Ochranný účinek extraktu Djulis (Chenopodium Formosanum) proti stárnutí kůže vyvolanému UV zářením a stárnutím prostřednictvím zmírnění oxidačního stresu a degradace kolagenu, část 2

3. Diskuse

Fibroblasty hrají klíčovou roli v přeměně dermální extracelulární matrix, včetně syntézy kolagenu, elastického vlákna a glykosaminoglykanu za vzniku husté pojivové tkáně [33]. Akumulace UV a AGE stresu způsobuje degradaci kolagenu a vzájemně se interferuje během vnitřního a vnějšího stárnutí [3,34]. Vývoj přírodních produktů nebo materiálů s antioxidačními, anti-fotoaging a antiglykačními aktivitami pro zmírnění stárnutí pleti v posledních letech pokračuje.

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a má schopnost vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý reparační účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na Anti-Aging Cistanche Para Que Serve

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Chenopodium formosanum (CF) je původní obilná rostlina pěstovaná na Tchaj-wanu, pěstovaná hlavně v domorodých obytných oblastech. Kromě použití obilovin přitahuje stále větší pozornost aplikace CF na základě antioxidačních vlastností [28–30,35]. Polyfenoly jsou dobře známé antioxidanty a chrání pokožku tím, že mají silnou aktivitu pohlcující volné radikály [36], snižují zánět a absorbují UV záření, aby poskytovaly kůži fotoprotekci [37,38]. Rutin je flavonoid široce rozšířený v ovoci a zelenině a reprezentativní polyfenol v CF naznačený předchozími studiemi [21,22]; několik zpráv prokázalo biologické účinky rutinu na stárnutí kůže vyvolané ROS [39] a navrhlo, že rutin účinně inhibuje tvorbu AGE při syntéze kolagenu [40]. U keratinocytů a myších modelů bylo indikováno, že CF chrání kůži před UV-indukovaným epidermálním poškozením a zánětem a rutin je hlavní složkou CF, která přispěla k ochrannému účinku [19]. V této studii výsledky ukázaly, že léčba HaCaT buňkami pomocí CF měla vyšší míru přežití a nižší produkci interleukinu-6, MMP-1 a ROS v podmínkách UVB záření. Předchozí studie používala keratinocyty vystavené UVB záření k napodobení modelu fotostárnutí kůže a fibroblasty byly v této studii použity k prozkoumání mechanismů a účinků vnitřních faktorů (AGE) a vnějších faktorů (UV) na stárnutí kůže dermis. Výsledky této studie ukázaly, že CF snižovala cytotoxicitu indukovanou UV zářením a poskytovala dobrou aktivitu vychytávání ROS, a výsledky byly v souladu s Hongovou studií [19]. Tato studie zvažovala více faktorů stárnutí kůže a zkoumala antiglykační účinek CF na vnitřní stárnutí a zjištění dále potvrdila, že CF má vynikající účinnost ochrany pokožky prostřednictvím zmírnění oxidačního stresu a degradace kolagenu.

20-Hydroxyekdyson je bioaktivní sloučenina patřící mezi fytoekdysteroidy, běžně se vyskytující v Chenopodium formosanum [21–24]. Microsorum grossum (Polypodiaceae) je jednou z nejčastěji používaných kapradin v polynéské tradiční medicíně a extrakty z jejích listů a oddenků obsahují jako hlavní bioaktivní složky 20-hydroxyecdyson. Bylo známo, že Microsorum grossum má UVB-ochranné účinky na lidské dermální fibroblasty tím, že upreguluje antioxidační enzym HO-1 a inhibuje stresem vyvolané předčasné stárnutí [41]. Chenopodium quinoa (Amaranthaceae) je semenná plodina známá jako „zlaté zrno“ původními obyvateli And v Jižní Americe, včetně 20-hydroxyecdysonu, u kterého bylo prokázáno, že inhibuje intracelulární produkci ROS a aktivitu MMP [42]. Kromě toho má 20-hydroxyekdyson izolovaný ze semen C. quinoa silnou inhibiční aktivitu proti kolagenáze a volným radikálům DPPH a silnou schopnost chelatovat ionty železa [43]. Mnoho předchozích studií uvádělo, že extrakt CF obsahuje rutin a 20-hydroxyecdyson jako svou bohatou bioaktivní složku, jiné rostliny obsahující tyto sloučeniny mají také podobné aktivity a potenciál péče o pleť. Primární výhodou rostlinných látek je jejich komplexní složení a synergický účinek příbuzných sloučenin s více aktivitami pro dosažení vyšší účinnosti [44]. Rostlinné extrakty představují slibnou budoucnost v péči o pleť díky své přitažlivosti jako přírodních produktů, vnímání jako bezpečné a hojnosti a udržitelnosti.

ROS jsou vedlejšími produkty normální oxidační funkce buněk v řetězci transportu elektronů aerobní metabolické reakce. Nadměrné vystavení UV záření a dalším environmentálním stresorům přebíjí kožní antioxidační kapacitu a dále indukují produkci ROS, fragmentaci DNA, peroxidaci lipidů a apoptózu [45,46]. Vysoké hladiny ROS iniciují kaskády signálů stárnutí v kožních buňkách, čímž podporují stárnutí buněk, dokonce i smrt [47]. Podle výsledků buněčného testu extrakt CF bez cytotoxických účinků na fibroblasty významně zachránil buněčnou cytotoxicitu indukovanou UV zářením a vykazoval dobrou fotoprotektivní aktivitu. Kromě toho ROS vytvořené ve fibroblastech byly významně zvýšeny buď UV zářením nebo působením AGEs a ​​obojí bylo účinně inhibováno extraktem CF. Silná aktivita CF pohlcující radikály byla také ověřena různými antioxidačními testy. Polyfenoly jsou schopny darovat elektrony volným radikálům a převádět je na stabilnější nereaktivní látky díky přítomnosti hydroxylových skupin v kruhové struktuře [48,49]. CF bohatý na polyfenoly může zabránit poškození kůže vyvolanému ROS ukončením řetězové reakce volných radikálů. Mnohočetné sloučeniny související s antioxidanty v extraktu CF poskytují synergický účinek pro zvýšení celkové aktivity extraktu CF a činí extrakt z CF silným antioxidantem, který chrání pokožku před oxidačním stresem.

