Terapeutický účinek Cistanosidu A na kostní metabolismus myší po ovariektomii

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktní

Cistanosid A (Cis A) je aktivní fenylethanoidní glykosid izolovaný zCistanche deserticola YC Mazískal naši pozornost kvůli své možné roli při léčběosteoporóza. V této studii jsme hodnotili účinky Cis A na modelu myší s ovariektomií (OVX) a zkoumali její základní molekulární mechanismy účinku. Po 12 týdnech orálně podávané intervence vykazoval Cis A (20, 40 a 80 mg/kg tělesné hmotnosti/den) významné antiosteoporotické účinky na myši OVX, o čemž svědčí zvýšená pevnost kostí, hustota kostních minerálů a zlepšená mikroarchitektura trabekulární kosti. Mezitím byly sníženy aktivity markerů kostní resorpce, včetně tartrát-rezistentní kyselé fosfatázy (TRAP), deoxypyridinolinu (DPD) a katepsinu K, a byla zvýšena bioaktivita markeru tvorby kosti alkalické fosfatázy (ALP). Cis A mechanicky inhiboval expresi faktoru 6 spojeného s TNF-receptorem (TRAF6), upstream molekuly, která je sdílena jak zesilovačem lehkého řetězce nukleárního faktoru kappa aktivovaných B buněk (NF-κB), tak fosfatidylinositol 3-kinázou ( PI3K)/Akt dráhy a následně suprimovaly hladiny receptorových aktivátorů ligandu jaderného faktoru kappaB (RANKL), downregulovaly expresi NF-κB a upregulovaly osteoprotegerin (OPG), PI3K a Akt, což znamená, že Cis A měla antiosteoporotickou aktivitu u ovariektomizovaných myší prostřednictvím TRAF6-zprostředkované inaktivace NF-kappaB a aktivace PI3K/Akt. Společně představujeme nová zjištění, že Cis A downregulací TRAF6 koordinuje inhibici NF-KB a stimulaci drah PI3K/Akt, aby podpořila tvorbu kosti a zabránila kostní resorpci. Tato data prokázala potenciál Cis A jako slibného činidla pro léčbuosteoporózachoroba.

Klíčová slova: cistanoside A; ovariektomizované myši; antiosteoporotické; TRAF6; RANKL

Úvod

Osteoporóza, systémový kosterní „tichý zabiják“, se v posledních letech stal velkým zdravotním rizikem, které postihlo více než 2 000 milionů lidí na celém světě [1]. Je charakterizována nízkou hustotou kostní hmoty (BMD) a zhoršením mikroarchitektury, které jsou důsledkem nadměrné resorpce kosti nad tvorbou kosti a nakonec vedou k osteoporotické zlomenině [2,3]. V současné době je identifikace látek, které blokují osteoklastickou diferenciaci a resorpci, běžnými a úspěšnými strategiemi pro vývoj terapeutických léků.osteoporóza[4] a skutečně existuje mnoho syntetických látek, včetně estradiolvalerátu a alendronátu sodného, ​​které by mohly předcházet a léčitosteoporóza. Léky na nemoci však zdaleka nejsou ideální; některé z těchto léků by mohly zvýšit riziko karcinomu endometria a prsu a mají také určitý stupeň vedlejších účinků, jako je hyperkalcémie, hyperkalciurie atd. [5], které omezují jejich klinické aplikace. Po více než tisíciletí se proto tradiční čínská medicína (TCM), zejména jedlá TCM s izolovanými bioaktivními sloučeninami a frakcemi, ve velké míře používají v asijských zemích bezpečně a účinně k prevenci a léčbě různých onemocnění, včetněosteoporóza[6,7].

