13-týdenní studie subchronické toxicity 2-(l-menthoxy)ethanolu v ledvinách potkanů F344
Mar 03, 2022
Pro více informací:emily.li@wecistanche.com
Takeshi Toyoda, Kohei Matsushita, Hirotoshi Akane, Tomomi Morikawa a Kumiko Ogawa
1 Division of Pathology, National Institute of Health Sciences, 3-25-26 Tonomachi, Kawasaki-Ku, Kawasaki 210-9501, Japonsko
Abstraktní:
{{0}}(-Menthoxy)ethanol se často používá jako ochucovadlo; údaje týkající se toxicity 2-(I-mentoxy)ethanolu však zůstávají omezené. Provedli jsme 13-týdenní studii subchronické toxicity 2-(I-menthoxy)ethanolu u samců a samic potkanů F344 s dávkami 0,15.d.nebo 250 mg/ke tělesné hmotnosti (BWday orálně podávané průměr hw s použitím kukuřičného oleje jako vehikula V žádné skupině nebyly pozorovány žádné významné toxikologické změny v celkovém stavu, tělesné hmotnosti nebo příjmu potravy. Hematologické hodnocení ukázalo snížení hemoglobinu, hematokritu, středního korpuskulárního objemu a průměrného korpuskulárního hemoglobinu a zvýšení počtu krevních destiček v skupina samců 250 mg/kg. Biochemie séra odhalila zvýšený celkový cholesterol ve skupině 250 mg/kg potkaních samců a samic, snížený obsah triglyceridů ve skupině samic 250 mg/kg a zvýšený celkový protein ve skupině samců 250 mg/kg, indikující účinky na metabolismus lipidů a syntézu bílkovin. Pro hmotnosti orgánů byly zvýšeny absolutní a relativní hmotnosti jater a nadledvin ve skupině 250 mg/kg u obou pohlaví au mužů 250 mg/kg, v tomto pořadí. Histopatologická analýza vykazovali chronickou nefropatii ve skupinách samců 15 mg/kg nebo vyšších, se zvýšenými absolutními a relativními hodnotamiledvinazávažístejně jako zvýšený kreatinin v séru u mužů ve skupinách 60 a 250 mg/kg. V proximálních tubulech však byly identifikovány eozinofilní granule obsahující a,-globulin, což naznačuje 2-globulinovou nefropatii specifickou pro samce potkanů a bez toxikologického významu. Tyto výsledky ukázaly, že hladina 2-(-menthoxy)ethanolu bez pozorovaného nepříznivého účinku byla 60 mg/kg tělesné hmotnosti/den pro obě pohlaví, (DOI; 10,1293tox2020-0091:J Toxicol Patho 1 2021;34:309-317)
Klíčová slova:2-(-menthoxy )ethanol, 2-1-menthoxyethandl,jídlopřísada, ochucovadlo, Fischer krysa, mentol
Úvod
{{0}}(-Mentoxy)ethanol (číslo CAS.{2}}) je čirá a bezbarvá kapalina s charakteristickým zápachem a je široce používána jako ochucovadlo. Společný výbor expertů FAO/WHO pro potravinářská aditiva (JECFA) vyhodnotil 2-(1-methoxy)ethanol jako ochucovadlo kategorizované jako látka strukturálně příbuzná mentolu. Na základě strukturní třídy aromatických látek byl2-(-methoxy)ethanol zařazen do třídy I. Ve Spojených státech a Evropě byly úrovně příjmu2-(I-methoxy)etanolu lidmi odhaduje se na 12 ug/osobu/den a 0,01 ug/osobu/den, v obou případech pod prahem třídy I 1 800 ug/osobu/den. Na základě těchto odhadů se má za to, že 2-(1-methoxy)ethanol nemusí představovat bezpečnostní riziko při běžném použití jako ochucovadlo.
