulem nebo STZ a n{40}} pro myši cKO léčené vehikulem nebo STZ. (G)Diabetes-indukovanýledvinahypertrofie. n{{0}} v každé skupině. Hypertrofie ledvin byla hodnocena vydělením hmotnosti ledvin (KW) tělesnou hmotností (BW). Relativní hodnoty KW/BW pro kontrolu s injekcí STZ a c Kot zvířata byly vypočteny připsáním 1{{10}}}0 procenta odpovídající skupina s injekčním vehikulem. (h) Rychlost glomerulární filtrace (GFR) (clearance inzulínu). n=5 a n=6 pro kontrolu ošetřenou STZ a myši c Kot, v daném pořadí. Udává se průměr ± SEM. Byla použita dvoucestná analýza rozptylu s testem vícenásobného porovnání Sidak. *P < 0,05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p=""><>
Exacerbovaná hyperglykémie u cKOt myší koreluje se zvýšenou expresí glukoneogenních enzymů v ledvinách
Abychom identifikovali molekulární dráhy spojené s exacerbovanou hyperglykémií u myší cKOt léčených STZ, provedli jsme analýzu sekvenování RNAledvinatranskriptomy následované analýzou obohacení celé transkriptomové dráhy a specifickými analýzami RNA kódujících proteiny zapojené do renální glukoneogeneze a renální reabsorpce glukózy. Porovnání transkriptomů odhalilo 1833 transkriptů odlišně exprimovaných mezi kontrolami léčenými vehikulem a STZ (doplňková tabulka S2; FDR < 5="" procent),="" 1784="" transkriptů="" diferencovaně="" exprimovaných="" mezi="" myšími="" ckot="" léčenými="" vehikulem="" a="" stz="" (doplňková="" tabulka="" s3;="" mezi="" kontrolou="" ošetřenou="" vehikulem="" a="" myší="" c="" kot="" (doplňková="" tabulka="" s4;="">< 5%),="" and="" 2667="" transcripts="" differentially="" expressed="" between="" stz-treated="" control="" and="" c="" kot="" mice="" (supplementary="" table="" s5;="" fdr="" <="" 5%).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" differentially="" expressed="" transcripts="" revealed="" enrichment="" of="" pathways="" related="" to="" lipid,="" amino="" acid,="" and="" carboxylic="" acid="" metabolism,="" and="" organic="" anion="" transport="" between="" control="" and="" cko="" mice="" in="" both="" vehicle="" and="" stz="" treatment="" groups="" (figure="" 4a="" and="" b,="" respectively,="" and="" supplementary="" tables="" s6="" and="" s7,="" respectively).="" a="" total="" of="" 284="" transcripts="" exhibited="" genotype-by="" treatment="" interaction="" effects="" (supplementary="" table="" s8;="" fdr="" <="" 5%),="" including="" glud1="" and="" g6pc="" transcripts="" encoding="" enzymes="" involved="" in="" renal="" gluconeogenesis="" (see="" below).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" transcripts="" with="" significant="" interaction="" showed="" enrichment="" of="" only="" a="" limited="" number="" of="" pathways,="" mainly="" related="" to="" lipid="" metabolism="" and="" organic="" anion="" transport="" (figure="" 4c="" and="" supplementary="" table="" s9).="" among="" the="" genes="" encoding="" transporters="" involved="" in="" glucose="" reabsorption="" in="" the="" proximal="" tubule="" (sglt1,="" sglt2,="" glut1,="" and="" glut2),="" only="" glut1="" (slc2a1)="" displayed="" higher="" expression="" in="">ledvinydiabetických cKOt myší ve srovnání s diabetickými kontrolami (doplňková tabulka S5).