Kůže má endogenní antioxidační obranný systém, který se vyrovnává s oxidačním stresem způsobeným stárnutím. Nrf2 je transkripční faktor, který působí proti oxidativnímu stresu, a Keap1 je tlakový senzor, který reguluje expresi Nrf2 [8]. Když nerovnováha intracelulárního tlaku způsobí změnu konfigurace Keap1 a ztratí svou schopnost vázat se na Nrf2, Nrf2 se translokuje do jádra a zvyšuje hladinu vnitřních antioxidačních enzymů, aby se zabránilo oxidačnímu poškození a projevila se fotoprotektivní aktivita [50,51]. Výsledky ukázaly, že extrakt CF mohl iniciovat signální dráhu Nrf2 a antioxidační obranný systém, když byly buňky stimulovány oxidačním stresem indukovaným UV zářením. CF extrakt upreguloval expresi Nrf2 a HO-1. Buněčné obranné vlastnosti CF extraktů lze vysvětlit jejich schopností buď přímo neutralizovat ROS, nebo nepřímo upregulovat expresi buněčných obranných proteinů. Na základě výše uvedených výsledků může extrakt CF snižovat intracelulární oxidační stres a být použit jako fotoprotektiv. Kromě přímého účinku na tvorbu ROS extrakt CF také chránil fibroblasty před poškozením UV zářením posílením intracelulárních antioxidačních obranných mechanismů prostřednictvím Nrf2 a jeho cílového faktoru, HO-1.

Fotostárnutí je způsobeno nerovnováhou mezi akumulací a degradací ECM po opakované absorpci UV záření. UV záření poškozuje střídání kožního kolagenu a urychluje tvorbu ROS, které následně působí na buňky a složky matrice a zprostředkovávají další obrat [33,47]. ROS a oxidační stres vedou k poškození kůže aktivací AP-1 signalizace a zvýšením mnoha MMP. Během normální údržby tkání kolagen prochází neustálou obměnou. Je však známo, že UV záření indukuje tři různé MMP, kolagenázu (MMP-1), stromelysin (MMP-3) a želatinázu (MMP-9), které rozbíjejí kolagenová a elastická vlákna, což má za následek fragmentaci a dezorganizaci [52,53]. TIMP jsou inhibitory MMP a homeostáza mezi těmito dvěma proteiny hraje důležitou roli ve funkční a strukturální integritě ECM [54–56]. V této studii extrakt CF inhiboval AP-1 indukovanou UVB a fosforylaci proteinů ERK a p38 ve fibroblastech lidské kůže. Kromě toho ošetření extraktem CF blokovalo degradaci kolagenu indukovanou UVB inhibicí exprese MMP-1, -3 a -9 ve fibroblastech lidské kůže a indukcí exprese TIMP-1 proti aktivitě MMP . Dráha TGF- je hlavní cestou regulující biosyntézu prokolagenu a produkci ROS [57]. Oxidační stres inhibuje signalizaci TGF snížením regulace Smad3, což přispívá ke ztrátě obsahu kolagenu ve stárnoucí kůži [4]. Výsledky ukázaly, že extrakt CF zvýšil expresi TGF- a Smad3 pro zvýšení celkového obsahu kolagenu. Na základě výše uvedených výsledků extrakt CF zlepšil UVB-indukovanou degradaci kolagenu prostřednictvím vychytávání ROS, inhibice MMP a upregulace TGF.

Jedním z faktorů přirozeného stárnutí pleti je progresivní akumulace AGEs v průběhu života. RAGE patří do imunoglobulinové superrodiny buněčných povrchových receptorů, které interagují s několika ligandy, zejména CML, jedním z glykačních produktů Maillardovy reakce [58]. RAGE je vysoce exprimován v kožních keratinocytech a fibroblastech interakcí s AGEs následovanou UVB zářením [59] a upregulován v kůži vystavené slunci [60]. UV-indukovaná oxidace urychluje tvorbu elastinu v lidské kůži při aktinické elastóze a AGE se hromadí na kožním kolagenu a elastinu, které narušují normální funkci kůže [61]. Aktivace RAGE snižuje syntézu kolagenu typu I a produkci matrice ve fibroblastech [62]. Předchozí studie uvedla, že extrakt CF inhiboval tvorbu AGE v bezbuněčném systému [32], ale podrobný antiglykační mechanismus v dermálních fibroblastech zůstává nejasný. Na základě výsledků této studie jsme předpokládali, že zabránění degradaci kolagenu blokováním interakce AGE–RAGE a snížení produkce ROS uvnitř buněk jsou možnými antiglykačními cestami extraktu CF.

Je známo, že biologické produkty indukované glykací jsou spojeny se stárnutím kůže, cukrovkou a progresí některých nádorů. Během procesu stárnutí akumulace AGE mění mechanické vlastnosti kůže zvýšením tuhosti [34]. Proto je přítomnost AGE považována za jeden z faktorů opožděného hojení ran a ztráty elasticity zhojené kůže. Cross-talk mezi RAGE a TGF- 1 ovlivňuje hojení ran u diabetu regulací kolagenového obratu a produkce cytokinů ve fibroblastech ošetřených AGEs [63]. V této studii extrakt CF nejen podporuje syntézu pro-kolagenu ve fibroblastech, ale také zlepšuje degradaci kolagenu způsobenou vnitřním a vnějším stárnutím kůže. Navíc extrakt CF zvýšil regulaci exprese TGF a snížil expresi RAGE. Na základě výše uvedených výsledků výzkumu lze v budoucnu dále zkoumat roli CF v mechanismech hojení ran souvisejících s glykačním stresem.

