Synergický protiskin pigmentační účinek Cistanche fenyletanoidní glykosidy a glabridinin
Jan 14, 2025
Abstrakt pro vyšetřování synergickéÚčinek CistancheStrana fenyl ethanolu (PHG) a glabridin (GLA) proti pigmentaci kůže, hmotnostní poměr PHG a GLA byl prověřen experimentem inhibice in vitro tyrosinázy (dpph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) a dppph) 2, 2- diazo-bis (3- ethyl-benzothiazol -6- Sulfonová kyselina Diamonium kation (ABTS+) byla hodnocena intibitovaní aktivity a hodnotí se s melaninem a experimenty s melaninem pomocí itrosinus s pomocí itrosinus a melanin s pomocí { indexy.
ThezánětlivéByl vytvořen model HACAT buněk indukovaných lipopolysacharidem (LPS) a protizánětlivý účinek léčiva byl vyhodnocen inhibicí uvolňování interleukinu -6 (il -6) a faktoru nádoru (TNF-). Model oxidačního stresu buněk indukovaných azodiisobuamidinem hydrochloridem (AAPH) byl dále stanoven a jako indexy byla použita zvýšená aktivita superoxiddismutázy (SOD) a katalázy (CAT) k vyhodnocení antioxidačního účinku léčiva. Optimální hmotnostní poměr PHG a GLA byl stanoven výše uvedenými třemi buněčnými modely. Výsledky ukázaly, že vodné roztoky PHG/GLA (1∶1), PHG/GLA (5∶1) a PHGS/GLA (10∶1) připravené s M (PHG) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1, 10∶1, 10∶1, vykazovaly dobré inhibiční a synergickou aktivitu na tyrosinázovou aktivitu. Míra inhibice PHG/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) a PHGS/GLA (1 0 ∶1) Vodná roztoky s hmotnostní koncentrací 0,4 g/l byly 94,37%, 92,93%a 88,06%. Míra úklidu volných radikálů DPPH byla 89,44%, 88,72,%a 88,10%.
Míra úklidu ABTS+ volných radikálů byla 1 0 0,13%, 100,0,1%a 99,87%. Když hmotnostní koncentrace PHG/GLA byla 25 ug/ml, PHG/GLA (1∶1), PHG/GLA (5∶1) a PHGS/GLA (10∶1) vodné roztoky nevykazovaly žádnou cytotoxicitu k B16F10 a HACAT buňkám. Inhibice aktivity tyrosinázy v PHGS/GLA (1 ∶1) vodný roztok byla silnější (aktivita tyrosinázy 23,80%) a obsah melaninu (30,90%) byl významně snížen. Vodný roztok PHGS/GLA (1∶1) vykazoval nejlepší inhibiční účinek na IL -6 a TNF-uvolnění a schopnost zlepšit aktivitu SOD a CAT. Kombinace PHG a GLA vykazovala dobrý synergický výkon, lepší a vyšší léčivo a vyšší než PHGS/ GLA (5∶1) a PHGS/ GLA (10∶1) vodný roztok. Kombinace PHG a GLA hrála synergickou roli při zlepšování pigmentace kůže inhibicí produkce melaninu a protizánětlivé a antioxidační účinky.
Klíčová slova cistanche fenyletanoidní glykosidy;; glabridin; synergické účinky; pigmentace proti kůže; antioxidace; protizánětlivé; drogové materiály
Strana Cistanche fenyl ethanol pro bělení
Podpůrná služba Wecistanche-největšího vývozce Cistanche v Číně:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950
Pro více informací o potenciálních slevách neváhejte kontaktovat náš tým zákaznických služeb. Rádi vám pomohou!
Pigmentace kůže je kožní onemocnění způsobená faktory, jako je poranění, zánět kůže a ultrafialové záření [1-2]. Tyto faktory mohou vést k neobvyklému nárůstu melaninu, což zase způsobuje problémy, jako je chloasma, pihy a pozánětlivá hyperpigmentace (PIH) [{2}}], což ovlivňuje duševní stav lidí a kvalitu života. V současné době se léčba pigmentace kůže zaměřuje hlavně na inhibici tyrosinázy, klíčového enzymu při tvorbě melaninu [5-6].
Nejnovější výzkum [7-8] ukazuje, že pigmentace kůže závisí na úzkém spojení mezi keratinocyty a melanocyty v epidermis. Jakmile volné radikály a zánětlivé faktory uvolňované keratinocyty přijdou do kontaktu s melanocyty, vyvolávají zvýšení aktivity tyrosinázy, což povede ke zvýšení obsahu melaninu. Zrychlí také transport melaninu a způsobí, že se melanin vloží na povrch kůže. Léčba pigmentace kůže proto vyžaduje řadu opatření, jako je inhibice produkce melaninu, protizánětlivé a antioxidace.