Obrázek 3|Charakteristiky příjmu vody a moči u kontrolních a c Kot myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ). (a) 24-hodinový příjem vody. n=8 pro kontrolní myši léčené vehikulem nebo myši cKOt a n=9 pro kontrolní myši léčené STZ nebo myši cKOt. (b) 24-hodinový objem moči. n=8 pro kontrolní myši léčené vehikulem nebo myši cKOt a n=9 pro kontrolní myši léčené STZ nebo myši cKOt. (c) Osmolalita moči. n=8 pro kontrolní myši léčené vehikulem, n=7 pro myši c Kot léčené vehikulem a n=9 pro kontrolní myši léčené STZ nebo myši cKOt. (d) Frakční vylučování (Fe) glukózy. n=8 kontrolních myší ošetřených vehikulem nebo cKOt myší a n=9 kontrolních myší ošetřených STZ nebo cKOt myší. (e) Fe sodíku. n=8 pro kontrolní myši léčené vehikulem, n=7 pro myši c Kot léčené vehikulem a n=9 pro kontrolní myši léčené STZ nebo myši cKOt. (f) Fe fosforečnanu. n=8 pro kontrolní myši ošetřené vehikulem, n{31}} pro myši cKOt ošetřené vehikulem, n=8 pro kontrolní myši ošetřené STZ a n=9 pro myši ošetřené STZ cKOt myši. (g) Fe hořčíku. n=8 kontrolních myší ošetřených vehikulem, n=7 myší c Kot ošetřených vehikulem a n=9 kontrolních myší ošetřených STZ nebo cKOt myší. (h) Fe vápníku. n=8 kontrolních myší ošetřených vehikulem, n=7 myší c Kot ošetřených vehikulem a n=9 kontrolních myší ošetřených STZ nebo myší cKOt. Znamená, že je dán SEM. Byla použita dvoucestná analýza rozptylu s testem vícenásobného porovnání Sidak. *P < {{50}}.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" bw,="" tělesná="">
2 hlavní glukoneogenní prekurzory vledvinaarelaktát a glutamin.29 Jak je znázorněno na obrázku 4d ae a v doplňkové tabulce S5, hladiny exprese proteinů kódujících transkripty zapojené do renální glukoneogeneze glutaminu (Snat3, Gls a Glud1) byly zvýšeny v ledvinách cKOt myší léčených STZ ve srovnání s kontrolami léčenými STZ Naopak exprese mRNA kódující glutamát amonnou ligázu (Gull), která obrací GLS-řízený počáteční krok glutaminolýzy, byla snížena. Podobně hladiny exprese mRNA kódujících 2 enzymy ve společné části glukoneogenní dráhy (jmenovitě fosfoenolpyruvátkarboxykináza [Pck1] a glukóza-6-fosfatáza [G6pc]) byly vyšší u cKOtmyší léčených STZ. Vyšší exprese GLUD1 a PCK1 v ledvinách diabetických myší cKOt byla potvrzena na úrovni proteinu kapilárním Western blotem (obrázek 4f a doplňkový obrázek S3). V játrech diabetických myší se hladina exprese GLUD1 mezi kontrolními a c Kot myšmi nelišila a exprese PCK1 byla nižší u c Kot myší (doplňkový obrázek S4). Je třeba poznamenat, že úrovně exprese Glud1, Snat3, fruktózy-1,6-bifosfátu 2 (Fbp2) a Glut1 byly vyšší a úrovně exprese Glul, Fbp1 a Glut2 byly nižší vledvinycKOt myší ošetřených vehikulem ve srovnání s kontrolami ošetřenými vehikulem.
Obrázek 4|Genová ontologie (GO) Analýza obohacení "Biologický proces". (a) GO analýza transkriptů odlišně vyjádřených vledvinykontrola ošetřená vehikulem a myši c Kot. (b) GO analýza transkriptů odlišně exprimovaných v ledvinách kontrolních ac Kot myší ošetřených streptozotocinem (STZ). (c) GO analýza transkriptů vykazujících účinek interakce genotyp od léčby. Bodové grafy pro první 2 0 nejvýznamnější výrazy (hodnota Q < 0.01).="" nadbytečné="" výrazy="" byly="" filtrovány.="" generace="" představuje="" zlomek="" významných="" genů="" označených="" zobrazeným="" termínem.="" velikost="" tečky="" představuje="" počet="" významných="" genů="" anotovaných="" zobrazeným="" termínem.="" n="6" za="" podmínku.="" (d)="" grafy="" složených="" změn="" pro="" enzymy="" kódující="" transkripty="" a="" transkripty="" zapojené="" do="" renální="" glukoneogeneze.="" hodnoty="" úrovně="" exprese="" byly="" extrahovány="" z="" doplňkových="" tabulek="" s2,="" s3,="" s4="" a="" s5.="" *p="">< 0,05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" (e)="" schematické="" znázornění="" buněk="" proximálního="" tubulu="" s="" hlavními="" proteiny/enzymy="" zapojenými="" do="" procesu="" renální="" glukoneogeneze.