4. Materiály a metody

4.1. Materiály a chemikálie

Činidla použitá v buněčné kultuře, včetně Dulbeccova modifikovaného Eagleova média (DMEM), fetálního bovinního séra (FBS), penicilin-streptomycinu a trypsinu-EDTA, byla získána od Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA) . CML byl zakoupen od Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, USA). Dodecylsulfát sodný (SDS), 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-difenyl-2H-tetrazolium bromid ( MTT) a fosforečnan draselný-hydroxid draselný (KH2PO4-KOH) byly zakoupeny od USB Corporation (Cleveland, OH, USA). 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), ferrikyanid draselný (III) (K3Fe(CN)6), chlorid železitý (FeCl3), kyselina askorbová, fenazinmethosulfát (PMS), - nikotinamid adenindinukleotid , redukovaný hydrát disodné soli (NADH), nitrotetrazolium blue chlorid (NBT), butylovaný hydroxyanisol (BHA), 2-deoxy-D-ribóza, kyselina thiobarbiturová (TBA), kyselina trichloroctová (TCA), mannitol, chlorid železnatý ( FeCl2), kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA), 20, 70 -dichlorfluorescin-diacetát (H2DCFDA), 2-propanol a 20-hydroxyekdyson byly zakoupeny od Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO, USA) . Rutin byl získán od ACROS Organics (Morris Plains, NJ, USA). Acetonitril a kyselina mravenčí čistoty pro HPLC byly získány od JT Baker, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA). Všechny ostatní použité chemikálie byly analytické kvality nebo vyšší jakosti.

4.2. Příprava CF extraktu

CF použitý v této studii byl zakoupen od Pingtung County, Taiwan, a CF extrakt byl dodán společností TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). Způsob přípravy extraktu CF byl popsán dříve [32]. Stručně řečeno, neloupané Chenopodium formosanum bylo přidáno do vody v poměru 1:10 (w/v) a extrahováno při třech různých teplotách, nejprve při 25 ◦C, poté při 50 ◦C a nakonec při 70 ◦C. Směs byla odstřeďována při 4600 x g po dobu 20 minut a byl odebrán supernatant. Prášek extraktu CF byl získán po odstranění rozpouštědla ze supernatantu lyofilizací a skladován při teplotě místnosti.

4.3. HPLC-ESI-MS/MS a MRM kvantitativní analýza

Hmotnostní spektrometrická analýza HPLC-ESI byla provedena pomocí kapalinové chromatografie Dionex Ultimate 3{{10}}00 (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) ve spojení s iontovou pastí hmotnostní spektrometr (HCT Ultra, Bruker Daltonics, Brémy, Německo). Separační metoda byla provedena tak, jak je popsáno Chen et al., s menšími úpravami [22]. Extrakt CF byl vstříknut do kolony Atlantis T3 C18 (2,1 mm ID × 150 mm, velikost částic 3 µm, Waters Corp., Milford, MA, USA), která byla spojena s ochrannou kolonou (SecurityGuard™ C 18 2.0 mm ID × 4,0 mm, Phenomenex Inc., Torrance, CA, USA). Použité mobilní fáze byly: 0,1 procenta kyseliny mravenčí ve vodě (rozpouštědlo A) a 0,1 procenta kyseliny mravenčí v acetonitrilu (rozpouštědlo B) při průtoku 0,3 ml/min. Vícekroková gradientová eluce byla provedena s 5–45 procenty B za 15 minut, 45–95 procenty B za 5 minut a nakonec isokratickou elucí 95 procent B po dobu 5 minut.

Hmotnostní spektrometrie byla provedena programem Esquire Control (V6.2) a LC/MS byla řízena Hystarem (V3.2) (Bruker Daltonics, Brémy, Německo). Provozní parametry hmotnostního spektrometru byly nastaveny následovně: tlak nebulizéru 30 psi, suchý plyn 12 l/min, teplota sucha 300 ◦C, kapilární napětí 3600 V s koncovou deskou −500 V. MS/MS byl aplikován na všechny hlavní ionty ve zvoleném hmotnostním rozsahu. Vícenásobné monitorování reakcí (MRM) bylo provedeno analýzou následujících iontových přechodů: přechod od prekurzorového iontu při m/z 481 k produkci při m/z 371 pro 20-hydroxyecdyson a přechod z prekurzorového iontu při m/z 611 do výroby při m/z 303 pro rutin. Šířka izolace iontů byla nastavena na 4 m/z s amplitudou fragmentace 0,5 V. Sloučenina byla identifikována a kvantifikována porovnáním hmotnostních spekter získaných pomocí ESI-MS/MS s komerčními referenčními standardy.

4.4. Měření antioxidační kapacity

4.4.1. DPPH test vychytávání volných radikálů

Reakční směsi obsahující methanolový roztok DPPH a sériová ředění extraktu CF 50–500 µg/ml byly umístěny do 96-jamkové mikrodestičky a inkubovány po dobu 30 minut. Absorbance byla stanovena při 517 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakousko). Kyselina askorbová (10 ug/ml) byla použita jako srovnávací kontrola [64].

4.4.2. Test na snížení výkonu

Sériové koncentrace extraktu CF (100–1000 µg/ml) byly smíchány s fosfátovým pufrem a K3Fe(CN)6 a poté inkubovány při 50 ◦C po dobu 20 minut. Byla přidána TCA a reakční směs byla centrifugována při 3000 ot./min. po dobu 10 minut. Roztok FeCl3 byl smíchán se supernatantem a absorbance byla měřena při 700 nm pomocí multimódové čtečky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Kyselina askorbová (100 ug/ml) byla použita jako srovnávací kontrola [64].

4.4.3. Test vychytávání superoxidových aniontů (O2 −)

Reakční směsi obsahující PMS, NADH a NBT byly připraveny ve fosfátovém pufru a sériových ředěních CF extraktu 100–1000 µg/ml. Směs se nechala reagovat po dobu 5 minut a absorbance byla odečtena při 560 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakousko). BHA (250 ug/ml) byl použit jako srovnávací kontrola [65].

4.4.4. Test zachycování peroxidu vodíku (H2O2).

Aktivita extraktu CF k vychytávání H2O2 byla provedena tak, jak bylo popsáno dříve [65]. K roztoku H2O2 byly přidány různé koncentrace extraktu CF (200–1500 µg/ml) a nechaly se reagovat ve tmě po dobu 10 minut. Absorbance reakční směsi byla zaznamenána při 230 nm za použití multimódové čtečky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA) a BHA (250 ug/ml) byl použit jako srovnávací kontrola.

