Diskuse

Stárnoucí populace nadále celosvětově roste nebývalým tempem. Stárnutí je spojeno s poklesem buněčných funkcí, akumulací poškození a zvyšující se pravděpodobností chronických onemocnění, která vedou ke kolapsu systému a případné smrti [3–7]. Prevalence patologických stavů souvisejících s věkem v pozdním věku má významný dopad na kvalitu života a náklady na zdravotní péči. Existuje tedy naléhavá potřeba intervencí s účinnou aktivitou proti stárnutí, kterou lze využít jako geroprotektor k oddálení stárnutí a prodloužení délky zdraví.

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a má schopnost vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý reparační účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Kliknutím získáte produkty Cistanche pro maloobchod

【Další informace: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Buněčné stárnutí je řízeno sítí vzájemně propojených komplexních biologických procesů [8, 9]. Nedávné studie ukázaly, že zásahy do biologických procesů stárnutí mohou podstatně prodloužit zdravý život modelových organismů, včetně savců [10, 14]. Chronologické stárnutí u pučících kvasinek Saccharomyces cerevisiae je dobře zavedený modelový systém pro stanovení intervencí lidského postmitotického stárnutí buněk [16–19].

Vyvinuli jsme novou, rychlou a levnou kvantitativní metodu nazvanou PICLS pro měření CLS pomocí (1) kvasinkových buněk inkubovaných s médiem a testovanými sloučeninami na čirých 96-jamkových destičkách; (2) fluorescenční barvivo propidium jodid (PI), buněčná nepropustná látka, která proniká pouze do mrtvých buněk [23–25]; a (3) čtečku mikrodestiček pro kvantitativní odečet přežití buněk. Měření hustoty buněk (a růstu buněk) při OD600nm lze provádět ze stejné destičky. U mrtvých kvasinkových buněk na 96-jamkových destičkách jsme zjistili vysokou lineární korelaci mezi PI fluorescencí a absorbancí OD600nm v rozmezí optimální hustoty buněk odpovídající 0,05–12 OD. Tento metodický přístup může být použit pro kvantifikaci životaschopnosti buněk ve vysoce výkonných testech.

S PICLS je spojeno několik důležitých inovací: (i) PICLS je v současnosti jedinou metodou pro kvantifikaci CLS bez přerůstání. Z protokolu je odstraněn kritický krok náročný na čas a zdroje, a proto je PICLS prvním skutečným vysoce výkonným screeningem (HTS) pro chemická činidla a kultivační podmínky pro měření CLS. (ii) Metodická myšlenka PICLS může být obecně formulována jako metoda založená na destičkách, kde (a) podíl mrtvých/přeživších buněk a (b) celkové množství buněk je přímo určeno současně ze stejné destičky s optickou intenzitou měřicí zařízení (běžně dostupná čtečka destiček). V této práci jsme použili 96-jamkové destičky, ale 384-jamkové destičky se zdají být také použitelné (s možná určitou sníženou citlivostí kvůli menšímu množství kultury). Lze použít jakékoli barvivo, které rozlišuje mrtvé a přežívající buňky a které má fluorescenci nebo absorpci v kanálu, který neinterferuje s obecným měřením hustoty buněk (např. prostřednictvím absorpce při OD600nm). Aplikovali jsme propidium jodid, který selektivně označuje mrtvé buňky, ale to není kritické pro PICLS.

