Antioxidační účinky fenylethanoidů z Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong / Shigetoshi Kadota," Tadato Tani, 6 a Tsuneo Namba"

Extrakt aceton-H2O (9:1) ze stonku Cistanche deserticola vykazoval silnou aktivitu vychytávání volných radikálů. Z tohoto extraktu bylo izolováno devět hlavních fenylethanoidových sloučenin. Pomocí NMR byly identifikovány jako akteosid, isoakteosid, l^acetylakteosid, tubulosid B, echinakosid, tubulosid A, syringalid A, 3z-a-rhamnopyranosid, cistanosid A a cistanosid F. Všechny tyto sloučeniny vykazovaly silnější aktivity pohlcující volné radikály než a -tokoferol na 1,1 -difenyl-2-pikrylhydrazy 1 (DPPH) radikálu a xanthin/xanthinoxidázou (XOD) generovaný superoxidový aniontový radikál (Oj). Mezi devíti sloučeninami, isoakteosid a tubulosid B, jejichž kofeoylová část je v d'-poloze glukózy, vykazovaly inhibiční účinek na XOD. Dále jsme studovali účinky těchto fenylethanoidů na peroxidaci lipidů v jaterních mikrosomech potkana indukovanou enzymatickými a neenzymatickými metodami. Jak se očekávalo, každý z nich vykazoval významnou inhibici peroxidace lipidů indukované kyselinou askorbovou/Fe2 plus a ADP/NADPH/Fe3 plus v jaterních mikrosomech potkana, které byly účinnější než a-tokoferol nebo kyselina kávová. Bylo zjištěno, že antioxidační účinek je potencován zvýšením počtu fenolických hydroxylových skupin v molekule.

klíčová slova: Cistanche deserticola; fenylethanoidy;antioxidant; DPPH (1,1 -difenyl-2-pikrylhydrazyl) radikál; superoxidový aniontový radikál; peroxidace lipidů

stonek Cistanche deserticola

Stonek Cistanche spp. (Cistanche Herba, čeleď Orobanchaceae) je tonikum v tradiční čínské medicíně používané při nedostatku ledvin charakterizovaném impotencí, pocitem chladu v bedrech a kolenou, ženskou sterilitou a zácpou v důsledku suchosti střev v senilu.Z těchto rostlin byla izolována řada složek včetně fenyletmoidů (někdy nazývaných fenylpropanoidy),2) iridoidů3* a polysacharidů4). Sato et al5} uvedli, že některé fenylethanoidy z této surové drogy vykazovaly ochranný účinek proti snížení sexuálního chování a chování při učení u visících myší nabitých stresem. Fenylethanoidy jsou hlavními složkami těchto rostlin a má se za to, že přispívají k různým účinkům této drogy.6)

Fenylethanoidy jsou široce rozšířeny v rostlinné říši a bylo zjištěno, že některé mají aktivitu proti anoxii,7) proti novotvarům,8) inhibici enzymů,9* proti zánětům,10) antinefritidě,1n proti mikroorganismům a imunomodulace.12) Byly také hlášeny studie antioxidační aktivity některých fenylethanoidů z Pedicularis,13 -15), ale nebyla nalezena žádná zpráva zabývající se antioxidační aktivitou fenylethanoidů z druhů Cistanche.

Je dobře známo, že volné radikály se kriticky podílejí na různých patogenezích, jako je rakovina, kardiovaskulární poruchy, artritida, záněty, stejně jako v degenerativních procesech spojených se stárnutím.16™18) V našem screeningu látek proti stárnutí z přírodních zdrojů zjistili jsme, že každý z extraktů CHC13 (C), EtOAc (E), acetonu (A), aceton-H2O (9:1) (AH) a vodního (H) extraktu stonku Cistanche deserticola vykazoval silný DPPH aktivita vychytávání radikálů (obr. 1), z nichž nejsilnější vykazoval aceton-Ha.(9:1) extrakt (AH). Extrakt aceton-H2O (9:1) obsahoval vysoký poměr fenylethanoidů, které byly pravděpodobně aktivními složkami účinků vychytávání volných radikálů. Z tohoto extraktu jsme izolovali hlavní fenylethanoidy a studovali antioxidační účinky jejich vychytáváním na DPPH radikálu a xanthin/XOD generovaný superoxidový aniontový radikál a jejich inhibicí peroxidace lipidů indukované kyselinou askorbovou/Fe2 plus a ADP/NADPH/Fe3 plus v krysích játrech mikrozomy.

