Jaké jsou výhody polysacharidu Cistanche na imunitní funkci

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Imunologická aktivita a mechanismus Cistanche Polysacharidu

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Abstraktní]Cíl: ProstudovatimunníčinnostCistanchePolysacharid(CDPS) a mechanismus jehoimunníregulace in vitro. Metody: Ke sledování regulačního efektu CDPS byla použita kolorimetrická metoda thiazolové modři (MTT).Polysacharid Cistanche) na IQS DEX TNF inhibující proliferaci myších thymových lymfocytů in vitro; CDPS (Polysacharid Cistanche) byla použita k provedení analýzy buněčného cyklu a buněčného cyklu pomocí průtokové cytometrie. Stanovení intracelulárního Ca2. Výsledky: CDPS (Polysacharid Cistanche) při vyšší koncentraci může odolat inhibičnímu účinku ISQDEX na proliferaci lymfocytů a inhibičnímu účinku vysoké koncentrace TNF na proliferaci lymfocytů a synergizovat účinek nízké koncentrace TNF na podporu proliferace na lymfocyty; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Polysacharid Cistanche) může výrazně zvýšit buňky ve fázi dělení; vyšší koncentrace (100 ug/ml) CDPS (Polysacharid Cistanche) může významně podporovat koncentraci Ca iontu v myších thymocytech. Závěr: CDPS (Polysacharid Cistanche) může podporovat buňky, aby vstoupily do fáze dělení, a lze usuzovat, že jeho podpůrný účinek na proliferaci lymfocytů myšího thymu souvisí s jeho podporou uvolňování vápníku v lymfocytech myšího thymu.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) je vzácný a vzácný čínský léčivý materiál v mé zemi. Je uveden jako nejvyšší stupeň v "Shen Nong's Materia Medica".Cistanchemá funkce vyživovat krev, vyživovat ledviny a pomáhat jangu, zvlhčovat střeva a oddalovat stárnutí. Moderní farmakologické výzkumy to ukazujíCistanchePolysacharidmůže zlepšit stav tělaimunnífunkcepodporuje syntézu DNA, posiluje fyzickou sílu, zlepšuje inteligenci a má zjevné účinky proti stárnutí [1]. Autor studoval regulaci CDPS(Cistanche Polysacharid), polysacharidová složkaCistanche, naimunnífunkcemyších lymfocytů.

Polysacharid Cistancheprosazováníproliferacelymfocyty

1 Materiál a metody

1.1 Reagencie a léky.

RPM, I 1640 střední: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamin: Shanghai Dongfeng Reagent Factory; Penicilin a streptomycin: Severní Čína Pharmaceutical Factory; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Fytohemaglutinin (PHA): Shanghai Medical Laboratory; Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng Pharmaceutical Factory; Mercaptoethanol: Fluka Company; Sérum pro novorozené tele: Sijiqing Bioengineering Company; Dexamethason (DEX) představil Dr. Ma Liang, první přidružená nemocnice lékařské fakulty univerzity Zhejiang; Tumor Suppressor Factor (TNF) poskytl Yu Yuehan, profesor, Ústav buněk, School of Life Sciences, Zhejiang University; Zbytek reagencií jsou všechna domácí analytické kvality.

1.2 Pokusná zvířata.

ICR myši, samci, 68 týdnů staří, vážící 18-20g, 22, byly zakoupeny od Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 Extrakce polysacharidu Cistanche [2]:

CistanchePolysacharidje extrahován naší laboratoří! Po rozdrcení surové drogyCistanchePonoří se do horkého ethanolu, extrahuje se vroucí vodou a vysráží se v ethanolu. Neutrální enzym kombinovaný se Sewagovou metodou pro deproteinizaci, aniontovou DEAE-Sephadex A- 50 výměnnou chromatografií a Sephacry S-200 gelovou filtrační chromatografií k získání jediné složky CDPS (Polysacharid Cistanche)). Uchovávejte v suchu, před použitím použijte neúplný RPMI1640 k vytvoření určité koncentrace a sterilizujte ultrafiltrací

1.4 Příprava lymfocytů sleziny a brzlíku [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, upravte koncentraci slezinných buněk na X 10 /ml a koncentraci thymocytů na × 10 stupňů /ml

1.5 Reakce proliferace lymfocytů:Podle Mosmanmnovy metody [4] Zlepšení: 96-jamková kultivační destička, přidejte 10/ml suspenze slezinných buněk nebo vody 10/ml suspenze thymocytů 100M1 a různé koncentrace léčiv 10041 do každé jamky. Kultivujte v CO2.37C inkubátoru po dobu 72 hodin. 4 hodiny před koncem kultivace přidejte do každé jamky 8 μl MTT (5 mg/ml). Na konci kultivace odsajte 150" 1 supernatantu z každé jamky a přidejte 0,5N hydrochlorid isopropanolu 150M1. Jemně protřepejte na mikrotřepačce, aby se úplně rozpustily modré krystaly. Změřte OD570 na čtečce mikrodestiček. Nastavte každý experiment bod jako tři replikační jamky.