="" červeně:="" p="" hodnoty="" pro="" rozdílnou="" expresi="" mezi="" stz-léčenou="" kontrolou="" a="" c="" kot="" myší.="" modře:="" p="" hodnoty="" pro="" diferenciální="" expresi="" mezi="" kontrolou="" ošetřenou="" vehikulem="" a="" myší="" c="" kot.="" červené="" a="" modré="" šipky="" označují="" zvýšenou="" ([)="" nebo="" sníženou="" (y)="" expresi="" inckot="" myší.="" (f)="" kvantitativní="" analýza="" kapilárních="" western="" blotů="" pro="" glutamátdehydrogenázu="" (glud1)="" a="" fosfoenolpyruvátkarboxykinázu="" (pck1;="" doplňkové="" obrázky="" s2="" a="" s3,="" v="" tomto="" pořadí)="">ledvinyz fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku – nebo kontroly ošetřené STZ a myší c Kot (n=6 stav). Byla použita dvoucestná analýza rozptylu s testem vícenásobného porovnání Sidak. *P < 0.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" au,="" libovolná="" jednotka;fbp1/2,="" fruktóza-1,6-bifosfatáza="" 1/2;="" g6pc,="" glukózo-6-fosfatáza;="" gls,="" glutamináza;="" glul,="" glutamin="" syntetáza;="" glut2,="" přenašeč="" glukózy2;="" nhe3,="" výměník="" sodík-vodík="" 3;="" p="" upravit,="" p="" upravit;="" pc,="" pyruvátkarboxyláza;="" snat3,="" přenašeč="" glutaminu;="" tca,="">
V ledvinách diabetických myší se mění mnoho mechanismů přímo nebo nepřímo ovlivňujících glukoneogenní dráhu
Glukonogenní dráha vledvinalze ovlivnit tímcirkadiánní hodinybuď přímo, prostřednictvím transkripční, translační nebo posttranslační kontroly proteinů zapojených do renální glukoneogeneze, nebo nepřímo, ovlivněním jiných renálních mechanismů, které jsou vnitřně spojeny s produkcí glukózy v proximálním tubulu. Transkripční faktory, koaktivátory a korepresory, které řídí transkripci glukoneogenních enzymů, byly částečně charakterizovány v játrech, ledvinách a dalších tkáních. Obrázky 5a a b shrnují změny v hladinách exprese transkriptů kódujících známé transkripční regulátory glukoneogeneze vledvinyofcontrol a cKOt myši (viz také doplňkové tabulky S4 a S5). Mezi analyzovanými transkripty ty kódující receptor d aktivovaný peroxisomovým proliferátorem (PPARd) a kryptochromy 1 a 2 vykazovaly podstatné zvýšení, zatímco nukleární receptor NR1D1 (také známý jako REV-Erba) byl podstatně snížen v ledvinách cKOt myší ve vozidlech i STZ- léčených zvířat ve srovnání s kontrolami se stejnou léčbou. Exprese peroxisomeproliferatorem aktivovaného receptoru g koaktivátoru 1-a (Pgc1a, Ppargc1a) byla zvýšena u cKOt myší léčených STZ ve srovnání s kontrolami léčenými STZ a exprese glukokortikoidního receptoru (Gr, Nr3c1) byla snížena u cKOtmicí léčených vehikulem ve srovnání s kontrolami ošetřenými vehikulem. Exprese proteinu forkhead O box (Foxo1), hepatocytárního nukleárního faktoru 4a (Hnf4a), cyklického adenosinmonofosfátového responzivního elementu vázajícího proteinu (Creb1), Para, Sirt1, CREB-vazebného proteinu (Cbp, Crebbp), CREB-regulovaného transkripčního koaktivátoru 2 (Crtc2), a histondeacetyláza 3 (Hdac3) nebyla ovlivněna léčbou nebo genotypem
Obrázek 5|(a) Grafy složených změn pro transkripty kódující transkripční faktory, koaktivátory a korepresory, které řídí transkripci glukoneogenních enzymů u kontrolních a cKOt myší ošetřených vehikulem a streptozotocinem (STZ). Hodnoty úrovně exprese byly extrahovány z doplňkových tabulek S2, S3, S4 a S5. *P < 0.{{10}}5,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" (b)="" schematické="" znázornění="" dat="" uvedených="" na="" obrázku="" 5a.="" červeně:="" p="" hodnoty="" pro="" rozdílnou="" expresi="" mezi="" stz-léčenou="" kontrolou="" a="" ckot="" myšmi.="" modře:="" p="" hodnoty="" pro="" rozdílnou="" expresi="" mezi="" kontrolou="" ošetřenou="" vehikulem="" a="" myší="" ckot.="" červené="" a="" modré="" šipky="" označují="" zvýšenou="" ([)="" nebo="" sníženou="" (y)="" expresi="" u="" ckot="" myší.="" au,libovolná="" jednotka;="" cbp,="" xxx;="" creb1,="" xxx;="" crtc2,="" xxx;="" cry1,="" xxx;="" cry2,="" xxx;="" foxo1,="" xxx;="" g6pc,="" xxx;="" gr,="" xxx;="" hdac3,="" xxx;="" hnf4a,="" xxx;="" nrld1,="" xxx;="" pck1,="" xxx;="" ppara,="" xxx;="" pparg,="" xxx;="" sirt1,="">
