Studie o estrogenních účincích echinakosidu a akteosidu z Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Univerzita tradiční čínské medicíny Tianjin, Tianjin 300193, Čína
Abstraktní: V této studii estrogenní účinkyechinakosidaakteosidHerba Cistanche byly vyšetřovány. K detekci estrogenních účinků byl použit zákon lucif erase reporter plasmiduechinakosidaakteosid. K detekci jejich kompetitivního účinku s estrogenem byly použity experimenty kompetitivní vazby estrogenového receptoru. Výsledky to ukázalyechinakosidaakteosidmůže zvýšit aktivitu ERE. KdyžechinakosidneboakteosidPokud se přidává do estrogenových aktů, aktivita reportérového genu řízená ERE může být stimulována jako agonista estrogenu. Proto byl učiněn závěr, žeechinakosidaakteosidměl fytoestrogenovou aktivitu prostřednictvím stimulace aktivity reportérového genu zvýšení ERE.Echinakosidaakteosidbyly potenciální SERMy.
Klíčová slova: echinacoside; akteosid; fytoestrogeny;
Herba Cistanche je rostlina rodu Cistanche (Orobanchaceae) z rodu Cistanche (Cistanche). Jedná se o suchou dužnatou lodyhu se šupinatými listy. Má funkce vyživování jangu ledvin, vyživující esence a krve a zvlhčování střev. Užívá se při nedostatku jangu ledvin, nedostatku esence a krve, impotenci a neplodnosti, bolestivosti pasu a kolen, slabosti svalů a kostí, suchých střevech a zácpě ¨. 2J. V současnosti jsou hlavními chemickými složkami izolovanými a identifikovanými z Cistanche fenylglykosidy, iridoidy, lignany, flavonoidy, polysacharidy, oligosacharidy, galaktitol, těkavé složky, alkaloidy atd. Mezi nimi jsou fenethylalkoholové glykosidy hlavními účinnými složkami Cistanche cistanche, a jsou také hlavními detekčními indikátory pro kontrolu kvality Cistanche a jsou reprezentoványechinakosid a verbascosid. Moderní farmakologické studie ukázaly, že Cistanche má funkce imunitní regulace, antioxidace, stárnutí, proti únavě, neuroprotekce a ochrany jater. Některé farmakologické studie také ukazují, že Cistanche může podporovat regeneraci kostí-l"J, inhibovat tvorbu osteoporózy a fytoestrogenů u žen po menopauze"]. V tomto experimentu jsme vybrali echinacosid a verbascosid, což jsou hlavní indikátory kontroly kvality v Cistanche, a testovali jsme estrogenníúčinky echinakosidua verbascosid metodou luciferázového reportérového plazmidu a experiment kompetitivní vazby estrogenového receptoru. Prozkoumejte mechanismus echinakosidu a verbascosidového estrogenu
1 Materiál a metody
1.1 Materiál Hela buňky (lidské buňky rakoviny děložního čípku), zakoupené od Shanghai Institute of Cell Biology;echinakosidbyla separována a purifikována z Cistanche deserticola naší laboratoří a byla testována pomocí HPLC-ELSD. Theechinakosidreferenční látka (Čínský národní institut pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů, číslo šarže: 111670) byla použita jako kontrola a naměřená čistota byla 95,1 procenta. Theakteosidbyl oddělen a vyčištěn z pouště Cistanche naší laboratoří a byl získán pomocí HPLC. ELSD test s glykosidovou referenční látkou Verbascum (Čínský institut pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů, číslo šarže: 111530) jako kontrolou, naměřená čistota byla 96,4 procenta; plazmidy ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (extrahované naší laboratoří); Estradiol (E), Sigma Company; Fetální bovinní sérum (FBS), PAA Company; Fetální bovinní sérum ošetřené aktivním uhlím (CS-FBS), PAA Company; DMEM bez fenolové červeně, Sigma Company; dimethylsulfoxid (DMSO)), Amresco Company; LB médium, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X Buffer, Promega Company; Lipofectamine 2000, Promega Company; Souprava pro extrakci plazmidu, TIANGEN Company; Kit pro detekci reportérového genu luciferázy je produktem společnosti Promega Company.