Obr. 7 Testování účinku 2,5-analogů anhydro-D-mannitolu na chronologickou životnost kvasinek. Prototrofní kvasinkový kmen (CEN.PK113-7D) byl pěstován v syntetickém definovaném médiu s různými koncentracemi 2,5-bezvodého-Dmannitolu (2,5-AM), D-fruktózy , D-mannitol, D-maltóza a D-sorbitol v 96-jamkových destičkách při 30 stupních. Buněčný růst OD600nm byl měřen v různých časových bodech 24 h, 48 h a 72 h pomocí čtečky mikrodestiček a grafu vyneseného proti různým koncentracím 2,5-AM, fruktózy, mannitolu, maltózy a sorbitolu. B Chronologická životnost (CLS) různých koncentrací buněk inkubovaných s 2,5-AM, fruktózou, mannitolem, maltózou a sorbitolem byla stanovena pomocí fluorescenční metody založené na propidium jodidu. Bylo kvantifikováno přežití buněk v různých chronologických bodech stáří a časový bod růstu 72 hodin byl považován za den 1. C CLS stárnoucích buněk bylo stanoveno metodou růstu v kapalném médiu YPD. Časový bod růstu 72 hodin byl považován za den 1. V různých chronologických bodech věku byla 3-μL kultura přenesena do druhé 96-jamkové destičky obsahující 200 μL média YPD. Růst OD600nm v kapalném médiu YPD byl měřen po inkubaci po dobu 24 hodin při 30 stupních za použití čtečky mikrodestiček. Graf je vykreslen ve vztahu ke dni 1. D Růst v kapalném médiu YPD 96-jamkové destičky byl vyfotografován po inkubaci po dobu 24 hodin při 30 stupních. E V různých chronologických bodech stáří byly kultury 3-μl naneseny na agarovou plotnu YPD. Výrůstek byl fotografován po inkubaci po dobu 48 hodin při 30 stupních. Všechna data představují průměr ± SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Všimli jsme si, že pro fluorescenční testy se obvykle doporučují černé mikrodestičky, protože tento materiál částečně zháší autofluorescenci. Metodu jsme však hodnotili na čirých mikrodestičkách a zjistili jsme podobnou účinnost jako u černých mikrodestiček. Vzhledem k tomu, že černé mikrodestičky jsou spojeny s vysokými náklady, je to významná výhoda pro rozsáhlé projekty screeningu s vysokou propustností.

Ověřili jsme naši vyvinutou metodu pomocí známých intervencí proti stárnutí, jako je podávání rapamycinu a omezení kalorií [10–16] tím, že jsme reprodukovali jejich účinek na CLS kvasinek. Tyto výsledky naznačují, že naše metoda je účinná pro identifikaci nových intervencí proti stárnutí. K identifikaci nových sloučenin proti stárnutí jsme využili náš nově vyvinutý protokol pro screening chemických látek (obr. 8). Identifikovali jsme 2,5-anhydro-D-mannitol (2,5-AM) prodlužující CLS kvasinek. Na základě našich výsledků navrhujeme použití 2,5-AM samostatně nebo v kombinaci s jinými intervencemi proti stárnutí.

2,5-AM je analog fruktózy a oba cukry mohou vstoupit do glykolytické dráhy. Glykolýza je metabolický proces, při kterém je glukóza nejprve fosforylována hexokinázou za vzniku glukózo-6-fosfátu (G6P). Fosfoglukoizomeráza interkonvertuje G6P na fruktóza-6-fosfát (F6P), který je dále metabolizován na různé downstream glykolytické meziprodukty, včetně pyruvátu, který vstupuje do mitochondriálního cyklu TCA. Stejně jako glukóza je fruktóza také fosforylována hexokinázou za vzniku F6P. Fosfofruktokináza přeměňuje F6P na fruktózu-1,{10}}bisfosfát (FBP), který je dále metabolizován na různé následné glykolytické meziprodukty. 2,5-AM může být také fosforylován hexokinázou za vzniku 2,5-AM- 6-fosfátu (2,5-AM6P) [39–41]. Kromě toho fosfofruktokináza převádí 2,5-AM6P na 2,5-AM- 1,6-bisfosfát (2,5-AMBP). 2,5-AMBP však nelze dále metabolizovat na následné glykolytické meziprodukty [39–41].

Vzhledem k tomu, že 2,5-AM je analog fruktózy, zkoumali jsme, zda může fruktóza také prodloužit životnost kvasinek. Nepozorovali jsme však aktivitu fruktózy proti stárnutí při prodlužování CLS kvasinek. Manitol a maltóza mohou také vstoupit do glykolýzy a metabolizovat se na následné glykolytické meziprodukty. Zkoumali jsme také vliv mannitolu a maltózy na životnost kvasinek. Fruktóza, mannitol a maltóza také nejsou schopny rozšířit CLS kvasinek.