V současné době, ačkoli tradiční přípravky léčiv, jako je hydrochinon a hydrochinon, mají určité účinky při léčbě pigmentace kůže, jejich způsoby účinku jsou relativně jednotlivé a mohou produkovat nežádoucí účinky [9-10]. Pro srovnání, přírodní léky jsou ve skutečnosti přirozené a mírné a spotřebitelé jsou stále více uznávány a oceňovány [11-12]. Zejména kombinace více rostlinných extraktů [13-14] může nejen inhibovat produkci melaninu, ale má také více účinků, jako jsou protizánětlivé a antioxidační účinky, což poskytuje nové myšlenky a metody pro léčbu pigmentace kůže.
Cistanche Deserticola MA má jedinečnou léčivou hodnotu a je známá jako „pouštní ženšen“. Studie zjistily, že charakteristický složka fenyletanoidní glykosid obsažený v Cistanche má dobrou antioxidační aktivitu [15] a protizánětlivé účinky [16] a také má určitý inhibiční účinek tyrosinázy [17]. Glycyrrhizin je flavonoidní složkou v Glycyrrhiza Glabra L., která má silný bělení a je známá jako „bělicí zlato“ [18]. Tradiční léčba čínské medicíny pigmentace kůže obvykle začíná fbystrenghrenginged the slezinu a ledviny, odstraňuje teplo a detoxikaci a doplňuje QI a krev [19].
Fenyletanolické glykosidy Cistanche Deserticola mohou doplnit ledviny jang a prospěšná podstata a krev, zatímco glycyrrhiza glabra může doplnit slezinu a qi, odstranit teplo a detoxikovat. Oba mohou spolupracovat na odolat pigmentaci. Kombinace phenyletanoidc glykosidů Cistanche Deserticola a glabridinu může odolávat pigmentaci kůže z více rozměrů a cílů, chránit před ultrafialovými paprsky v celém pásmu, synergicky inhibuje aktivitu tyrosinázy a snížit produkci melaninu a také snižovat volné radikály a inflatační faktory a oxidační stresu a regulovat a regulovat melaninovou aktivitu a regulaci a regulaci melaninu. V literatuře však existuje jen málo zpráv o synergické inhibici pigmentace kůže fenyletanoidními glykosidy Cistanche Deserticola a glabridinu.
Tento článek má v úmyslu prozkoumat, zda existuje synergický účinek mezi pfenyletanoidglykosidy CiStanche Deserticola (PHG) a glabridinem (GLA) prostřednictvím biochemického experimentů in vitro a založením 3 buněčných modelů, ND získají optimální poměr složené hmotnosti pro Synergický účinek. Očekává se, že poskytne teoretickou podporu a praktické pokyny pro rozvoj přírodních produktů pro péči o pleť rostlin a pomůže propagovat průmysl péče o pleť, aby se rozvíjel přirozenějším, zdravějším a efektivnějším směrem.
Kde: Reakce je absorbance roztoku vzorku, roztoku L-tyrosinu, roztoku PBS a tyrosinázy; Reakční kontrola je absorbance roztoku vzorku, roztoku L-tyrosinu, roztoku N a PBS; Slačkou je absorbance roztoku L-tyrosinu, roztoku PBS a roztoku tyrosinázy; Blank Control je absorbance roztoků L-tyrosinu a PBS.
'
1.3.2 Stanovení schopnosti vychytávání volných radikálů DPPH
Nejprve přesně vážte {{{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) DPPH a rozpustit jej v 25 0 Ml Anhydrous Ethanol. mmol/l. Poté byly PHGS a GLA připraveny do roztoku ethanolu PHGS a roztoku ethanolu GLA s hmotnostními koncentracemi 0 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml bylo použito stejným způsobem a VC Ethanol řešení byl připraven stejným způsobem. Potom byly roztok ethanolu PHGS a roztok ethanolu GLA rovnoměrně smíchány v M (roztok PHGS) ∶ m (roztok GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40, na získání 9 druhů phgs/gla ethanol, které byly zaznamenány jako záznamy, které byly zaznamenány jako záznamy, které byly zaznamenány jako záznamy, které byly zaznamenány jako phgs, které byly zaznamenány jako phgs/glanol. (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Ethanolové roztoky. Nakonec přidejte 100 μl různých vzorkovacích roztoků a 100 ul pracovního roztoku DPPH do desky 96-, dobře promíchejte a držte dál od světla při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Změřte absorbanci při 517 nm enzymovým markerem. VC byl použit jako pozitivní kontrola a každý experiment byl opakován třikrát. Vypočítejte rychlost vychytávání volných radikálů DPPH (%) podle vzorce (2).
