Účinky Cistanche na změny ATPázy v jaterních mitochondriích u septikemických potkanů

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Gang Wang Zhiqiang Yin

Abstrakt: Cíl:Studovat změnuATPázová aktivita jaterních mitochondrií při sepsia účinekCistanchena to.Metody:40 SD potkanů ​​bylo náhodně rozděleno do skupiny s falešnou operací, 12-hodinové kontrolní skupiny, 12-hodinové administrační skupiny, 16-hodinové kontrolní skupiny a 16-hodinové administrační skupiny. Thesepsemodel byl replikován ligací a perforací slepého střeva (C LP) a porovnán. Míra přežití skupiny, střední arteriální tlak (MAP), játramitochondriální ATPázazměny aktivity.Výsledek:Poté, co krysy replikovaly model sepse,ATPázačinnost jatermitochondriepoklesla a 24-hodinová míra přežití se významně snížila. TheATPázaaktivita jaterních mitochondrií po podáníCistanchese významně zlepšila ve srovnání s kontrolní skupinou (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Závěr:Snížení mitochondriíAktivita ATPázy při sepsi, přetížení buněk vápníkem a edém a nekróza jsou přímými příčinami smrti vseptické krysy. Cistanche zvyšuje aktivitu ATPázyje důležitým mechanismem pro léčbusepse.

klíčová slova: Cistanche, cistanche sepse mitochondrie ATP enzym

Sepseje klinicky kritické onemocnění. Přestože byla antibiotika v posledních 30 letech aktualizována, úmrtnost na sepse se významně nesnížila a stále dosahuje až 50 procent [1]. Samotná západní antibakteriální léčba „eliminující zlo“ nezlepšuje prognózusepse.Sepse patří v patogenezi TČM mezi „spravedlnost nedostatku a zla“, léčba musí být založena na principu „posilování těla“ a „odstranění zla“. Tradiční čínská medicína prokázala velký potenciál v léčbě sepse.Sepsekomplikované multiorgánovým selháním je hlavní příčinou vysoké úmrtnosti a poškození buněčné struktury je mikroskopickým patologickým podkladem multiorgánového selhání [2]. Cistanche je tradiční čínská medicína pro tonikum, prokázaly to moderní farmakologické studieCistanchepůsobí tak, že odolává peroxidaci membránových esterů a chrání funkci buněk [3]. Funkcemitochondriální energiemetabolismus je jednou ze základních funkcí buněk a činnostíATPázaje důležitým ukazatelem pro měření funkcemitochondriální energiemetabolismus. V tomto experimentu jsme pozorovali změnyATPázačinnost jaterních buněk vseptické krysya vztah mezi účinkyCistancheo ní a úmrtnosti krys a jejím cílem bylo poskytnout teoretický základ a účinný průzkum pro klinickou „posilující“ léčbusepse.

Cistanche

1. Materiály a metody

1.1 Reagencie

Cistanchebyl zakoupen od Xinjiang (identifikován profesorem Tan Defu z Lékařské fakulty univerzity ve třech soutěskách). Odebralo se 200 g sušeného Cistanche a dvakrát se odvařilo v destilované vodě. Filtrát byl odpařen a zahuštěn na koncentraci 1 g/ml. Pentobarbital sodný (001104), China National Pharmaceutical Group Shanghai ChemicalČinidloSpolečnost;ATPázové činidlo(20030108), Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute.

1.2 Experimentální zvířecí model a seskupení

40 samců potkanů ​​SD (zakoupeno v Experimentálním zvířecím centru Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology) bylo náhodně rozděleno do 5 skupin: skupina s falešnou operací (n=8), 12-hodinová kontrola skupina (n=8), 12-hodinová administrační skupina (n=8), 16-hodinová kontrolní skupina (n=8), 16-hodina administrativní skupina (n=8). Skupině s předstíranou operací a kontrolní skupině byl podáván žaludeční sondou normální fyziologický roztok a skupině, které byla podávána, byl podáván 1 g/ml Cistanche dvakrát denně po dobu až 15 dnů. Themodel sepsebyla replikována ligací a perforací slepého střeva [4]. Před operací měla zvířata možnost pít vodu a 12 hodin hladovět.