Osteoporózaje charakterizována jako zvýšená kostní resorpce v důsledku zvýšené osteoklastogeneze a tento proces zahrnuje začlenění hematopoetických monocytů do prekurzorů osteoklastů, které se spojí za vzniku vícejaderných osteoklastů, které se zaměřují na místa kosti procházející remodelací [4]. Aktivátor receptoru pro nukleární faktor-κB ligand (RANKL), klíčový faktor, který je secernován z osteoblastů, stimuluje diferenciaci monocytů na osteoklasty [8,9]. Interakce RANKL s jeho receptorem RANK má za následek kaskádu intracelulárních událostí, včetně NF-KB, PI3K/Akt, kalcium/kalmodulin-dependentní kinázy rekrutováním adaptorového signálního proteinu TNF receptor-asociovaný faktor (TRAF6). V důsledku toho je několik markerových genů souvisejících s osteoklasty, včetně TRAP, kathepsinu K a DPD, upregulováno a proces kostní resorpce je urychlen.

Fenylethanoidové glykosidy jsou charakterizovány kyselinou skořicovou a hydroxylfenylethylovými skupinami, které jsou navázány na -glukopyranózu (apióza, galaktóza, rhamnóza, xylóza atd.) prostřednictvím glykosidické vazby, které jsou široce rozšířeny v léčivých rostlinách [10]. Cistanosid A (Cis A) je aktivní fenylethanoidní glykosid vCistanche deserticola YC Ma. Podle záznamu čínského lékopisu se C. deserticola tradičně používala k léčbě deficitu jinu ledvin, svalové slabosti, bederní slabosti atd. a fenylethanoidové glykosidy jsou hlavní bioaktivní složkou této byliny [11]. Na základě „ledvinové“ teorie TCM by ledviny mohly řídit kostní systém, což znamená, že vývoj a funkce kostí závisí na esenci ledvin a tato esence ledvin se může přeměnit v kostní dřeň, aby vyživovala kosti. podporují růst a opravu kostry a posilují kostru [12]. Protože C. deserticola může posílit ledviny, předpokládali jsme, že Cis A může předcházet a léčitosteoporóza. Tato studie byla proto navržena tak, aby potvrdila potenciál Cis A v prevenciosteoporózaza použití ovariektomizovaného myšího modelu a markery tvorby a resorpce kosti, stejně jako související potenciální mechanismy, byly stanoveny pro odhad antiosteoporotické bioaktivity tohoto činidla.

Výsledek

Účinky Cis A na kostní tříbodové ohybové testování

Abychom analyzovali, zda léčba Cis A dělá kost silnější, podrobili jsme stehenní kosti tříbodovému ohybovému testu. Jak ukazuje obrázek 1, maximální zátěž aplikovaná při zlomeninách byla 21,5 procenta a 22.0 procent vyšší u zvířat léčených 20 mg/kg a 80 mg/ kg Cis A, v tomto pořadí, ve srovnání se zvířaty ve skupině po ovariektomii (OVX) (p < 0.05).="" mezitím="" léčba="" cis="" a="" také="" zvýšila="" tuhost="" kostí;="" všechny="" myši="" léčené="" cis="" a="" vykazovaly="" významně="" zvýšenou="" tuhost="" s="" údaji="" 121.0="" ±="" 12,1="" (p="">< 0,05),="" 124,1="" ±="" 16,2="" (p="">< 0,05)="" a="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p="">< 0,01).="" ve="" srovnání="" se="" 102,2="" ±="" 10,7="" ovx="" myší.="" výsledky="" ukazují,="" že="" zvýšená="" pevnost="" kostí="" u="" ovx="" myší="" léčených="" cis="" a="" byla="" způsobena="" zvýšeným="" množstvím="" kosti="" a="" zlepšením="" kvality="">

Účinky Cis A na kostní mikroarchitekturu

Trojrozměrná mikroarchitektura trabekulární kosti u myší měřená pomocí mikro-CT (obrázek 2 a tabulka 1) intuitivně ukazuje, že myši ve skupině OVX vykazovaly významné snížení trabekulární plochy a počtu trabekulárních kostí ve srovnání s falešnou skupinou, což naznačuje, že ovariektomie mohlo vyvolat výrazné snížení hustoty kostní hmoty (BMD, -46 procent), obsahu kostních minerálů (BMC, -66 procent), obsahu tkáňových minerálů (TMC, -85 procent), objemové frakce kostí (BVF, -82 procent), trabekulární číslo (Tb. N, −76 procent ) a zvýšení trabekulární separace (Tb. Sp, plus 80 procent ) bez jakékoli modifikace celkové hustoty tkáňových minerálů (TMD) a tloušťky trabekulárních trámců (Tb. Th) po operaci 12 týdnů.