Jako sorbitol, jiný ještě nemetabolizovaný cukr, bylo dříve hlášeno, že ovlivňuje CLS ve velmi vysokých koncentracích (18 procent ekvivalentních 1 M) [20, 45], chtěli jsme objasnit, zda anti-aging aktivita 2,{{7 }}AM může být způsobeno zvýšenou osmolaritou kultivačního média. Naše experimenty ukázaly, že sorbitol nezvyšuje CLS kvasinek při nižších koncentracích, které jsou účinné v případě 2, 5- ráno. Protože sorbitol vyžaduje vyšší koncentrace ke zvýšení CLS kvasinek, je mechanismus proti stárnutí 2,5-AM nezávislý na účincích osmolarity. Tato zjištění odhalila, že anti-aging aktivita 2,5-AM je specifická a není paralelní s několika dalšími analogy s podobnou chemickou strukturou.

Zbývá však prozkoumat, jak 2,{1}}AM prodlužuje životnost. Bude zajímavé prozkoumat, zda 2,5-AM přímo moduluje znaky stárnutí [8]. TORC1 a AMPK jsou komplexy snímající glukózu, které se účastní procesu stárnutí [32, 43]. Avšak chronologická životnost prodloužená inhibicí TORC1 je snížena, když je inhibována AMPK. Glukóza a glykolytické meziprodukty regulují aktivitu TORC1 a AMPK [34, 46, 47]. 2,5-Bylo prokázáno, že AMBP inhibuje aktivitu aldolázy, která katalyzuje přeměnu FBP na glyceraldehyd-3-fosfát (G3P) a dihydroxyacetonfosfát (DHAP) [39, 40]. DHAP je interkonvertován na G3P triosefosfát izomerázou. Nedávné důkazy naznačují, že DHAP je důležitou signální molekulou glukózy, která aktivuje TORC1 [48].

Glykolytický fux je ohrožen, když je ovlivněna syntéza G3P a DHAP, což vede k nižší produkci ATP. Je zajímavé, že AMPK se aktivuje, když je narušen energetický stav buněk, a inhibuje buněčný růst inhibicí TORC1 [46, 47]. Antagonistický vztah AMPK a TORC1 je tedy účinnou metabolickou adaptací pro zajištění rovnováhy buněčné homeostázy pro zdravé buňky. Ačkoli jsme nepozorovali účinek 2,5-AM na buněčný růst (obr. 6 a 7). Tato zjištění vyloučila jakýkoli účinek restrikce glukózy, který by ohrozil buněčný růst (obr. 5), avšak prodloužil životnost s fenotypem pomalého růstu [49]. Prodloužení životnosti rapamycinem však nevyžaduje vyšší dávku, než je ohrožení buněčného růstu (obr. 4). Nemůžeme proto vyloučit možnost aktivity proti stárnutí 2,5-AM prostřednictvím TORC1/AMPK nebo nezávisle na TORC1/AMPK.

Na rozdíl od inhibičního účinku 2,5-AMBP na aldolázu se uvádí, že aktivuje pyruvátkinázu, poslední enzym glykolýzy [39–41]. Pyruvátkináza katalyzuje konverzi fosfoenolpyruvátu na pyruvát, jeden ze zdrojů pro generování NAD plus (nikotinamid adenindinukleotid). NAD plus je důležitý metabolit, který reguluje několik buněčných procesů a funkcí kritických pro udržení zdravých buněk a prodloužení životnosti [50, 51]. Pyruvát je také hlavním substrátem pro mitochondriální reakce, které generují různé metabolity stavebních bloků pro syntézu životně důležitých prvků, včetně aminokyselin, nukleových kyselin a ATP, v podstatě pro přežití buněk a zdravé stárnutí [52–55]. Pokles mitochondriální aktivity je skutečně spojen se stárnutím a nemocemi souvisejícími s věkem [53–56]. Nedávno byl 2,{12}}AM navržen jako potenciální léčivo k léčbě rakoviny akutní myeloidní leukémie (AML) [57].