4.4.5. Test vychytávání hydroxylových radikálů (· OH).

Test byl proveden smícháním ředění CF extraktu (100–1000 µg/ml), KH2PO4- KOH pufru, 2-deoxy-D-ribózy, FeCl3, kyseliny askorbové, EDTA, H2O2 a deionizované vody . Po inkubaci při 37 °C po dobu 1 hodiny byly ke směsi přidány TBA a TCA a směs byla inkubována při 100 °C po dobu 15 minut a poté centrifugována při 4000 otáčkách za minutu a 25 °C po dobu 10 minut. Následně byla měřena absorbance supernatantu při 532 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Manitol (2500 ug/ml) byl použit jako srovnávací kontrola [64].

4.4.6. Chelatační test železných iontů (Fe2 plus).

Chelatace železnatých iontů extraktem CF byla provedena podle postupu popsaného dříve [65]. CF extrakt (100–1000 µg/ml) byl smíchán s roztokem FeCl2 a reakce byla zahájena přidáním ferozinu. Poté, co směs dosáhla rovnováhy, byla Fe2 plus -chelatační aktivita extraktu CF monitorována měřením absorbance komplexu Fe2 plus -ferrozin při 562 nm pomocí multimódové čtečky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). EDTA (100 uM) byla použita jako srovnávací kontrola.

4.5. Buněčná kultura

Buňky Hs68 byly zakoupeny od Bioresource Collection and Research Center (BCRC, Hsinchu, Taiwan). Buňky byly udržovány v 10-cm miskách pro buněčné kultury a pěstovány v DMEM doplněném 10 procenty FBS, 100 U/ml penicilinu a 100 ug/ml streptomycinu při 37 °C v inkubátoru obsahujícím 5 procent CO2. V blízkosti konfluence (80–90 procent) byly buňky disagregovány v trypsinu-EDTA a subkultivovány [55].

4.6. Vystavení UV záření a ošetření stárnutím

Výběr dávky expozice UV záření pro buňky Hs68 odkazoval na předchozí studie [55,56]. Před ošetřením byly buňky dvakrát opláchnuty PBS a ozářeny různými dávkami UVB (mJ/cm2). Energetické spektrum UVB (280–320 nm) dodal UV Crosslinker CL-1000M (UVP, Upland, CA, USA) s emisním vrcholem při 302 nm a dobou expozice 15–30 s. Dávky UVB záření v testu viability buněk byly 20–100 mJ/cm2 pro vyhodnocení vhodné expoziční dávky UVB pro indukci cytotoxicity. Buňky Hs68 byly ozařovány vysokou dávkou UVB (80 mJ/cm2) po dobu 2 hodin, aby se prozkoumala schopnost rychlého vychytávání radikálů extraktu CF proti krátkodobě nadprodukované intracelulární ROS. Jiné experimenty využívají UVB záření (40 mJ/cm2) v buňkách Hs68 po dobu 24 hodin k napodobení buněk za podmínek dlouhodobého oxidačního stresu. CML byl dodáván jako krystalická pevná látka a vodné roztoky CML byly připraveny rozpuštěním sloučeniny v PBS pufru. Buňky byly ošetřeny 100 ug/ml CML.

4.7. Test buněčné životaschopnosti

Buňky Hs68 byly nasazeny do 24-jamkových destiček (4 × 104 buněk/jamka), nechaly se přes noc uchytit a ošetřily se 1 ml extraktu CF o různých koncentracích (50–250 µg/ml) rozpuštěným v DMEM po dobu 24 h. Na destičky byl přidán roztok MTT a následovala inkubace při 37 °C po dobu 4 hodin. Poté byl přidán 2-propanol, aby se rozpustily krystaly MTT formazanu, a absorbance byla měřena při 570 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakousko) [56].

4.8. Měření intracelulárního ROS

Test je založen na použití zavedeného nefluorescenčního (H2DCFDA)/fluorescenčního (DCF) systému, který měří aktivitu ROS v buňce. Buňky Hs68 byly nasazeny do 24-jamkových destiček (4 x 104 buněk/jamka) a nechaly se přes noc přichytit. Buňky byly inkubovány v bezsérovém médiu v přítomnosti různých koncentrací CF extraktu (100–250 µg/ml) po působení UVB záření nebo CML. Buňky byly promyty PBS a do každé jamky bylo na 30 minut přidáno činidlo pro detekci ROS DCFDA. Snímky byly zachyceny pomocí fluorescenčního mikroskopu (Leica DM IL LED, Leica Microsystems, Wetzlar, Německo) a fluorescence (excitace/emise: 488 nm/520 nm) byla měřena pomocí čtečky mikrodestiček (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA) [55].

4.9. Exprese proteinu analýzou Western Blot

Po uvedených ošetřeních byly buňky Hs68 (5 x 105 buněk/misku) shromážděny a homogenizovány s proteinovým extrakčním pufrem na ledu. Buněčné lyzáty byly vortexovány po dobu 30 minut při 4 °C a centrifugovány, aby se získal supernatant jako intracelulární protein. Připravené vzorky obsahující stejná množství celkového proteinu byly separovány elektroforézou na SDS-polyakrylamidových gelech a přeneseny na polyvinylidendifluoridové blotovací membrány. Nespecifická vazba byla blokována odtučněným mlékem v TBST pufru. Membrána byla inkubována s primárními protilátkami proti, c-Jun, c-Fos, MMP-1, MMP-3, TGF-, Smad3 a pro-COL1A1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), MMP-9, TIMP-1 a HO-1 (GeneTex, Inc., Irvine, CA, USA). Nrf2, Keap1, RAGE, pc-Jun, p-p38, p-ERK a - aktin (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA) při 4 ◦C přes noc. Následně byly membrány několikrát promyty TBST pufrem a jako sekundární protilátka byla použita odpovídající anti-imunoglobulinová G-křenová peroxidáza. Bloty byly inkubovány s chemiluminiscenčním detekčním činidlem. Imunoreaktivní pásy byly detekovány detekčním systémem ECL western blotting (LAS-4000, Fujifilm, Tokio, Japonsko) a intenzita signálu byla kvantifikována pomocí softwaru ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA) [56] .