Protože acidóza je hlavním nepřímým stimulem pro renální glukoneogenezi, měřili jsme pH krve a moči, krevní plyny, vylučování amoniaku močí (NH3/NH4þ) a titrovatelnou aciditu. Jak je ukázáno na obrázku 6, pH krve bylo vyšší u cKOt myší ošetřených vehikulem ve srovnání s kontrolami ošetřenými vehikulem, ale nelišilo se mezi diabetickými myšmi obou genotypů. Bikarbonát v plazmě byl nižší u diabetických kontrol ve srovnání s kontrolami léčenými vehikulem; byl však nalezen rozdíl v plazmatickém bikarbonátu mezi diabetickými kontrolními a cKOt myšmi. Přebytek plazmatické báze a pH moči nebyly ovlivněny léčbou ani genotypem. Myši cKOt léčené STZ však vylučovaly zvýšené množství amoniaku a titrovatelné kyselosti ve srovnání s kontrolami léčenými STZ. Analýza transkriptů kódujících proteiny podílející se na manipulaci s kyselinou ledvinovou odhalila sníženou expresi sodíkového vodíkového výměníku NHE3 (Slc9a3; viz obrázek 4d a e) a aniontoměničem AE1 (Slc4a1) a zvýšenou expresí karboanhydrázy II (Car2) a b1 podjednotky Hþ-ATPázy (Atp6v1b1). Nebyl však pozorován žádný rozdíl v hladinách exprese chlorid-protonového antiporteru Clcn5, podjednotky b2 Hþ-ATPázy (Atp6v1b2), transportéru amoniaku Rhcg, kotransportéru hydrogenuhličitanu sodného NBCE1 (Slc4a4), na sodíku závislého chlorid-bikarbonátového výměníku NDCBE(Slc4a) aniontoměnič pendrin (Pds, Slc26a4) indiabetické myši cKOt ve srovnání s diabetickými kontrolami (doplňková tabulka S5). Je třeba poznamenat, že hladiny exprese Nhe3 byly nižší v ledvinách myší cKOt ošetřených vehikulem ve srovnání s kontrolami ošetřenými vehikulem (obrázek 4d a doplňková tabulka S4).
DISKUSE
Je dobře známo, že dysfunkcecirkadiánní hodinyMechanismus nebo nesoulad mezi biologickými hodinami a sociálními a environmentálními podněty způsobenými (např. prací na směny) závislostí na počítači/internetu, častým jetlagem nebo poruchami spánku jsou hlavními rizikovými faktory pro patogenezi a/nebo progresi řady chronických onemocnění. Nicméně příspěvek tkáňových lokálních cirkadiánních hodin versus systémové cirkadiánní podněty ke specifickým patofyziologickým procesům nebyl široce prozkoumán. Předpokládali jsme, že poruchy vnitřních renálních cirkadiánních hodin mohou přispívat k rozvoji DN a/nebo diabetické hyperglykémie. K testování těchto hypotéz jsme použili 2 myší modely (tj. myši cKOp a cKOt) vyvinuté na genetickém pozadí C57BL/6, o kterém je známo, že je relativně odolný vůči DN. V obou modelech nevedl nedostatek BMAL1 u diabetických stavů k další albuminurii nebo rozdílu v GFR, což jsou 2 hlavní znaky onemocnění. To buď naznačuje, že transgenní myši na pozadí C57BL/6 nemusí být vhodným modelem pro studium hypotézy "druhého zásahu" u DN, nebo že patogeneze a/nebo progrese DN jsou více ovlivněny systémovými cirkadiánními poruchami spíše než vnitřními renálními cirkadiánními hodinami. Testování hypotézy o interakci mezi diabetickou hyperglykémií a vlastní ledvinoucirkadiánní hodinyodhalili zvýšenou renální tubulární glukoneogenní dráhu a exacerbovanou hyperglykémii u diabetických cKOt myší. Analýzy exprese mRNA a proteinů ukázaly, že jak glukoneogeneze glutaminu, tak běžná část glukoneogenní dráhy jsou ve srovnání s diabetickými kontrolami u indiabetických myší cKOt zesíleny. Toto pozorování naznačilo, že oba hlavní glukoneogenní substráty vledvina(tj. glutamin a laktát) by mohly přispět ke zhoršení hyperglykémie u cKOt myší.