1.3 Stanovení středního arteriálního tlaku

Jugulární žíla byla zavedena skalpovou jehlou, k antikoagulaci byl použit heparin, levá společná krkavice byla kanylována do aortálního oblouku a vlastnoručně vyrobený katétr byl připojen k biologickému vícekanálovému nástroji.arteriální tlak(MAP). Experimentujte poté, co se MAP stabilizuje.

1.4 Stanovení mitochondriální aktivity ATPázy

Vezměte 6 g krysích jater a rychle je vložte do 0stupňového separačního média [250mmol sacharózy, 2mmol ethoxy-ethylpiperazin 2-ethylsulfonové kyseliny, 0,1mmol kyseliny ethylendiamintetraoctové, pH 7,4], otevřete ji a smyjte nečistoty, oddělte suspenzi média (1:10), zhomogenizujte teflonovým elektrickým homogenizátorem (1200 ot./min.), odstřeďujte při 2000 ot./min. po dobu 10 minut, ponechejte supernatant, odstřeďte při 10 000 ot. /min po dobu 15 minut, odstraňte supernatant, vezměte sraženinu a suspendujte ji ve 2 ml separačního média, abyste získalimitochondriální suspenze. Celý proces se provádí při 0 až 4 stupních. K měření byla použita metoda stanovení fosforu [5]Aktivita ATPázy(sada byla zakoupena od Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering).

1.5 Statistické zpracování

Experimentální data jsou všechna vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (X ± S) a software SPSS provádí jednosměrnou analýzu rozptylu a korelační analýzu.

Extrakt z cistanche

2. výsledky

2.1 Účinek Cistanche na střední arteriální tlak a 24-hodinovou mortalitu potkanů

Krevní tlak kontrolní skupiny významně poklesl za 12 hodin po podvázání a perforaci slepého střeva a stal se zřetelnějším po 16 hodinách. Ve srovnání se skupinou s předstíranými operacemi byl významný rozdíl. Krevní tlakLéčba cistancheskupina se zlepšila. Úmrtnost kontrolní skupiny byla významně vyšší než u skupiny s předstíranou operací a úmrtnost skupiny, které byla podávána, byla významně nižší než u odpovídající kontrolní skupiny.

2.2 Účinek Cistanche na mitochondriální aktivitu ATPázy

ČinnostiATPáza sodno-draselná, ATPáza vápenatá, ATPáza hořčíku a ATPáza vápenato-hořčíkováve skupině s podáváním byly významně vyšší než u odpovídající kontrolní skupiny a dosáhly úrovně skupiny s falešnou operací, což významně pozitivně korelovalo se sníženímúmrtnost krys (r=0.834) ).

Cistanche

3. Diskuse

Na plus -K plus -ATPáza, také známá jako sodno-draselná pumpa, hraje důležitou fyziologickou roli při udržování fyziologických aktivit buněk, tělesné teploty a normálního metabolismu a při regulaci rovnováhy iontů uvnitř i vně buňky.V sepsidochází k těžké dysfunkci sodíkové pumpy ve vnitřní mitochondriální membráně, což způsobujemitochondriálníotok. TheNa plus -K plus -ATPenzym je poškozen, nerovnováha omitochondriálníkoncentrace iontů se zvyšuje, aktivita enzymů energetického metabolismu je inhibována, zásobování buněk energií je vyčerpáno a je způsoben cytotoxický edém. Současně se zvyšuje propustnost membrány, což v konečném důsledku vede k buněčné smrti. V experimentu jsme zjistili, že mitochondriálníNa plus -K plus -ATPázaaktivita septických hepatocytů byla významně snížena (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na plus -K plus -ATPázačinnostjaterní mitochondriese výrazně zvýšil (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">septické krysybyla výrazně snížena. Experimentální výsledky naznačují, že poklesAktivita Na plus -K plus -ATPázyvýznamně pozitivně koreluje s vývojemsepse u potkanů. InhibiceAktivita Na plus -K plus -ATPázybuněčný edém a smrt vedoucí k selhání více orgánů mohou být rychlým rozvojem sepse. Jeden z důležitých mechanismů. V posledních letech se objevilo mnoho zpráv oNa plus -K plus -ATPázaa mnoho nemocí, které přitahovaly pozornost klinických a základních pracovníků. Je velmi důležité studovat zákon změn v činnostiNa plus -K plus -ATPázaa jeho nařízení [6]. O specifickém mechanismu je málo známoNa plus -K plus -ATPázave vývoji a výsledkusepse,a je potřeba další výzkum.

