Polysacharidy Xinjiang Cistanche Deserticola mají antioxidační účinky
Aug 30, 2023
abstraktní
Byla studována antioxidační aktivita polysacharidu Cistanche deserticola in vitro. Využití kyseliny askorbové jako kontroly, Fentonova reakce k produkci hydroxylových radikálů, autooxidační reakce dopaminu za vzniku superoxidových aniontových radikálů, reakce chlornanu sodného s peroxidem vodíku za vzniku singletového kyslíku, difenylové hořké hydrazinové radikály jako experimentální model , účinky polysacharidů Cistanche deserticola na superoxidové aniontové radikály, hydroxylové radikály DPPH · volný radikál (difenyl hořký hydrazinový radikál), vychytávací efekt singletového kyslíku. Výsledky ukázaly, že polysacharidy z Cistanche deserticola měly zjevné vychytávací účinky na výše uvedené volné radikály a vychytávací účinek pozitivně koreloval s koncentrací polysacharidů.
Klíčová slova :Cistancon tubulosa Polysaccharide; Volné radikály
1. Úvod
Organismus v procesu oxidativního metabolismu životních aktivit nepřetržitě produkuje různé reaktivní volné radikály kyslíku (ROS), které jsou meziproduktem oxidačně-redukční reakce aerobního metabolismu.Výzkum zjistil, že přebytek volných radikálů napadne životní makromolekuly a různé organely, způsobí různá poškození na molekulární úrovni, úrovni buněk, tkání a orgánů, urychlí proces stárnutí těla a vyvolá onemocnění, jako je trombóza, cukrovka, ateroskleróza, nádory atd. [1]. Vzhledem k toxicitě chemicky syntetizovaných antioxidantů pro lidský organismus se hledání přírodních antioxidantů s vysokou účinností a nízkou toxicitou, které dokážou odstraňovat volné radikály kyslíku, stalo horkým výzkumným tématem v oblasti medicíny, potravinářství, chemického inženýrství a dalších oborů. v posledních letech.
Cistanche deserticola(YCMa.)je vzácný čínský tradiční lék a je známý jako „pouštní ženšen" [2]. Cistanche deserticola mapolysacharid je jednou z hlavních bioaktivních složek Cistanche deserticola, ale neexistuje žádná zpráva o tom, zda má polysacharid Cistanche deserticola účinek na vychytávání volných radikálů. V tomto článku byly pomocí spektrální analýzy stanoveny vychytávací účinky polysacharidu Cistanche deserticola na superoxidový aniontový radikál, hydroxylový radikál, DPPH · volný radikál a singletový kyslík, aby se vyhodnotila jeho antioxidační aktivita a poskytl vědecký základ pro plný vývoj a využití tento přírodní zdroj.
Čínská bylina cistanche
2. Experimentální část
2.1 Nástroje a činidla
UV-2401 UV-viditelný spektrofotometr (Shimadzu, Japonsko); Ultra citlivý trubicový luminometr LumatLB9507 (Německo
BertholdTechnologies); Rotační výparník RE-52CS (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronická termostatická vodní lázeň (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH metr PHS-3C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vakuová sušicí pec (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: zakoupeno od Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamin (Čínský institut pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů), FeSO4, EDTA, vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 atd. jsou všechna domácí analytická činidla. Experimentální voda je iontoměničová destilovaná voda.
2.2 Experimentální metoda
2.2.1 Metoda extrakceCistanche deserticolapolysacharid
Vezměte 30 g prášku Cistanche deserticola a vložte jej do 500ml kuželové baňky. Ponořte jej do petroletheru (60-90 stupeň), etheru a 80% ethanolu horkého roztoku (30 stupňů) na 6 hodin, v tomto pořadí, a zbytek se odpaří, aby se rozpouštědlo vysušilo. Zbytek filtru namočte do vody v poměru 1 ∶ 10 na 24 hodin, zahřejte na 30 stupňů a extrahujte 100 minut. Po extrakci centrifugujte, abyste získali supernatant. Po zahuštění supernatantu za sníženého tlaku se vysráží 95% ethanolem o trojnásobku objemu. Nechá se stát 24 hodin při 4 stupních. Po odstředění se shromáždí a vysráží. Po vakuovém sušení lze získat surový polysacharid Cistanche deserticola. Odváží se 1,00 g surového polysacharidu, rozpustí se ve vodě a vloží se do 50ml odměrné baňky do pohotovostního režimu.