As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD.:>2,000 mg/kg tělesné hmotnosti [BW)1. Navzdory použití 2-(1-menthoxy)ethanolu jako ochucovadla. jsou k dispozici omezené údaje týkající se toxicity po opakovaném podávání této sloučeniny. Naše laboratoř zkoumala toxicitu několika potravinářských přídatných látek, včetně reprezentativních aromatických látek z každé kategorie, na modelech hlodavců2-7. Abychom objasnili toxikologický profil a stanovili hladinu bez pozorovaného nepříznivého účinku (NOAEL), provedli jsme 13-týdenní studii subchronické toxicity 2-(1-ethoxy)ethanolu, která byla orálně podávané krysám F344 žaludeční sondou.
Materiály a metody
Testovaná chemikálie
2-(I-Menthoxy)ethanol (šarže č. 510002, čistota 99,9 procent) vyrábí Takasago Int. Corp. (Tokio, Japonsko) byla poskytnuta Divize standardů a hodnocení, Ministerstvo bezpečnosti potravin, Ministerstvo zdravotnictví, práce a sociálních věcí, Japonsko, s podporou Japan Flavor & Fragrance Materials Association (Tokio, Japonsko). Ačkoli byla testovaná látka poskytnuta jako směs optických izomerů (CAS č. 38618-23-4), byla výrobcem potvrzena jako 1-enantiomer (CAS č. 75443-64-0). Orální sonda s kukuřičným olejem (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) jako vehikulum byla vybrána jako způsob podání vzhledem k nerozpustnosti ve vodě a těkavosti 2-(1-menthoxy)ethanolu. Roztoky 2-(1-menthoxy)ethanolu byly připravovány denně, bezprostředně před podáním. Po 2 hodinách skladování při pokojové teplotě byly zbytkové poměry 2-(-menthoxy)ethanolu v 4, 40 a 400 mg/ml roztoky byly potvrzeny jako 96,8 procenta, 99,8 procenta a 96,5 procenta, v tomto pořadí, plynovou chromatografií (Japan Inspection Association of Food and Food Industry Environment, Tokio, Japan).
Pokusná zvířata
Celkem bylo od Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japonsko) zakoupeno a používáno po aklimatizaci po dobu jednoho týdne 40 samců a 40 samic krys bez specifických patogenů (F344/DuCrlCrlj,5-ve věku týdne). Během studie byla zvířata umístěna v polykarbonátových klecích s měkkou čipovou podestýlkou, chována v místnosti s bariérovým systémem pro kontrolu cyklu světlo/tma (12 h), ventilaci (rychlost výměny vzduchu 18x/h), teplotu (24 ±1 stupeň) a relativní vlhkost (55±5 procent). Klece a podestýlka na čipy byly vyměňovány dvakrát týdně. Každé zvíře mělo volný přístup k vodě z vodovodu a základní dietě (CRF-1; Oriental Yeast, Tokio, Japan). Na začátku experimentu byla zvířata náhodně rozdělena do čtyř skupin po 10 krysích samcích a samicích, na základě tělesné hmotnosti měřené bezprostředně před zahájením léčby testovanou chemickou látkou.
Studovat design
V předběžné {{0}}denní studii hodnotící2-(1-mentoxy)ethanol podávaný v dávkách 0,200 400 a 800 mg/kg tělesné hmotnosti/den, absolutní a relativní hmotnosti jater byly významně zvýšeny ve všech léčených skupinách obou pohlaví (data nejsou uvedena). Na základě těchto výsledků jsme vybrali 2-(-mentoxy)ethanol v dávce 0,15,60 a 250 mg/kg tělesné hmotnosti/den pro podávání samcům i samičkám potkanů v současné době 13- týdenní studie toxicity.
