Spontánní granulocytární leukémie u myši NOD/Shi-scid IL-2R null

Abstraktní:Zde uvádíme případ spontánní granulocytární leukémie u 51-týdenního muže NOD/Shi-SCIDIL-2R nulová (NOG) myš. Ukázala se myšprogresivní anémieahrubý dechový pohyb. Makroskopicky byla slezina odbarvena a zvětšena. Histologicky kostní dřeňhrudní kosta femur byl vysoce buněčný a téměř výhradně vyplněnýneoplastické buňky. Jádra neoplastických buněk byla velká, oválného až mírně nepravidelného tvaru a malý počet buněk mělledvina- nebo prstencovitá jádra.Neoplastické buňkyextenzivně infiltroval orgány a významně se týkala slezina a játra. Imunohistochemicky byla velká populace neoplastických buněk v červené dřeni sleziny a sinusoidě jater pozitivní namyeloperoxidáza. Na základě histologických znaků byl tento případ diagnostikovángranulocytární leukemie. Tato nová informace naspontánní nádorymohou být užitečné pro vhodné použití tohoto myšího kmene v dalším výzkumu. (DOI: 10 1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Klíčová slova: granulocytární leukemie, NOG myš, spontánní nádor

KLIKNĚTE ZDE A ZÍSKEJTE PŘÍRODNÍ BIO EXTRAKT CISTANCHE S 25 % ECHINAKOSIDU A 9 % AKTEOSIDU PRO FUNKCI LEDVIN

Supporting Service Of Wecistanche-Největší vývozce cistanche v Číně:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Nakupujte pro další specifikace Podrobnosti:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontánní granulocytární leukémieje zřídka hlášena u několika kmenů myší, ačkoli chemické látky a ionizující záření mohou u některých myších kmenů zvýšit výskyt1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) myši jsou vážnězvířata s poruchou imunitya přítomné defekty v T-, B- a přirozených zabíječských buňkách a špatně fungujících makrofázích a dendritických buňkách knockoutem IL-2 receptorového řetězce (IL2R c) do kmene NOD-scid3. Tento myší kmen se používá pro neklinické testy, jako je test tumorigenicity, k posouzení kvality a bezpečnosti biologických produktů pro regenerativní medicínu využívající buňky/tkáně odvozené od člověka, a to z důvodu výrazně lepšího přihojení xenogenních buněk4–6. Přestože imunodeficientní stav a jeho důsledky pro xenoimplantáty byly dobře studovány, je k dispozici jen málo informací o spontánních nádorech vyskytujících se u tohoto myšího kmene, jako je lymfom brzlíku,prsnížláza adenom/adenokarcinom, bronchioloalveolární karcinom, rabdomyosarkoma teratom7. Zde uvádíme případ granulocytární leukémie u 51-týdenního samce NOG myši.

Zvíře bylo získáno od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japonsko) ve věku 6 týdnů a bylo drženo bez léčby. Zvíře bylo jednotlivě umístěno v plastové kleci s individuálně ventilovaným klecovým systémem (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japonsko) v místnosti s bariérovým systémem s kontrolovaným prostředím, která byla udržována při teplotě 22 ± 2 stupně pomocí vlhkost 50 ± 20 % a 12-h cyklus světlo/tma. Myš byla krmena autoklávovanou peletovanou stravou (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japonsko) s autoklávovanou vodou z vodovodu a libitem. Se zvířetem bylo zacházeno podle protokolu schváleného Institucionálním výborem pro péči o zvířata a použití společnosti CMIC Pharma Science Co., Ltd., který je akreditován organizací AAALAC International.

Tato myš vykazovala klinické známky oslabení, jako je anémie, hrubé dýchací pohyby a snížení tělesné hmotnosti mezi 49. a 51. týdnem věku. Zvíře bylo usmrceno ve věku 51 týdnů. Při pitvě byla slezina odbarvena a zvětšena. V ostatních orgánech nebyly pozorovány žádné zjevné abnormální makroskopické nálezy. Brzlík a lymfatické uzliny byly atrofické, podobně jako u normálních NOG myší.

Všechny vzorky orgánů a tkání byly rutinně odebírány, fixovány v 10% neutrálním pufrovaném formalínu, zalité v parafínu a nařezány na přibližně 3 μm. Pro jeho patologické vyšetření byly řezy obarveny hematoxylinem a eosinem (HE). Řezy sleziny a jater byly imunohistochemicky obarveny na králičí polyklonální protilátku proti lidské myeloperoxidáze (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japonsko) jako marker myeloidních buněk, králičí anti-lidskou CD3 monoklonální protilátku (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japonsko ) jako T-buněčný marker a králičí anti-lidská Pax{6}} monoklonální protilátka (Abcam Inc., Cambridge, UK) jako B-buněčný marker8. Řezy byly inkubovány s protilátkami při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny a imunodetekce byla provedena pomocí Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) s 3,3'-diaminobenzidinem/H202 jako chromogenem. Pak byly imunobarvené řezykontrastně obarveno hematoxylinem.

