Preparativní izolace a čištění čtyř sloučenin z Cistanches Deserticola YC Ma vysokorychlostní protiproudovou chromatografií

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktní:

Po kroku obohacení složky na koloně silikagelu, čtyřifenylethanoidové glykosidybyly úspěšně izoloványCistanches deserticolaa purifikován preparativní vysokorychlostní protiproudovou chromatografií (HSCCC) s dvoufázovým rozpouštědlovým systémem složeným z ethylacetát-n-butanol-ethanol-voda (40:6:6:50, obj./obj. /v/v). Celkem bylo 30,9 mg akteosidu, 13,0 mg isoakteosidu, 12,5 mg syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu a 7,2 mg 2'-acetylakteosidu s čistotou vyšší než 95 procent, jak bylo stanoveno pomocí HPLC-ELSD. získané v jednostupňové separaci z 297 mgExtrakt z Cistanche deserticola, resp. Jejich struktury byly identifikovány pomocí HR-MS, 1H-NMR a 13C-NMR.

Klíčová slova: vysokorychlostní protiproudá chromatografie;Cistanches deserticola YC Ma;fenylethanoidové glykosidy; akteosid; isoacteosid; syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid; 2'-acetylakteosid.

Úvod

Cistanches deserticolaYC Ma, druhCistancheskterá patří do čeledi Orobanchacea, je známá tradiční čínská medicína pro léčbu nedostatku ledvin, ženské neplodnosti, chorobné leukorey, neurapraxie a stařecké zácpy [1]. Je to parazitická rostlina, která je hojně rozšířena na severozápadě Číny. Dosud bylo z tohoto druhu izolováno několik sloučenin, včetně fenylethanoidových glykosidů (PhGs), iridoidů a lignanů [2]. U některých PhG se uvádí, že mají antioxidační, hepatoprotektivní a neuroprotektivní účinky [3–6]. Avšak postup izolace a čištění PhG je obtížný a časově náročný. Kromě toho klasické vícenásobné chromatografické metody nejen používají velké množství organických rozpouštědel, ale také poskytují nižší výtěžnost vzorku. Vysokorychlostní protiproudá chromatografie (HSCCC), metoda separační chromatografie kapalina-kapalina bez nosiče, nabízí vynikající výtěžnost vzorku ve srovnání s některými konvenčními metodami a je široce používána pro separaci a čištění různých přírodních produktů [7–9] . Ačkoli několik PhG bylo purifikováno zCistanchesrodu a dalších HSCCC [10–14], žádná práce neuvádí čištění akteosidu, isoakteosidu, syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu a 2'-acetylakteosidu v jednom dvoufázovém systému.

V tomto článku uvádíme jednoduchou metodu separace a purifikace čtyř PhG z C. deserticola. Nakonec byly v jednom kroku získány 30,9 mg akteosidu, 13,0 mg isoakteosidu, 12,5 mg syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu a 7,2 mg 2'-acetylakteosidu separace z 297 mg frakce s čistotou 99 procent , 95 procent , 99 procent a 98 procent , v tomto pořadí . Jejich struktury byly charakterizovány na základě 1H- a 13C-NMR spektrálních dat a HR-MS spekter. Struktury čtyř PhG identifikovaných v tomto výzkumu jsou znázorněny na obrázku 1.

Výsledky a diskuse

HPLC analýza surového extraktu

Frakce n-butanového extraktu z C. deserticola obohacená o složku byla analyzována pomocí HPLC-UV. Použitou kolonou byl Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, vnitřní průměr 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, město, státní zkratka, USA), mobilní fáze byla methanol-voda (30:70, obj./obj.). Průtok byl 1 ml/min. Vlnová délka detektoru byla nastavena na 254 nm. HPLC chromatogram je znázorněn na obrázku 2. Píky 1 až 4 odpovídají akteosidu (1), isoakteosidu (2), syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu (3) a 2'-acetylakteosidu (4), respektive.