Jako vedlejší poznámku jsme naši novou metodu pojmenovali PICLS (metoda CLS založená na PI) s ohledem na slovní hříčky „pickles“. Zatímco všechny prvky našeho nového protokolu již byly nezávisle popsány jinde, jejich „fermentovaná“ kombinace činí měření jednoduchým a levným a konečně připraveným na vysokou propustnost.

Na závěr jsme vyvinuli kvantitativní metodu pro měření chronologické délky života kvasinek a identifikovali 2,5-AM jako novou sloučeninu proti stárnutí. V současné době probíhá studie, která má zkoumat mechanismy anti-aging aktivity 2,5-AM.

Materiály a metody

Kvasinkový kmen, média a chemikálie

V této studii bylo použito genetické pozadí prototrofního kmene CEN.PK113-7D [35, 36]. Standardní bohaté médium YPD (1 procenta Bacto kvasnicový extrakt, 2 procenta Bacto pepton a 2 procenta glukózy), YPD agar (2,5 procenta Bacto agar) a syntetické definované (SD) médium obsahující 6,7 g/l kvasinkové dusíkaté báze se síranem amonným bez aminokyselin (DIFCO) a 2 procent glukózy. Zásobní roztok rapamycinu (Enzo) byl připraven v dimethylsulfoxidu (Sigma). Konečná koncentrace DMSO nepřesáhla 1 procento v žádném testu. 2,5-anhydro-D-mannitol (Santa Cruz), D-fruktóza (Sigma), D-mannitol (Sigma), D-maltóza (Sigma) a D-sorbitol (Sigma), pracovní koncentrace připravené čerstvě přímo rozpustí prášek v médiu a sterilizuje filtrací.

Podmínky růstu kvasinek

Kvasinkový kmen byl získán ze zmrazeného glycerolového zásobního roztoku na YPD agarovém médiu při 30 stupních. Kvasinky byly pěstovány v SD médiu přes noc při 30 stupních s třepáním při 220 ot./min. Buňky pěstované přes noc byly zředěny na OD600nm~0,2 v čerstvém SD médiu pro zahájení experimentů s chronologickou životností.

Analýza chronologické životnosti

Experimenty s chronologickou životností (CLS) byly provedeny na {{0}}jamkových destičkách s celkem 20{{10}} µL kvasinkové kultury, jak bylo popsáno dříve [58]. Buněčné inokulum bylo přeneseno do 96-jamkové destičky obsahující sériově dvakrát zředěné koncentrace (0–10 nM) rapamycinu. Pro kalorický restrikční test byla buněčná inokula připravena v SD médiu obsahujícím 2 procenta, 0,5 procenta a 0,25 procenta glukózy a přenesena na 96-jamkové destičky. Podobně bylo buněčné inokulum přeneseno do 96-jamkových destiček obsahujících sériově dvakrát zředěné koncentrace (0–8 mM) 2,5-anhydro-D-mannitolu, D-fruktózy, D-mannitolu, D-maltóza a D-sorbitol. Buňky byly inkubovány při 30 stupních a růst byl měřen v různých časových bodech. Časový bod růstu 72 hodin byl považován za den 1 pro test CLS. Přežití buněk bylo kvantifikováno v různých časových bodech věku třemi různými přístupy: (i) metodou na bázi fluorescence propidium jodidu, (ii) růstem v kapalném médiu YPD a (iii) testem skvrn.