Celkový stav a mortalita byly hodnoceny denně. Tělesná hmotnost, stejně jako množství dodané a zbytkové stravy, byly měřeny jednou týdně během experimentálního období. Všechny krysy byly po dokončení léčby přes noc nalačno a vzorky krve pro hematologii a biochemii séra byly odebrány z břišní aorty v hluboké inhalační anestezii za použití isofluranu. Návrh studie byl v souladu s Pokyny pro označování potravinářských přídatných látek a revizí norem pro použití potravinářských přídatných látek z Japonska (1996) a schválen Výborem pro péči o zvířata a využití při Národním institutu zdravotnických věd v Japonsku.
Hematologie a biochemie séra
Následující hematologické parametry byly analyzovány pomocí automatických hematologických analyzátorů ProCyte Dx (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA): počet bílých krvinek (WBC), počet červených krvinek (RBC), koncentrace hemoglobinu (HGB), hematokrit (HCT ), střední korpuskulární objem (MCV), střední korpuskulární hemoglobin (MCH),
střední korpuskulární koncentrace hemoglobinu (MCHC), počet krevních destiček (PLT) a diferenciální leukocytární buňky, včetně neutrofilů (Neut), lymfocytů (Lymph), monocytů (Mono), eozinofilů (Eosino) a bazofilů (Baso). Biochemická analýza séra byla provedena pomocí Oriental Yeast pro následující parametry: celkový protein (TP), albumin (Alb), poměr albumin/globulin (A/G), celkový bilirubin (Bil). glukóza, celkový cholesterol (T-Chol), triglyceridy (TG), močovinový dusík (BUN), kreatinin (Cre), vápník (Ca), anorganický fosfor (IP), sodík (Na), draslík (K), chlor (Cl), as-partátaminotransferáza (AST), alaninaminotransferáza (ALT), alkalická fosfatáza (ALP) a y-glutamyltrans-peptidáza (y-GTP).
Hmotnosti orgánů a histopatologické hodnocení
U všech zvířat byla provedena kompletní pitva. a mozek, brzlík, plíce, srdce, slezina,játra, nadledvinekžlázy,ledvinybyla zvážena varlata a vaječníky. Tyto orgány, stejně jako tkáně z míchy, trojklaného nervu, hypofýzy, nosní dutiny, slinných žláz, jazyka, jícnu, průdušnice, aorty, štítné žlázy, příštítných tělísek, slinivky břišní, žaludku, tenkého a tlustého střeva, submandibulární a mezenterické lymfatické uzliny, pochva, děloha, močový měchýř, prostata, semenné váčky, nadvarlete, femur a hrudní kost s kostní dření, obratle, kosterní svaly, sedací nerv, kůže a mléčná žláza, byly fixovány v 10% neutrálně pufrovaném formalínu; poté byly připraveny řezy zalité v parafínu a obarveny hematoxylinem a eosinem pro histopatologické vyšetření. Varlata a oči s Harderovými žlázami byly fixovány v Bouinově fixativu a Davidsonově roztoku. Kostní tkáně, včetně nosní dutiny, obratlů, hrudní kosti a stehenní kosti, byly dekalcifikovány pomocí směsi 10 procent kyseliny mravenčí a 10 procent pufrovaného formalínu po dobu až 2 týdnů. Histopatologické hodnocení bylo provedeno pro všechny tkáně získané od zvířat v kontrolní skupině a skupině byla podávána nejvyšší dávka, pokud nebyly pozorovány žádné léze související s léčbou.
Imunohistochemie pro ,-globulin
U samců potkanů byla akumulace a.globulinu v ledvinách zkoumána imunohistochemickou analýzou řezů zalitých v parafínu. Pro získání antigenu byly řezy získané od 5 krys v každé skupině inkubovány s proteinázou K (DAKO, Glostrup, Dánsko) po dobu 1 minuty při teplotě místnosti. Všechny řezy byly ponořeny do 3% roztoku H20/methanol na 10 minut při teplotě místnosti pro inaktivaci endogenní peroxidasové aktivity. Po zablokování nespecifických reakcí 10% normálním králičím sérem byly řezy inkubovány s primární protilátkou pro -globulin (zředěnou 1:400; anti-krysí, globulinová protilátka; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) přes noc při 4 stupních s Vizualizace vazby protilátky byla provedena pomocí soupravy Vecta-Stain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) a 3,3'-diaminobenzidinu. Všechny řezy byly kontrastně obarveny hematoxylinem.