4.10. Imunofluorescenční barvení

Buňky byly naočkovány na sklíčka v 6-jamkové destičce (Hs68 buňky: 1 x 105 buněk/jamka) a ponechány přes noc se uchytit. Buňky byly ozářeny UVB (40 mJ/cm2) a ošetřeny 1 ml CF extraktu rozpuštěného v DMEM. Buňky byly promyty PBS, fixovány paraformaldehydem po dobu 30 minut a blokovány pomocí odtučněného mléka s pufrem Triton X-100/PBS (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) po dobu 60 minut. Vzorky byly inkubovány s primární králičí anti-Nrf2 protilátkou přes noc při 4 °C. Sklíčka byla promyta PBS a poté inkubována s anti-králičí sekundární protilátkou po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Sklíčka byla upevněna pomocí ProLong® Gold Antifade Mountant s DAPI (Invitrogen, Waltham, MA, USA). Všechny vzorky byly analyzovány pomocí zobrazovacího systému konfokálního spektrálního mikroskopu (Leica Microsystems, Wetzlar, Německo) [51].

4.11. Stanovení celkového obsahu kolagenu

Celkový obsah kolagenu byl kvantifikován pomocí soupravy Sirius Red Collagen Detection kit (Chondrex Inc., Redmond, WA, USA). Buněčné kultivační médium bylo shromážděno a smícháno s koncentračním činidlem. Směs byla vortexována a inkubována při 4 °C po dobu 24 hodin. Po inkubaci byla směs centrifugována při 10,000 otáčkách za minutu a supernatant byl odstraněn. Poté byla do mikrozkumavky přidána kyselina octová, aby se peleta rozpustila, a získaný roztok byl použit jako testovací vzorek. Do každé zkumavky byl přidán roztok Sirius Red pro barvení kolagenem, promíchán na vortexu, inkubován po dobu 20 minut při teplotě místnosti a odstředěn. Supernatant byl odstraněn opatrným pipetováním bez narušení pelety. Promývací roztok byl přidán do každé zkumavky a výše uvedené kroky byly jednou opakovány. Nakonec byl přidán extrakční pufr a absorbance byla měřena při 540 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakousko).

4.12. Statistická analýza

Data jsou prezentována jako průměr ± standardní odchylka v alespoň třech nezávislých experimentech. Všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Významné rozdíly mezi skupinami v experimentech byly analyzovány pomocí jednocestné ANOVA, po které následoval Tukeyho post-hoc test. Rozdíly s p < 0,05 byly považovány za statisticky významné.

5. Závěry

Tato studie odhaluje molekulární mechanismy odpovědné za ochranný účinek CF proti intracelulární tvorbě ROS indukované UV a AGE a degradaci kolagenu v kožních fibroblastech. V důsledku toho naše studie poskytuje současné porozumění a informace o úloze extraktu CF v buněčném obranném systému proti oxidativnímu stresu prostřednictvím aktivace signální dráhy Nrf2/HO-1. Kromě toho CF nejen moduluje MAPK/AP-1/MMP a signální dráhy TGF, aby se zabránilo ztrátě kolagenu vyvolané oxidačním stresem, ale také zeslabuje upregulaci receptorů pro AGE. CF extrakt lze rozvinout do zdravých potravin nebo aplikovat na produkty péče o pleť a kosmetiku jako antioxidant, anti-fotoaging a antiglykační činidlo pro oddálení stárnutí v budoucnosti. Regulační mechanismy extraktu CF v buňkách Hs68 jsou znázorněny na obrázku 13.

Doplňkové materiály:Následující podpůrné informace lze stáhnout z webové stránky, Obrázek S1: Iontový chromatogram MRM a hmotnostní spektrum na ESI pozitivním módu 20-hydroxyekdysonu a standardu rutinu. Obrázek S2: Celkový iontový chromatogram (TIC) a extrahovaný iontový chromatogram (EIC) 20-hydroxyecdysonu (m/z 481) a rutinu (m/z 611) v CF extraktu za monitorování MRM.

Příspěvky autora:Konceptualizace, J.-LL, K.-CW, C.-YC, Y.-HL a H.-MC; Metodologie, J.-LL, C.-YC a H.-MC; Investigation, J.-LL a Y.-JL; Zdroje, Y.-HL; Data curation, J.-LL a Y.-JL; Psaní – původní návrh, J.-LL a H.-MC; Psaní—recenze a úpravy, J.-LL, Y.- JL; K.-CW, C.-YC a H.-MC; Vizualizace, J.-LL; Dohled, K.-CW; Administrace projektu, H.-MC Všichni autoři si přečetli a souhlasí s publikovanou verzí rukopisu.

Financování: Tento výzkum byl financován Čínskou lékařskou univerzitou (CMU106-ASIA-20, CHM106-5- 2 a CMU108-MF-38).

Prohlášení institucionální revizní komise:Nelze použít.

Prohlášení o informovaném souhlasu:Nelze použít.

Prohlášení o dostupnosti dat:Nelze použít.

Poděkování: Extrakt Chenopodium formosanum dodal TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). Experimenty a analýza dat byly provedeny částečně s využitím Medical Research Core Facilities, Office of Research and Development na China Medical University (Taichung, Taiwan). Hmotnostní spektrometrická analýza byla provedena v Proteomics Research Core Laboratory, Office of Research and Development na China Medical University (Taichung, Taiwan).