Rychlost vychytávání volných radikálů DPPH/%=(1 −𝐴1−𝐴3𝐴2) × 100 (2) Kde: A1 je absorbance roztoku vzorku + pracovní roztok DPPH; A2 je absorbance 50% ethanolu podle objemu + pracovní roztok DPPH; A3 je absorbance roztoku vzorku + 50% ethanolu podle objemu.
1.3.3 Stanovení ABTS+ schopnost vychytávání volných radikálů
Nejprve vážte 1 g (1,82 mmol) ABT a rozpusťte jej v deionizované vodě, aby se připravil pracovní roztok ABT s konečnou koncentrací 7,4 mmol/l; zvážit 0. 5 g persulfátu draselného a rozpusťte jej v deionizované vodě, aby připravil pracovní roztok personálu draslíku s konečnou koncentrací 2,6 mmol/l; Smíchejte pracovní roztok ABT a pracovní roztok personálu draselného ve stejných objemech a reagujte po dobu 12 hodin ve tmě, abyste připravili pracovní roztok ABTS+. Poté, podle metody v části 1.3.2, připravte roztok ethanolu PHGS, roztok ethanolu GLA, roztok ethanolu N a VC, jakož i PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Ethanolový roztok.
Nakonec přidejte 40 ul různých vzorkovacích roztoků a 160 μl ABTS+ pracovního roztoku do desky 96-, dobře promíchejte, reagujte při pokojové teplotě ve tmě 6 minut a měří absorbanci roztoku při 734 nm pomocí čtečky ELISA. Vypočítejte míru úchyty ABTS+ volný radikál (%) podle vzorce (3).
Kde: A1 je absorbance roztoku vzorku + ABTS + pracovní roztok; A2 je absorbance deionizované vody + ABTS + pracovní roztok; A3 je absorbance roztoku vzorku + deionizovaná voda.
1,4 buněčný experiment
1.4.1 Buněčná kultura
Po oživení buněk B16F10 a HACAT jsou naočkovány do vysoko-glukózového média DMEM (obsahující směs 10% fetálního hovězího séra a 1% penicilin-streptomycin hmotností) a kultivovány v inkubátoru při 37 stupních, 5% objemové frakce CO2 a 70% frakce objemu CO2 a 70% po dobu 24 h. Stav růstu buněk je pozorován pod mikroskopem a médium je nahrazeno nebo subkultivováno podle stavu růstu buněk.
1.4.2 Experimentální seskupení
Buňky B16F10 a HACAT ve fázi logaritmické růstu jsou inokulovány v 96- jamkách s vhodným počtem buněk a kultivovány po dobu 24 hodin, aby buňky přidržovaly stěnu. Ukázkové roztoky různých hmotnostních koncentrací jsou připraveny pomocí kultivačního média DMEM. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) Skupina, skupina PHGS/GLA (5∶1) a PHGS/GLA (10∶1) Kulturní střední skupina.
V modelu pigmentace B16F10 indukované UVB byly přidány buňky modelu s 30 μl PBS (pH =7. 4) a umístěny 3 cm přímo pod UVB iradiátor po dobu 110 s; Experimentální skupina byla předem ošetřena 100 ul vzorkových roztoků různých hmotnostních koncentrací po dobu 1 hodiny, poté přidána s 30 ul PBS a umístěna 3 cm přímo pod UVB ozáření po dobu 110 s; Normální skupina vždy používala vysoce glukózové kultivační médium; Skupina prázdná nebyla naočkována buňkami, ale místo toho se stejným množstvím kultivačního média.
V modelu zánětů HACAT buněk indukovaný LPS byla modelová skupina kultivována s PBS roztokem LPS v koncentraci 20 ug/ml po dobu 24 hodin; Experimentální skupina byla předem ošetřena 100 ul roztoků vzorků různých hmotnostních koncentrací po dobu 24 hodin a poté přidána s 20 ug/ml LPS roztokem po dobu 24 hodin; Normální skupina vždy používala vysoko-glukózové DMEM médium; Skupina prázdné nebyla naočkována buňkami, ale stejným množstvím kultivačního média.
