Aktivní složka Cistanche: Echinacosid s protizánětlivým inhibičním a neuroprotektivním účinkem

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

echinakosid, an Aktivní Složka z Cistanche Herba, Vymáhá a Neuroprotektivní Účinek v a Kainic Kyselina Krysa Modelka podle InhibičníZánětlivé Procesy a Aktivace a Akt/GSK3 Cesta

Cheng Wei Lu,a,b Hsi Lung Hsieh,c,d Tzu Yu Lin,a,b Ting Yang Hsieh,e Shu Kuei Huang,a a Su Jane Wang^*,f,g

Echinakosidje hlavní sloučeninou cistanche Herb a má aktivitu inhibující uvolňování glutamátu v mozku. Vzhledem k účasti excitotoxicity způsobené masivním glutamátem v patofyziologii epilepsie jsme zkoumali antiepileptický účinek echinakosidu na záchvaty vyvolané kyselinou kainovou u potkanů. Krysám byla podávána intraperitoneálněechinakosidpo dobu 30 minut před intraperitoneální injekcí kyseliny kainové. Výsledky ukázaly, že chování podobné záchvatům vyvolané kyselinou kainovou, zvýšené koncentrace glutamátu, způsobily ztrátu neuronů a mikrogliální aktivaci a stimulovaly expresi genu prozánětlivých cytokinů v hipokampu. Bylo zjištěno, že tyto alternace vyvolané kyselinou kainovou jsou zeslabenyechinakosidpředúprava. Kromě toho snížená fosforylace Akt a glykogensyntázy kinázy 3 (GSK3 ), stejně jako exprese Bcl-2 v hipokampu, byla zvrácena předběžnou léčbou echinakosidem. Tyto výsledky demonstrují, že echinakosid uplatňuje své antiepileptické a neuroprotektivní účinky v modelu krys s kyselinou kainovou prostřednictvím potlačení zánětlivé reakce a aktivace signalizace Akt/GSK3. Proto tato studie naznačuje, že echinakosid je potenciálně užitečný v prevenci epilepsie.

klíčová slova:echinakosid; kyselina kainová; epilepsie; neuroprotektivní účinek; hippocampus

Echinakosid v cistanche

Epilepsie je celosvětově rozšířená mozková porucha. Postihuje více než 65 milionů lidí, téměř 1 procento světové populace.1) Syntetická antiepileptika jsou široce dostupná na farmaceutickém trhu; tyto léky jsou však účinné pouze u 60–70 procent pacientů a mají nežádoucí vedlejší účinky.2–4) Existuje tedy nenaplněná potřeba hledat účinnější a bezpečnější lék. Potenciálním zdrojem těchto sloučenin jsou léčivé rostliny.^5,6)

V tradiční čínské bylinné medicíně se Cistanche Herba již dlouho používá k léčbě epilepsie.7,8)Echinakosidje hlavní složkou Cistanche Herba9) a má mnoho farmakologických vlastností, jako je antioxidační, protizánětlivá, antineoplastická, hepatoprotektivní a imunomodulační aktivita.10,11) Navíc se uvádí, žeechinakosidmůže vstoupit do mozku a vyvolat neuroprotekci.12–16) Již dříve jsme prokázali, že echinakosid snižuje uvolňování glutamátu v cerebrokortikálních nervových zakončeních potkana.17) Protože glutamát je hlavním excitačním neurotransmiterem v mozku savců a hraje klíčovou roli v patofyziologii epilepsie, 18,19) jsme navrhli, že echinakosid má antiepileptický účinek. K objasnění této hypotézy byl v této studii použit krysí model s kyselinou kainovou.

