Účinky Cistanche glykosidů na imunitní funkci D-galaktózou indukovaných myší modelu stárnutí

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

〔Abstrakt〕 Cíl:

Studovat imunologický mechanismus anti-aging účinku glykosidů Cistanche na D-galaktózou indukovaných stárnoucích myších.Metody: Metoda začlenění 3 H-TdR byla použita k určení schopnosti transformace lymfocytů, neutrální červený test byl použit k určení fagocytární funkce myších peritoneálních makrofágů, imunofluorescenční metoda byla použita k detekci podskupin lymfocytů a radioimunoanalýza byla použita k určení hladiny IL-2 v periferní krvi. , Metoda uvolňování enzymů Trace NAG pro měření aktivity NK buněk.Výsledky: Imunitní funkce stárnoucích myší indukovaných D-galaktózou byla významně snížena, což se projevilo schopností transformace lymfocytů, obsahem IL-2 v periferní krvi, obsahem CD4+ T buněk a CD8+ T buněk, fagocytární funkcí peritoneálních makrofágů a aktivitou NK buněk. Snížení (P<>cistanche glykosidumůže zlepšit schopnost transformace lymfocytů, obsah IL-2 v periferní krvi, fagocytární funkci peritoneálních makrofágů, aktivitu NK buněk, obsah CD4 + T a CD8 + T buněk (P<0.05). 0.="" 05).="">Závěr: cistanche glykosidu může významně zvýšit imunitní funkci stárnoucích myší indukovaných D-galaktózou, obnovit nebo se přiblížit stavu mladých myší a mít vliv na zpoždění stárnutí.

[Klíčová slova]:Cistanche celkové glykosidy; D-galaktóza; model stárnutí; Imunita

Cistanche glykosidu:proti stárnutí

Cistancheje nejčastěji používaným lékem ve vzorcích proti stárnutí a dlouhověkosti. Cistanche celkové glykosidy (GCS) je obecný termín pro třídu fenylethanoidních glykosidů v cistanche a je hlavní biologickou aktivitou extrahovanou z cistanche produkujícího sůl v severní složce Xinjiang [1], GCS bylo prokázáno, že má anti-lipidový peroxidační účinek [2], ale existuje jen málo výzkumných zpráv o jehoimunitní mechanismus proti stárnutí.

1. Materiály a metody

1. 1 Seskupení zvířat a medicína

60 myší Kunming, samci a samice, ve věku 3 měsíců, o hmotnosti 18-21 g, poskytované místností pro zvířata Ústavu biologických produktů Ministerstva zdravotnictví. Myši v každé skupině byly umístěny ve stejné místnosti v oddělených klecích a mohly jíst a pít. Zvířata byla náhodně rozdělena do tří skupin: kontrolní skupina mládeže, skupina modelů stárnutí a skupina modelové správy s 20 zvířaty v každé skupině. GCS byl extrahován a identifikován katedrou fytochemie, Farmaceutická škola, Jiamusi University podle literatury [1].

Zlepšení imunityCistanche doplněk

1.2 Metoda

Mladé skupině byla injekčně podána normální fyziologický roztok subkutánně do krku po dobu 30 dnů každý den a byla jí podávána teplá voda po dobu 15 dnů od 15. dne. Myším ve skupině stárnoucích modelů byla každý den injekčně podávána D-galaktóza (autoklávovaná) 100 mg/kg subkutánně na zadní straně krku. Tělesná hmotnost po dobu 30 po sobě jdoucích dnů. Ve skupině s modelovým podáním byla D-galaktóza 100 mg/kg tělesné hmotnosti injikována subkutánně na zadní stranu krku každý den a GCS 125 mg·kg-1·d-1 byla podávána současně od 15. dne a podávání bylo podáváno nepřetržitě po dobu 15 dnů. Všechna zvířata byla obětována ve stejnou dobu 30. dne a byly stanoveny různé pozorovací indexy.

1. 2. 1 Experiment s transformací lymfocytů

Suspenze myších slezinných buněk byla upravena na koncentraci buněk 2×106 a Con A byl použit jako podnět pro kultivaci in vitro po dobu 5 dnů a jeho transformační schopnost byla testována metodou začlenění 3 H-Td R. Výsledky jsou vyjádřeny jako stimulační index SI (SI = ConA stimulační skupina/kontrolní skupina).

1. 2. 2 Myší peritoneální makrofág fagocytární funkce (neutrální červený test [3])

Sbírejte peritoneální tekutinu myšimakrofágsuspenze asepticky. Po centrifugaci se sraženina vznáší v médiu buněčné kultury. Pomocí hemocytometru spočítejte a upravte buněčnou koncentraci roztoku na 2×106. Umístěte jej na 2 hodiny do inkubátoru o teplotě 37 °C. , Zlikvidujte supernatantní a nepřilnavé buňky. Vezměte stěnové makrofágy a přidejte 0,1% neutrálního červeného fyziologického fyziologického roztoku na 37 °C a pokračujte v kultivaci po dobu 30 minut, vyřaďte neutrální červenou a opakovaně promyjte makrofágy 37 °C PBS, zředte 50% kyselinou octovou a 50% ethanolem, nastavte 722 Spektrofotometr kolorimetricky na vlnové délce 540 nm, naměřená hodnota absorbance A.