(i) Metoda založená na fluorescenci propidium jodidu:Podrobné postupy pro vývoj přístupu založeného na fluorescenci propidium jodidu (PI) jsou uvedeny v části výsledků. Pro test CLS bylo {{0}}}µl kvasinkových buněk v různých časových bodech přeneseno do druhé 96-jamkové destičky. Buňky byly promyty a inkubovány ve 100 ul 1 x PBS s PI (5 ug/ml) po dobu 15 minut ve tmě. Pozitivní a negativní kontrolní vzorky byly zahrnuty pro kvantitativní analýzu. Pozitivní kontrola (buňky vařené při 100 stupních po dobu 15 minut) byly obarveny PI a zpracovány ve stejné 96-jamkové destičce. Vzorky bez buněk barvených PI sloužily jako negativní kontrola. Po inkubaci byly buňky promyty a resuspendovány ve 100 ul PBS. Odečet fluorescence vzorku (excitace při 535 nm, emise při 617 nm) a OD600nm byly měřeny čtečkou mikrodestiček (BioTek). Intenzita fluorescence každého vzorku byla normalizována pomocí OD600nm. Normalizovaná intenzita fluorescence každého vzorku byla odečtena od signálu pozadí nebarveného negativního vzorku. Získaná intenzita fluorescence pozitivního kontrolního vzorku (vařené mrtvé buňky) byla považována za 0 procent přežití buněk. Potvrdili jsme smrt buňky b a umožnili jí růst v médiu. Přežití buněk ve vzorcích v různých časových bodech bylo vypočteno b normalizací intenzity fluorescence s pozitivním kontrolním vzorkem (vařené buňky).

kde Iij(535nm∕617nm) je fluorescenční intenzita naměřená v jamce se souřadnicemi destičky iaj s excitací při 535 nm a emisí při 617 nm, ID(535nm∕617nm) je fluorescenční intenzita naměřená pro buňku se 100 procenty mrtvých buňky obarvené PI, IC(535nm~617nm) je intenzita fluorescence naměřená pro buňky bez PI a příslušné hodnoty OD jsou absorpce naměřená pro příslušné buňky při 600 nm normalizovaná na počet buněk.

(ii) Růst v kapalném médiu YPD:Stacionární kultura kvasinek (3-μL) různých věkových časových bodů byla přenesena do druhé 96-jamkové destičky obsahující 200 μL média YPD a inkubována po dobu 24 hodin při 30 stupních. Růst (OD600nm) stárnutých buněk byl měřen čtečkou mikrodestiček. Kvantifikace přežití buněk pro každý věkový bod byla stanovena ve vztahu ke dni 1 (považováno za 100% přežití buněk), jak bylo popsáno dříve [19, 20, 58].

(iii) Tečkovací test:Stacionární kultura kvasinek (3 μl) různých věkových časových bodů byla nanesena na YPD agarovou plotnu a inkubována po dobu 48 hodin při 30 stupních. Růst starých buněk na agarové plotně YPD byl fotografován pomocí zobrazovacího systému BioRad GelDoc.

Analýza dat

Statistická analýza všech výsledků, jako je střední hodnota, směrodatné odchylky, korelace (R2), významnost a graf, byla provedena pomocí softwaru GraphPad Prism v.9.3.1. Výsledky byly statisticky porovnány s použitím běžné jednocestné ANOVA a dvoucestné ANOVA následované násobným srovnáním Dunnettovým post hoc testem nebo Sidakovým post hoc testem. Ve všech grafech jsou hodnoty P zobrazeny jako *P<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

PoděkováníMA a FE autora jsou vynálezci dvou patentových přihlášek (10202201534P a 10202201536U), které zahrnují část práce popsané v tomto článku.

Autorský příspěvekMA koncipoval projekt, provedl experimenty a analyzoval data. FE spolukoncipovala projekt, vyhodnocovala data a navrhla strategii. MA a FE napsali práci a všichni autoři práci zkontrolovali a souhlasili s její konečnou verzí.

FinancováníTato práce byla podpořena Bioinformatics Institute (BII), A*STAR Career Development Fund (C210112008) a grantem Global Healthy Longevity Catalyst Awards (MOH-000758–00).

Prohlášení

Konkurenční zájmyAutoři neuvádějí žádné konkurenční zájmy.

Otevřený přístupTento článek je licencován podle Creative Commons Attribution 4.{1}} Mezinárodní licence, která umožňuje použití, sdílení, adaptaci, distribuci a reprodukci na jakémkoli médiu nebo formátu, pokud uvedete příslušné jméno původního autora (autorů) ) a zdroj, uveďte odkaz na licenci Creative Commons a uveďte, zda byly provedeny změny. Obrázky nebo jiný materiál třetích stran v tomto článku jsou zahrnuty v licenci Creative Commons k článku, pokud není uvedeno jinak v kreditní hranici k materiálu. Pokud materiál není zahrnut v licenci Creative Commons článku a vaše zamýšlené použití není povoleno zákonnými předpisy nebo překračuje povolené použití, budete muset získat povolení přímo od držitele autorských práv.