Kyselina kainová je derivát glutamátu a její jediná systémová injekce hlodavcům vede k záchvatům, neurozánětům a neuronální degeneraci nebo smrti na selektivní populaci neuronů v mozku.20–22) Tyto patologické změny jsou podobné lidské epilepsii temporálního laloku.23 ,24) Podávání kyseliny kainové hlodavcům se obecně považuje za indukci adekvátního modelu epilepsie. Dosud žádná studie nezkoumala antiepileptické a neuroprotektivní vlastnostiechinakosidna zvířecím modelu s injekcí kyseliny kainové. Naše studie si proto klade za cíl zhodnotit účinek a jeho možný mechanismusechinakosidpředběžné podávání krysám léčeným kyselinou kainovou.

MATERIÁLY A METODY

Zvířata a záchvatová aktivita

Během studie byli použiti samci potkanů ​​Sprague–Dawley (BioLASCO, Taipei, Taiwan) o hmotnosti 150–200 g. Krysy byly náhodně rozděleny do čtyř skupin následovně: i) Skupina 1: skupina ošetřená dimethylsulfoxidem (kontrola); ii) Skupina 2: skupina ošetřená kyselinou kainovou; iii) Skupina 3:echinakosid10 mg/kg plus skupina kyseliny kainové; iv) Skupina 4:echinakosid50 mg/kg plus skupina kyseliny kainové. Echinakosid (ChemFaces, Wuhan, PRC) byl injikován (intraperitoneální podání) 30 minut před intraperitoneální injekcí kyseliny kainové (15 mg/kg). Záchvatová aktivita byla hodnocena během 4 hodin po injekci kyseliny kainové podle Racinovy ​​stupnice.25) Dávka a rozvrh podávání byly zvoleny na základě předchozích studií.22,26,27) Experimenty na zvířatech byly schváleny ústavem Výbor pro péči o zvířata a jejich použití na Katolické univerzitě ve Fu Jen a prováděné v souladu s vydanými protokoly, které se řídily Příručkou pro péči a použití laboratoře National Institutes of Health Guide (NAC 2011).

Stanovení hladin glutamátu

Čtyři hodiny po ošetření kyselinou kainovou byly krysy usmrceny dekapitací. Celý mozek byl vypreparován a hippocampus každé krysy byl odebrán pro analýzu. Koncentrace glutamátu v tkáni mozkového hipokampu byla stanovena podle metod popsaných v předchozích studiích.28,29)

Neutrální červená a barvení Fluoro-Jade B

Tři dny po injekci kyseliny kainové byly krysy anestetizovány pomocí chloralhydrátu (650 mg/kg) a transkardiálně perfundovány fixačním roztokem obsahujícím 4 procenta paraformaldehydu v 0,1 M roztoku fosfátového pufru (PBS, pH 7,4). Mozky byly vyjmuty ihned po perfuzi a uloženy ve 4% paraformaldehydu přes noc při 4 stupních. Po postfixaci byly mozky ponořeny do 30 procent sacharózy při 4 stupních po dobu 24 hodin. Vzorky byly rychle zmraženy a řezy o tloušťce 30-µm byly nařezány pomocí zmrazeného mikrotomu. Volně plovoucí řezy byly obarveny neutrální červení (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) a Fluoro-Jade B (Millipore, CA, USA). Fluoro-Jade B-pozitivní buňky v oblasti CA3 hipokampu byly stanoveny, jak bylo popsáno dříve.^30,31)

Imunohistochemie

Řezy byly promyty {{0}},1 M PBS a blokovány 0,5% normálním kozím sérem v {{20}},1 M PBS po dobu 1 hodiny pokojová teplota. Inkubace primární protilátky (myší monoklonální anti-OX-42 protilátka, 1:1000; AbD Serotec, Oxford, UK) byla provedena dvě noci při 4 stupních. Po opakovaném promytí PBS byly řezy inkubovány s biotinylovaným anti-myším imunoglobulinem G (IgG) (1:200) po dobu 90 minut, ošetřeny roztokem komplexu avidin-biotin (ABC) (1:1000) po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. a reagovaly s 0,025 procenty 3,3'-diaminobenzidinu a 0,0025 procenty H202, dokud nebylo dosaženo požadované intenzity zbarvení. Řezy byly upevněny na sklíčka pomocí standardních protokolů. Obarvená sklíčka byla zkoumána a zobrazena pod mikroskopem (Olympus, Tokio, Japonsko).31) Analýza těla mikrogliálních buněk a délky procesu byla provedena pomocí ImageJ.³²)