1. 2. 3 Detekce podskupin lymfocytů

Vezměte 0,1 ml 1×107/mlsuspenze lymfocytů, přidejte 10 μl myších anti-myší CD3, CD4 a CD8 monoklonálních protilátek, dobře promíchejte, inkubujte při 4 °C po dobu 30 minut, 1% FC S v PBS (0. 2M, pH7,4) Promyjte 3krát, detekce průtokové cytometrie: laserový průtokový cytometr (FACScan, společnost USA BD), argonový laser, excitační vlnová délka 488 nm, detekční spektrum FITC 480 ~ 630 nm, počet buněk 800 / s, Celkem 200 000 buněk. Výsledky byly analyzovány a zaznamenány pomocí počítače HP340 a profesionálního softwaru LYSI SII.

1. 2. 4 Stanovení IL-2 v periferní krvi radioimunologickou zkouškou

Vezměte 1 ml krve z očních bulvů myši ve zkumavce. Po koagulaci se sérum oddělí. Podle provozu soupravy se číslo CPM měří na počítadle.

1. 2. 5 Aktivita NK buněk

Vezměte krev myšího oka asepticky a přidejte heparin pro antikoagulaci. Podrobnosti naleznete v literatuře [4]. 1.3 Statistické zpracování Experimentální data jsou vyjádřena jako x±s, zpracována softwarem S AS a analyzována analýzou rozptylu, F testem a t-testem.

přínos cistanche: Zlepšení imunity

2. výsledky

2.1 Účinky GCS na transformační schopnost lymfocytů a podskupin T buněk v každé skupině myší jsou uvedeny v tabulce 1.

Tabulka 1. Vliv GCS na transformační schopnost lymfocytů a podskupin T buněk v každé skupině myší (n = 16,x±s)

Ve srovnání s I.: 1) P<0.05, 2)="" p.="" 05;="" compared="" with="" ⅱ:="" 2)="" p=""><0.05; the="" same="" as="" the="" table="">

2.2 Účinky EK na fagocytární funkci, obsah IL-2 a aktivitu NK buněk peritoneálních makrofágů v každé skupině myší jsou uvedeny v tabulce 2.

Tabulka 2. Vliv GCS na fagocytární funkci, aktivitu NK buněk a obsah IL-2 peritoneálních makrofágů u každé skupiny myší (n = 16,x±s)

3. Diskuse

V tomto experimentu byla snížena fagocytární funkce peritoneálních makrofágů a aktivita NK buněk stárnoucích myší (P<0.05). gcs="" can="" increase="" the="" phagocytic="" function="" and="" nk="" cell="" activity="" of="" peritoneal="" macrophages="" in="" aging="" model="" mice=""><0.05), which="" is="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" from="" this,="" it="" can="" be="" inferred="" that="" gcs="" can="">zlepšit nespecifickou buněčnou imunitu a imunitní regulační funkce tělaazvýšit Protinádorové a protiinfekčnístárnoucího těla je jedním ze způsobů, jak oddálit stárnutí [4]. IL-2 je nepostradatelným cytokinem pro proliferaci a diferenciaci T lymfocytů a může regulovat funkce lymfocytů, monocytů-makrofágů a NK buněk. IL-2 může podporovat proliferaci a diferenciaci T lymfocytů, regulovatimunitní odpověď, indukují aktivitu Tc a podporují tvorbu protilátek a interferon-α.Hraje důležitou roli v imunitním systému. V tomto experimentu se obsah IL-2 u stárnoucích modelových myší snížil (P<0.05). after="" gcs="" were="" given,="" the="" il-2="" content="" increased=""><0.05), which="" was="" close="" to="" the="" youth="" model="" group,="" indicating="" that="" gcs="" produced="" il="" by="" increasing="" t="" lymphocytes.="" -2,="" enhance="" the="" immune="" function="" of="" elderly="" mice="" and="" achieve="" the="" effect="" of="" delaying="" immune="" aging.="" the="" content="" of="" cd4+="" t="" cells="" and="" cd8+="" t="" cells="" decreased="" significantly="" with="" increasing="" age.="" the="" low="" t="" cell="" function="" was="" also="" manifested="" by="" the="" decline="" of="" specific="" antigen="" and="" mitogen="" con="" a,="" and="" the="" decline="" of="" the="" ability="" of="" t="" cells="" to="" divide="" repeatedly.="" in="" this="" experimental="" model,="" the="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4+="" t="" cell="" and="" cd8+="" t="" cell="" content="" of="" the="" mouse="" was="" reduced="" (p=""><0.05), and="" gcs="" increased="" the="" mouse="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4="" +="" t="" cell="" and="" cd8="" +="" t="" cell="" content="" (p=""><0.05). 05),="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" it="" shows="" that="" gcs="" can="" make="" the="" body="" resist="" aging="" and="" tend="" to="" be="" younger="" by="" promoting="" the="" proliferation="" of="" lymphocytes="" and="">zlepšení specifické buněčné imunitní funkce myší.

Zlepšení imunity cistanche doplněk

4. Odkazy

1. Du Niansheng, Wang Hong. Izolace a identifikace fenoxyethanolových glykosidů z Cistanche [J]. Výzkum a vývoj přírodních produktů, 1993; 5(4): 7-8.

2. Li Linlin, Wang Xiaowen, Wang Xuefei, et al. Antilipidové peroxidační a antiradiační účinky celkových glykosidů Cistanche 〔J〕. Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1997; 22(6): 364-367.

3. Xu Shuyun, Bian Rulian. Experimentální farmakologická metodologie [M]. 2. vydání. Peking: Nakladatelství lidového zdraví, 1994: 1221.

4. Liu Xiongbo, Liu Caiyu, Yang Xiuyun, et al. Detekce aktivity NK buněk metodou uvolňování mikro-NAG [J]. Journal of Clinical Laboratory Science, 1996; 14(2): 66-67.