Obrázek 6|pH plazmy, hydrogenuhličitan plazmy, přebytek plazmatické báze, pH moči, 24-hodinová titrační acidita moči (TA) a vylučování amonia u kontrolních myší a myší s cKOt léčených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ). n ¼ 6–9. Byla použita dvoucestná analýza rozptylu s testem vícenásobného porovnávání Sidak. *P < 0.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p=""><>
ledvinyglukoneogeneze se v posledních letech stala předmětem zvýšeného zájmu kvůli potenciálně důležité úloze glukózy produkované v renálním tubulu jak v systémové metabolické rovnováze, tak při onemocnění ledvin (přezkoumáno dříve2,30). Ledviny tvoří 40 procent celkové tělesné produkce glukózy de novo u lidí nalačno přes noc.29cukrovkaJak játra, tak ledviny zvyšují syntézu glukózy, ale relativní zvýšení renální glukoneogeneze je mnohem silnější než v játrech. Studie na játrech ukázaly, žecirkadiánní hodinymůže vícenásobně ovlivnit jaterní glukoneogenezicirkadiánní hodiny- řízené buněčné mechanismy. Zhang a kol. prokázali, že cirkadiánní represory kryptochromů 1 a 2 inhibují expresi glukoneogenních enzymů blokováním cykladenosinmonofosfát-dependentní aktivace CREB1.31Li et al. prokázali, že NR1D1, který tvoří kritickou negativní větev v základních cirkadiánních hodinách, potlačuje transkripci Pck1 a G6pc.32 Jak se očekávalo pro cirkadiánní hodinové geny u Bmal1 knockout myší,33 naše výsledky prokázaly silnou upregulaci transkriptů Cry1/Cry2 a silnou regulaci Přepis Nr1d1 vledvinydiabetických cKOtmycí ve srovnání s diabetickými kontrolami. Tyto protichůdné výsledky mohou naznačovat tkáňovou specifitu regulace glukoneogeneze elementy jádrových hodin. Zajímavě,ledvinyu diabetických myší cKOt vykazovala silnou indukci Ppard, o kterém bylo prokázáno, že dramaticky stimuluje expresi Pck1 ve svalu.34 Konečně, exprese mRNA kódující PGC1a, kritického koaktivátoru FoxO1, transkripčního faktoru, který řídí expresi glukoneogenních enzymů v ledvinách a játrech, byla zvýšena v ledvinách diabetických cKOtmycí. Souhrnně analýza renálních transkriptomů odhalila, že diabetické cKOt myši vykazují podstatné změny v několika buněčných drahách zapojených do kontroly glukoneogeneze vledvinaa/nebo jiné tkáně.
Posouzení potenciálních mechanismů, jejichž prostřednictvímcirkadiánníhodinymůže ovlivnit glukoneogenní dráhu u diabetikůledvinaodhalili několik rysů kompenzovaného acidobazického stavu krve, včetně zvýšeného vylučování amonia močí a titrovatelné acidity. Tato pozorování se srovnávala s transkriptomickými údaji, které prokázaly snížení hladin exprese transkriptu kódujícího NHE3, atransportéru, který hraje klíčovou roli v acidobazické manipulaci v proximálních tubulech, spolu s potenciálně kompenzačním zvýšením exprese genu kódujícího Atp6v1b1 podjednotku HþATPázy zapojené do sekrece Hþ distální nefron. Přímá kontrola exprese Nhe3 cirkadiánními hodinami byla prokázána na úrovni transkripce16 i exprese proteinu.35 Intracelulární acidifikace v důsledku snížené exprese NHE3 by tedy mohla být považována za možnou příčinu zvýšené glukoneogeneze v buňkách proximálních tubulů myší cKOt. Tyto výsledky jsou paralelní s nálezy Onishi et al.,36 kteří prokázali, že tubulární vyřazení NHE3 má za následek zvýšenou expresi glukoneogenních enzymů v ledvinách. Posílení rychlosti omezující společné části glukoneogenní dráhy (Pck1 a G6pc) u diabetických myší cKOt může dále zhoršit intracelulární acidifikaci prostřednictvím posílení glukoneogeneze glutaminu, metabolického procesu, který vytváří vodíkové ionty. Zajímavé je, že exprese Nhe3, Glul, Glud1 a Snat3, stejně jako několika transkripčních kódujících transkripčních faktorů, koaktivátorů nebo korepresorů, které řídí transkripci glukoneogenních enzymů (Gr, Ppard, Nr1d1, Cry1 a Cry2), byla modifikována podobným způsobem v STZ- a vehikulem ošetřené myši cKOt. To naznačuje, že renální glukoneogeneze je také zvýšena u myší cKOt léčených vehikulem. V nediabetických stavech by nepřítomnost hyperglykémie incKOt myší mohla být věrohodně vysvětlena zvýšeným metabolismem této nadměrně syntetizované glukózy všemi tkáněmi metabolizujícími glukózu, včetněledvina.