Transmission Electron Microscopy Transmisní elektronová mikroskopie

byla provedena, jak bylo popsáno dříve.33) Stručně, oblast CA3 hippocampu byla odstraněna a fixována v pufru obsahujícím 4 procenta paraformaldehydu a 2,5 procenta glutaraldehydu při 4 stupních po dobu 24–36 hodin. Po promytí PBS byly oblasti CA3 postfixovány v 1% oxidu osmičelého po dobu 2 hodin, dehydratovány ethanolem a zality do epoxidové pryskyřice. Ultratenké řezy (70 nm) byly připraveny pomocí ultramikrotomu (EM UC7, Leica Microsystems, Wetzlar, Německo). Řezy byly obarveny acetátem uranylu a citrátem olovnatým a pozorovány pomocí transmisní elektronové mikroskopie (Model JEM-1400, JEOL Ltd., Tokio, Japonsko).

Kvantitativní PCR v reálném čase

Extrakce RNA a kvantitativní PCR v reálném čase byly provedeny, jak bylo popsáno dříve.34,35) Celková RNA byla extrahována z hipokampu pomocí mirVana™ miRNA Isolation Kit (Life Technologies, Grand Island, NY, USA) podle protokolu výrobce. Genomová DNA byla odstraněna inkubací s deoxyribonukleázou (DNáza) I. cDNA byla syntetizována pomocí (souprava NoScript reverzního transkripčního systému; Promega, Madison, WI, USA) a použita pro kvantitativní reálnou kvantitativní analýzu SYBR Green (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo). časová amplifikace PCR se specifickými primery pomocí systému LightCycler 480 (Roche Diagnostics). Protokol sestával z počátečního denaturačního kroku při 95 stupních po dobu 3 minut, následovaných 45 cykly denaturace při 95 stupních po dobu 10 s, žíháním při 56 stupních po dobu 30 s. Hladiny mRNA každého cílového genu byly normalizovány na hladiny mRNA glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenázy (GAPDH). Záhybová indukce byla vypočtena pomocí metody 2−ΔACT, jak je popsáno v předchozí studii.³⁴)

Imunoblotting

Dvacet mikrogramů proteinových extraktů z hippocampi bylo odděleno elektroforézou na 10% dodecylsulfátu sodného-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) následovanou elektroforetickým přenosem na polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membránu. Membrána byla blokována pomocí 5% odstředěného mléka po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě a inkubována s vhodnými protilátkami v 1% odstředěném mléce přes noc při 4 stupních, následovala inkubace se sekundární protilátkou po dobu 1 hodiny. Primárními protilátkami byly králičí monoklonální protilátky namířené proti Akt (1: 2000), pAktSer473 (1: 2000), glykogensyntáza kináza 3 (GSK3) (1: 2000), pGSK3 Ser9 (1: 500), Bcl-2 ( 1: 1000) a -aktin (1: 2000) získaný od Cell Signaling Technology (MA, USA). Sekundární peroxidázou konjugovaná kozí anti-králičí protilátka (1:5000) byla získána od Santa Cruz (CA, USA). Pásy byly vizualizovány zvýšenou chemiluminiscencí (Amersham, Buckinghamshire, UK) za použití gelového zobrazovacího analytického systému. Intenzita každého pásu byla měřena pomocí softwaru Syngene (Synop tics, Cambridge, UK).