Střet zájmů:Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

Reference

1. Zouboulis, CC; Makrantonaki, E. Klinické aspekty a molekulární diagnostika stárnutí kůže. Clin. Dermatol. 2011, 29, 3–14. [CrossRef] [PubMed]

2. Helfrich, YR; Sachs, DL; Voorhees, JJ Přehled stárnutí kůže a photoaging. Dermatol. Zdravotní sestry. 2008, 20, 177–183. [PubMed]

3. Gkogkolou, P.; Böhm, M. Konečné produkty pokročilé glykace: Klíčoví hráči ve stárnutí pleti? Dermatoendokrinologie 2012, 4, 259–270. [CrossRef] [PubMed]

4. Tu, Y.; Quan, T. Oxidační stres a stárnutí pojivové tkáně lidské kůže. Kosmetika 2016, 3, 28. [CrossRef]

5. Shin, J.-W.; Kwon, S.-H.; Choi, J.-Y.; Na, J.-I.; Huh, C.-H.; Choi, H.-R.; Park, K.-C. Molekulární mechanismy stárnutí pokožky a přístupy proti stárnutí. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2126. [CrossRef]

6. Dupont, E.; Gomez, J.; Bilodeau, D. Beyond UV záření: A skin under challenge. Int. J. Cosmet. Sci. 2013, 35, 224–232. [CrossRef]

7. D'Orazio, J.; Jarrett, S.; Amaro-Ortiz, A.; Scott, T. UV záření a kůže. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 12222–12248. [CrossRef]

8. G ˛egotek, A.; Skrzydlewska, E. Úloha transkripčního faktoru Nrf2 v metabolismu kožních buněk. Oblouk. Dermatol. Res. 2015, 307, 385–396. [CrossRef]

9. Silva-Palacios, A.; Ostolga-Chavarría, M.; Zazueta, C.; Königsberg, M. Nrf2: Molekulární a epigenetická regulace během stárnutí. Ageing Res. Rev. 2018, 47, 31–40. [CrossRef]

10. Fisher, GJ; Kang, S.; Varani, J.; Baťa-Csorgo, Z.; Wan, Y.; Datta, S.; Voorhees, JJ Mechanismy fotostárnutí a chronologického stárnutí pleti. Oblouk. Dermatol. 2002, 138, 1462–1470. [CrossRef]

11. Pittayapruek, P.; Meephansan, J.; Prapapan, O.; Komine, M.; Ohtsuki, M. Role matricových metaloproteináz ve fotostárnutí a fotokarcinogenezi. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 868. [CrossRef] [PubMed]

12. Wautier, M.-P.; Chappey, O.; Corda, S.; Stern, DM; Schmidt, AM; Wautier, J.-L. Aktivace NADPH oxidázy pomocí AGE spojuje oxidační stres se změněnou genovou expresí prostřednictvím RAGE. Dopoledne. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2001, 280, E685–E694. [CrossRef] [PubMed]

13. Oliveira, MIA; Souza, EMd; Pedrosa, FdO; Réa, RR; Alves, AdSC; Picheth, G.; Rego, FGdM RAGE receptor a jeho solubilní izoformy u komplikací diabetes mellitus. J. Bras. Patol. Med. Laboratoř. 2013, 49, 97–108. [CrossRef]

14. Reddy, S.; Bichler, J.; Wells-Knecht, KJ; Thorpe, SR; Baynes, JW N epsilon-(karboxymethyl)lysin je dominantním antigenem konečného produktu pokročilé glykace (AGE) v tkáňových proteinech. Biochemistry 1995, 34, 10872–10878. [CrossRef]

15. Ikeda, K.; Higashi, T.; Sano, H.; Jinnouchi, Y.; Yoshida, M.; Araki, T.; Ueda, S.; Horiuchi, S. N (epsilon)-(karboxymethyl)lysinový proteinový adukt je hlavním imunologickým epitopem v proteinech modifikovaných pokročilými glykačními koncovými produkty Maillardovy reakce. Biochemistry 1996, 35, 8075–8083. [CrossRef]

16. Crisan, M.; Taulescu, M.; Crisan, D.; Cosgarea, R.; Parvu, A.; Cãtoi, C.; Drugan, T. Exprese konečných produktů pokročilé glykace na slunci vystavených a neexponovaných kožních místech během procesu stárnutí u lidí. PLoS ONE 2013, 8, e75003. [CrossRef]

17. Jeanmaire, C.; Danoux, L.; Pauly, G. Glykace během lidského dermálního vnitřního a aktinického stárnutí: In vivo a in vitro modelová studie. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 10–18. [CrossRef]

18. Tsai, P.-J.; Chen, Y.-S.; Sheu, C.-H.; Chen, C.-Y. Vliv nanobroušení na pigment a bioaktivitu Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.). J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 1814–1820. [CrossRef]

19. Hong, Y.-H.; Huang, Y.-L.; Liu, Y.-C.; Tsai, P.-J. Vodní extrakt Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.) a jeho bioaktivní složky zlepšují dermální poškození u modelů kůže ozářených UVB. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 7368797. [CrossRef]

20. Hsu, B.; Lin, S.; Inbaraj, BS; Chen, B. Simultánní stanovení fenolových kyselin a flavonoidů v Chenopodium formosanum Koidz. (julio) pomocí HPLC-DAD-ESI-MS/MS. J. Pharm. Biomed. Anální. 2017, 132, 109–116. [CrossRef]

21. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Inhibiční účinky Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktivních sloučenin na adipogenezi v 3T3-L1 adipocytech. Molekuly 2018, 23, 1780. [CrossRef] [PubMed]

22. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Chyau, C.-C.; Yang, J.-W.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktivní sloučeniny ovlivňují vazodilataci, aktivitu enzymu konvertujícího angiotenzin a hypertenzi. Food Biosci. 2019, 32, 100469. [CrossRef]

23. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Wu, Y.-C.; Chu, H.-L.; Duh, P.-D. Protirakovinná aktivita a zprostředkování apoptózy v buňkách karcinomu hepatomu indukované juliem a jeho bioaktivními sloučeninami. J. Funct. Potraviny 2020, 75, 104225. [CrossRef]

24. Tu, D.-G.; Chyau, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chu, H.-L.; Wang, S.-C.; Duh, P.-D. Antiproliferativní účinek a zprostředkování apoptózy v buňkách HepG2 lidského hepatomu indukovaných slupkami Djulis a jejich bioaktivními sloučeninami. Jídlo 2020, 9, 1514. [CrossRef]

25. Hsu, B.-Y.; Pan, S.-Y.; Wu, L.-Y.; Ho, C.-T.; Hwang, LS Hypoglykemická aktivita Chenopodium formosanum Koidz. komponenty pomocí testu vychytávání glukózy s 3T3-L1 adipocyty. Food Biosci. 2018, 24, 9–16. [CrossRef]

26. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Lin, Y.-C.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktivní sloučeniny pro léčbu hyperlipidémie a hyperglykémie u myší krmených dietou s vysokým obsahem tuku. J. Food Nutr. Res. 2019, 7, 452–457. [CrossRef]

27. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Fu, Z.-H.; Liu, C.-C.; Duh, P.-D. Ochranný účinek Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktivních sloučenin proti poškození jater vyvolanému tetrachlormethanem, in vivo. J. Funct. Potraviny 2016, 26, 585–597. [CrossRef]

28. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosaneum) a jeho bioaktivní sloučeniny chrání před oxidačním stresem v lidských buňkách HepG2. J. Funct. Potraviny 2015, 18, 159–170. [CrossRef]

29. Lin, T.-A.; Ke, B.-J.; Cheng, C.-S.; Wang, J.-J.; Wei, B.-L.; Lee, C.-L. Výtažky z červených otrub quinoa chrání před poškozením jater a fibrózou vyvolaným tetrachlormethanem u myší aktivací antioxidačních enzymových systémů a blokováním dráhy TGF- 1. Živiny 2019, 11, 395. [CrossRef]

30. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Xie, G.-R.; Shih, C.-K. Djulis (Chenopodium Formosanum) zabraňuje karcinogenezi tlustého střeva prostřednictvím regulace antioxidačních a apoptotických drah u potkanů. Živiny 2019, 11, 2168. [CrossRef]

31. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Chien, Y.-H.; Hsia, S.-M.; Chen, J.-H.; Shih, C.-K. Synbiotická kombinace Djulis (Chenopodium formosanum) a Lactobacillus acidophilus inhibuje karcinogenezi tlustého střeva u potkanů. Živiny 2020, 12, 103. [CrossRef] [PubMed]

32. Lin, Y.-K.; Chung, Y.-M.; Lin, Y.-H.; Lin, Y.-H.; Hu, W.-C.; Chiang, C.-F. Zdravotní funkční vlastnosti neloupaného červeného julia (Chenopodium formosanum) v boji proti stárnutí. Int. J. Food Prop. 2021, 24, 833–844. [CrossRef]

33. Naylor, EC; Watson, RE; Sherratt, MJ Molekulární aspekty stárnutí kůže. Maturita 2011, 69, 249–256. [CrossRef] [PubMed]

34. Fournet, M.; Bonté, F.; Desmoulière, A. Glykační poškození: Možný náboj pro velké patofyziologické poruchy a stárnutí. Aging Dis. 2018, 9, 880. [CrossRef] [PubMed]

35. Tsai, P.-J.; Sheu, C.-H.; Wu, P.-H.; Sun, Y.-F. Tepelná a pH stabilita betacyaninového pigmentu Djulis (Chenopodium formosanum) na Tchaj-wanu a jejich vztah k antioxidační aktivitě. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 1020–1025. [CrossRef]

36. McClain, GE; Watson, RR Role polyfenolů ve zdraví pokožky. In Bioaktivní dietní faktory a rostlinné extrakty v dermatologii; Springer: Berlín/Heidelberg, Německo, 2013; s. 169–175.

37. Nichols, JA; Katiyar, SK Fotoprotekce kůže přírodními polyfenoly: Protizánětlivé, antioxidační mechanismy a mechanismy opravy DNA. Oblouk. Dermatol. Res. 2010, 302, 71–83. [CrossRef]

38. Afaq, F.; Katiyar, SK Polyfenoly: Fotoprotekce kůže a inhibice fotokarcinogeneze. Mini Rev. Med. Chem. 2011, 11, 1200–1215.

39. Choi, SJ; Lee, S.-N.; Kim, K.; Joo, DH; Shin, S.; Lee, J.; Lee, HK; Kim, J.; Kwon, SB; Kim, MJ Biologické účinky rutinu na stárnutí pleti. Int. J. Mol. Sci. 2016, 38, 357–363. [CrossRef]

40. Cervantes-Laurean, D.; Schramm, DD; Jacobson, EL; Halaweish, I.; Bruckner, GG; Boissonneault, GA Inhibice tvorby konečného produktu pokročilé glykace na kolagenu rutinem a jeho metabolity. J. Nutr. Biochem. 2006, 17, 531–540. [CrossRef]

41. Ho, R.; Teai, T.; Meybeck, A.; Raharivelomanana, P. UV-ochranné účinky fytoekdysteroidů z extraktů Microsorum grossum na lidské dermální fibroblasty. Nat. Prod. Commun. 2015, 10, 1934578X1501000110. [CrossRef]

42. Graf, BL; Cheng, DM; Esposito, D.; Shertel, T.; Poulev, A.; Plundrich, N.; Itenberg, D.; Dayan, N.; Lila, M.; Raskin, I. Sloučeniny vyluhované ze semen quinoa inhibují aktivitu matricové metaloproteinázy a intracelulární reaktivní formy kyslíku. Int. J. Cosmet. Sci. 2015, 37, 212–221. [CrossRef] [PubMed]

43. Nsimba, RY; Kikuzaki, H.; Konishi, Y. Ekdysteroidy působí jako inhibitory kolagenázy telecí kůže a oxidačního stresu. J. Biochem. Mol. Toxicol. 2008, 22, 240–250. [CrossRef]

44. Schmidt, B.; Říbnický, DM; Poulev, A.; Logendra, S.; Cefalu, WT; Raskin, I. Přirozená historie botanické terapie. Metabolismus 2008, 57, S3–S9. [CrossRef] [PubMed]

45. Poljšak, B.; Dahmane, R. Volné radikály a vnější stárnutí pleti. Dermatol. Res. Praxe. 2012, 2012, 135206. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​De Jager, T.; Cockrell, A.; Du Plessis, S. Ultrafialovým světlem indukovaná generace reaktivních forem kyslíku. Adv. Exp. Med. Biol. 2017, 996, 15–23.