Cistanche deserticola

MATERIÁLY A METODY

Reagencie Polyamid C-200 (75一150/zm) a silikagel (Wakogel C-200, 75–150^m) prášek pro sloupcovou chromatografii, DPPH (1,1 -difenyl{{ 8}} pikrylhydrazyl), xanthin, XOD (xanthin oxidáza), NBT (nitromodrá tetrazoliová), ADP, g-NADPH, kyselina kávová a a-tokoferol byly zakoupeny od Wako Pure Chemicals, Osaka, Japonsko. Malonaldehyd bis(dimethylacetal) byl z Tokyo Kasei, Tokio, Japonsko. BSA (bovinní sérový albumin) a allopurinol byly od sigma,St. Louis, USA Ostatní chemikálie byly analytické čistoty.

Přístroje Absorbance UV byla měřena na aZáznamový spektrofotometr Shimadzu UV{0}}, NMR spektra byla přenášena na JEOL GX-400 nebo JEOL JNM-LA 400WB FT NMR systému.

Rostlinné materiály Komerční surová droga (vyrobená v Nei Monggol, zakoupená v Bozhou Crude Drug Market, provincie Anhui, Čína, 1995; vzorek voucheru, TMPW č. 15479 uložený v Muzeu Materia Medica, Analytické výzkumné centrum pro etnomedicínu, Výzkum Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) byl identifikován jako kmeny Cistanche deserticola YC Ma porovnáním jeho morfologických a anatomických znaků s autentickým vzorkem, který poskytl profesor Dawen Shi, katedra farmakognozie, Shanghai Medical University, Čína.

Extrakce a izolace Prášková surová droga (5,87 kg) byla postupně extrahována CHC13 (12, 9 1 x 2) a EtOAc (9 1 x 3) při teplotě místnosti a refluxována s acetonem (9 1). x 3), aceton-玦0 (9:1,91x3) a H2O (7.5 1x4), čímž se získají extrakty CHC13 (C) (28,7 g), EtOAc (E) ( 13,4 g), aceton (A) (95 g), aceton-H2O (9:1) (AH) (175 g) a H2O (H) (2,51 kg). Část 100 g extraktu aceton-H2O (9:1) byla podrobena polyamidové C-200 (4{{50}}0 g) koloně a eluována H2O ({{41 }}) a poté MeOH (5 1). Eluent MeOH (20 g) byl nanesen na kolonu silikagelu (600 g) a eluován CHCl3-MeOH-H20 (8:3:0,3) (5 1), čímž bylo získáno 10 frakcí. Každá frakce byla podrobena koloně Sephadex LH-20 a eluována různými poměry MeOH-H20 (0~50 procent); devět hlavních fenylethanoidů 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) byly získány 9 (75 mg).

Zvířata Samci Std: Použili se potkani Wistar (stáří 8 týdnů, 230 až 250 g). Zvířata byla zakoupena od Shizuoka Laboratory Animal Center a byla krmena laboratorním peletovým krmivem (Clea Japan) a byla jim podávána voda ad libitum.

Příprava suspenze krysích jaterních mikrozomů Frakce krysích jaterních mikrozomů byla připravena metodou podle Kiso et al.19), ale bez předchozí úpravy fenobarbitalem. Poté, co zvířata hladověla po dobu 24 hodin, byla játra perfundována ledově studeným 0,9% roztokem NaCl in situ, poté nakrájena na tenké kousky a homogenizována ve studeném 1,15% roztoku KC1 (1.{{9} } ml/g vlhké hmotnosti jater). Homogenát byl čtyřikrát zředěn 1,15% roztokem KC1 a centrifugován při 8000 g po dobu 20 minut při 4 stupních. Frakce supernatantu byla poté shromážděna a ultracentrifugována při 105 000 g po dobu 60 minut. Získaná peleta byla resuspendována ve stejném objemu 1,15% roztoku KCl. Obsah proteinu byl stanoven metodou podle Lowryho a za použití albuminu jako standardu.