Jaký je význam těchto zjištění pro patogenezi?cukrovkau lidí? Je dobře známo, že stravovací rytmus hraje důležitou roli ve strhávání periferních cirkadiánních hodin.37 Složky potravy (např. vysoký obsah soli,38 nízkosacharidové a vysokoproteinové diety39 a ketogenní dieta40) a parakrinní/autokrinní faktory řízené příjmem potravy (např. , kortikosteroidy41) mají silný vliv na cirkadiánní rytmy vledvina. Několik hlavních skupin populace je pravidelně nebo neustále vystaveno posunu nebo neuspořádanému příjmu potravy. Například až 20 až 25 procent severoamerických a evropských zaměstnanců vykonává práci na směny, což je spojeno se změněným stravovacím vzorcem.42 Druhou rychle rostoucí skupinou s postiženým dietním chováním jsou těžce závislí na internetu, kteří podle současných odhadů představují 6 Prokázalo se, že také některé léky (např. cisplatina46) významně zhoršují renální cirkadiánní rytmy. Lze tedy spekulovat, že u podstatné části diabetických pacientů se může hyperglykémie dále zhoršit v důsledku dysregulace cirkadiánních hodin v periferních tkáních, včetně vnitřníchcirkadiánní hodiny. V tomto smyslu velký počet studií prokázal silnou souvislost mezi prací na směny a rizikem rozvoje diabetu (přezkoumáno dříve47). Naše výsledky společně poskytují nové molekulární spojení mezi cirkadiánním systémem a patofyziologiícukrovka.
Cistanche může zabránit onemocnění ledvin
ZVEŘEJNĚNÍ
Všichni autoři deklarovali žádné konkurenční zájmy.
PODĚKOVÁNÍ
Tato práce byla podpořena výzkumným grantem Swiss National Science Foundation 310030-188499 (do DF) Část této práce byla předložena jako abstrakt na výroční zasedání Americké nefrologické společnosti v roce 2021.
AUTORSKÉ PŘÍSPĚVKY
HAIRY, FG a DF navrhly studii; CA, GC, DO, YB a AG prováděné experimenty; CA, GC, DO, SP, LM a HAIY analyzovaly data; CA a HAIY vytvořili čísla; DF a HAIY napsali rukopis. Všichni autoři schválili konečnou verzi rukopisu.
DOPLŇKOVÝ MATERIÁL
Doplňkový soubor (PDF)
Obrázek S1. Barvení močových proteinů Coomassie modří z kontrolních a cKOt myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ).
Obrázek S2. (A) Massonovo barvení trichromemledvinařezy z kontrolních myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ) a myší cKOt. (B) Barvení řezů ledvin z kontrolních a cKOt myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ) podle Schiffa (PAS).
Obrázek S3. Kapilární Western blot analýza exprese glutamátdehydrogenázy 1 (GLUD1; A) a fosfoenolpyruvátkarboxykinázy (PCK1; B) vledvinykontrolních a cKOt myší ošetřených vehikulem-orstreptozotocinem (STZ).
Obrázek S4. Kapilární Western blot analýza exprese glutamátdehydrogenázy 1 (GLUD1; A) a fosfoenolpyruvátkarboxykinázy (PCK1; B) v játrech kontrolních a cKOt myší ošetřených vehikulem nebo streptozotocinem (STZ).
Tabulka S1. Plazmatická chemie u kontrolních myší a myší cKOt s injekčním vehikulem nebo streptozotocinem (STZ). Doplňkové soubory (Excel)
Tabulka S2. Transkriptom: kontrolní streptozotocin (STZ) versus kontrolní fyziologický roztok pufrovaný fosfátem (PBS).
Tabulka S3. Transkriptom: knockout (KO) streptozotocin (STZ) versus KO fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS).
Tabulka S4. Transkriptom: knockout (KO) fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS) versus kontrolní PBS.
Tabulka S5. Transkriptom: knockout (KO) streptozotocin (STZ) versus kontrolní STZ.
Tabulka S6. Obohacení genové ontologie (GO) pro knockoutovaný (KO)fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS) versus kontrolní PBS.
Tabulka S7. Obohacení genové ontologie (GO) pro knockout (KO)streptozotocin (STZ) versus kontrolní STZ.
Tabulka S8. Transkriptom: interakce genotyp od léčby.
Tabulka S9. Obohacení genové ontologie (GO) pro interakci.
Tabulka S10. Statistika.
REFERENCE
1. Vallon V. Transportéry glukózy vledvinave zdraví a nemoci.Pflugers Arch. 2020;472:1345–1370.
2. Gerich JE. Role ledvin při normální homeostáze glukózy a při hyperglykémiicukrovkamellitus: terapeutické důsledky. DiabetMed. 2010;27:136–142.
3. Mithieux G, Gautier-Stein A, Rajas F a kol. Příspěvek střeva a ledvin k tokům glukózy v různém nutričním stavu u potkanů. CompBiochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2006;143:195–200.
4. Gheith O, Farouk N, Nampoory N, et al. Diabetické onemocnění ledvin: celosvětový rozdíl v prevalenci a rizikových faktorech. J Ethnopharmacol. 2016;5:49–56.