Reference

1. das nações Unidas, O. Organizace spojených národů, Ministerstvo ekonomických a sociálních věcí, Divize populace (2019). Vyhlídky světové populace, hlavní události (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Stárnoucí populace: žijeme déle, ale jsme zdravější? Organizace spojených národů, Ministerstvo hospodářství a sociálních věcí, Divize populace, UN DESA/ POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Stárnutí jako rizikový faktor onemocnění. Curr Biol. 2012.

4. Hou Y, a kol. Stárnutí jako rizikový faktor neurodegenerativních onemocnění. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Proces stárnutí: hlavní rizikový faktor pro onemocnění a smrt. Proč Natl Acad Sci USA A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Čelit globálním výzvám stárnutí. Příroda. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Lékařský výzkum: léčba stárnutí. Příroda. 2014.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Charakteristické znaky stárnutí. Buňka. 2013.

9. Kennedy BK a kol. Geroscience: Spojení stárnutí s chronickými nemocemi. Buňka. 2014.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Hledání zpomalení stárnutí prostřednictvím objevu léků. Nat Rev Drug Discovery. 2020.

11. Mattison JA, et al. Omezení kalorií zlepšuje zdraví a přežití opic rhesus. Nat Commun.

12. Bitto A, et al. Přechodná léčba rapamycinem může prodloužit životnost a zdraví u myší středního věku. Elife. 2016.

13. Fontana L, Partridge L. Podpora zdraví a dlouhověkosti prostřednictvím stravy: od modelových organismů k lidem. Buňka. 2015.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. Role rapamycinu v prodloužení zdravotního stavu prostřednictvím zpoždění stárnutí orgánů. Aging Res Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. Vliv rapamycinu na stárnutí a nemoci související s věkem – minulost a budoucnost. GeroScience. 2021.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Prodloužení délky zdravého života z kvasinek na lidi. Věda. 2010.

17. Zimmermann A, a kol. Kvasinky jako nástroj k identifikaci sloučenin proti stárnutí. FEMS Yeast Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Replikativní a chronologické stárnutí u Saccharomyces cerevisiae. Cell Metab. 2012.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Prodloužení chronologické délky života u kvasinek snížením signalizace dráhy TOR. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner ČR, Kennedy BK, Kaeberlein M. Metoda pro vysoce výkonnou kvantitativní analýzu chronologické délky života kvasinek. J Gerontol. Ser. Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. Kvantifikace geneticky řízené buněčné smrti u pučících kvasinek. Metody Mol Biol. 2013.

22. Garay E, a kol. Profilování přežití ve stacionární fázi s vysokým rozlišením odhaluje faktory dlouhověkosti kvasinek a jejich genetické interakce. PLoS Genet. 2014.

23. Alfatah M, a kol. Hypoculosid, sloučenina podobná sfingoidní bázi z Acremonium, narušuje membránovou integritu kvasinkových buněk. Sci Rep. 2019.

24. Alfatah M, a kol. Krajina chemicko-genetických interakcí mono-(2-ethylhexyl)-ftalátu pomocí chemogenomického profilování v kvasinkách. Chemosféra. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Srovnání metod používaných pro hodnocení životaschopnosti a vitality kvasinkových buněk. FEMS Yeast Res. 2014.

26. Chadwick SR, a kol. Sada nástrojů pro rychlé kvantitativní hodnocení chronologické délky života a přežití u Saccharomyces cerevisiae. Trafc. 2016.

27. Pereira C, Saraiva L. Interference stárnoucích médií na hodnocení chronologické životnosti kvasinek barvením propidium jodidem. Folia Microbiol. (Praha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapalogy a inhibitory mTOR jako terapeutika proti stárnutí. J Clin Investig. 2013.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamycin: Inhibitor stárnutí se objevuje z půdy Velikonočního ostrova. Žurnály gerontologie - série Biologické vědy a lékařské vědy. 2016.