Nicméně OVX myši léčené Cis A vedly ke zvýšení BMD v závislosti na dávce (plus 43 procent ~57 procent), BMC (plus 65 procent ~73 procent), TMC (plus 83 procent ~90 procent), BVF (plus 80 procent ~88 procent), větší snížení Tb. Sp (-79 procent ~88 procent) a dále zvýšený Tb. N (plus 73 procent ~ 82 procent) ve srovnání se skupinou OVX. Zdá se, že TMD není ovlivněna ovariektomií, ale byla významně zvýšena léčbou estradiolvalerátem (EV).

Účinky Cis A na markery tvorby kosti a resorpce

Účinky Cis A na markery kostní resorpce, včetně TRAP, DPD, kathepsinu K a indexu tvorby kosti ALP a kostního Gla-proteinu (BGP), jsou uvedeny na obrázku 3. Po 12 týdnech operace ovariektomie se aktivity TRAP, DPD a katepsin K ve skupině OVX byly významně zvýšeny, zejména DPD, která se zvýšila o téměř 55,6 procenta; TRAP a kathepsin K byly zvýšeny o 43,5 procenta a 38,1 procenta, v tomto pořadí, ve srovnání s falešnou skupinou. Cis A podávaný perorálně po dobu 12 týdnů prokázal značný potenciál v prevenci všech výše uvedených markerů kostní resorpce, zejména vysoká dávka (80 mg/kg) vykazující významný účinek na potlačení aktivit DPD o 45.0 procent , TRAP o 49.0 procent a katepsin K o 44.0 procent (p < 0,01)="" ve="" srovnání="" s="" skupina="" ovx="" (obrázek="" 3).="" přestože="" byl="" ve="" skupině="" ovx="" prokázán="" rostoucí="" trend="" aktivit="" alp="" a="" bgp,="" nebyly="" pozorovány="" žádné="" statisticky="" významné="" změny.="" nicméně="" významné="" zlepšení="" aktivity="" alp="" bylo="" pozorováno="" ve="" skupinách="" léčených="" nízkou="" a="" vysokou="" cis="" a="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" s="" falešnou="" léčbou="" (p=""><>

Účinky Cis A na hladiny proteinové exprese TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG a RANKL

Analýza Western blot odhalila, že ve srovnání se simulovanou skupinou byly hladiny proteinů TRAF6, NF-κB a RANKL ve skupině OVX významně zvýšeny (p < 0.05),="" zatímco="" opg,="" pi3k="" a="" akt="" byly="" významně="" sníženy="" (obrázek="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" nebo="" 80="" mg/kg)="" významně="" snížila="" expresi="" traf6="" (p="">< 0.05),="" po="" níž="" následovala="" exprese="" rankl="" poklesl="" a="" opg="" se="" zvýšil,="" což="" znamená,="" že="" poměr="" opg/rankl="" byl="" upregulován.="" v="" důsledku="" toho="" byly="" signální="" kaskády="" nf-kb="" downregulovány="" a="" pi3k/akt="" byly="" upregulovány="" léčbou="" cis="" a="" (p="">< 0,05).="" molekuly="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" z="" 11="" 2.1.4.="" účinky="" cis="" a="" na="" hladiny="" proteinové="" exprese="" traf6,="" nf-kb="" pi3k,="" akt,="" opg="" a="" rankl="" western="" blot="" analýza="" odhalila,="" že="" ve="" srovnání="" s="" falešnou="" skupinou="" byly="" hladiny="" proteinů="" traf6,="" nf-kb="" a="" rankl="" ve="" skupině="" ovx="" významně="" zvýšené="" (p="">< 0,05),="" zatímco="" opg,="" pi3k="" a="" akt="" byly="" významně="" sníženy="" (obrázek="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" nebo="" 80="" mg/kg)="" signifikantně="" downreguloval="" expresi="" traf6="" (p="">< 0,05),="" následovalo="" snížení="" exprese="" rankl="" a="" zvýšení="" opg,="" což="" znamená,="" že="" poměr="" opg/rankl="" byl="" upregulován.="" v="" důsledku="" toho="" byly="" signální="" kaskády="" nf-kb="" downregulovány="" a="" pi3k/akt="" byly="" upregulovány="" léčbou="" cis="" a="" (p=""><>

