Změny v antioxidační aktivitě během fermentace enzymu

Kapitola 4 Změny v antioxidační aktivitě během fermentace enzymu

Ovoce jsou bohaté na živiny a přicházejí v mnoha odrůdách. Produkce látek během fermentace je složitá a rozmanitá a existuje mnoho studií jejichAntioxidační aktivita. Lidé vždy zkoumají a objevují a hledají potraviny, které jsou prospěšnélidské zdraví„Enzymy se v posledních letech staly horkým tématem. Tradičním procesem produkce enzymů je získat enzymy přirozenou fermentací ovoce a zeleniny. Na základě předchozího výzkumu tento článek přidává 4 prospěšné fermentační bakterie. Tato bakterie sama o sobě také existuje v enzymu. Po dalším přidání bakterií se změní počet a typ mikroorganismů v procesu fermentace. Jaký vliv bude mít tato změna na jeho antioxidační aktivitu? V předchozí kapitole jsme vzali jablka jako příklad pro podrobné vysvětlení. Porovnání antioxidační aktivity experimentální skupiny a kontrolní skupiny při různých koncentracích enzymu ukázala, že antioxidační aktivita enzymu v experimentální skupině byla větší než aktivita kontrolní skupiny. Intenzita antioxidační aktivity také odráží spolehlivost enzymu určitým způsobem.

Nové byliny cistanche se silnou antioxidační silou

 

Podpůrná služba Wecistanche-největšího vývozce Cistanche v Číně:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

Tato kapitola přidává do původního experimentu běžné ovoce a citrus a sleduje a detekuje změny v jejichAntioxidační aktivitaběhem fermentace. Na základě snižování nákladů v experimentech doufáme, že po přidání bakterií komplexně odráží biologickou aktivitu enzymů a poskytneme určitou teoretickou základnu a podporu dat pro výrobu mikrobiálních enzymů By Umělá inokulace kmenů.

 

 

 

4.1 Materiály a metody

4.1.1 Materiály

(1) Experimentální materiály

Umyjte čerstvá jablka, hrušky a citrusové plody sterilní vodou za sterilních podmínek, přirozeně je vysušte na sterilním operačním stole, loupá je a nakrájejte je pro pozdější použití. Přidejte bílý cukr a ovoce do sterilizované skleněné nádoby při hmotnostním poměru 1: 1. Aktivujte bakterie potřebné pro experiment a naočoute je do enzymu podle optimálního schématu (tento operační krok je vynechán pro kontrolní skupinu), utěsněte je a umístěte na chladné a suché místo. Vezměte vzorky v různých časových obdobích fermentace při pokojové teplotě, abyste získali veškerou enzymatickou kapalinu obsahující ovocnou buničinu a filtrují ji. Vezměte supernatant jako experimentální vzorek a použijte jej k měření relevantních dat po jeho odstředění na 10, 000 RPM ve vysokorychlostní odstředivce po dobu 15 minut. Stojí za zmínku, že v procesu výroby enzymů, aby se zabránilo zbytečné kontaminaci, jsou všechny naše operace prováděny za sterilních podmínek.

(2) Hlavní nástroje

Nástroje potřebné pro experiment jsou stejné jako 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metody

(1) Změny v celkovém obsahu fenolu během fermentace

450 μl roztoku vzorku bylo přidáno s destilovanou vodou, aby se objemový objem 46 ml, a poté bylo přidáno 1 ml činidla folin-fenolu. Dobře promíchejte a reagujte po dobu 3 minut. Poté bylo přidáno 3 ml 20% NACO3. Směs byla otřesena ve vodní lázni konstantní teplotě po 25 stupňů po dobu 2 hodin. Destilovaná voda byla použita jako prázdná kontrola. Absorbance A byla měřena při 760 nm pomocí spektrofotometru. Pro každé ošetření byly provedeny tři replikáty. Celkový obsah fenolu byl vypočítán podle standardní rovnice křivky.

(2) Změny snížení energie během fermentace

Add 450μL of sample to 2.5mL of phosphate buffer with a concentration of 0.2mol/L and a pH value of 6.6, then add 2.5mL of potassium ferricyanide (w/v) with a mass concentration of 1%, react at 50 degree for 30 minutes, add 2.5mL of trichloroacetic acid (hm./obj.) S hmotnostní koncentrací 10%, odstředivka při 3000 ot/min po dobu 10 minut, vyjměte a okamžitě nakreslete 2,5 ml supernatantu do objemové baňky, přidejte 2,5 ml destilované vody a 0,5 ml chloridu (hm./obj.) S hmotnostní koncentrací 0,1%. Použijte destilovanou vodu jako prázdné ovládání a měřte absorbanci A při vlnové délce 700 nm se spektrofotometrem. Proveďte 3 replikáty pro každé ošetření. Síla redukční síly je stanovena na základě hodnoty absorbance.