Výběr dvoufázového rozpouštědlového systému

Úspěšná separace pomocí HSCCC do značné míry závisí na výběru vhodného dvoufázového systému rozpouštědel, dvoufázový systém rozpouštědel byl vybrán podle hodnot rozdělovacích koeficientů (K) každé cílové složky a optimální rozmezí K by mělo být od {{ 2}}.5 až 2.

V experimentu jsou hodnoty K pro cílové složky několika dvoufázových systémů rozpouštědel uvedeny v tabulce 1 (ačkoli o něco vyšší pro vrchol 4, výsledky se ukázaly jako přijatelné). Mezi nimi ethylacetát-n-butanol-ethanol-voda (40:6:6:50, v/v/v/v) poskytly vhodné rozdělovací koeficienty pro cílové sloučeniny. Nakonec byl systém rozpouštědel složený ze směsi ethylacetát-n-butanol-ethanol-voda (40:6:6:50, v/v/v/v) použit k izolaci a čištění čtyř sloučenin C. deserticola, jak je ukázáno na Obrázek 3. Jak je znázorněno na obrázku 2, analýza HPLC každé frakce HSCCC odhalila, že čtyři čisté PhG (akteosid, 99 procent; isoakteosid, 95 procent; syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid 99 procent a 2'- acetylakteosid 98 procent) lze získat ze surové frakce.

Experimentální

Zařízení

Zařízení HSCCC použité v této studii byl vysokorychlostní protiproudý chromatografický systém TBE-300B (Shanghai Tauto Biotech Co., Shanghai, Čína) se třemi preparativními vícevrstvými spirálovými separačními kolonami zapojenými do série (průměr trubky=2,6 mm, celkový objem=300 ml) a 20ml vzorkovací smyčka. Poloměr otáčení nebo vzdálenost mezi osou držáku a středemosa odstředivky (osa centrifugy (R) byla 5 cm a hodnota se lišila od 0,5 na interním terminálu do 0,8 na externím terminálu (=r/R, kde r je vzdálenost od cívky k hřídeli držáku). K řízení teploty v experimentu bylo použito zařízení HX 105 s konstantní teplotou cirkulace (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Peking, Čína). Systém HSCCC byl vybaven modelem TBP-5002 středotlakým čerpadlem s konstantním průtokem, modelovým UV detektorem TBP-2000 pracujícím při 254 nm a modelovou pracovní stanicí V4.0 (Jinda Biochemistry Instrument Company, Šanghaj, Čína).

Použitým zařízením pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC) byl systém Agilent 1200, který se skládá z binárního čerpadla G1312A, autosampleru G1329A, detektoru s proměnnou vlnovou délkou G1314A (VWD), termostatované komory G1316A, odplyňovače G1379B a Agilent LC pracovní stanice. Pro detekci čistoty byl použit Alltech 3300 ELSD. Pro strukturní identifikaci sloučenin byly použity NMR spektrometry Agilent 6520 Q-TOF a Bruker AVANCE III 500-. 'H a 13C-NMR spektra (při 500 a 125 MHz, v daném pořadí) byla měřena při teplotě místnosti (22 stupňů /295,1 K).

Činidla a materiály

Ethylacetát, n-butanol a ethanol byly analytické kvality a methanol byl čistoty pro HPLC. Všechna rozpouštědla byla zakoupena od Tianjin Concord Technology Company (Tianjin, Čína). Pro všechny roztoky a ředění byla použita voda Milli-Q (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, USA). Oddenek C. deserticola byl odebrán z provincie Vnitřní Mongolsko, Čínská lidová republika, v červnu 2009. Rostlinu identifikoval prof. Lijuan Zhang a do naší laboratoře byl uložen voucherový vzorek (č. 20091001).