Diskuse

Vzhledem k omezením současných terapeutických možností proosteoporózaonemocnění, existuje potřeba alternativ z potravin nebo přírodních jedlých léčivých rostlin. V rámci naší pokračující snahy objevit účinná antiosteoporotická činidla z TCM jsme našli řadu extraktů, frakcí a sloučenin, které mají účinek antiosteoporotických vlastností [13,14].Cistanche deserticolaje důležitou klasickou TČM, u které bylo zjištěno, že má příznivý bezpečnostní profil [15] a široké léčebné funkce při léčbě deficitu ledvin atd. [16]. Podle teorie TCM se k léčbě obvykle používaly TCM, které mají účinek povzbuzující ledvinyosteoporóza; fenylethanoidové glykosidy jsou hlavními bioaktivními složkami této byliny, což znamená, že fenylethanoidní glykosidy obsažené v C. deserticola mohou mít antiosteoporotické vlastnosti. Bylo prokázáno, že extrakt z C. deserticola může významně inhibovat snížení BMD a zabránit zhoršení trabekulární mikroarchitektury způsobené OVX [17]. V experimentu in vitro také významně zvýšil ALP, kostní morfogenetický protein-2 a mRNA osteopontinu a také kostní mineralizaci kultivovaných osteoblastů [18]. Echinakosid, hlavní bioaktivní složka C. deserticola oficiálně zaznamenaná v čínském lékopisu [11], vykazovala antiosteoporotický účinek při vysoké dávce 30~270 mg/kg tělesné hmotnosti/den [19] a další výsledky in vitro ukázaly, že by mohly podporovat regeneraci kostí zvýšením poměru OPG/RANKL v buňkách MC3T3-E1 Subklon 14 [20]. Cis A byl jedním z fenylethanoidových glykosidů izolovaných z C. deserticola a několik zpráv odhalilo, že tato sloučenina má antioxidační aktivitu [21] a protizánětlivé vlastnosti [22,23]. Nedávno publikovaná práce zjistila, že Cis A vykazuje ochranné účinky na hepatotoxicitu vyvolanou CCl4 a alkoholem u myší a také vykazuje ochrannou vlastnost na poškození vyvolané ethanolem v primárních kultivovaných myších hepatocytech in vitro [24]. V naší současné studii výsledky ukázaly, že Cis A má antiosteoporotickou aktivitu při nízké dávce (20~80 mg/kg tělesné hmotnosti/den) za použití modelu myší s ovariektomií, a tato bioaktivita byla vyvíjena snížením hladiny TRAF6, potlačením exprese RANKL a NF-KB a stimulace OPG, PI3K a Akt, což znamená, že terapeutický účinek Cis A u OVX myší byl prostřednictvím mechanismu TRAF6-zprostředkované inaktivace NF-kappaB a aktivace PI3K/Akt.

Je dobře známo, že ovariektomie může způsobitosteoporózase zřejmým poklesem BMD, biomechanické síly, kvality kosti a mikroarchitektury trabekulární kosti a výše uvedené změny jsou částečně způsobeny deficitem estrogenů [25]. Nyní, v tomto experimentu in vivo, naše studie ukazuje, že ovariektomie byla vyvolánaosteoporózavedlo k významnému snížení biomechanické síly a trabekulárních strukturálních parametrů, včetně BMD, BMC, TMC a Tb. N a zvýšení Tb. Sp; a léčba Cis A významně zlepšila mechanické vlastnosti kosti včetně maximálního zatížení a tuhosti, zlepšila BMD a zlepšila většinu strukturálních parametrů kostní trabekulární mikroarchitektury ve srovnání s myšmi ve skupině OVX, což naznačuje, že Cis A byl účinný při zlepšování kvality kostí a trabekulární mikroarchitektura u OVX myší.