Stabilita intracelulárního vápníku a hořčíku je nezbytným materiálním základem pro udržení reakce intracelulárního uvolnění a přenosu informací [7]. V experimentu poklesAktivita Ca2 plus -ATPázyv kontrolní skupině přímo ovlivňuje činnost kalciové pumpy a pokles aktivity kalciové pumpy oslabuje její rolimitochondriálnívápníková pumpa k vylučování Ca2 plus ven z buňky a přetížení Ca2 plus dovnitřmitochondrie. Důležitou příčinou je přetížení mitochondrií vápníkemmitochondriálníporucha oxidativní fosforylace, strukturální poškození a nekróza buněk [8, 9]. Přetížení Ca2 plus snižuje potenciál mitochondriální membrány a obsah tkáňového ATP [10] a je narušeno energetické využití tkáňových buněk. Ca2 plus může aktivovat fosfolipázu na mitochondriích a způsobit poškození mitochondriímitochondriální membránaničí normální funkci syntézy ATP v mitochondriích a brání produkci mitochondriální energie [11]. Poruchymitochondriální metabolismus vápníkumůže přímo ovlivnitmitochondriální respirační funkce, což způsobujemitochondriální kyslíkporuchy vychytávání a oxidace protonů v řetězci transportu elektronů [12]. Současně může zvýšení Ca2 plus zhoršit poškození mitochondrií peroxidací esterů [13]. To vše přímo či nepřímo vede k selhání zásobování buněk energií a odumírání tkání a orgánů a urychluje rozvoj patologických změn v sepsi. V experimentu jsme také zjistili, že aktivity oM g2 plus -ATPáza a Ca2 plus -M g2 plus -ATPáza u septických potkanůse také výrazně snížily.Mg2 plus -ATPáza a Ca2 plus -M g2 plus -ATPázajsou důležité látky pro udržení intracelulární rovnováhy vápníku a hořčíku. Widner uvádí, že pokles intracelulárních iontů hořčíku je indukujícím faktorem nevratného poškození buněk a poměr Mg 2 plus / Ca2 plus je důležitým ukazatelem odrážejícím nevratné poškození buněk [14]. TheMg2 plus -ATPáza a Ca2 plus -M g2 plus -ATPázačinnostiCistanche-podávané skupině byly zesíleny, A TPáza je sulfhydryláza aCistanchemá antimembránový ester peroxidační účinek, který může být způsoben zesílenímATPázaaktivita Cistanche Základy chemie a Základy farmakologie [15].

v sepsi, mitochondriálníporucha energetického metabolismu, sníženáAktivita enzymu ATPmitochondriální edém, intracelulární přetížení vápníkem a porucha rovnováhy vápníku a hořčíku jsou přímými příčinami buněčné smrti sepse a selhání více orgánů.Cistancheantagonizuje peroxidaci membránových esterů, zvyšuje aktivitu ATPázy, udržuje intracelulární homeostázu vápníku a hořčíku a chrání normální fungování buněčných funkcí.Cistancheje důležitým mechanismem pro snížení úmrtnostiseptické krysy. Ukazuje to dobré vyhlídkyCistanche v léčbě sepse