47. Rittié, L.; Fisher, GJ UV zářením indukované signální kaskády a stárnutí pleti. Ageing Res. Rev. 2002, 1, 705–720. [CrossRef]

48. Leopoldini, M.; Russo, N.; Toscano, M. Molekulární základ pracovního mechanismu přírodních polyfenolických antioxidantů. Food Chem. 2011, 125, 288–306. [CrossRef]

49. Sandoval-Acuña, C.; Ferreira, J.; Speisky, H. Polyfenoly a mitochondrie: Aktualizace o jejich stále více se objevujících nezávislých akcích odstraňování ROS. Oblouk. Biochem. Biophys. 2014, 559, 75–90. [CrossRef]

50. Wu, P.-Y.; Liu, J.-L.; Liu, Y.-J.; Chien, T.-Y.; Hsu, H.-C.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Fisetin reguluje expresi Nrf2 a signální dráhu související se zánětem, aby se zabránilo poškození kůže vyvolanému UVB u bezsrstých myší. Int. J. Mol. Sci. 2017, 18, 2118. [CrossRef]

51. Kuo, Y.-H.; Chiang, H.-L.; Wu, P.-Y.; Chu, Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochrana proti apoptóze kůže a karcinogenezi vyvolané ultrafialovým zářením A díky účinkům N-(4-bromfenethyl)kafeamidu, derivátu propolisu, ke snížení oxidačního stresu. Antioxidanty 2020, 9, 335. [CrossRef]

52. Quan, T.; Qin, Z.; Xia, W.; Shao, Y.; Voorhees, JJ; Fisher, GJ Matrix-degradující metaloproteinázy ve fotostárnutí. J. Investig. Dermatol. Symp. Proč. 2009, 14, 20–24. [CrossRef] [PubMed]

53. Brenneisen, P.; Sies, H.; Scharffetter-Kochánek, K. Ozáření ultrafialovým zářením B a matrixové metaloproteinázy: Od indukce přes signalizaci k počátečním událostem. Ann. NY Acad. Sci. 2002, 973, 31–43. [CrossRef] [PubMed]

54. Kanaki, T.; Makrantonaki, E.; Zouboulis, CC Biomarkery stárnutí kůže. Rev. Endocr. Metab. Porucha. 2016, 17, 433–442. [CrossRef] [PubMed]

55. Wu, P.-Y.; Lin, T.-Y.; Hou, C.-W.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. 1,2-bis[(3-methoxyfenyl)methyl]ethan-1,2- dikarboxylová kyselina snižuje fotopoškození způsobené UVB zářením in vitro a in vivo. Antioxidanty 2019, 8, 452. [CrossRef] [PubMed]

56. Lin, T.-Y.; Wu, P.-Y.; Hou, C.-W.; Chien, T.-Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochranné účinky sesaminu proti zánětu kůže vyvolanému UVB a fotopoškození in vitro a in vivo. Biomolecules 2019, 9, 479. [CrossRef] [PubMed]

57. Kim, YI; Kim, KS; Ahn, HJ; Kang, IH; Shin, MK Snížená matrix metaloproteináza a transkripce kolagenu zprostředkovaná TGF-/Smad dráhou v pasážovaných normálních lidských dermálních fibroblastech. J. Cosmet. Dermatol. 2020, 19, 1211–1218. [CrossRef]

58. Kislinger, T.; Fu, C.; Huber, B.; Qu, W.; Taguchi, A.; Du Yan, S.; Hofmann, M.; Yan, SF; Pischetsrieder, M.; Stern, D. N(epsilon)-(karboxymethyl)lysinové adukty proteinů jsou ligandy pro receptor pro koncové produkty pokročilé glykace, které aktivují buněčné signální dráhy a modulují genovou expresi. J. Biol. Chem. 1999, 274, 31740–31749. [CrossRef]

59. Han, AR; Nam, MH; Lee, KW Plantamajoside inhibuje expresi MMP-1 indukovanou ultrafialovým zářením UVB a pokročilou glykací koncovými produkty tím, že potlačuje dráhy MAPK a NF-κB v buňkách HaCaT. Photochem. Photobiol. 2016, 92, 708–719. [CrossRef]

60. Lohwasser, C.; Neureiter, D.; Weigle, B.; Kirchner, T.; Schuppan, D. Receptor pro koncové produkty pokročilé glykace je vysoce exprimován v kůži a upregulován koncovými produkty pokročilé glykace a tumor nekrotizujícím faktorem alfa. J. Investig. Dermatol. 2006, 126, 291–299. [CrossRef]

61. Mizutari, K.; Ono, T.; Ikeda, K.; Kayashima, K.; Horiuchi, S. Foto-enhanced modifikace elastinu lidské kůže v aktinické elastóze N(epsilon)-(karboxymethyl)lysinem, jedním z produktů glykooxidace Maillardovy reakce. J. Invest. Dermatol. 1997, 108, 797-802. [CrossRef]

62. Owen, WF, Jr.; Hou, F.; Stuart, RO; Kay, J.; Boyce, J.; Chertow, GM; Schmidt, AM Beta 2-mikroglobulin modifikovaný koncovými produkty pokročilé glykace moduluje syntézu kolagenu lidskými fibroblasty. Kidney Int. 1998, 53, 1365–1373. [CrossRef] [PubMed]

63. Serban, AI; Stanča, L.; Geicu, OI; Munteanu, MC; Dinischiotu, A. RAGE a TGF- 1 cross-talk regulují přeměnu extracelulární matrix a syntézu cytokinů ve fibroblastech exponovaných AGEs. PLoS ONE 2016, 11, e0152376.

64. Liu, Y.-J.; Lyu, J.-L.; Kuo, Y.-H.; Chiu, C.-Y.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Antimelanogenetický účinek 3, 4-dihydroxybenzalacetonu prostřednictvím downregulace zrání a transportu melanosomu v B16F10 a lidských epidermálních melanocytech. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 2823. [CrossRef] [PubMed]

65. Huang, Y.-H.; Wu, P.-Y.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochranné účinky a mechanismy methanolického extraktu Terminalia catappa L. na oxidační stres vyvolaný peroxidem vodíku ve fibroblastech lidské kůže. Alternativa doplňku BMC. Med. 2018, 18, 266. [CrossRef]

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】