V modelu oxidačního stresu indukovaného AAPH indukovaný AAPH byla modelová skupina kultivována se 100 ml AAPH (2,5 mmol) roztokem při koncentraci 25 mmol/l po dobu 24 hodin; Experimentální skupina byla předem ošetřena se 100 ul roztoků vzorků různých hmotnostních koncentrací po dobu 24 hodin a poté přidána s AAPH roztokem při koncentraci 25 mmol/l po dobu 24 hodin; Normální skupina vždy používala vysoko-glukózové DMEM médium; Skupina prázdné nebyla naočkována buňkami, ale stejným množstvím kultivačního média.
Každá skupina byla nastavena se 3 replikačními jamkami a kultivována v inkubátoru při 37 stupních, 5% objemovém frakci CO2 a 70% vlhkosti.
1.4.3 Test cytotoxicity
Metoda CCK8 byla použita ke stanovení cytotoxicity. B16f1 0 a HACAT buňky ve fázi logaritmické růstu byly štěpeny 0,25% trypsin po dobu 3 minut. Po ukončení trávení bylo kultivační médium opakovaně foukáno, aby se provedl buněčnou suspenzi s hustotou 1 x 104 buněk/ml. Buňky byly rovnoměrně inokulovány v destičce 96-, 100 ul na jamku a PBS byl přidán do jamek kolem buněk. Poté, co se buňky dodržovaly na stěně, byly přidány různé hmotnostní koncentrace roztoku vzorku, 3 replikující jamky na skupinu a kultivovány v inkubátoru při 37 stupňů, 5% objemovou frakci CO2 a 70% vlhkosti po dobu 24, 48 a 72 hodin a poté byl roztok vyřazen. Všechny skupiny byly přidány se 100 ul kompletního kultivačního média obsahujícího 10% objemovou frakci CCK8 a inkubovány po dobu 60 minut. Absorbance roztoku při 450 nm byla měřena pomocí čtečky ELISA. Životaschopnost buněk (%) byla vypočtena podle vzorce (4).
Kde: Experimentální skupina je absorbance jamek obsahujících buňky a roztok vzorku pod ozářením UVB; Normální skupina je absorbance buněk obsahujících jamky a roztok vzorku bez ozáření UVB; Prázdná skupina je absorbance studny obsahujícího kultivační médium, ale žádné buňky.
1.4.5 Stanovení obsahu melaninu
Obsah melaninu byl určen metodou lýzy NaOH. Po ošetření buněk po dobu 72 hodin podle metody v části 1.4.2 byl supernatant vyřazen a dvakrát promyt PBS a bylo přidáno 100 μl vodného roztoku NaOH obsahujícího 10% DMSO (koncentrace 1 mol/l). Po umístění do 90 stupňové pece po dobu 1 hodiny byla absorbance roztoku při 490 nm stanovena enzymovým markerem. Experiment byl opakován třikrát. Obsah melaninu (%) byl vypočítán podle vzorce (5).
1.5 Stanovení obsahu zánětlivého faktoru a indexu oxidačního stresu
Po ošetření buněk po dobu 48 hodin podle metody v oddíle 1.4.2 byly buňky HACAT v každé skupině shromážděny s škrabkou buněk, centrifugovány a supernatant byl odebrán. Obsah IL -6 a TNF- byl stanoven podle pokynů soupravy ELISA.
Po ošetření buněk po dobu 48 hodin podle metody v oddíle 1.4.2 byly buňky HACAT v každé skupině shromážděny buněčným škrabkem a buňky byly přerušeny opakovaným zmrazením a rozmrazením. Buňky byly centrifugovány při 12000 r/min při 4 stupních po dobu 10 minut a supernatant byl odebrán. Aktivita SOD a obsah koček byly stanoveny podle pokynů soupravy ELISA.
1.6 Stanovení kombinovaného indexu
Metoda kombinovaného indexu (CI) [20] byla použita k určení, zda PHG a GLA v různých hmotnostních poměrech měly synergický účinek při inhibici aktivity tyrosinázy a antioxidace. Kombinovací index byl vypočten podle vzorce (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 Označuje antagonistický účinek, CI =1 označuje aditivní efekt a CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Analýza dat
Všechna data jsou vyjádřena jako „aritmetický průměr ± standardní odchylka (𝑥̅ ± 𝑠)“. Graf Prism 9.5. 0 byl použit pro statistickou analýzu. Pro srovnání mezi více skupinami byla použita jednosměrná analýza rozptylu. Str<0.05 was considered statistically significant.