Příprava vzorků Testované vzorky byly rozpuštěny ve vodě nebo ethanolu a zředěny vodou na různé koncentrace. Konečné koncentrace ethanolu byly pod 1 procentem ve všech testovacích systémech kromě testu zachycování radikálů DPPH. Ethanol v konečné koncentraci pod 1 procento nevykazoval žádný účinek na tyto testovací systémy.

Účinek vychytávání radikálů DPPH Účinek vychytávání odpovídal intenzitě zhášení radikálu DPPH, jak popisuje Hatano et al. 30 min při pokojové teplotě, poté byla změřena optická hustota při 520 nm. Pro slepý pokus byl místo roztoku DPPH použit EtOH a pro kontrolu byla místo roztoku vzorku použita H2O. Hodnoty IC50 byly vypočteny z regresních čar, kde osa x představuje koncentraci testované sloučeniny a osa ordinát průměrné procento snížení DPPH radikálu ze čtyř samostatných testů.

Účinky na tvorbu radikálů superoxidových aniontů Produkce superoxidových aniontů v systému xanthin/XOD byla stanovena pomocí poloviční velikosti metody podle Imanariho et al.22) Směs složená z 900/zl 0,05 m Na2C03 (pH 10,2), 50 ul každého 3 mM xanthinu, 3 mM EDTA, 1,5 mg/ml BSA, 0,75 mM NBT a testovaný vzorek byl přidán s 50 ul 0,1 mg/ml XOD pro zahájení reakce. Po inkubaci po dobu 30 minut byla reakce zastavena 50 ul 6 mM CuCl2 a byla měřena absorbance při 560 nm. Kontrolní roztok byl připraven stejným způsobem, ale místo roztoku vzorku bylo použito 50/l H2O. Ve slepém roztoku bylo místo XOD roztoku použito 50 ul H2O. Hodnoty IC50 byly vypočteny z regresních přímek, kde osa x představuje logaritmickou koncentraci testované sloučeniny a ordináta střední procento inhibice snížení NBT ze čtyř v závislých testech.

Inhibiční účinky na aktivitu XOD Inhibiční účinky na aktivitu XOD byly odhadnuty metodou Hatano et al.* s některými modifikacemi. Směs obsahující 600/11 pufru (0,1 m fosfátový roztok, pH 7,5), 50 以 roztoku XOD (0,068 U/ml v pufru) a 50 µl roztoku vzorku bylo preinkubováno po dobu 10 minut při 25 stupních. Poté bylo ke směsi přidáno 300 ul xanthinového roztoku (0,1 mM v pufru) a výsledný roztok byl inkubován po dobu 30 minut při 25 stupních. Enzymová reakce byla ukončena přidáním 1 n HC1 (100/zl) a absorbance reakční směsi byla měřena při 295 nm. Koncentrace kyseliny močové vytvořené ve směsi byla vypočtena z absorbance, po odečtení absorbance slepého roztoku, který byl připraven jak je popsáno výše, kromě toho, že roztok XOD byl nahrazen 50/zl pufru. Inhibiční účinky na XOD byly vyjádřeny procentem inhibice (procenta) tvorby kyseliny močové vs. inhibice u kontroly, ve které byla místo roztoku vzorku použita voda. Jako pozitivní kontrola byl použit dobře známý inhibitor XOD, allopurinol.