Statistická analýza

Data jsou prezentována jako průměr ± standardní chyba průměru (SEM). Statistická analýza byla provedena dvoustranným Studentovým t-testem při srovnávání dvou skupin a jednosměrnou ANOVA s Tukeyho vícenásobným srovnáním post hoc testů při srovnávání více než dvou skupin. Analýza byla dokončena pomocí softwaru SPSS (verze 17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p<0.05 was="" considered="" statistically="">

VÝSLEDEK

Účinek echinakosidu na záchvaty vyvolané kyselinou kainovou a zvýšení hladin glutamátu v hippocampu

Vyhodnotit neuroprotektivní účinekechinakosidproti excitotoxicitě vyvolané kyselinou kainovou byly krysy předem ošetřenyechinakosid(5, 10 a 50 mg/kg, intraperitoneální podání) po dobu 30 minut před intraperitoneální injekcí kyseliny kainové (15 mg/kg). Intraperitoneální injekce kyseliny kainové (15 mg/kg) vedla k záchvatům s latencí a skóre 92,5 ± 5,3 min, respektive 4,9 ± 0,1 (obr. 1A, B). Významné zvýšení záchvatové latence[F(2, 43)=40.2, str<0.01; fig.="" 1a]="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" seizure="" score="" [f(2,="" 40)="21.5,"><0.001; fig.="" 1b]="" were="" observed="" in="" echinacoside="" (10="" or="" 50="" mg/kg)-pretreated="" rats.="" however,="" echinacoside="" at="" 5="" mg/kg="" had="" no="" significant="" effect="" on="" seizure="" latency="" and="" score="" (p="">0.05; Obr. 1A, B). Vzhledem k silnému zeslabení záchvatové aktivity, které bylo pozorováno u 10 nebo 50 mg/kg echinakosidu, byly tyto dvě dávky echinakosidu použity v následujících experimentech k vyhodnocení mechanismů, které jsou základem schopnosti echinakosidu inhibovat záchvaty vyvolané kyselinou kainovou. Obrázek 1C ukazuje, že zvýšení hladin glutamátu v hipokampu bylo zaznamenáno u potkanů ​​léčených kyselinou kainovou po 4 hodinách ve srovnání se skupinou léčenou dimethylsulfoxidem (kontrola; p<0.001). however,="" decreased="" hippocampal="" glutamate="" levels="" were="" obtained="" in="" the="" echinacoside="" group="" (10="" or="" 50="" mg/kg)="" [f(3,="" 16)="6.1,"><0.01; fig.="">

Účinek echinakosidu na neuronální poškození vyvolané kyselinou kainovou v oblasti CA3 hippocampu

Stupeň poškození neuronů byl hodnocen 3 dny po injekci kyseliny kainové pomocí neutrálního červeného barvení nebo Fluoro-Jade B pro detekci přežívajících neuronů a degenerujících neuronů, v daném pořadí. Neutrální červené barvení odhalilo zjevnou ztrátu neuronů v CA3 u krys s injekcí kainové kyseliny ve srovnání s krysami ošetřenými dimethylsulfoxidem (kontrola; p<0.001; figs.="" 2a,="" c).="" however,="">echinakosidpředléčení (10 nebo 50 mg/kg) účinně snížilo ztrátu neuronů vyvolanou kyselinou kainovou u CA3 [F(2, 13)=11.6, p<0.001; figs.="" 2a,="" c].="" similarly,="">echinakosid- ošetřená zvířata vykazovala sníženou fluorescenci Fluoro-Jade B FL v oblastech CA3 hippocampu po injekci kyseliny kainové (str.<0.001), compared="" with="" the="" strong="" damage="" observed="" in="" kainic="" acid-injected="" rats="" [f(2,="" 24)="6.9,"><0.001; figs.="" 2b,="" d].="" in="" addition,="" transmission="" electron="" microscopy="" shows="" that="" neuronal="" injury="" in="" ca3="" was="" not="" obvious="" in="" the="" dimethylsulfoxide-treated="" (control)="" group.="" however,="" in="" the="" kainic="" acid-treated="" group,="" nerve="" cells="" had="" ultrastructural="" changes.="" nerve="" cells="" exhibited="" autophagosome="" formations,="" deformed="" nuclei="" with="" the="" condensed,="" and="" disruptive="" cell="" plasma="" membrane.="" in="" contrast,="" the="" neuronal="" injury="" in="" the="" echinacoside-pretreated="" group="" was="" apparently="" attenuated="" compared="" with="" the="" kainic="" acid-injected="" rats="" (fig.="">

