Má celkový glykosid cistanche účinky na čich?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Vliv celkových glykosidů cistanche na buňky čichového obalu potkana a jejich sekreci neurotrofních faktorů

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Poranění míchy (SCI) je vážné poranění centrálnínervový systém, což představuje {{0}},2 procenta —0,5 procenta celkového traumatu. U zlomenin páteře je 16 procent – ​​40 procent komplikováno poraněním míchy, které často zanechává těžké postižení, což vede k obtížím v každodenním životě ovlivňujícím kvalitu života pacientů a představuje velkou zátěž pro rodinu a společnost.Čichovýensheathing cells (OEC) jsou speciálním typem nervového lepidla. Plazmatické buňky mohou migrovat do mozku sčichovýnervových axonů a může vylučovat mnoho růstových faktorů, jako je NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptid-Y a S-100. Vzhledem k těmto vlastnostemčichovýOEC jsou považovány za jednu ze slibných zárodečných buněk pro buněčnou transplantaci k opravě SCI. V současné době je léčba SCI v oboru rehabilitační medicíny založena především na komplexní rehabilitaci. Abychom našli účinnější metodu, byl proveden následující výzkum účinkucistanchecelkovýglykosidyna OEC:

Celkový glykosid Cistanche pro buňky čichového obalu

1 Materiál a metody

1.1 Experimentální materiály

Krysa Wistar (poskytovaná Animal Center of Inner Mongolia University);cistanchecelkovýglykosidy, médium DMEM/F12, fetální telecí sérum (FCS), poly-D-lysin, arabinosid (Ara-C), trypsin, D-Hanksův roztok, králičí anti-p75NGFR (Santa Cruz), souprava ELISA (Promega), buněčný inkubátor (Thermo-HEPA Class 100), mikroskop s inverzním fázovým kontrastem (Olympus CKX41, Japonsko), ultračistý pracovní stůl (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Společnost, SW-CJ-2FD), enzym analyzátor etiket (Wellscan MKH), průtokový cytometr atd.

1.2 Metody výzkumu

1.2.1 Kultivace, purifikace a identifikace OEC: Krysy Wistar byly usmrceny dekapitací a namočeny ve víně po dobu 5 minut. Přední lebka byla otevřena, aby se odhalilačichovýžárovka. Dvačichovýžárovky byly zcela odstraněny pod pitevním mikroskopem. Promyjte v D-Hanksově roztoku; řezatčichovýbaňku mikrochirurgickými nůžkami, přidejte 2 ml 0,25% pankreatinu a inkubujte při 37 stupních po dobu 20 minut; přidejte kultivační médium D MEM/F12 obsahující 10 procent telecího séra do 2ml centrifugační zkumavky Trávení bylo ukončeno uprostřed; sběrnicová pipeta odsála neúplně natrávenou tkáň při 800 otáčkách za minutu a centrifugovala po dobu 5 minut, supernatant se odstranil; nakonec bylo použito upravené médium (20 procent FCS plus 20 |i, mol/LForskolin plus 20 |ig/mlBPE plus DMEM /F12) Udělejte z něj lx 107 ml jednobuněčné suspenze, naočkujte ji do baňky pro kultivaci buněk potaženou polylysinem, umístěte to v 37 stupních, 5% CO2 inkubátoru, a pak přidat Arac Purifikace byla provedena po 36 hodinách. Pro imunohistochemickou identifikaci buněk a pozorování fluorescenčním mikroskopem použijte králičí anti-p75E a FITC-značenou kozí anti-králičí IgG sekundární protilátku.

1.2.2 Ke stanovení účinku použijte MTT a průtokovou cytometriicistanche celkové glykosidynačichovýobalové buňky: naočkujte kultivované a purifikovanéčichovýzabalte buňky do 96-jamkové destičky při 1X106 a přidejtecistanche celkové glykosidy(akční koncentrace jsou Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), změřte hodnotu OD a změřte buněčnou průtokovou cytometrii po 24 hodinách působení. Nastavte kontrolní skupinu aCelkové glykosidy Cistancherůzné koncentrační skupiny: Skupina A (kontrolní skupina): Kultivační médium obsahující sérum se používá jako negativní kontrola; Skupina B (cistanche celkové glykosidyskupina s nízkou koncentrací: 11ig/ml); Skupina C (střední koncentrace celkových glykosidů cistanche Skupina: L10jxg/MK); Skupina D (cistanche celkové glykosidyskupina s vysokou koncentrací: 100|xg/ml): 15 krys v každé skupině.