5. Firsov D, Bonny O. Cirkadiánní rytmy a ledviny. Nat Rev Nephrol.2018;14:626–635.
6. Ansermet C, Centeno G, Nikolaeva S, a kol. Vnitřnícirkadiánní hodinyinpodocyty řídí rychlost glomerulární filtrace. Sci Rep. 2019;9:16089.
7. Stow LR, Richards J, Cheng KY, et al. Cirkadiánní proteinová perioda 1 přispívá ke kontrole krevního tlaku a koordinovaně reguluje transportní geny renálního sodíku. Hypertenze. 2012;59:1151–1156.
8. Zuber AM, Centeno G, Pradervand S, a kol. Molekulární hodiny se podílejí na prediktivní cirkadiánní úpravě renálních funkcí. Proč Natl Acad Sci U SA. 2009;106:16523–16528.
9. Nikolaeva S, Ansermet C, Centeno G, a kol. Nefronově specifická delece genu cirkadiánních hodin Bmal1 mění plazmatický a renální metabolom a zhoršuje dispozici léku. J Am Soc Nephrol.2016;27:2997–3004.
10. Tokonami N, Mordasini D, Pradervand S, et al. Lokální renálnícirkadiánní hodinykontrolovat homeostázu tekutin a elektrolytů a TK. J Am Soc Nephrol. 2014;25:1430–1439.
11. Motohashi H, Tahara Y, Whittaker DS, et al. U myší s adeninem indukovanou tubulointersticiální nefropatií jsou cirkadiánní hodiny narušeny.ledvinyInt. 2020;97:728–740.
12. Charles LE, Gu JK, Fekedulegn D, et al. Souvislost mezi směnným provozem a mírou glomerulární filtrace u policistů. J Occup Environ Med.2013;55:1323–1328.
13. Boogaard PJ, Cabo ME. Zvýšené vylučování albuminu u průmyslových pracovníků v důsledku směny práce spíše než dlouhodobého vystavení nízkým koncentracím chlorovaných uhlovodíků. Occup Environ Med.1994;51:638–641.
14. Kim SJ, Kim JW, Cho YS a kol. Vliv cirkadiánního narušení spojeného s umělým osvětlením v noci na mikční vzorce u pracovníků na směny. IntNeurorourol J. 2019;23:258–264.
15. Uhm JY, Kim HR, Kang GH a kol. Souvislost mezi prací na směny a chronickým onemocněním ledvin u manuálně pracujících pracovníků pomocí údajů z korejského národního průzkumu zdraví a výživy (KNHANES2011-2014). Ann Occup Environ Med. 2018;30:69.
16. Solocinski K, Richards J, All S, et al. Transkripční regulace NHE3 a SGLT1 pomocícirkadiánní hodinyprotein Per1 v buňkách proximálního tubulu.Am J Physiol Renální Physiol. 2015;309:F933–F942.
17. Wolf G. Regulace buněčného cyklu u diabetické nefropatie. Kidney Int Suppl.2000;77:S59–S66.
18. Papadimitriou A, Silva KC, Peixoto EB, et al. Theobromin zvyšuje aktivitu NAD(þ)/Sirt{1}} a chrání ledviny při diabetických stavech. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F209–F225.
19. Perlis M, Ramsey KM, Bass J. Molekulární hodiny jsou metabolický reostat. Diabetes Obes Metab. 2015;17(suppl 1):99–105.
20. Ramanathan C, Kathale ND, Liu D, et al. Signalizace mTOR reguluje centrální a periferní zařízenícirkadiánní hodinyfunkce. PLoS Genet. 2018;14:e1007369.
21. Sakaguchi M, Isono M, Isshiki K, et al. Inhibice signalizace mTOR pomocí rapamycinu zmírňuje renální hypertrofii u časných diabetických myší. Biochem Biophys Res Commun. 2006;340:296–301.
22. Godel M, Hartleben B, Herbach N, et al. Role mTOR ve funkci podocytů a diabetické nefropatii u lidí a myší. J Clin Invest.2011;121:2197–2209.
23. Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, a kol. Endoteliální buňky a podocyteautofagie synergicky chrání předcukrovka- indukovaná glomeruloskleróza. Autofagie. 2015;11:1130–1145.
24. Lu Q, Zhou Y, Hao M a kol. mTOR podporuje apoptózu mesangiálních buněk indukovanou oxidativním stresem u diabetické nefropatie. Mol Cell Endocrinol.2018;473:31–43.
25. Chan JC. Rychlé stanovení titrovatelné kyseliny a amonia v moči a vyhodnocení zmrazení jako způsobu konzervace. ClinBiochem. 1972;5:94–98.
26. Eisner C, Faulhaber-Walter R, Wang Y, et al. Hlavní příspěvek tubulární sekrece k clearance kreatininu u myší. Kidney Int. 2010;77:519–526.