Příprava surového vzorku

Dusité stonky C. deserticola (1 kg) sušené na vzduchu v prášku byly refluxovány dvakrát s vodným ethanolem (8 1, 60 procent v/v) pokaždé po dobu 2 hodin. Extrakt byl odpařen za sníženého tlaku a při teplotě 60 °C až do úplného odpaření ethanolu. Zbytek se suspenduje ve vodě a extrahuje se postupně třikrát chloroformem, ethylacetátem a n-butanolem, čímž se po odpaření do sucha za sníženého tlaku získá 5,16 g n-butanového extraktu. N-butanový extrakt byl poté separován na silikagelové koloně (200–300 mesh) za použití progresivní gradientové eluce (CHCl3–MeOH, 10:1—>1:1), čímž bylo získáno osm frakcí. Frakce 6 (297 mg) byla použita pro další izolaci a separaci HSCCC.

Výběr dvoufázových rozpouštědlových systémů

Dvoufázové rozpouštědlové systémy byly vybrány podle rozdělovacího koeficientu (K) cílových složek ve frakci C. deserticola. Hodnoty K byly stanoveny LC analýzou následovně: Vhodné množství surového práškového extraktu (frakce 6) bylo rozpuštěno ve spodní fázi systému rozpouštědel a analyzováno pomocí HPLC. Oblasti píku byly zaznamenány jako A1. Poté byl k roztoku přidán stejný objem horní fáze a důkladně promíchán, aby se dosáhlo rozdělovací rovnováhy. Spodní fáze byla poté znovu analyzována pomocí HPLC. Plochy píku byly zaznamenány jako A2. K-hodnoty byly vypočteny podle následující rovnice: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Příprava dvoufázového systému rozpouštědel a roztoku vzorku

V této studii byl pro separaci HSCCC použit dvoufázový rozpouštědlový systém složený z ethylacetátu-n-butanolu-ethanolu-vody (40:6:6:50, v/v/v/v). Každé rozpouštědlo bylo přidáno do dělicí nálevky a důkladně ekvilibrováno při teplotě místnosti. Horní fáze a spodní fáze byly odděleny a odplyněny sonikací po dobu 30 minut krátce před použitím. Roztok vzorku byl připraven rozpuštěním 297 mg frakce 6 v 15 ml spodní fáze ethylacetát-n-butanol-ethanol-voda (40:6:6:50, v/v/v/v).

Postup separace HSCCC

HSCCC byla provedena následovně. Vícevrstvá spirálová kolona byla nejprve naplněna horní organickou stacionární fází. Spodní vodná mobilní fáze byla potom čerpána do hlavy kolony rychlostí průtoku 1,5 ml/min a současně byla aparatura HSCCC provozována při rychlosti otáček 900 ot./min. Poté, co byla ustavena hydrodynamická rovnováha, jak je indikováno čirou mobilní fází eluující na koncovém výstupu (přibližně o dvě hodiny později), byl injekčním ventilem vstřikován 15 ml roztok vzorku obsahující 297 mg surového extraktu (frakce 6). Výtok z kolony byl kontinuálně monitorován při 254 nm. Čtyři vrcholové frakce byly shromážděny podle chromatogramu a poté odpařeny za sníženého tlaku. Teplota zařízení byla nastavena na 25 stupňů.

HPLC analýza a identifikace HSCCC vrcholových frakcí

Vrcholové frakce z HSCCC byly analyzovány pomocí HPLC-ELSD. Použitá kolona byla Accurasil C18 (250 mm x 4,6 mm, vnitřní průměr 5 μm), mobilní fáze byla methanol-voda (30:70, obj./obj.). Průtok byl 1 ml/min. ELSD pracoval za následujících podmínek: Teplota 45 stupňů, plyn 1,6 l/min. Strukturní identifikace čtyř vrcholových frakcí HSCCC byla provedena pomocí HR-ESI-MS, 1H a 13C-NMR spektroskopie.