Inhibiční účinky na peroxidaci lipidů v jaterních mikrosomech potkana Peroxidace lipidů v jaterních mikrosomech potkanů ​​neenzymaticky indukovaná askorbovou/Fe2 plus a enzymaticky indukovaná ADP/NADPH/Fe3 plus byla měřena metodou podle Kiso et al.19) s některými modifikacemi .

a) Kyselina askorbová/Fe2 plus indukovaná peroxidace lipidů v mikrosomech krysích jater: Reakční směs se skládala z 390/11 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 pl mikrozomální frakce v 1,15 procentech KC1 (20 mg proteinu/ml) a 50 µl roztoku vzorku. Po přidání 10/11 10 mM kyseliny askorbové/0,5 mM FeS04 a následné inkubaci při 37 stupních po dobu 20 minut byla reakční směs ochlazena v ledu, aby se reakce zastavila. Peroxidace lipidů byla měřena metodou thiobarbiturové kyseliny24) a vyjádřena jako produkce MDA (malondialdehydu). Že

b) ADP/NADPH/Fe3 plus indukovaná peroxidace lipidů v mikrosomech krysích jater: Reakční směs obsahovala 29 0贝 100mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il mikrosomální suspenze v 1,15 procentech KC1 (20 mg proteinu/ml) a 50 以 vzorku ve vodě. Bylo přidáno padesát čerstvě připraveného 20 mM ADP, 50 ul 1 mM NADPH a 10 ul 2 mM FeCl3 a poté inkubováno při 37 stupních po dobu 30 minut. Byla měřena peroxidace lipidů a IC50 byla vypočtena výše uvedeným způsobem.

cistanche výhody: chránit játra

VÝSLEDEK

Stanovení struktury Přímým srovnáním jejich ^H-NMR a 13C-NMR dat s literaturou2* bylo devět fenylethanoidů identifikováno jako 2,-acetylakteosid (1), cistanosid A (2), tubulosid A (3), echinakosid ( 4), akteosid (5), syringalid A 3'-a-rhamnopyranosid (6), tubulosid B (7), isoakteosid (8) a cistanosid F (9) (obr. 2). Nicméně pro akteosid, reprezentativní sloučeninu fenylethanoidů, přiřazení 13C-NMR signálů C-3 a C-4 v aglykonové části, C-3, C-4 , C-5 a C-6 v kávové části v předchozích zprávách25) byly matoucí. Metodou 2D-NMR, jako je HMBC a HMQC, jsme jednoznačně přiřadili 13C-NMR data akteosidu jako aglykonové skupiny Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; caffeoylová skupina Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C{70}}: 123,23,23,2 Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; glukózová část C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; a část rhamnózy: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C{115}} : 18:46.

Vztahy mezi strukturou a aktivitou byly studovány pro těchto devět fenylethanoidů pomocí jejich radikálů DPPH a xanthin/XOD generovaných superoxidových aniontů zachycujících radikály, kyseliny askorbové/Fe2 plus a ADP/NADPH/Fe3 plus indukované peroxidací lipidů v jaterních mikrosomech potkanů. Jako pozitivní kontrolní látky byly použity kyselina kávová a a-tokoferol, které jsou dobře známými lapači volných radikálů a antioxidanty.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalid A S'-a-rhamnopyranosid (6) (IC5O=5,52 /zm) > cistanosid F (9) (IC50=6,29 /im) > a-tokoferol (IC{{10 }}.2//m). Tubulosid B⑺,echinakosid (4), 2/-acetylacetosid (1), tubulosid A (3), akteosid (5) a isoakteosid (8) (IC5O=2,99一3,49 /im), z nichž každý má čtyři fenolické hydroxylové skupiny v molekule podobně vykazoval silnější aktivitu než cistanosid A (2), jehož 3-OH aglykonové části byla methylována. Syringalid A 3z-a-rhamnopyranosid (6), který má pouze jednu OH skupinu v aglykonové části, vykazoval relativně slabou aktivitu. Nejslabší aktivitu vykazoval cistanosid F (9), který má pouze dvě hydroxylové skupiny umístěné na kofeoylovém zbytku, ale nemá žádný fenylethanolový aglykon.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanosid A (2) (IC50=3,69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 〃m).