Histopatologicky byla kostní dřeň hrudní kosti a stehenní kosti vysoce buněčná a téměř výhradně vyplněná neoplastickými buňkami (obr. 1A). Tuková tkáň byla zcela vytlačena. Občas se v kostní dřeni vyskytla buněčná ložiska sestávající z erytroidních a megakaryocytárních elementů, které byly považovány za zbytkynormální krvetvorbu. Většina neoplastických buněk vykazovala blastický vzhled, charakterizovaný velkými, oválnými až mírně nepravidelně tvarovanými jádry a s retikulárním chromatinem obsahujícím jedno nebo více prominentních jadérek. Byl zde malý počet buněk s jádry ve tvaru ledvin nebo prstenců a několik buněk s jádry s laločnatými jádry bylo přítomno (obr. 1B). Granule v cytoplazmě neoplastických buněk nebyly v řezech obarvených HE patrné. Ve dřeni byly nalezeny četné mitotické útvary a občas byla pozorována i apoptotická tělíska. Neoplastické buňky výrazně pronikly do periostu a okolního kosterního svalstva. Došlo k rozsáhlé infiltraci neoplastických buněk do jiných orgánů a tkání a významně se podílela slezina a játra. Ve slezině byly neoplastické buňky pozorovány v celé červené dřeni (obr. 2). Byla evidentní kapsulární infiltrace neoplastických buněk. Bylo pozorováno několik vyvíjejících se erytroidních sérií a megakaryocytů. Občas byly pozorovány megakaryocyty obsahující jednu nebo několik myeloidních buněk v cytoplazmě, což naznačuje emperipolézu. V játrech neoplastické buňky difúzně infiltrovaly Glissonovo pouzdro a jaterní sinusoidy (obr. 3). V některých cévách byly také patrné neoplastické buňky s jádry ve tvaru ledvin nebo prstenců. Některé hepatocyty v periportální oblasti s výraznou infiltrací neoplastických buněk vykazovaly degeneraci nebo nekrózu, zatímco normální struktura jaterního lalůčku zůstala nedotčena. Neoplastická buněčná infiltrace byla nalezena také v jiných orgánech, včetně alveolární stěny a perivaskulární oblasti plic, interstadionu v ledvině, sinusoidy v nadledvinách a sliznice a submukózy v žaludečním traktu (žaludek a střevo). Imunohistochemicky byla na MPO pozitivní velká populace neoplastických buněk v červené dřeni sleziny (obr. 4) a sinusoidě jater. CD3 a Pax-5 pozitivní buňky nebyly detekovány. Výsledky imunobarvení CD3 a Pax{11}} byly podobné jako u sleziny normálních myší NOG, které byly histologicky hypoplastické a nevykazovaly žádné CD3 nebo Pax{13}} pozitivní buňky.

Imunohistochemické vyšetření ukázalo, že neoplastické buňky pocházejí z myeloidních buněčných linií. V některých dotčených oblastech, zejména ve slezině a játrech, mělo malé množství buněk ledvinové, prstencové nebo laločnaté tvary svědčící o diferencujících myeloidních sériích. Tato zjištění naznačují, že neoplastické buňky pocházejí z nezralých granulocytů. Případ těžké myelopoézy může být zřejmý přítomností všech typů vyvíjejících se myeloidních sérií, na rozdíl od dominance nezralých buněk u leukémie. Kromě toho je progresivní anémie běžným klinickým příznakem granulocytární leukémie a zvýšení počtu erytroidních a megakaryocytárních buněk je slabé1. Menší populace granulocytů s laločnatými jádry v postižené oblasti bez zjevného zánětu ukazuje na nálezy tohoto případu neoplastickou a nereaktivní myelopoézu.

U granulocytární leukémie může být kostní dřeň nahrazena nezralými a zralými myeloidními buňkami. V předchozí zprávě o jiných kmenech myší tyto neoplastické buňky plně infiltrovaly játra, slezinu, lymfatické uzliny atd.2 a tyto buňky ve slezině a játrech se nacházely hlavně v červené dřeni a kolem Glissonova pouzdra1. Distribuce leukemických buněk v tomto případě byla tedy totožná s distribucí v předchozím případě. Na základě morfologie buněk je granulocytární leukémie u myší klasifikována do dvou typů: juvenilní typ, který je srovnatelný s lidskou akutní myeloidní leukémií, a zralý typ s lidskou chronickou myeloidní leukémií1. V juvenilním případě dominovaly neoplastickým buňkám v kostní dřeni, slezině a játrech špatně diferencované buňky, zatímco lze pozorovat myeloidní elementy představující různé stupně zrání a procento myeloblastů bylo u některých zralých případů nízké2, 9. v tomto případě leukemickým buňkám dominovala nezralá forma s velkými, oválnými až mírně nepravidelně tvarovanými jádry. Navíc, vezmeme-li v úvahu klinické nálezy, že se akutně rozvinulo celkové zhoršení zdravotního stavu, včetně progresivní anémie a hrubých respiračních pohybů; proto se má za to, že projednávaná věc je typu mladistvých.

Obr. 1. Histologické snímky kostní dřeně femuru. Odpověď: Neoplastické buňky se difúzně množí, čímž nahrazují kostní dřeň. B: Jádra jsou velká, oválného až mírně nepravidelného tvaru. Malý počet buněk má jádra ve tvaru ledviny (žlutá šipka), prstencového (zelená šipka) nebo laloku (bílá šipka). Mitotická postava je označena bílou šipkou. HE skvrny. Černý pruh=50 μm (A), 10 μm (B).

V předchozí publikaci o NOG myších byly neoplastické léze obecně neobvyklé; nicméně lymfom brzlíku byl hlášen u 0,82 % ve věkové skupině od 16 do 40 týdnů7, 10. Podle našich nejlepších znalostí nebyla spontánní granulocytární leukémie u NOG myší dříve hlášena. U několika kmenů myší, včetně B6C3F1 a BALB/c, se granulocytární leukémie vyskytla zřídka2, 11 a nebyla hlášena v případě těchto myší ve věku 12 měsíců nebo mladších. V tomto případě se vyvinula granulocytární leukémie ve věku 51 týdnů, což byl relativně mladý věk. Tyto nové informace o spontánních nádorech mohou být užitečné pro vhodné použití tohoto myšího kmene v dalším výzkumu.