Strukturální identifikace

Frakce I: HR-ESI-MS pozorováno při m/z 623,2001 (M-H)-, vypočteno pro C29H35O15, 623,1981. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) 5 ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 rhamnosy), 2,79 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukózy), 5,18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } rhamnosy), 6,27 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar -CH=CH-), 6,5–7,1 (6H, aromatická H).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 5 ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C{{65} }), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4), 116,4 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,6 (C-), 127,7 (Caf-1), 115,3 (Caf-2), 146,9 (Caf-3), 149,8 (Caf-4), 116,6 (Caf{{ 98}}), 123,2 (Caf{101}}), 168,3 (Caf-), 114,8 (Caf-), 148,1 (Caf-), 104,3 (G-1), 76,1 (Glc{116} }), 81,7 (Glc-3), 70,5 (Glc-4), 76,3 (Glc-5), 62,4 (Glc-6), 103,1 (Rha{131} }), 72,3 (Rha{134}}), 72,1 (Rha{137}}), 73,9 (Rha{140}}), 70,7 (Rha{143}}), 18,5 (Rha{146} }). Ve srovnání s údaji uvedenými v literatuře [17] frakce I odpovídala akteosidu.

Frakce II: HR-ESI-MS pozorováno při m/z 623,1987 (M-H)-, vypočteno pro C29H35O15, 623,1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) 5 ppm: 1,25 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 rhamnózy), 2,78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukózy), 5,17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 rhamnózy), 6,28 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,56 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatický H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 5 ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C-2), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116,5 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,7 (C-), 127,8 (Caf-1), 115,2 (Caf{{89 }}), 146,8 (Caf-3), 149,7 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf{101}}), 169,2 (Caf-), 115,0 (Caf-), 147,3 (Caf-), 104,5 (G-1), 75,5 (Glc-2), 84,2 (Glc-3), 70,1 (Glc{122}} ), 75,7 (Glc-5), 64,7 (Glc{128}}), 102,8 (Rha{131}}), 72,4 (Rha{134}}), 72,4 (Rha{137}} ), 74,1 (Rha{140}}), 70,5 (Rha{143}}), 17,9 (Rha{146}}). 1H-NMR a 13C-NMR spektrální data byla ve shodě s daty isoakteosidu, jak je uvedeno v literatuře [18].

Frakce III: HR-ESI-MS pozorováno při m/z 6{{10}8}}7,2032 (M-H)-, vypočteno pro C29H35O14, 607,2032. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) 5 ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 rhamnosy), 2,84 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukózy), 5,19 (1H, d, J=1,5 Hz, H{{ 35}} rhamnosy), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,6-7,1 (7H, aromatický H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 5 ppm: 130,8 (C-1), 116,2 (C-2), 130,9 (C-3), 156,8 (C-4 ), 130,8 (C-5), 116,2 (C-6), 72,4 (C-), 36,4 (C-), 127,8 (Caf-1), 114,8 (Caf{{88 }}), 149,8 (Caf-3), 146,9 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf{100}}), 168,3 (Caf-), 115,4 (Caf-), 148,0 (Caf-), 104,3 (G-1), 76,3 (Glc-2), 81,7 (Glc-3), 70,4 (Glc{121}} ), 76,1 (Glc-5), 62,5 (Glc-6), 103,0 (Rha{130}}), 72,3 (Rha{133}}), 72,2 (Rha{136}} ), 73,9 (Rha{139}}), 70,7 (Rha{142}}), 18,4 (Rha{145}}). Podle literatury [18] frakce III odpovídala syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu.

Frakce IV: HR-ESI-MS pozorováno při m/z 665,21{{20}} (M-H)-, vypočteno pro C31H37O16, 665,2087. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) 5 ppm: 1,09 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 rhamnosy), 2,00 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J { {25}},5 Hz, Ar-CH2-), 4,55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukózy), 4,90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 rhamnózy), 6,29 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,62 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatické H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 5 ppm: 131,9 (C-1), 117,3 (C-2), 146,1 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116,4 (C-5), 121,4 (C-6), 72,7 (C-), 36,4 (C-), 127,7 (Caf-1), 115,4 (Caf{{93 }}), 146,9 (Caf-3), 149,9 (Caf-4), 116,6 (Caf{102}}), 123,2 (Caf{105}}), 168,1 (Caf-), 114,7 (Caf-), 148,2 (Caf-), 101,8 (G-1), 75,3 (Glc-2), 80,3 (Glc-3), 70,8 (Glc{126}} ), 76,2 (Glc-5), 62,3 (Glc{132}}), 103,3 (Rha{135}}), 72,0 (Rha{138}}), 71,8 (Rha{141}} ), 73,7 (Rha-4), 70,8 (Rha-5), 18,5 (Rha{150}}), 171,5 (C=O), 20,9 (OAC). 1H-NMR a 13C-NMR spektrální data byla v souladu s daty 2'-acetylakteosidu [17].