1.2 Buněčná kultura Buňky Hela byly kultivovány v kultivačním médiu DMEM obsahujícím 10 procent fetálního hovězího séra. Alespoň jedna generace před experimentem byla nahrazena kultivačním médiem DMEM obsahujícím 1 procento fetálního hovězího séra ošetřeného aktivním uhlím.
1.3 Stanovení transfekce a luciferázové aktivity Buňky Hella byly vysety do 24-jamkové destičky v hustotě 70 procent až 80 procent. Poté, co buňky přilnou ke stěně a hustota buněk dosáhne 90 procent, postupujte podle pokynů v lipo. Pokyny pro transfekční činidlo Feetamin 2000 transfektují expresní plazmidy ERa, ER[3 a reportérové plazmidy ERE, Renila, po 8 hodinách vymění médium a přidají testovaná léčiva různých koncentrací. Po inkubaci přes noc použijte multifunkční čtečku destiček k detekci estrogenové odpovědi. Aktivita luciferázy komponenty ERE, vypočítejte relativní vliv léků na aktivitu luciferázy.
1.4 Zpracování dat a statistická analýza
Pomocí statistického softwaru SPSS18.0 jsou data vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (x ± S). K analýze dat mezi skupinami byly použity jednosměrná analýza rozptylu (ANOVA) a Dunnettův t-test pro vícenásobné srovnání. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Akteosid
2 Experimentální výsledky
2.1 Vliv verbascosidu na aktivitu estrogenového responzivního elementu ERE luciferázy Výsledky ukazují, že ve srovnání s kontrolní skupinou při zprostředkování ERa a ER[3, E (10nmol) může významně upregulovat estrogenový responzivní element ERE luciferáza Aktivita verbascosidu může up-regulovat aktivitu estrogenového responzivního elementu ERE luciferázy při 10, 100, 1, 10 a 50 txmol. Když koncentrace dosáhne 50 umol, up-regulace aktivity ERE luciferázy je ekvivalentní estradiolu. Je závislý na dávce, ale selektivita pro estrogenové receptory ERa a EP~ není zřejmá (obrázek 2).
2 Účinky různých koncentracíakteosidna luciferázovou aktivitu ERE
Poznámka: Ve srovnání s kontrolní skupinou P
2.2 Účinekechinakosidna estrogenovém responzivním elementu ERE luciferázová aktivita Výsledky ukazují, že ve srovnání s kontrolní skupinou, když je zprostředkovaná ERa a ER[3, E(10nmol) může významně up-regulovat estrogenový responzivní element ERE fluorescence Echinakosid může upregulovat estrogenovou odpověď element ERE luciferázová aktivita při 10, 100, 1, 10 a 50 Ixmol. Když koncentrace dosáhne 50 Ixmol, up-regulace aktivity ERE luciferázy je mírně nižší než u estrogenu. Diol je také závislý na glukometru, ale má mírný rozdíl v selektivitě pro estrogenové receptory ERa a E (obrázek 3).
2.3 Kompetitivní vazebný účinek Verbascum glykosidů a estradiolu na estrogenové receptory Výsledky ukazují, že Verbascum glykosidy se mohou kompetitivně vázat na estrogenové receptory s estradiolem a antagonizovat aktivitu estradiolu na estrogenový odezvový prvek ERE luciferáza. Efekt up-regulace. Ve srovnání se skupinou E (10nmo1) mohou verbascosidy down-regulovat luciferázovou aktivitu estradiolu na estrogenovém responzivním prvku ERE v různé míře při 1, 10 a 50 p, mol a verbascosidy vykazují závislost na dávce. , Když koncentrace dosáhne 50 Ixmol, antagonistický účinek na estradiol je nejzřetelnější (obrázek 4).