1.6 Stanovení vlivu na buněčný cyklus [5]:

{{0}}jamková destička pro kultivaci buněk, do každé jamky přidejte 1 ml suspenze thymocytů 4 10 stupňů /ml, přidejte různá činidla a roztok polysacharidů do 2 ml v silném CO, 37 inkubátorů Po kultivaci po dobu 72 hodin centrifugujte při 1500 ot./min po dobu 15 minut, zlikvidujte supernatant, přidejte 7 ethanolu k fixaci vysrážených buněk, uložte při 4 °C pro pohotovostní testování, promyjte buňky dvakrát PBS, centrifugujte při 1500 ot./min po dobu 15 minut, zlikvidujte supernatant a přidejte Poté, co bylo 0,5 ml 0,1 RNázyA štěpeno při 4 °C po dobu 30 minut, 50 ug/ml bromacetátu bylo barveno po dobu 30 minut při 4 °C a intenzita fluorescence vzorků buněk byla měřena na průtokovém cytometru FACScan. Pro každý vzorek bylo shromážděno 10000 buněčných testovacích bodů a data byla použita pro analýzu softwaru tříkolky Mul.

1.7 Stanovení intracelulární koncentrace vápenatých iontů [6]

Odeberte myší thymocyty stejným způsobem jako výše. Suspendujte v neúplném kultivačním médiu RPMIl640 a upravte koncentraci buněk na × 10'/ml. Přidejte 1 ml suspenze thymocytů a 1 μM do každé experimentální zkumavky Fluo-3AM barvicí roztok 5μ1, 2 procenta F-275μ1, po inkubaci při 37 °C po dobu 30 minut promyjte dvakrát neúplným RPM1640, 1500 r/ min, centrifugujte 10 min, odstraňte supernatant a přidejte různé koncentrace polysacharidů a polysacharidů k ​​precipitovaným buňkám. Po ConA byla intenzita fluorescence měřena na průtokovém cytometru FACScan. Pro každý vzorek byla shromážděna data 10000 buněčných testovacích bodů a analyzována softwarem CELLQUEST. 1.8 Pro analýzu rozptylu byly použity statistické metody a měření buněčného cyklu a vápenatých iontů bylo analyzováno softwarem průtokového cytometru.

Cistanche Polysacharid z cistanche deserticola

2 Výsledky

2.1 Polysacharid Cistanche in vitro inhibuje proliferaci myších thymových lymfocytů pomocí ISO DEX TNF

Agonista -adrenergních receptorů isoproterenol (ISO) a třída hormonu kůry nadledvin dexamethason (DEX) inhibují proliferaci lymfocytů CDPS (Polysacharid Cistanche) ve vyšší koncentraci (75 125ug/ml) může odolat inhibičnímu účinku ISO DEX na proliferaci lymfocytů (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polysacharid) (125 ug/ml) ve vyšší koncentraci může odolat inhibičnímu účinku TNF a synergicky podporovat proliferaci lymfocytů s nízkou koncentrací TNF (obrázek 2)

2.2 Cystanche Polysacharidová regulace cyklu thymu lymfocytů

CDPS (CistanchePolysacharid) 25 ug/ml 100 ug/ml 200#g/ml tři koncentrace působily na myší thymické lymfocyty po dobu 72 hodin, obsah DNA v buňkách byl měřen pomocí FACS a byl vypočten index proliferace (PI) podle vzorce. Výsledky ukazují, že jak 100 ug/ml, tak 200 ug/ml může významně zvýšit počet buněk ve fázi dělení a index proliferace (68,0 procent, 56,6) obou je významně vyšší než u kontrolní skupiny (44,6) a 200 ug/ml skupina je mírně nižší než skupina 100 ug/ml, protože při koncentraci 200 ug/ml má její účinek na buněčnou proliferaci klesající tendenci [7]. Hodnota PI (47,5 procenta) u skupiny s 25 ug/ml nebyla významně vyšší než u kontrolní skupiny.

2.3 Vliv polysacharidu Cistanche na koncentraci vápenatých iontů v myších thymocytech

Experimentální výsledky ukazují, že vyšší koncentrace (100 ug/ml) CDPS (Polysacharid Cistanchee) může významně podporovat zvýšení koncentrace vápenatých iontů v myších thymocytech Ve srovnání s kontrolní skupinou je zde významný rozdíl (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Diskuse