Účinek echinakosidu na aktivaci mikroglií indukovanou kyselinou kainovou a genovou expresi prozánětlivých

Cytokiny v hippocampu V modelu pro záchvaty vyvolané kyselinou kainovou a smrt hipokampálních neuronů je v hipokampu zvýšená mikrogliální aktivace a produkce prozánětlivých cytokinů.36,37) Aby bylo možné zjistit, zdaechinakosidovlivnila zánětlivou odpověď v hipokampu krys s injekcí kyseliny kainové, aktivace mikroglie byla analyzována pomocí protilátky anti-OX42. U potkanů ​​léčených dimethylsulfoxidem (kontrolní skupina) byla těla mikrogliálních buněk v oblastech CA3 malá a jejich výběžky dlouhé a tenké (obr. 4A). Počet aktivovaných mikrogliálních buněk v oblasti CA3 u potkanů ​​s injekcí KA se však významně zvýšil, těla mikrogliových buněk byla zvětšena (p<0.01; figs.="" 4a,="" b),="" and="" their="" cellular="" processes="" became="" shorter="" and="" thicker=""><0.001; figs.="" 4a,="" c).="" in="" the="" animals="" pretreated="" with="">echinakosid(10 nebo 50 mg/kg) předem ošetřených potkanů, počet aktivovaných mikrogliálních buněk byl významně snížen a těla mikrogliových buněk byla tenká [F(2, 13)=6.2, p<0.01; fig.="" 4b]="" and="" their="" cytoplasmic="" processes="" were="" ramified="" [f(2,="" 28)="47.5,"><0.001; fig.="" 4c].="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" interleukin-1β,="" interleukin-6,="" and="" tumor="" necrosis="" factor-α="" mrna="" in="" the="" hippocampus="" were="" apparently="" elevated="" at="" 1="" d="" after="" kainic="" acid="" injection,="" compared="" to="" dimethylsulfoxideinjected="" animals="" (control)=""><0.001). however,="" decreased="" mrna="" levels="" for="" these="" pro-inflammatory="" cytokines="" were="" obtained="" in="" the="" echinacoside="" group="" [interleukin-1β,="" f(3,="" 18)="154.7,"><0.001; interleukin-6,="" f(3,="" 17)="17.9,"><0.001; tumor="" necrosis="" factor-α,="" f(3,="" 16)="31.1,"><0.001; figs.="">

Účinek echinakosidu na kyselinou kainovou indukovaný pokles hladin hipokampální fosfo-Akt, fosfo-glykogen syntázy kinázy 3 a Bcl-2

Hladiny fosforylovaného Akt (pAkt) (Ser473), fosforylovaného GSK3 (pGSK3) (Ser9) a Bcl-2 byly testovány v hippocampu (obr. 6). Podstatné snížení exprese pAkt, pGSK-3 a Bcl{7}} v hippocampu bylo pozorováno u krys léčených kyselinou kainovou po 4 hodinách ve srovnání s krysami léčenými dimethylsulfoxidem (kontrola) (p<0.001). however,="" pretreatment="" with="">echinakosid(10 nebo 50 mg/kg) významně zvýšily hladiny pAkt, pGSK3 a Bcl-2 ve srovnání s léčbou samotnou kyselinou kainovou [pAkt, F(3, 19)=69.5, s.<0.001; pgsk3β,="" f(3,="" 17)="60.3,"><0.001; bcl-2,="" f(3,="" 18)="26.1,"><0.001; figs.="">