Statistická analýza
Rozdíly v hodnotách dat pro tělesnou hmotnost během experimentálního období, stejně jako pro hematologii, biochemii séra a hmotnosti orgánů, byly hodnoceny na homogenitu pomocí Bartlettova testu. Pro homogenní a heterogenní data byla použita jednocestná analýza rozptylu a Kruskal-Wallisův test. Při stanovení statisticky významných rozdílů byl použit Dunnettův mnohočetný srovnávací test ke srovnání kontrolní a léčené skupiny. Srovnání histopatologických incidencí a stupňů byla analyzována s použitím Fisherova exaktního pravděpodobnostního testu a Mann-W Whitneyho U/ testu, v daném pořadí. P hodnoty<0.05 were="" considered="" statistically="">
Výsledek
Parametry během života, hematologie a biochemie séra Během experimentálního období nebyly zaznamenány žádné významné klinické příznaky a všechna zvířata přežila až do plánované nekropsie. Kromě toho nebyly u samců a samic potkanů pozorovány žádné významné rozdíly v tělesné hmotnosti a denním příjmu potravy (obr. 1A a B).
Údaje o hematologii a biochemii séra jsou uvedeny v tabulkách I a 2, v daném pořadí. Hematologické analýzy odhalily významně snížené HGB, HCT, MCV a MCH a zvýšené PLT u samců potkanů, kterým bylo podáváno 250 mg/kg tělesné hmotnosti/den 2-(1-menthoxy)ethanol (tabulka 1). V biochemii séra bylo zaznamenáno významné zvýšení TP, T-Chol a Ca a snížení Bil a ALP u mužů ze skupiny 250 mg/kg (tabulka 2). Významné zvýšení Cre a snížení A/G bylo zaznamenáno u mužů ve skupinách 60 a 250 mg/kg. U žen bylo zaznamenáno významné zvýšení Ca a snížení ALP ve skupinách 60 a 250 mg/kg, zatímco zvýšené T-chol a snížené A/G, Bil, TG.AST a ALT byly detekovány ve skupinách 250 mg/kg. skupina kg.
Ačkoli u samců, kterým byla podávána dávka 60 mg/kg, bylo pozorováno významné zvýšení TG a snížení Cl, absence jakéhokoli vztahu mezi dávkou naznačovala, že tyto rozdíly nebyly spojeny s expozicí testované látce.
Váhy orgánů
Údaje o hmotnosti orgánů jsou shrnuty v tabulce 3. Absolutní a relativní hmotnosti jater byly významně zvýšeny u obou pohlaví ve skupině 250 mg/kg (tabulka 3). Významné zvýšení relativní hmotnosti jater bylo pozorováno u mužů ve skupině 60 mg/kg, u mužů absolutní a relativníledvinahmotnosti byly významně zvýšeny ve skupinách 60 a 250 mg/kg. Ve skupině mužů 250 mg/kg bylo zaznamenáno významné zvýšení absolutní a relativní hmotnosti nadledvin a relativní hmotnosti sleziny a varlat.
Histopatologie a imunohistochemie
Údaje pro histopatologické a imunohistochemické nálezy jsou shrnuty v tabulkách 4 a 5, v daném pořadí. Histopatologické nálezy odhalily, že frekvence akumulace eozinofilních granulí (obr. 2A-D), bazofilních tubulů a hyalinních odlitků, stejně jako fokální intersticiální zánět vledvina, byly významně zvýšeny v léčebných skupinách výhradně mužů ve srovnání s kontrolní skupinou (tabulka 4). Na základě imunohistochemických analýz vykazovali krysí samci léčení testovanou látkou zvýšení imunoreaktivity globulinu v epiteliálních buňkách proximálních tubulů, což prokázalo jasnou závislost na dávce (obr. 2E-H) (tabulka 5).