2.4 Konkurenční vazebný účinekechinakosida estradiol na estrogenových receptorech. Výsledky to ukazujíechinakosidmůže se také kompetitivně vázat na estrogenové receptory s estradiolem a antagonizovat odpověď estradiolu na estrogen. Up-regulace aktivity ERE luciferázy. Ve srovnání se skupinou E (10 nmol) může verbaskosid v různé míře snižovat luciferázovou aktivitu estradiolu na estrogenový odezvový prvek ERE v různé míře při 1, 10 a 50 mol, aechinakosidvykazuje línou dávku. Pohlaví, když koncentrace dosáhne 50 lxmol, antagonistický účinek na estradiol je nejzřetelnější (obrázek 5)
3 Diskuse
Tento experiment poprvé ukázal, že jasná data to ukázalaechinakosida verbascoside, hlavní aktivní složky v Cistanche, se mohou vázat na estrogenové receptory ERa a EP®, regulovat aktivitu luciferázy ERE a vykazovat estrogenní účinky, což ukazuje aktivitu SERM. Analýza výše uvedených experimentálních dat ukazuje, že v systému ERa je upregulace verbascosidu na estrogenové odezvové aktivitě luciferázy ERE při 50 lxmol ekvivalentní 0,977násobku E2 (1 0nmol), což je ekvivalentní tomu v systému ERI3. 0,970 krát; podobně v systému ERa je účinek upregulace echinakosidu na aktivitu luciferázy ERE odpovědný na estrogen při 50 lxmol ekvivalentní E (10 nmol), což je ekvivalentní 0 v systému ERI3. 937krát je upregulace verbascosidu na aktivitu estrogenového responzivního prvku ERE luciferázy mírně vyšší než uechinakosida selektivita pro estrogenové receptory ERa a ER[3 není zřejmá, zatímco echinaceové glykosidy mají slabé rozdíly v selektivitě pro estrogenové receptory ERa a ERI3. Tyto rozdíly mohou souviset s různými skupinami spojenými s pozicí R4 verbascosidu a echinakosidu. Estrogen působí hlavně prostřednictvím estrogenového receptoru. Existují dva hlavní podtypy estrogenového receptoru, ERa a ER [3, estrogen a látky působící na estrogen se spojí s estrogenovým receptorem za vzniku dimeru a poté dimerizují Tělo se spojí s prvkem estrogenové odezvy ERE a poté projeví estrogenní účinek [2l,. Fytoestrogeny a estrogeny mají podobnou strukturu a funkce. Studie prokázaly, že fytoestrogeny mohou regulovat kostní metabolismus a hrají mimořádně důležitou roli při udržování rovnováhy kostní resorpce a tvorby kosti. Je účinný při osteoporóze u pacientů se senilní hypofunkcí. Má určitý klinický preventivní a léčebný efekt¨. Proto se spekuluje, že účinek Cistanche na podporu regenerace kostí a inhibici tvorby osteoporózy u žen po menopauze je prostřednictvím fytoestrogenů. Tento experiment také ukazuje, že echinakosid a verbascosid se mohou kompetitivně vázat na estrogenové receptory s estradiolem a antagonizovat up-regulaci estradiolu na aktivitu ERE luciferázy. Mechanismus tohoto účinku je znám u resveratrolu. Účinek fytoestrogenů je podobný jako u J. Dále je vysvětleno, že echinakosid a verbascosid vykazují estrogenní účinky vazbou na estrogenové receptory ERa a ER3. Výše uvedené studie o fytoestrogenové aktivitě přípravku Cistanche a mechanismu jeho estrogenního účinku naznačují, že přípravek Cistanche může oddálit vznik postmenopauzální osteoporózy u žen zlepšením hladiny estrogenu v těle nebo léčbou léčby způsobené poklesem hladiny estrogenu v těle. Osteoporóza předkládá možnost a poskytuje teoretický základ pro rozšíření rozsahu klinického lékařského použití přípravku Cistanche.
Odkaz
1 Komise pro čínský lékopis（(国家药典委员）). Lékopis Čínské lidové republiky. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Vol 1:126.
2 Li SZ（李时珍）. Compendium of Materia Medica. Peking: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）,Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Imunobiologická aktivita a mechanismus jejího působení cistanches polysacharidů. J Zhejiang Univ, Med Ed （浙江 大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