27. Ritchie ME, Phipson B, Wu D a kol. limma umožňuje diferenciální expresní analýzy pro sekvenování RNA a mikročipové studie. Nucleic Acids Res.2015;43:e47.
28. Yu G, Wang LG, Han Y a kol. cluster profile: R balíček pro porovnávání biologických témat mezi genovými clustery. Omics. 2012;16:284–287.
29. Gerich JE, Meyer C, Woerle HJ a kol. Renální glukoneogeneze: její význam pro homeostázu glukózy u člověka.DiabetesPéče. 2001;24:382–391.
30. Legouis D, Faivre A, Cippà PE, et al. Renální glukoneogeneze: podceňovaná roleledvinav systémovém metabolismu glukózy [e pub before print]. Transplantace nefrolového číselníku. Publikováno online 28. listopadu 2020. https://doi.org/10.1093/ndt/gfaa302.
31. Zhang EE, Liu Y, Dentin R, a kol. Kryptochrom zprostředkovává cirkadiánní regulaci cAMP signalizace a jaterní glukoneogenezi. Nat Med.2010;16:1152–1156.
32. Li X, Xu M, Wang F a kol. Interakce ApoA-IV s NR4A1 a NR1D1 potlačuje transkripci G6Pázy a PEPCK: nukleárním receptorem zprostředkovaná downregulace jaterní glukoneogeneze u myší a buněčné linie lidských hepatocytů. PLoS One. 2015;10:e0142098.
33. Weger BD, Gobet C, David FPA a kol. Systematická analýza diferenciální rytmické jaterní genové exprese zprostředkované cirkadiánními hodinami a krmnými rytmy. Proč Natl Acad Sci US A.2021;118:e2015803118.
34. Fan W, Waizenegger W, Lin CS, a kol. PPARd podporuje běžeckou vytrvalost tím, že uchovává glukózu. Cell Metab. 2017;25:1186–1193.e1184.
35. Saifur Rohman M, Emoto N, Nonaka H, et al.Cirkadiánní hodinygeny přímo regulují expresi Na(þ)/H(þ) výměníku NHE3 v ledvinách. Kidney Int. 2005;67:1410–1419.
36. Onishi A, Fu Y, Darshi M, et al. Účinek specifického knockdownu renálního tubulu výměníku Na(þ)/H(þ) NHE3 u diabetických myší Akita. Am J Physiol. Renální Physiol. 2019;317:F419–F434.
37. Schibler U, Ripperger J, Brown SA. Periferní cirkadiánní oscilátory savců: čas a potrava. J Biol Rhythms. 2003;18:250–260.
38. Speed JS, Hyndman KA, Roth K, et al. Vysoký obsah sodíku v potravě způsobuje dyssynchronii renálních molekulárních hodin u potkanů. Am J Physiol RenalPhysiol. 2018;314:F89–F98.
39. Oishi K, Uchida D, Itoh N. Nízkosacharidová strava s vysokým obsahem bílkovin ovlivňuje rytmickou expresi genů glukoneogenních regulačních a cirkadiánních hodin v periferních tkáních myší. Chronobiol Int.2012;29:799–809.
40. Oishi K, Uchida D, Ohkura N, et al. Ketogenní dieta narušujecirkadiánní hodinya zvyšuje hypofibrinolytické riziko indukcí exprese inhibitoru aktivátoru plazminogenu-1. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2009;29:1571–1577.
41. Sugino M, Furukawa K, Koinuma S, et al. Diferenciální strhávání periferních hodin u potkanů glukokortikoidem a krmením. Endokrinologie.2012;153:2277–2286.
42. Souza RV, Sarmento RA, de Almeida JC, et al. Vliv práce na směny na stravovací návyky: systematický přehled. Scand J Pracovní prostředí Zdraví. 2019;45:7–21.
43. Kim Y, Park JY, Kim SB a kol. Účinky závislosti na internetu na životní styl a dietní chování korejských adolescentů. Nutr Res Pract.2010;4:51–57.
44. Canales MT, Holzworth M, Bozorgmehri S, et al. Exprese hodinového genu je u veteránů se spánkovou apnoe změněna. Physiol Genomics. 2019;51:77–82.
45. Egstrand S, Olgaard K, Lewin E. Cirkadiánní rytmy metabolismu minerálů při chronickém onemocnění ledvin-porucha minerálních kostí. Curr Opin NephrolHypertens. 2020;29:367–377.
46. Cao BB, Li D, Xing X a kol. Účinek cisplatiny na expresi hodinových genů v játrech, srdci aledvina. Biochem Biophys Res Commun.2018;501:593–597.
47. Schilperoort M, Rensen PCN, Kooijman S. Čas na nové strategie ke zmírnění kardiometabolického rizika u pracovníků na směny. Trendy Endocrinol Metab.2020;31:952–964.