 

(3) Změny ve schopnosti vychytávání radikálů superoxidu během fermentace
Umístěte 4,5 ml 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8,2 Tris-HCl vyrovnávací paměti v konstantní teplotní vodní lázni a upravit teplotu na 25 stupňů. Po 20 minutách přidejte 1 ml roztoku vzorku enzymu a 0,4 ml roztoku pyrogallolu s molární koncentrací 25 mmol/l. Dobře promíchejte a umístěte do 25 stupňové vodní lázně po dobu 5 minut. Přidejte 1,0 ml 8 mol/l HCl pro ukončení reakce. Použijte vyrovnávací paměť Tris-HCI jako reference a pro výpočet rychlosti vychytávání použijte spektrofotometr k měření absorbance A při 299 nm. Skupina Blank Control Group používá místo vzorku 1 ml rozpouštědla. Rychlost vychytávání radikálu superoxidového aniontu se vypočítá podle vzorce 4.1: rychlost vychytávání radikálů superoxidu (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (4.1) Kde: A1 je absorbance prázdné kontrolní skupiny; A2 je absorbance roztoku enzymu vzorku experimentální skupiny.

 

(4) Změny schopnosti vychytávání radikálů hydroxylu během fermentace

 

Přidejte vodu na 45 0 μl vzorku do 2 ml, poté jej přidejte do 1,4 ml peroxidu vodíku s koncentrací molární hmoty 6 mm/l, poté přidejte 0,6 ml salicylátu sodné s molární hmotou koncentraci 37 mm/l a 2ml ferózního sulfátu s molárnou hmotností 1,5 mmol, a na 37 míry na 37 míry na 37 míry na 37 mm na 37 míry na 37 mm na 37 míry na 37 míry na 37 mm na 37 míry, na 37 mm, na 37 míry, na 37 mly. 1H. Nula s destilovanou vodou a měřte absorbanci A při vlnové délce 562nm se spektrofotometrem. Pro každé ošetření byly provedeny tři replikáty. Rychlost vychytávání hydroxylu byla vypočtena podle vzorce 4.2: Hydroxyl Radical Scavenging rychlost (%)=[(A 1- a2)/A1] × 100 (4.2), kde: A1 je průměrná absorbance prázdného; A2 je průměrná absorbance roztoku vzorku.

 

(5) Změny schopnosti vychytávání volných radikálů DPPH během fermentace
Přesně přeneste 2 ml roztoku vzorku enzymu na 1 0 ML Volumetrická baňka, poté přidejte 2 ml 80% DPPH ethanolového vodného roztoku do objemové baňky, s molární koncentrací 2 x 10-4 mol/l. Dobře promíchejte a nechte stát při pokojové teplotě po dobu 30 minut. Vezměte 80% roztok ethanolu jako odkaz a měřte absorbanci vzorku při vlnové délce 517 nm, což je zaznamenáno jako A1. Smíchejte 2 ml roztoku DPPH a 2 ml 80% roztoku ethanolu a změřte jejich absorbanci na stejné vlnové délce, která je zaznamenána jako A0. Smíchejte 2 ml enzymového roztoku a 2 ml 80% roztoku ethanolu a změřte jejich absorbanci na stejné vlnové délce, která je zaznamenána jako A2. Pro každé ošetření byly provedeny tři replikáty. Vypočítejte rychlost vychytávání volných radikálů DPPH podle vzorce 4.3:
Rychlost vychytávání volných radikálů (%) {{0}} [1- (A 1- a2)/A 0] × 100 (4.3) Kde: A1 je průměrná absorbance 2 Ml dpph aqueous aqueous roztoku; A2 je absorbance 2 ml enzymového roztoku a 2 ml 80% ethanolového smíšeného roztoku; A0 je absorbance 2 ml roztoku DPPH a 2 ml 80% ethanolového smíšeného roztoku.

(6) Změny schopnosti vychytávání volných radikálů ABTS během fermentace
8 μl roztoku vzorku byl doplněn na 10 ul fosfátovým pufrem (5 mmol/l pH 7,4) a pak se rovnoměrně smíchán s 10 ml síranu draselného a ABTS smíšený roztok pro reakci při reakční teplotě 30 stupňů a reakční dobou 5 minut. Nulu je roztok destilovanou vodou a měří absorbance A při vlnové délce 734 nm pomocí spektrofotometru. Pro každé ošetření byly provedeny tři replikáty. Míra vychytávání volných radikálů ABTS byla vypočtena podle vzorce 4.4:
ABTS Free Radical Scaveng Rychlost (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.4), kde: A1 je absorbance kontrolní skupiny Blank; A2 je absorbance experimentální skupiny vzorku.