DISKUSE

Důkazy ukázaly, že glutamát hraje klíčovou roli v patofyziologii epilepsie.^17,18) Glutamátergní hypotéza epilepsie naznačuje, že epileptogenní proces souvisí se zvýšenou koncentrací glutamátu v mozku a snížení koncentrace tohoto neurotransmiteru je schopno vyvolat antiepileptický účinek.^38–40) Studie z naší laboratoře to prokázalaechinakosidmůže snižovat uvolňování glutamátu z nervových zakončení a naznačovalo, že echinakosid má pravděpodobně antiepileptický účinek.17) Tento návrh byl potvrzen v současné studii s použitím modelu krysy s injekcí kyseliny kainové. Kyselina kainová, glutamátový derivát, se široce používá k vyvolání epilepsie ve studiích na zvířatech, protože její neuropatologické a biochemické vlastnosti jsou podobné těm u lidí.^23,24)

Intraperitoneální injekce kyseliny kainové do potkanů ​​způsobuje záchvaty a poškození neuronů, zejména v oblastech CA3 hippocampu.^41–43Kromě toho tyto patologické změny produkované kyselinou kainovou souvisí s masivním uvolňováním glutamátu.^41,44,45) V souladu s těmito zjištěními jsme pozorovali, že intraperitoneální podávání kyseliny kainové (15 mg/kg) vyvolalo záchvatové chování, zvýšilo hladiny glutamátu v hipokampu a způsobilo ztrátu pyramidálních buněk v oblasti hipokampu CA3. Tyto patologické změny vyvolané kyselinou kainovou byly zmírněny intraperitoneálním předléčenímechinakosid(10 nebo 50 mg/kg). Dále bylo zmírněno poškození hipokampálních nervových buněk CA3 hodnocené ultrastrukturální alternací s transmisní elektronovou mikroskopií.echinakosidu krys s kyselinou kainovou. Navíc byl v buňkách CA3 po podání kyseliny kainové pozorován zvýšený počet autofagozomů. Předběžná léčba echinakosidem potlačila zvýšenou tvorbu autofagozomů. Předchozí studie naznačovaly, že aktivace autofagie se účastní neuronální smrti indukované kyselinou kainovou a inhibice procesu autofagie se zdá být neuroprotektivní.^46,47) Ačkoli mechanismus, který je základem antiepileptického účinkuechinakosidvyžaduje další prozkoumání, neuroprotektivní účinek echinakosidu na zvířecím modelu s kyselinou kainovou mohl vyplývat z antiepileptické aktivity prostřednictvím inhibice glutamátové excitotoxicity a aktivace autofagie.

Neurozánět významně přispívá k opožděnému poškození mozku po akutním poranění a má škodlivý vliv na neurologický výsledek.²⁷) Zánětlivé reakce, jako je aktivace mikroglií a produkce zánětlivých cytokinů, byly popsány u lidské epilepsie a na experimentálních modelech epilepsie.^36,48Kromě toho uvolňování těchto prozánětlivých cytokinů z aktivovaných mikrogliálních buněk podporuje poškození neuronů v hippocampu vyvolané kyselinou kainovou.^36,37) Ukázali jsme, že zatímco kyselina kainová zvyšovala aktivaci mikroglií a genovou expresi prozánětlivých cytokinů (interleukin{0}}, interleukin{1}} a tumor nekrotizující faktor-) v hippocampu, tyto účinky byly potlačenyechinakosidpředúprava. Proto to navrhujemeechinakosidpotlačením zánětlivých procesů může přispět k jeho antiepileptickým a neuroprotektivním účinkům na zvířecím modelu s kyselinou kainovou. Jak již bylo pozorováno v našich předchozích studiích, několik léků a přírodních produktů má také antiepileptické účinky a neuroprotekci proti záchvatům vyvolaným kyselinou kainovou prostřednictvím svého protizánětlivého účinku.^31,33,35)