Kromě celkové BMD lze přímo diagnostikovat tříbodový ohybový test a měření mikroarchitektury trabekulární kostiosteoporózamarkery tvorby kostí, včetně ALP a BGP, a index kostní resorpce, včetně TRAP, DPD a katepsinu K, byly také použity k objasnění souvisejících antiosteoporotických mechanismů Cis A. V naší studii byla aktivita ALP u myší skupiny OVX prokázaly nevýznamný rostoucí trend, který ukazuje na zvýšenou míru kostního obratu [26,27] v postmenopauzálnímosteoporóza; vysoké (80 mg/kg tělesné hmotnosti/den) a nízké (20 mg/kg tělesné hmotnosti/den) dávky léčby Cis A vykázaly významné zvýšení aktivity ALP ve srovnání se simulovanou skupinou, zatímco se zdálo, že aktivita BGP nebyla ovlivněna ovariektomie ve všech léčených skupinách; TRAP, DPD a katepsin K byly významně zvýšeny ve skupině OVX a podávání Cis A výrazně snížilo všechny tři markery kostní resorpce. Výše uvedená data naznačují, že Cis A má potenciální antiosteoporotickou aktivitu a tento účinek byl vyvíjen regulací kostního metabolismu, včetně potlačení kostní resorpce a zvýšení kostní tvorby.

Koordinace mezi osteoblasty a osteoklasty je kritickým faktorem při udržování integrity skeletu. Osteoklasty exprimující TRAP se připojují k povrchu kosti prostřednictvím tvorby těsnících zón vázaných na aktin, ve kterých se uvolňují proteolytické enzymy, jako je katepsin K, což vede k tvorbě resorpčních důlků. Modulace osteoklastogeneze nezralými buňkami osteoblastické linie je zprostředkována RANKL a OPG [28]. OPG je návnadový receptor, který inhibuje aktivaci osteoklastogeneze RANKL, čímž snižuje kostní resorpci. RANKL, který poskytuje důležitý signál pro progenitory osteoklastů, je membránově vázaná molekula z rodiny ligandů faktoru nekrotizujícího nádory, která podporuje tvorbu osteoklastů. Poměr exprese OPG/RANKL je považován za klíčový parametr osteoklastogenní aktivity a signální kaskády aktivované RANKL zahrnují dráhy NF-κB a PI3K [29]. Důležitost dráhy NF-κB pro osteoklastogenezi dokládá skutečnost, že delece NF-κB u myší vedla k absenci zralých osteoklastů [30]. TRAF6 se ukázal jako slibný cíl pro nová antiosteoporotická léčiva. TRAF6-deficientní myši vykazující defektní osteoklastogenezi a závažnou osteopetrózu tak prokázaly důležitost TRAF6 v kostním metabolismu. Nové důkazy poukazují na kritickou regulační funkci pro TRAF6 v RANKL/RANK-zprostředkovaných signálních kaskádách [4,31]. Údaje ze současné studie ukázaly, že léčba Cis A na myších OVX vedla ke snížení hladiny exprese proteinu TRAF6, snížení RANKL a zvýšení exprese OPG, a tím zabránila aktivaci RANKL downstream NF-κB a aktivaci signálních drah PI3K/Akt. , což naznačuje, že Cis A inhibuje diferenciaci osteoklastů inaktivací NF-kappaB zprostředkovanou TRAF{20}} a aktivací PI3K/Akt a zvyšuje poměr OPG/RANKL, následně inhibuje osteoklastogenezi a podporuje tvorbu kosti.