Inhibiční účinky na aktivitu XOD Inhibiční účinky na aktivitu XOD měly pouze isoakteosid (8) a tubulosid B (7), jejichž kofeoylová část je v poloze 6z glukózy, a další fenylethanoidy, které mají kofeoylovou část na ^- pozice glukózy, nevykazovaly žádné účinky při testovaných koncentracích (25~200 m) (tabulka 1). izolovali devět hlavních fenylethanoidových sloučenin z tohoto extraktu a určili jejich struktury pomocí NMR. systém jako tubulosid B (7)M2'-acetylakteosid (1) iso-akteosid (8) echinakosid (4) tubulosid A (3) M akteo strana (5) > syringalid A 3'-a-rhamnopyranosid (6) > cistanosid A (2) > cistanoside F (9); v systému ADP/NADPH/Fe3 plus jako tubulosid B (7)2,-acetylakteosid (^^iso akteosid (8) akteosid (5) > tubulosid A (3) > strana echinaco (4) > syringalid A 3z-a-rhamnopyranosid (6) > cistanosid A (2) > cistanosid F (9).Obě tyto řády byly podobné jako ve výše uvedených testech pohlcování volných radikálů, zejména v testu pohlcování radikálů DPPH. Přesto počet fenolických hydroxylových skupin v molekule hrál nejdůležitější roli v inhibici peroxidace lipidů v mikrosomech jater potkana.

účinky cistanche

DISKUSE

Testovali jsme aktivity vychytávání volných radikálů různých rozpouštědlových extraktů stonku Cistanche deserticola na DPPH radikálu a zjistili jsme, že extrakt aceton-H2O (9:1) vykazoval nejsilnější aktivitu. Abychom našli aktivní složky aktivity vychytávání volných radikálů, izolovali jsme z tohoto extraktu devět hlavních fenylethanoidních sloučenin a určili jejich struktury pomocí NMR.

Antioxidační účinky těchto fenylethanoidů byly hodnoceny jejich aktivitou pohlcující volné radikály a antilipidovou peroxidační aktivitou. Jako pozitivní kontrolní látka byl použit široce známý a-tokoferol. Jakolipofilita a-tokoferolu může ovlivnit jeho aktivity v předkládaných testovacích systémech, s výjimkou testu DPPH pohlcujícího radikály, jako další pozitivní kontrolní látku jsme vzali kyselinu kávovou.

Nejprve jsme provedli testy aktivit pohlcujících volné radikály. Všech 9 testovaných fenylethanoidů nepochybně vykazovalo silnější aktivity vychytávání radikálů DPPH a superoxidových aniontů než a-tokoferol, ale některé byly silnější a jiné slabší než kyselina kávová. Aktivita vychytávání radikálů se zvýšila se zvýšením počtu fenolických hydroxylových skupin. Má se za to, že neúplný paralelismus DPPH radikálových a superoxidových aniontů pohlcujících aktivit je způsoben rozdílnými vlastnostmi mezi radikálovými druhy a některými dalšími faktory podílejícími se na těchto dvou reakčních systémech,21,26) protože radikál DPPH je chemicky indukovaný radikál, který reaguje s lapači radikálů jednoduchým chemickým způsobem, zatímco superoxidový aniontový radikál je generován xanthinem/XOD, enzymovou reakcí.