1.2.3 Stanovení obsahu neurotrofního faktoru v supernatantu pomocí ELISA: naočkujte kultivované a purifikovanéčichovýzapouzdření buněk do 6-jamkové destičky při 1x106, přidejtecistanche celkové glykosidy(stejná koncentrace jako výše) po 24 hodinách a působit po dobu 24 hodin a odděleně sebrat supernatant, Uloženo při -80 Long. Obsah nervových růstových faktorů v tekutině byl stanoven metodou ELISA.

1.3 Statistická analýza

Data v této studii jsou považována za data měření a získaná data jsou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka a pro statistickou analýzu se používá SPSS 11.0 statistický software. Získaná data se analyzují analýzou rozptylu a P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Výsledky

2.1 Účinekcistanchecelkové glykosidy načichovýopláštění buněk

2.1.1 Výsledky stanovení metodou methyloxazolyltetrazolu (MT): Skupina A: 0,617±0,149; Skupina B: 0.589±0.147; Skupina C: 0.761±0.138; Skupina D: 0.732±0.234. Srovnání meziCelkové glykosidy Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, rozdíl nebyl významný;Celkové glykosidy Cistanche10 mg/ml, 100 mg/ml koncentrační skupina (C, D) ve srovnání s kontrolní skupinou (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Výsledek stanovení průtokové cytometrie je znázorněn na obrázku 1. Ve srovnání s kontrolní skupinoucistanche celkové glykosidyskupina byla vyšší než kontrolní skupina a procento apoptotických buněk bylo nižší než kontrolní skupina.

2.2 Výsledky testu ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay).

Výsledky testu ukázaly, že obsah neurotrofního faktoru odvozeného z gliových buněk (GDNF): před dávkováním: 302,1 ± 16,6 pg/ml, skupina A: 340,5 ± 13,2 pg/ml; skupina B: 333,2 ± 23,6 pg/ml; Skupina C: 355,2 ± 17,6 pg/ml; skupina D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. Ve srovnání s preadministrací byl obsah GDNF významně zvýšen; ve srovnání s kontrolní skupinou (A), obsah GDNF vCelkové glykosidy CistancheSkupina (D) s koncentrací 100 mg/ml byla významně zvýšena.

3 Diskuse

Obtížná regenerace axonů je jedním z hlavních důvodů, proč je obtížné zotavit se po poranění míchy. OEC mají roli v regeneraci centrálních neuronů axonů, které jiné typy buněk je obtížné nahradit. V posledních letech výzkumčichovýobalové buňky se staly horkým místem.Čichovýensheathing cells jsou speciálním typem gliových buněk, které mají vlastnosti Schwannových buněk a astrocytů. Pocházejí zčichovýbazální membrány a jsou široce distribuovány na povrchučichovýsliznice,čichovýnerv ačichovýžárovka. Má schopnost se dělit a regenerovat po celý život a může doprovázetčichovýnervových axonů migrovat do mozku. Axony zčichovýnerv může každých 30-60 dnů projít spojením mezi periferním nervovým systémem a centrálním nervovým systémem, znovu dorůst dočichovýpouzdro a navazují synaptická spojení4.Čichovýensheathing buňky mohou vylučovat mnoho růstových faktorů, jako je NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptid-Y a S-100. Studie ukázaly, že nervový růstový faktor (NGF) může zabránit atrofii neuronů míšního červeného jádra a posílit kortikospinální trakt Sprout a podpořit regeneraci nervové dráhy míchy s červeným jádrem; jak neurotrofní faktor odvozený z mozku (BDNF), tak neurotrofin-3 (NT-3) mohou zabránit apoptóze buněk míchy s červeným jádrem u dospělých potkanů ​​s axotomizovaným poškozením a zachránit umírající neurony a podpořit axonální regeneraci P. navícčichovýensheathing buňky také exprimují další faktory na svých buněčných membránách, jako je faktor adheze nervových buněk (N-CAM), které se podílejí na buněčné adhezi a růstu axonů. Vzhledem k těmto vlastnostemčichovýOEC jsou považovány za jednu ze slibných zárodečných buněk pro buněčnou transplantaci k opravě SCI.