Cistanche, běžně známý jako„pouštní ženšen“, je suchá, šupinatá masitá naťCistanche.Cistanchemá funkce vyživování jangu ledvin, výživné esence, krve a střev. Patří k jakémusi vzruchu kůry hypofýzy-nadledvinky nebo má hormonálně podobný účinek jako kůra nadledvin. Cenná čínská medicína, která dokáže regulovatimunnífunkcez těla. Naše předchozí výsledky výzkumu ukazují, že CDPS (Polysacharid Cistanche) in vitro může podporovat proliferaci thymických T lymfocytů, které nebyly aktivovány nebo aktivovány ConA PHA. V kombinaci s ConA PHA existují dva typy stimulátorů T buněk, věříme, že CDPS (Polysacharid Cistanche) je Badjuvant pro T buňky a také jsme zjistili, že CDPS (Polysacharid Cistanche) může významně zvýšit sekreci myších slezinných lymfocytů při vyšších koncentracích [8]

Některé studie zjistily, že rekombinantní TNF může způsobit apoptózu normálních myších a lidských shluků T lymfocytů in vitro a tento účinek může být potenciálně inhibován IIL-2 IL-1 IFN a IIL-4 s dexamethasonem (DEX) Může inhibovat proliferaci lymfocytů inhibicí exprese lymfocytů a sekrece IL-2 a down-regulací produkce vysoce afinitního IL-2R. Tento experiment zjistil, že vyšší koncentrace CDPS (CistanchePolysacharid) může působit proti účinkům vysoké koncentrace TNF na proliferaci lymfocytů. Inhibice, synergická s nízkou koncentrací TNF k podpoře proliferace lymfocytů a může působit proti inhibičnímu účinku ISQ DEX na proliferaci lymfocytů. Tyto efekty jsou právě prostřednictvím CDPS (CistanchePolysacharid), aby podporovaly proliferaci T lymfocytů a jsou autokrinní T buňkami IL-2 a dalšími cytokiny.

V posledních letech bylo provedeno mnoho studií o imunofarmakologických účincích rostlinných polysacharidů, ale jen málo studií oimunníregulační mechanismus polysacharidů, zejména signální transdukční dráhu polysacharidů působící na lymfocyty s Ca2 jako druhým poslem. Neexistuje žádná zpráva. Tento experiment provedl předběžný výzkum v této oblasti. Mezi intracelulární signální molekuly patří cAM R Ca, IP3 DG cGMP atd., mezi nimiž má Ca“ mimořádně důležitý fyziologický účinek na buňky. Zvýšení intracelulární koncentrace Ca² je důležitým jevem v časném stadiu aktivace a proliferace lymfocytů. K tomuto procesu dochází především v prvních desítkách sekund až minut, kdy jsou buňky aktivovány stimulátory. Klasickým způsobem aktivace T buněk je fosfatidylinositol (PIB), který metabolizuje fosfatidylový sval. Alkoholový metabolit 1,4.5-inositoltrifosfát (IP3) může podporovat uvolňování Ca“ uloženého ve vnitřní síti vazbou na receptory vnitřní sítě, zvyšuje hladinu intracelulárního Ca2 a koncentraci intracelulárního Ca * zvyšuje. Vysoká může podporovat produkci NF-AT (nudeický faktor aktivovaných T buněk), ten má vliv na podporu exprese genu IIL-2. Experimentální výsledky ukazují, že vyšší koncentrace (100 ug/ml ) z CDPS (CistanchePolysacharid) je účinný po dobu 5 10 min Čas má významný vliv na zvýšení koncentrace Ca* v myších thymocytech a má synergický účinek s ConA. Proto spekulujeme, že CDPS (Polysacharid Cistanche) podporuje uvolňování vápníku v myších thymických lymfocytech ke zvýšení intracelulární koncentrace iontů vápníku. Zvýšení podporuje expresi genu IL{0}} a vede k proliferaci T buněk, což je jeden z teoretických základůCistanchePolysacharidyregulační účinek na organismus

Polysacharid Cistanche

Reference

1. IN XiuHin, SU Yuke (Obecná situace farmakologického výzkumu naCistancheSka 【J】. Čínské tradiční a bylinné drogy ((čínská bylinná medicína). 1993.24(10. 550-552(v čínštině))

2. ZHANG Weijiee ( Biochemická technologie složeného polysacharidu [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (v čínštině)

3. MA Bo- (Ma Baoli). Technologická imunologie【M1. Shanghai Medical University Pres (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Číňané))

4. Mosmann T. Rapiloloimerický test pro snadnější růst a přežití aplikace na proliferaci a cytotoxicitu pryč [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, atd.), Vliv zinku na proliferaci cyklických buněk vimunníorgánová analýza pomocí průtokové cytometrie [J]. Čínská imunologie (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (v čínštině)

6. axin TAO. JIYong-yong, GAO Qi-rong a kol. (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong atd.). Analýza FACS změn v intracelulárním C2 během elaktivace[J] Čínský žurnál imunologie (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (v čínštině)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Purifikace d polysachariduCistancheDeserticolaYC Mfa a jeho imunomodulační účinky na Tellfunction[J].burnal z Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998,27 (3: 108-111. (v čínštině)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotoxické Efed of TNF a Lymphotoxin on T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.