Pokud fenylethanoidy inhibují xantin/XOD generovaný superoxidový aniontový radikál, inhibice může být považována za výsledek jejich aktivity vychytávání superoxidových aniontových radikálů nebo (a) jejich inhibice enzymu XOD,23), proto jsme provedli test jejich inhibiční účinky xanthinoxidázy. Je zajímavé, že selektivně pouze isoakteosid (8) a tubulosid B (7), jejichž kofeoylová část je v poloze 6/ glukózy, prokázaly inhibici. Vykazovaly účinek při koncentraci 25-200jtiM na 3,4x10^3U/ml (10 ug/ml) XOD, ačkoli aktivita byla slabší než alopurinol; jiné sloučeniny, jejichž kofeoylová část je v poloze < glukosy,="" nevykazovaly="" žádný="" inhibiční="" účinek.="" tento="" výsledek="" poskytl="" první="" zprávu="" o="" inhibičním="" účinku="" fenylethanoidů="" na="" enzym="" xod.="" chan="" et="" al21)="" uvedli,="" že="" kyselina="" kávová="" a="" některé="" její="" analogy="" měly="" inhibiční="" účinky="" na="" aktivitu="" xod,="" avšak="" za="" současných="" reakčních="" podmínek="" jsme="" žádný="" takový="" účinek="" kyseliny="" kávové="" nenašli.="" v="" tomto="" testu="" byla="" koncentrace="" xod="" podobná="" jako="" v="" testu="" účinku="" na="" tvorbu="" superoxidových="" aniontových="" radikálů="" (4,3="" g/ml),="" ale="" koncentrace="" sloučenin="" byla="" mnohem="" vyšší="" než="" v="" druhém="" případě.="" inhibice="" tvorby="" oj="" těmito="" fenylethanoidy="" je="" tedy="" způsobena="" jejich="" aktivitou="" pohlcující="" radikály,="" ale="" ne="" jejich="" inhibiční="" aktivitou="" enzymu="">

To, že řetězová reakce volných radikálů nakonec vede k peroxidaci lipidů, je dobře známá.28,29) Proto jsme tyto fenylethanoidové sloučeniny studovali z hlediska jejich účinků na peroxidaci lipidů v mikrosomech jater potkana indukovanou enzymatickým systémem ADP/NADPH/Fe3 plus a na peroxidaci vyvolanou neenzymatický systém kyselina askorbová/Fe2 plus. Všechny tyto sloučeniny vykazovaly silnější antilipidové peroxidační účinky než kyselina kávová a a-tokoferol v obou systémech. Obecně se uznává, že oba systémy jsou katalyzovány ionty železa, buď Fe2 plus nebo Fe3 plus , které se účastní lipidových peroxylových radikálů,30,31) a že hydroxylový radikál OH hraje nejdůležitější roli v peroxidaci lipidů,32 _34) ačkoli iniciace OH byla v některých zprávách zpochybňována.35祁6) Na druhou stranu, superoxidový aniontový radikál OJ, který je primárním produktem e_ útoku na O2 v řetězci radikálů, je poměrně špatný reaktivní radikál a nevede k samotné peroxidaci lipidů. Ačkoli tyto fenylethanoidy vykazovaly slabší vychytávací aktivitu na superoxidový aniontový radikál než kyselina kávová, vykazovaly mnohem silnější antilipidový peroxidační účinek než kyselina kávová. Proto se domníváme, že stejně jako některé další aromatické polyfenoly narušující řetězce mohou inhibovat výše uvedenou peroxidaci lipidů v mikrosomech jater potkana chelatací Fe2 plus nebo Fe3 plus iontů a také vychytáváním superoxidového radikálu Oj, aby se rozložila radikálová řetězová reakce. .37,38) Navíc mohou také vychytávat toxičtější radikály, jako jsou hydroxylové radikály a lipidové peroxylové radikály, aby přímo přerušily peroxidaci lipidů s vyšší účinností než kyselina kávová.38,39)