Chemické složkyCistanchezahrnují především fenylethanoidové glykosidy, iridoidy, těkavé složky, lignany, polysacharidy a alkaloidy. Studie to zjistilaCistanchea jeho chemické složky mají neuroprotektivní účinky. Deng a kol. studovali účinek tubulosy B na apoptózu neuronů SH-SY5Y indukovanou tumor nekrotizujícím faktorem (TNF). Výsledky ukázaly, že po 100 ug/ neurony SH-SY5Y po ​​36 hodinách působení TNF pomocí L vykazovaly typické charakteristiky apoptózy, zatímco léčba tubulinem B po dobu 2 hodin mohla významně snížit apoptózu indukovanou TNF. Kromě toho studie také ukázaly, že fenylethanoidní glykosidy mohou inhibovat apoptózu krysích cerebelárních granulárních buněk inhibicí kaspázy-3 a kaspázy-8 a proti myší černi C57 způsobené methylfenyltetrahydropyridinem (MPTP). Poškození kvalitních dopaminergních neuronů má ochranný účinek. Nejen to, aleCistanchemůže také zmírnit různá poškození, jako je ischemie-reperfuze nervového systému. Experiment ischemického poškození mozku u myší ukazuje, že rozsah infarktu 24 hodin a 48 hodin po ischemii ve skupině s cerebrální ischemií-reperfuzí je v průměru 72,98 procent a 60,45 procent. Na rozdíl od toho,cistancheskupiny celkových glykosidů velké, střední a nízké dávky (250.0mg·kg/d; 125,0 mg·kg/d; 62,5 mg·kg/d) mohou vytvořit mozek myší po mozkové ischemii-reperfuzi 24h Velikost infarktu byla snížena na 25,94 procenta, 25,81 procenta a 31,13 procenta a velikost mozkového infarktu byla po 48 hodinách snížena na 22,14 procenta, 20,06 procenta a 22,27 procenta. Mezi těmito dvěma byl významný rozdíl, který vykazoval významný inhibiční účinek na neuronální apoptózu.

V této studii jsou různé koncentracecistanche celkové glykosidybyly aplikovány na OEC. Metoda MTT a měření průtokovou cytometrií potvrdily, že 10 mg/ml100 mg/mlcistanche celkové glykosidymůže podporovat šířeníčichovýopláštění buněk. Ukázaly to výsledky průtokové cytometriecistanche celkové glykosidymůže podporovat šířeníčichovýensheathing cells Podporuje především proliferaci cyklu G1čichovýspermií a významně snižuje apoptotické buňky. Proto,Celkové glykosidy Cistanchemůže nejen podporovat šířeníčichovýobalují buňky, ale také zvyšují buněčnou aktivitu a inhibují jejich apoptózu. Enzymově vázaný imunosorbentní test to dokazujeCelkové glykosidy Cistanchemůže významně podporovat sekreci GDNF tímčichovýopláštění buněk. Výše uvedené výsledky poskytují experimentální základ pro klinickou aplikaciCelkové glykosidy Cistanche.

Reference

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang a kol. Faktory ovlivňující kvalitu života pacientů s poraněním míchy během rehabilitace [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria ačichovýbýčí ensheath buňky vykazují rozdílnou integraci a migraci a podporují deferenční pučení axonu v poškozené míše[J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. buňky čichového obalu: jejich úloha při opravě centrálního nervového systému [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005, 37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotence čištěného. transplantované bazální buňky glukózy včichovýepitel[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. marostromální buňka exprimující BDNF; podporují rozsáhlý axonální růst v místech d poranění míchy[J]. Exp Neurol, 2005, 191 (2): 344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD a kol. Ochranný účinek tubulosy B na TNF-indukovanou apoptózu v neuronálních buňkách[J]. Acta Pharmacol Sin, 2004,25 (102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.fenylethanoidglykosidyzCistanchessalsa inhibuje apoptózu indukovanou 1-methyl-4-fenylpyridiniovým iontem v neuronech[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L. Pu X, et al. Neuroprotektivní účinek