Závěry

Metoda HSCCC pro preparativní separaci a čištění akteosidu, isoakteosidu, syringalidu A 3'- -L-rhamnopyranosidu a 2'-acetylakteosidu zCistanches deserticola YC Mabyl založen. Tato studie ukazuje, že HSCCC je velmi výkonná technika pro preparativní separaci a čištění bioaktivních složek z rostlinných materiálů. Sloučeniny lze také izolovat v dostatečně velkém měřítku s vysokou čistotou a pak je lze použít jako referenční látky pro chromatografické studie nebo studie bioaktivity. Metoda je proveditelná, ekonomická a účinná technika pro rychlou preparativní izolaci komplikovaných přírodních produktů.

Poděkování

Tato práce byla podpořena Programem pro učence z Čchang-ťiang a inovačním výzkumným týmem na univerzitě (PCSIRT), Projektem plánu mezinárodní spolupráce Ministerstva vědy a technologie Číny (2008DFB30070) a Vědeckým programem levého praporu Alashanu ({{2 }}).

Reference

1. Čínská lékopisná komise. Pharmacopoeia Čínské lidové republiky; Lidové lékařské nakladatelství: Peking, Čína, 2010; Svazek 1, str. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Analýza chemických složek u druhů Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Acylované fenylethanoidní aminoglykosidy s hepatoprotektivní aktivitou z pouštní rostliny Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacosid zabraňuje snížení striatálních extracelulárních hladin monoaminových neurotransmiterů u 6-krys s lézí hydroxydopaminu. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Hepatoprotektivní složky ze stonků Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotektivní aktivity fenylethanoidových glykosidů z Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Sun, AL; Wu, SJ; Liu, NN Separace a čištění rutinu a akaciinu z čínské léčivé byliny Herba Cirsii kombinací makroporézní adsorpční pryskyřice a vysokorychlostní protiproudé chromatografie. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Preparativní izolace a čištění dvou benzoxazinoidových glukosidů z Acanthus ilicifolius L. vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Ano, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Vysokorychlostní protiproudá chromatografická separace s gradientem průtoku pěti diterpenoidů z Triperygium wilfordii a zvětšení měřítka. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Separace a čištění echinakosidu z Penstemon barbatus (Can.) Roth recyklací vysokorychlostní protiproudé chromatografie. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Young, JC; Zhu, H. Izolace a čištění fenylethanoidových glykosidů zCistanche deserticolavysokorychlostní protiproudovou chromatografií. Food Chem. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Young, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, MY; Fu, ZH Izolace a čištění akteosidu a isoakteosidu z Plantago psyllium L. vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molekuly 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Preparativní izolace a čištění akteosidu a 2'-acetyl akteosidu z Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck pomocí vysokorychlostní protiproudé chromatografie. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Preparativní izolace a čištění fenylethanoidních glykosidů z extraktu trusu psů bíglů vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Preparativní izolace tří antrachinonů z Rumex japonicus vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. Molekuly 2011, 16, 1201–1210.

16. On, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Izolace a čištění oridoninu z celé rostliny Isodon rubescens vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. Molekuly 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Nové fenylethanoidní glykosidy z cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. F. I. Chem. Pharm. Býk. 1987, 35, 3309-3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Složky cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. F. II. Izolace a struktury nového fenylethanoidového glykosidu a nového neolignanového glykosidu. Chem. Pharm. Býk. 1990, 38, 1927–1930.