30. Wilkinson JE, a kol. Rapamycin zpomaluje stárnutí u myší. Stárnoucí buňka. 2012.

31. Saxton RA, Sabatini DM. mTOR signalizace v růstu, metabolismu a nemoci. Buňka. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovich PS, Kaeberlein M. MTOR je klíčovým modulátorem stárnutí a nemocí souvisejících s věkem. Příroda. 2013.

33. González A, sál MN. Snímání živin a signalizace TOR u kvasinek a savců. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M, a kol. TORC1 reguluje transkripční odpověď na glukózu a vývojový cyklus prostřednictvím Tap42-Sit4-Rrd1/2 dráhy v Saccharomyces cerevisiae. BMC Biol. 2021.

35. Van Dijken JP, a kol. Mezilaboratorní srovnání fyziologických a genetických vlastností čtyř kmenů Saccharomyces cerevisiae. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Müller M, a kol. Sbírka prototrofních delečních mutantů pro kvasinkovou metabolomiku a systémovou biologii. Nat Biotechnol. 2012.

37. Alvers AL, et al. Autofagie je nutná pro prodloužení chronologické délky života kvasinek rapamycinem. Autofagie. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. Jednoduchý statistický parametr pro použití při hodnocení a validaci vysoce výkonných screeningových testů. Obrazovka J Biomol. 1999.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Regulace metabolismu sacharidů 2,5-anhydro-D-mannitolem. Proč Natl Acad Sci USA A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Mechanismus účinku 2,5-anhydro-D-mannitolu v hepatocytech. Účinky fosforylovaných metabolitů na enzymy metabolismu sacharidů. J. Biol. Chem. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. Inhibice glykolýzy 2,5-anhydromannitolem v izolovaných potkaních hepatocytech a buňkách Ehrlichova ascitu. Proč Natl Acad Sci US A.

42. Hardie DG. AMP-aktivované/SNF1 proteinkinázy: konzervativní strážci buněčné energie. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK na spojení energetiky a stárnutí. Cell Metab. 2014.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa DG, Zhang BB, Schmidt MC. Genetická analýza rezistence a citlivosti na 2-deoxyglukózu u Saccharomyces cerevisiae. Genetika. 2014.

45. Burtner ČR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. Molekulární mechanismus chronologického stárnutí u kvasinek. Buněčný cyklus. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie DG. AMPK: snímání glukózy a stavu buněčné energie. Cell Metab. 2018.

47. González A, sál MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK a TOR: jin a jang snímání buněčných živin a řízení růstu. Cell Metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. Dihydroxyaceton fosfát signalizuje dostupnost glukózy pro mTORC1. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Nedostatek růstového hormonu: zdraví a dlouhověkost. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nikotinamid, nikotinamid ribosid a kyselina nikotinová – objevující se role v replikativním a chronologickém stárnutí v kvasinkách. Biomolekuly. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD plus metabolismus a jeho role v buněčných procesech během stárnutí. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021.

52. Spinelli JB, Haigis MC. Mnohostranné příspěvky mitochondrií k buněčnému metabolismu. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. Energetický pohled na geroscience: mitochondriální protonmotivní síla a stárnutí. Gero-Science. 2021.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Mitochondriální základ stárnutí. Mol Cell. 2016.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Savčí mitochondrie a stárnutí: aktualizace. Cell Metab. 2017.

56. Bratic A, Larsson NG. Role mitochondrií ve stárnutí. J Clin Investig. 2013.

57. Chen WL, a kol. Zvýšená utilizace fruktózy zprostředkovaná SLC2A5 je unikátní metabolickou vlastností akutní myeloidní leukémie s terapeutickým potenciálem. Cancer Cell. 2016.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. Suplementace železem oddaluje stárnutí a prodlužuje životnost buněk prostřednictvím potenciace mitochondriální funkce. Buňky 11, (2022).

Poznámka vydavateleSpringer Nature zůstává neutrální, pokud jde o jurisdikční nároky v publikovaných mapách a institucionálních přidruženích.

【Další informace: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】