Při pitvě jeden krysí samec ve skupině 250 mg/kg vykazoval závažné zvětšení pravé částiledvinav důsledku histologicky charakteristického nefroblastomu. Ačkoli nefroblastom je u většiny kmenů potkanů neobvyklý9, tento případ byl považován za náhodný, protože žádné jiné zvíře nevykazovalo podobné léze. Kromě toho se ve studiích orální karcinogenity výskyt spontánního nefroblastomu u samců potkanů F344/DuCrlCrlj údajně pohyboval mezi 0-2.0 procenty 10. Ačkoli bylo sporadicky zjištěno několik lézí v jiných orgánech, žádná významná léčba- byly zřejmé závislé změny ve výskytu těchto lézí.
Diskuse
K dnešnímu dni bylo 24 příznivých látek, včetně 2-(-menthoxy)ethanolu, vyhodnoceno JECFA jako látky strukturálně příbuzné mentolu a všechny jsou uvedeny jako „žádné bezpečnostní riziko“ při současných odhadovaných úrovních příjmu. 2-(1-Mentoxy)ethanol je zařazen do podskupiny alicyklických alkoholů nebo etherů a je považován za primárně konjugovaný s kyselinou glukuronovou, po níž následuje vylučování močí!. Ačkoli jsou hodnoty LD těchto látek u hlodavců při perorálním podání relativně vysoké, údaje ze studií toxicity po opakovaném podávání zůstávají omezené. 13-týdenní studie toxicity po opakovaných dávkách odhalila, že mentylpyrrolidonkarboxylát (CAS č. 68127-22-0), sloučenina strukturně příbuzná mentolu, může být spojena se zvýšeným relativním zvýšením jater aledvinahmotnosti u samců a samic potkanů Wistar. Akumulace .-globulinu v proximálních tubulech krysích samců byla také pozorována při dávce 1,1 ul mg/kg BW/den a NOAEL byla stanovena jako 109 mg/kg BW/den.
V této 13-týdenní studii subchronické toxicity 2-(1-menthoxy)ethanolu nebyly pozorovány žádné toxikologické změny v celkovém stavu, tělesné hmotnosti a příjmu potravy. Po hematologickém vyšetření jsme pozorovali pokles HGB (96,6 procenta oproti kontrolním průměrným hodnotám), HCT (96,3 procenta), MCV (98,4 procenta) a MCH (98,2 procenta) a zvýšení PLT (111 procenta) u mužů. 250 mg/kg, které byly považovány za toxikologické vlivy léčby 2-(1-mentoxy)ethanolem Jak absolutní (115 procent u obou pohlaví), tak relativní (119 procent u mužů a 111 procent u žen Hmotnost jater byla významně zvýšena u obou pohlaví ve skupinách s dávkou 250 mg/kg. Přestože v játrech nebyly žádné histopatologické změny, zvýšené hladiny T-chol v séru (110 procent u mužů a 121 procent u žen) a TP (105 procent u mužů) a snížení TG (60,1 procent u žen) u 250 mg/kg skupiny ukazují toxické změny spojené s metabolismem lipidů a syntézou proteinů v játrech. Snížené HGB a MCH a zvýšené PLT, T-Chol a TP u mužů a snížené TG a zvýšené absolutní a relativní hmotnosti jater u obou pohlaví byly také detekovány se statistickou významností v 28-denní předběžné studii (data neuvedena ), což potvrzuje, že tyto změněné hematologické a biochemické parametry séra, stejně jako hmotnosti jater, nebyly náhodné, ale související s testovanou látkou. Na rozdíl od toho významné zvýšení relativní hmotnosti jater zjištěné u mužské skupiny 60 mg/kg v této studii nebylo doprovázeno zvýšením absolutní hmotnosti nebo změnami souvisejících biochemických parametrů, což naznačuje, že toto zvýšení bylo adaptivní změnou.