Je známo, že četné proteinkinázové signální kaskády jsou aktivovány kyselinou kainovou, která hraje důležitou roli v neuroprotekci. Mezi těmi, které se zdají mít obzvláště významnou účast, je Akt.^49,50,) Akt zprostředkovává své neuroprotektivní účinky aktivací různých downstream substrátů, včetně GSK-3 a Bcl-2. Akt fosforyluje GSK-3 na Ser9, což vede k jeho inaktivaci a posílení přežití neuronálních buněk51), protože aktivní forma GSK-3 aktivuje dráhu mitochondriální smrti.^52,53) Bcl-2 je klíčovým členem antiapoptotické Bcl-2 rodiny a hraje klíčovou roli při potlačování mitochondriálně zprostředkované apoptotické buněčné smrti. Například Bcl-2 může chránit integritu mitochondriální membrány a blokovat uvolňování cytochromu C z mitochondrií, což vede k přežití buněk a inhibici apoptózy.⁵⁴) Bylo také hlášeno, že nadměrná exprese Bcl-2 chrání neurony před excitotoxickými urážky in vitro a in vivo. 54,55) Tato studie pozorovala sníženou fosforylaci Akt (Ser473) a GSK3 (Ser9) a také expresi Bcl-2 v hipokampu krys po expozici kyselině kainové, což je v souladu s předchozími studiemi.^56,57) Předběžné ošetření echinakosidem navíc zachránilo snížení exprese pAkt a pGSK3 a také Bcl-2 vyvolané kyselinou kainovou. Neuroprotektivní účinky tedyechinakosidve zvířecím modelu s kainovou kyselinou může být částečně zprostředkováno prevencí downregulace Akt/GSK-3/Bcl-2 dráhy, čímž se zvyšuje přežití neuronů.

Echinakosidje potenciálním novým terapeutickým kandidátem. To je proto, žeechinakosidmůže vstoupit do mozku a vykazuje četné výhody.⁵⁸) Prokázaly to četné studieechinakosidzmírňuje poškození mozku a zmírňuje motorické nebo paměťové poruchy v několika experimentálních modelech in vivo.^12,14,15,59) Ačkoli mechanismy, které jsou základem neuroprotektivních účinkůechinakosidv mozku vyžadují objasnění, inhibovaný neurozánět, antioxidace, zachycování volných radikálů a zvýšená neurogeneze.^14–16) Kromě těchto možných mechanismů naše předchozí¹⁷) a současné výsledky naznačují, že inhibice nadměrné excitace zprostředkované glutamátem může částečně přispívat k neuroprotektivním a antiepileptickým účinkůmechinakosidv mozku. To je podporováno skutečností, že záchvatová aktivita vyvolaná kyselinou kainovou, neurozánět a poškození mozku jsou spojeny s nadměrným uvolňováním glutamátu a aktivací glutamátových receptorů.^44,45Dále bylo prokázáno, že několik klinicky používaných antiepileptik zmírňuje záchvatovou aktivitu vyvolanou kyselinou kainovou60,61) a snižuje uvolňování glutamátu v mozkových tkáních lidí a potkanů.^62,63) Tato zjištění poukázala na to, že snížené hladiny glutamátu jsou důležité pro farmakoterapeutické účinky antiepileptik.

Závěrem, naše výsledky to dokazujíechinakosid, prostřednictvím potlačení zánětlivých procesů, snížení nadměrné excitace zprostředkované glutamátem, stejně jako zvýšení aktivace Akt/GSK-3 a exprese Bcl{2}}, má významný antiepileptický a neuroprotektivní účinek u potkanů, kterým byla injikována kyselina kainová. Přestože roleechinakosidna pacientech s epilepsií vyžaduje další hodnocení, naše zjištění naznačují, že by to mohl být cenný přístup v terapii epilepsie.

Poděkování

Autoři by rádi poděkovali panu Yen-Sheng Wu z laboratoře elektronového mikroskopu Tzong Jwo Jang, College of Medicine, Katolická univerzita Fu Jen. Tato práce byla podpořena Ministerstvem vědy a technologie (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Konflikt zájmů

Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.