Kliknutím sem zobrazíte práškové produkty Cistanche
【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.2.2 Test schopnosti vyplachováníCistanche deserticolapolysacharid na O-2 · volný radikál
Schopnost vychytávání polysacharidu Cistanche deserticola na O{{0}} · byla testována produkcí volných superoxidových radikálů (O-2 ·) z autooxidace dopaminu [3]. Přidejte 3.0ml {{10}}.1mmol/LpH=10.12 uhličitanového pufrovacího roztoku, 3{16}}ml vody a {{18 }}.5 ml roztoku polysacharidového vzorku různých koncentrací v sušící zkumavce se stupnicí. Po předehřátí ve vodní lázni o teplotě 30 po dobu 5 minut přidejte 1.0ml 2,0mmol/l dopaminu předehřátého ve vodní lázni o teplotě 30 stupňů, ihned promíchejte a čas, udržujte reakci na 30 stupňů po dobu 5 minut a okamžitě zastavte reakci 2 kapkami 10mol/l HCl. Použijte tlumivý roztok jako referenční, změřte absorbanci (vzorek A) při 221 nm, nahraďte vzorek (blank A) 0,5 ml vody ve slepé skupině a nahraďte vzorek 0,5 ml kyseliny askorbové v kontrolní skupině. , změřte každý vzorek třikrát paralelně a vezměte průměrnou hodnotu. O-2 · míra clearance (%)=(A blank – Vzorek)/A blank × 100%
2.2.3 Test schopnosti vyplachováníCistanche deserticolapolysacharid na · OH volný radikál
Desert živá bylina cistanche –Antioxidant
Systém EDTA-Fe (Ⅱ) - methylenová modř - H2O2 byl použit k testování schopnosti vychytávání polysacharidu Cistanche deserticola na hydroxylovém radikálu. Princip spočívá v tom, že EDTA-Fe (Ⅱ) reaguje s peroxidem vodíku za vzniku volných radikálů · OH, které snižují charakteristický absorpční pík roztoku methylenové modři při 660 nm.
Přidejte 1.0ml 5mmol/L roztoku LFeSO4, 1,2ml 5mmol/L roztoku LEDTA, 2.0ml 0.03mol/L NaH2PO{{101} {12}}tlumivý roztok Na2HPO4 (pH=7,4) a 1,3 ml 20mmol/l roztoku peroxidu vodíku do série 10ml zkumavek se zátkami, dobře protřepejte, přidejte 0,7 ml 0,2 mmol/L roztoku methylenové modři a poté přidejte 1,0 ml roztoku, který má být testován, a vitamin C1,0 o různých koncentracích, zřeďte na 10.{30}} ml vody, dobře promíchejte, udržujte při 37 stupních po dobu 30 minut a změřte hodnotu absorbance každého roztoku při 660 nm. Slepá skupina nahradila roztok vzorku vodou. Každý vzorek se měří třikrát paralelně a vezme se průměrná hodnota. · Míra vychytávání OH radikálů ve vzorku (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Ve vzorci 100 %: A0 -- absorbance hodnota nepoškozené trubky; A1 - hodnota absorbance poškozené trubice; A2 -- Fotometrická hodnota po přidání vzorku.
2.2.4 Zkouška DPPH · sací schopnostiCistanche deserticolapolysacharid
Vezměte {{0}}.1 ml roztoku polysacharidu Cistanche deserticola a přidejte jej do 5,0mLDPPH · roztoku, rychle promíchejte a nechte stát 10 minut při pokojové teplotě,
Určete jeho změnu absorbance při vlnové délce 517nm [4]. Každý vzorek se měří třikrát paralelně a vezme se průměrná hodnota. Míra clearance vzorku DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Ve vzorci 100%: A0 -- hodnota absorbance DPPH · (1,9mLDPPH ·+0,1mL 50% ethanolu) bez vzorku; A - hodnota absorbance vzorku po reakci s DPPH ·; B -- hodnota absorbance slepého vzorku (vzorek 0,1 ml+1,9 ml 50% ethanolu).
2.2.5Cistanche deserticolatest vychytávání polysacharidů singletového kyslíku 1O2
Jednolinkový kyslík (1O2) se vyrábí chemickou reakcí NaClO a H2O2 při 37 stupních [5]. Roztok použitý pro stanovení 1O2 je 100 μL2,8mmol/L roztoku NaClO, 400μL5mmol/LNaOH roztok, 300μL10mmol/LH2O2 roztok, 50μL1mmol/Luminol. Během reakce se reakční roztok přidává k roztoku vzorku a chemiluminiscenční přístroj současně automaticky zaznamenává průběh reakce. Vezměte NaClO-H2O2-NaOH-Luminol jako slepou kontrolu. Spusťte reakci a přidejte reakční roztok do zkumavky se vzorkem ze zásobní lahvičky chemiluminiscenčního přístroje podle množství nastaveného postupem. Poté se každých 5 sekund zaznamená intenzita chemiluminiscence reakční směsi na záznamový papír, každý vzorek se měří třikrát paralelně a vezme se průměrná hodnota.