Významně zvýšená absolutní (120 procent) a relativní (118 procent) hmotnost nadledvin ve skupině mužů 250 mg/kg byla považována za spojenou s testovanou chemickou látkou. Kromě toho zvýšená absolutní a relativní hmotnost nadledvin u obou pohlaví ukázala jasnou závislost na dávce v 28-denní předběžné studii (data nejsou uvedena), což ukazuje na souvislost s ošetřením testovanou chemickou látkou. Ačkoli hypertrofie nadledvin mohla být důsledkem stresu, v současných ani předběžných studiích nebyly zjištěny žádné nálezy naznačující stres, jako je snížený přírůstek tělesné hmotnosti nebo atrofie brzlíku a jiných lymfoidních orgánů. Vzhledem k tomu, že v případech inhibice enzymů souvisejících se steroidogenezí nemusí dojít k žádným histopatologickým změnám v nadledvinách ani při zhoršené produkci glukokortikoidů, nelze vyloučit možnost, že zvýšená hmotnost nadledvin je toxickým nálezem. Naproti tomu zvýšené relativní hmotnosti sleziny a varlat ve skupině samců 250 mg/kg, které nebyly pozorovány v předběžné studii, byly považovány za toxikologicky nevýznamné kvůli absenci histopatologických lézí nebo významně zvýšené absolutní hmotnosti. Podobně biochemie séra odhalila pokles A/G a zvýšení Ca u obou pohlaví, což bylo považováno za toxikologicky bezvýznamné, vzhledem k tomu, že nebyly zjištěny žádné abnormality v souvisejících parametrech. Navíc snížené hladiny Bil a ALP u obou pohlaví a snížené AST a ALT u žen byly v rozporu s očekávanými toxickými účinky a nebyly považovány za významné.
Chronická nefropatie charakterizovaná bazofilními tubuly, hyalinním útvarem a fokálním intersticiálním zánětem byla pozorována se statistickou významností u mužů ze všech léčených skupin. Navíc zvýšené sérum Cre a absolutní a relativníledvinahmotnosti byly detekovány ve skupinách samců 60 a 250 mg/kg; tyto změny nebyly pozorovány v léčebných skupinách žen. V těchto případech se stupeň akumulace eozinofilních granulí v buňkách proximálního tubulárního epitelu zvýšil zjevně závislým způsobem. Tyto granule byly imunohistochemicky potvrzeny jako 2uglobulin, což ukazuje na výskyt x-globulinové nefropatie. -Globuliny vázané na určité chemikálie, jako je d-limonen, se hromadí v lysozomech a jsou pozorovány v proximálních tubulech jako eozinofilní nebo hyalinní granule9. Tato akumulace může poškodit epiteliální buňky, což vede k chronické progresivní nefropatii a následné tvorbě nádoru. Ačkoli tedy NOAEL pro 2-(1-men-thoxy)ethanol spojený s ., globulinovou nefropatií u samců potkanůledvinynebyl identifikován, tento typ nefropatie je údajně specifický pro samce potkanů, a proto není relevantní pro hodnocení rizika pro člověka. Zvýšené riziko selhání ledvin zprostředkované mechanismy souvisejícími s akumulací ,-globulinu je vysoce nepravděpodobné, protože tento protein v hu-mansl4 chybí. Proto bylo považováno za rozumné vyloučit ze stanovení NOAEL změny spojené s chronickou nefropatií pozorovanou u mužů.
Závěrem lze říci, že současná 13-týdenní studie subchronické toxicity prokázala, že léčba 250 mg/kg tělesné hmotnosti/den 2-(/-menthoxy)ethanolem způsobila toxické změny v hematologii, biochemii séra a hmotnosti orgánů u mužů a samice potkana F344. Na základě pozorovaných výsledků byla NOAEL 2-(1-menthoxyethanolu vyhodnocena jako 60 mg/kg tělesné hmotnosti/den pro obě pohlaví.