Li a kol. studoval některé fenylethanoidní glykosidy včetně akteosidu (verbaskosidu) (5), isoakteosidu (isoverbaskosidu) (1) a echinakosidu (4) z Pedicularis pro jejich inhibici autooxidace kyseliny linolové v micelách, což je nebiologický systém,13) pro jejich ochranu proti oxidativní hemolýze in vitro,14''1 a také pro jejich vychytávací účinky na NBT/PMS/NADH generovaný superoxid a inhibici peroxidace lipidů vyvolané kyselinou askorbovou/Fe2 plus v mikrosomech myších jater.15) Podobná aktivita -strukturní vztah byl pozorován ve zprávách Li et al. a naše výsledky. To znamená, že aktivity fenylethanoidů pro inhibici peroxidace lipidů závisí především na počtu a sterické poloze fenolických hydroxylových skupin.15) Na základě jejich stereochemie jsou fenolické hydroxylové skupiny caffeoylového zbytku na akteosidu (5), tubulosidu A ( 3) a echinakosid (4), které mají kafeoyl v poloze 4z glukózy, by snadněji vytvořily vodíkovou vazbu s hydroxylovými skupinami rhamnosylu než ty na isoakteosidu (8) a tubulosidu B (7), které mají caffeoyl v 6'-poloze glukózy. Tudíž posledně jmenovaný rezervoval více volných fenolických hydroxylových skupin než první, a proto vykazoval silnější antilipidovou peroxidační aktivitu. Také jsme zaznamenali, že 2z-acetylace těchto fenylethanoidů, i když mírně, zvýšila jejich antioxidační účinky. Například akteosid (5) a isoakteosid (8), když se 2'-acetyloval na 2/-acetylakteosid (1), respektive tubulosid B (7), vykazovaly silnější aktivity ve všech čtyřech testovacích systémech. Vzhledem k nadřazenosti stereochemie a 2'-acetylace vykazoval tubulosid B (7) nejsilnější antioxidační aktivitu mezi testovanými vzorky. Možná kvůli substituci třetí cukerné skupiny v poloze 6', tato korelace neseděla dobře v případě tubulosidu A (3) nebo echinakosidu (4); avšak v systému ADP/NADPH/Fe3 plus tubulosid A ⑶ stále vykazoval silnější antilipidovou peroxidační aktivitu než echinakosid (4).

Kromě toho pořadí aktivity vychytávání radikálů DPPH vykazovalo lepší paralelnost s anti-lipidovou peroxidací než pořadí aktivity vychytávání radikálů superoxidových aniontů. To znovu prokázalo, že test DPPH radikálu je vhodnou a spolehlivou metodou pro antioxidační test,26) ačkoli DPPH radikál je chemicky indukovaný radikál, zatímco superoxidový aniontový radikál může být biologicky endogenní radikál.

Závěrem lze říci, že všech devět fenylethanoidů vykazovalo v této studii významné aktivity zachycující volné radikály a antilipidové peroxidační účinky. Antioxidační účinek byl zesílen zvýšením počtu fenolických hydroxylových skupin v molekule. Jak si lze představit, zde prokázané antioxidační účinky těchto fenyletanoidů mohou hrát důležitou roli v působení léku Cistanchis Herba a mohou částečně vysvětlit mechanismy působení některých fenylethanoidů proti novotvarům,8* zánětům10) a nefritidě, 1 n, na kterém se vážně podílejí volné radikály.

Cistsanche Echinacoside: Antioxidace

REFERENCE

1) Namba T., "Encyklopedie Wakan-Yaku (tradiční čínsko-japonské medicíny) s barevnými obrázky, 5, svazek II, Hoikusha, Tokio, 1994, s. 16—17.

2) a) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Bull, 32, 3009-3014 (1984); b) Tamtéž, 32, 3880—3885 (1984); c) Tamtéž, 33, 1452—1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562-566 (1986); e) Tamtéž, 106, 721-724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309 až 3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., tamtéž, 38, 1927-1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508 až 511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984); c) Tamtéž, 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerová A., Hromádková Z., Patoprstý V., Fytochemie, 40, 709—715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131-1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, Čína J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・, Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456-58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ ed. Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, INRA Editions, Paříž, 1993, s. 237—245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479-80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47-52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L., Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L., Acta Microbiol. Hung.. 36, 425-32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Phys. Lipidy. 65, 151-154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, American Pharmacy. 34, 26-35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949—956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem. 193, 265-275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016 až 2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496-497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T., Yoshihara R., Agata L., Noro T., Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 38, 1224-1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351-358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481— 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Phytochemistry. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., tamtéž,, 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Příroda (Londýn), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703 až 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335 až 3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biochem. Biophys., 300, 535 až 543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289-303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Methods Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biophys. Res, Commun., 108, 1025 až 1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 945 až 951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241-251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biophys. Res, Commun., IL, 777-784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Pharm. Bull.. 19, 779-782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovich L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol., 37, 837-841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・, Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695 až 702 (1995)