Míra clearance se vypočítá podle následujícího vzorce: míra clearance (%)= (kontrolní svítivost – intenzita osvětlení vzorku)/kontrolní svítivost × 100 %
3 Výsledky a diskuse
3.1 Vyplachovací účinekCistanche deserticolapolysacharid na O-2 ·
Výhody cistanche tubulosa — Antioxidant
Chemická vlastnost O-2 · je aktivní, což může způsobit, že mastné kyseliny na biofilmu produkují peroxid a následně ničí buňky [6]. V tomto článku byla k určení schopnosti vychytávání O-2 · použita dopaminová metoda. Schopnost vychytávat Cistanche deserticola na O-2 · je znázorněna na obrázku 1. Výsledky ukázaly, že polysacharid Cistanche deserticola může inhibovat O-2 · produkovaný autooxidací dopaminu a zvyšuje se se zvýšením koncentrace v naměřeném koncentračním rozmezí (0-8mg/ml), ale schopnost vychytávání byla nižší než u kyseliny askorbové.
3.2 Vyplachovací účinekCistanche deserticolapolysacharid · OH
·OH je jedním z nejaktivnějších volných kyslíkových radikálů v aktivních formách kyslíku. Může reagovat s téměř jakoukoli biologickou makromolekulou v živých buňkách a může vést k biochemickým procesům, jako je peroxidace lipidů, polymerace proteinů a depolymerizace, štěpení nukleových kyselin atd. v tělesné tkáni, což způsobuje onemocnění tkání a buněk, což vede k výskytu různých onemocnění a urychlení stárnutí organismu [7]. Schopnost vychytávání polysacharidu Cistanche deserticola na · OH je znázorněna na obrázku 2. Výsledky ukázaly, že polysacharid Cistanche deserticola měl dobrý vychytávací účinek na · OH a ten se zvyšoval se zvyšující se koncentrací.
3.3 Schopnost vychytávání polysacharidu Cistanche deserticola na DPPH ·
DPPH · (difenyl hořký hydrazinový radikál) je stabilní volný radikál, který je v organickém rozpouštědle purpurový a má silnou absorpci blízkou 517 nm. Po přidání antioxidantů dochází k odstranění některých volných radikálů, což oslabuje vstřebávání, což lze využít pro hodnocení antioxidační aktivity této látky [8]. Viz obrázek 3 pro DPPH · vychytávací kapacitu polysacharidu Cistanche deserticola. Experimentální výsledky ukázaly, že vychytávací kapacita polysacharidu Cistanche deserticola na DPPH · pozitivně korelovala s jeho koncentrací a vychytávací kapacita byla větší než u kyseliny askorbové.
3.4 Schopnost vychytávání polysacharidu Cistanche deserticola na 1O2
Jednolinkový kyslík je excitovaný molekulární kyslík s aktivními chemickými vlastnostmi. Protože nespárované elektrony mají tendenci se párovat, volné radikály vykazují aktivnější chemické vlastnosti [9]. Vychytávací schopnost polysacharidu Cistanche deserticola vůči 1O2 je znázorněna na obrázku 4. Experimentální výsledky ukázaly, že vychytávací schopnost polysacharidu Cistanche deserticola byla nižší než kapacita kyseliny askorbové v rozsahu 0-4.0mg /ml a vychytávací kapacita polysacharidu Cistanche deserticola byla vyšší než u kyseliny askorbové, když byla koncentrace vyšší než 4.0mg/ml.
4. Závěr
Antioxidační aktivita polysacharidů Cistanche deserticola in vitro byla podrobně studována prostřednictvím různých reaktivních systémů bez kyslíkových radikálů.Z experimentálních výsledků je vidět, že v rámci experimentálního koncentračního rozmezí má polysacharidový extrakt z Cistanche deserticola vychytávací účinky na O-2 ·, · OH, DPPH · a 1O2 a vychytávací účinky jsou různé pro různé systémy.Výsledky to ukázalyPolysacharid Cistanche deserticola je účinný exogenní přírodní antioxidant, který je hodný dalšího výzkumu, vývoje a komplexního využití..
Cistanche tubulosa 200 mg— Antioxidant