Reference
1 JEFF. WHO Food Additives Series: 60. Hodnocení bezpečnosti některých potravinářských přídatných látek. 579–593. 2009.
2. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Toyoda T a Ogawa K. Hodnocení subchronické toxicity 5-hexenyl isothiokyanátu, přírodně identické aromatické látky z Wasabia japonica, u potkanů F344/DuCrj. Food Chem Toxicol. 122: 80–86. 2018. [Medline] [CrossRef]
3. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T a Ogawa K. 13- týdenní studie subchronické toxicity acetalu vanilin propylenglykolu u potkanů F344. Food Chem Toxicol. 132: 110643. 2019. [Medline] [CrossRef]
4. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T, Takahashi M, Inoue K a Ogawa K. 13-týdenní studie subchronické toxicity 2-ethylbutanalu u potkanů F344. Regul Toxicol Pharmacol. 100: 118–126. 2018. [Medline] [CrossRef]
5. Toyoda T, Cho YM, Matsushita K, Tachibana S, Senuma M, Akagi J a Ogawa K. 13-týdenní studie subchronické toxicity hexylacetátu u SD potkanů. J Toxicol Pathol. 32: 205–212. 2019. [Medline] [CrossRef]
6. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Tatebe C, Sato K a Ogawa K. Hodnocení subchronické toxicity methyletheru isoeugenolu u potkanů F344/DuCrj při 13-týdenním perorálním podávání. Regul Toxicol Pharmacol. 102: 34–39. 2019. [Medline] [CrossRef]
7. Ide T, Mizuta Y, Akagi J, Masumoto N, Sugimoto N, Sato K, Ogawa K a Cho YM. 90-denní studie toxicity po opakovaném orálním podávání čtyř stereoizomerů 2,4-dimethyl- 4-fenyltetrahydrofuranu, syntetické aromatické látky, u potkanů F344. Regul Toxicol Pharmacol. 114: 104664. 2020. [Medline] [CrossRef]
8. Furukawa S, Nagaike M a Ozaki K. Databáze pro technické aspekty imunohistochemie. J Toxicol Pathol. 30: 79–107. 2017. [Medline] [CrossRef]
9. Seely JC, Hard GC a Blankenship B. Kidney. In: Boor man's Pathology of the Rat, 2nd ed. AW Suttie (ed). Aca demic Press, Londýn. 125–166. 2018.
10. Takanobu K, Aiso S, Umeda Y, Senoh H, Saito M, Katagiri T, Ikawa N, Ishikawa H, Mine T, Take M, Haresaku M, Matsumoto M a Fukushima S. [Základní údaje o spontánních nádorech v F344 /DuCrlCrlj krysy]. Sangyo Eiseigaku Zasshi. 57: 85–96. 2015 (v japonštině). [Medline] [CrossRef]
11. JEFF. Řada technických zpráv WHO: 891. Hodnocení určitých potravinářských přídatných látek (Padesátá první zpráva Společného výboru expertů FAO/WHO pro potravinářská přídatná látka). 111–118. 2000.
12. Wallig MA. Endokrinní systém. In: Základy toxikologické patologie, 3. vyd. MA Wallig, WM Haschek, CG Rousseaux, B Bolon a BW Mahler (eds.). Academic Press, Londýn. 565–624. 2018.
13. Swenberg JA. 2u-globulinová nefropatie: přehled zahrnutých buněčných a molekulárních mechanismů a jejich důsledků pro hodnocení rizika pro člověka. Environmentální zdravotní perspektiva. 101 (Suppl 6): 39–44. 1993. [Medline] [CrossRef]
14. Škvarky P. Močové cesty. In: Histopathology of Preclinical Toxicity Studies, 4th ed. Academic Press, Londýn. 537–614. 2012.