Reference

1. Lane, NE Epidemiologie, etiologie a diagnostikaosteoporóza. Dopoledne. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Suppl. S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, WD Intervenční prahy a diagnostikaOsteoporóza. J. Bone Miner. Res. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Antiosteoporotická aktivita centrálního icaridinu (CIT) na kostní metabolismus ovariektomizovaných potkanů. Molekuly 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Inhibice osteoklastogeneze a kostní resorpce in vitro a in vivo prenylovým flavonoidem xanthohumolem z chmele. Sci. rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, USA Estrogeny v prevenci a léčbě postmenopauzálníchosteoporóza: Přezkoumání. Dopoledne. J. Med. 1988, 85, 847-850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Antiosteoporotické účinky a proteomická charakterizace cíle a mechanismu Er-Xian odvaru na osteoblastické UMR-106 a osteoklasty indukované z RAW264.7. Molekuly 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Slunce, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Antiosteoporotická aktivita antrachinonů z Morinda Officinalis na osteoblasty a osteoklasty. Molekuly 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Úžasný osteocyt. J. Bone Miner. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Molekulární markery pro rakovinu prsu: predikce chování nádoru. Dis. Markery 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside—Přehled jeho výskytu, (bio)syntézy a farmakologického významu. Biotechnol. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Lékopis, Redakční výbor Čínského lékopisu. Pharmacopoeia Čínské lidové republiky; China Medical Science and Technology Press: Peking, Čína, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Účinky tradičního čínského bylinného přípravku na osteoblasty a osteoklasty. Maturita 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Antiosteoporotické flflavonoidy z Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Ano, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Antiosteoporotická aktivita a složky Podocarpium podocarpus. Fytomedicína 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; On, L.; Yao, S.; Zhao, P. Hodnocení bezpečnosti práškuCistanche deserticola YCMapomocí 90-denního testu krmení u potkanů ​​Sprague-Dawley. Drug Chem. Toxicol. 2016, 1.–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Studie o toxicitěCistanche Deserticola. Brada. J. Health Lab. Technol. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Anti-osteoporóza účinekExtrakt z Cistanche deserticola Mau ovariektomizovaných potkanů. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Ho, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHExtrakt z Cistanche deserticolazvyšuje tvorbu kostí v osteoblastech. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Antiosteoporotická aktivita echinakosidu u krys po ovariektomii. Fytomedicína 2013,

20, 549–557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinakosid podporuje regeneraci kostí zvýšením poměru OPG/RANKL v buňkách MC3T3-E1. Fitoterapie 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Antioxidační účinky fenylethanoidů zCistanche deserticola. Biol. Pharm. Býk. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Fenylethanoidové glykosidy s protizánětlivými aktivitami ze stonkůCistanche deserticolapěstované v poušti Tarim. Fitoterapie 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Inhibice oxidu dusnatého fenylethanoidy v aktivovaných makrofázích. Eur. J. Pharmacol. 2000, 400, 137–144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Ochranný účinek Cistanchis A na poškození vyvolané ethanolem v primárních kultivovaných myších hepatocytech. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Antiosteoporotická aktivita icariinu u krys po ovariektomii. Fytomedicína 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Biochemické markery kostního obratu. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Preventivní účinky extraktu z kůry Eleutherococcus senticosus u OVX indukovanýchosteoporózau krys. Molekuly 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Irsko, DC; Beavan, SR; Compston, JE Účinky estrogenu na expresi osteoprotegerinu, RANKL a estrogenového receptoru v lidských osteoblastech. Kost 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimunologie: sdílené mechanismy a přeslechy mezi imunitním a kostním systémem. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Požadavek na NF-kappaB ve vývoji osteoklastů a B-buněk. Gene Dev. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 zprostředkovává potlačení osteoklastogeneze a prevenci ztráty kostní hmoty vyvolané ovariektomií novým prenylovým flavonoidem. J. Bone Miner. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Antiosteoporotická aktivita fenolických sloučenin z Curculigo orchioides. Fytomedicína 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]