Transport echinakosidu a akteosidu citlivý na floridzin a změněná cesta střevní absorpce po aplikaci extraktu z Cistanche Tubulosa

Další informace:{0}}

Tadatoshi Tanino a kol

Abstraktní Cíle

Cílem této studie bylo zabývat se příznivými účinkyExtrakt z Cistanche tubulosana zlepšení nízké střevní permeability echinakosidu (ECH) a akteosidu (ACT).

Metody

Absorpce ECH a ACT vExtrakt z Cistanche tubulosabyla charakterizována pomocí monovrstev lidských střevních Caco{0}} buněk s intaktními sloučeninami. Absorpce ECH a ACT závislá na glukózovém transportéru byla potvrzena in-situintestinální perfuzní technikou.

Klíčové poznatky

Zdánlivá permeabilita (Papp) se významně nelišila mezi intaktní ECH a intaktní ACT. V přítomnosti floridzinu byl Papp ECH a ACT ve vysoké dávce snížen na 20 procent příslušného neléčeného stavu, ale nebyl ovlivněn phloretinem a verapamilem.Extrakt z Cistanche tubulosapři nízkých a vysokých dávkách zvýšily Papp ECH a ACT (obojí trojnásobně), což mělo za následek jejich velkou účast na na sodíku závislé absorpci glukózy nezávislé na transportéru. Při nízké koncentraci byly souběžné hladiny ECH a ACT v portální krvi významně potlačeny floridzinem.

Závěr

Dietní a léčivéExtrakt z Cistanche tubulosazvýšení intestinální absorpce ECH a ACT může sloužit k lepšímu řízení lidského zdraví, ačkoli zapojení transportu citlivého na floridzin by mělo být sníženo.

Klíčová slovaakteosid; monovrstvy buněk Caco{0}};Extrakt z cistanchetubulosy; echinakosidtransportér glukózy citlivý na floridzin

Extrakt z Cistanche tubulosa

Klikněte na prášek Cistanche tubulosa

Úvod

Kořeny Cistanche tubulosa se tradičně používají v lékařství a potravinářství.Extrakt z Cistanche tubulosaje známo, že má farmakologické účinky při různých onemocněních mozku, funkcích proti stárnutí, metabolismu tuků a růstu vlasů.[1–4]V poslední době byly z izolovány iridoidy, monoterpenoidy, fenylethanoidglykosidy a lignany.Cistanche tubulosa[5,6] Fenylethanoidové glykosidy, třída polyfenolických sloučenin, jsou hlavními chemickými složkami u druhů Cistanche,[7] ačkoli jejich množství se u různých druhů liší. Echinakosid (ECH; obrázek 1) je jedním z hlavních fenylethanoidových glykosidů v HerbaCistanchis. Je hydrolyzován na akteosid (ACT; také nazývaný verbaskosid) enzymy bakteriálního původu v tlustém střevě.[8,9] ECH a ACT mají u rodentanů příznivou aktivitu hepatoprotekce[10] a protizánětlivé[11]. Překvapivě vysoce ve vodě rozpustná ECH zlepšuje behaviorální a neurochemické výsledky u myšího modelu Parkinsonovy choroby a inhibuje aktivaci kaspázy-3 a kaspázy{11}} v neuronech cerebelárních granulí.[9] Je dobře známo, že hematoencefalická bariéra přísně omezuje vstup a distribuci xenobiotik do mozku z krve. Wu a kol.[12] také ukázal, že ve vodě rozpustný ACT byl rychle distribuován v mozkových tkáních krys. Proto může být ECHand ACT transportován do mozku, střev a jater specifickým systémem (systémy).

Ačkoli existují silné důkazy, které naznačují, že spotřebaExtrakt z Cistanche tubulosaje prospěšná pro lidské zdraví, propustnost čisté ECH přes Caco{{0}} buněčné monovrstvy při apikální koncentraci 8,4 ± 1,6 ug/ml je stejná nebo nižší než u paracelulárního transportního markeru manitolu.[13] Když je čistá ECH podávána perorálně potkanům (dávka, 1{{10}}}0 mg/kg), absorpce je extrémně rychlá (Tmax, 15 min) a maximální koncentrace v séru je velmi nízká (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] Absolutní biologická dostupnost ECH je pouze 0,83 procenta. Podobně, když jsou buňky Caco{15}} inkubovány s fenolickou frakcí částečně purifikovanou z odpadní vody z olivového mlýna, čistý příjem ACT je rychlý s vrcholem akumulace po 30 minutách a celkovou účinností akumulace 0,1 procenta, což poskytuje intracelulární hladiny 130 pmol/mg buněčného proteinu.[15] U potkanů ​​bylo maximální koncentrace (0,13 ± 0,03 ug/ml) čistého ACT dosaženo do 30 minut po perorálním podání 100 mg/kg[12], což znamená rychlou střevní absorpci. Perorální biologická dostupnost ACT, stejně jako ECH, je poměrně nízká (0,12 ± 0,04 procenta), což naznačuje možnost účinků prvního průchodu ve střevním traktu a játrech. V potkaní žluči jsou hlavními metabolity methylační a glukuronidační konjugáty ECH,[16] ačkoli rozsah jaterního metabolismu zůstává nejasný. Předběžně jsme zjistili, že ECH a ACT byly docela stabilní v homogenátech střevní sliznice potkana a umělé žaludeční kyselině (data nejsou uvedena). Najar a kol.[17] prokázali, že ACT inhibuje aktivitu P-glykoproteinu (P-gp)-ATPázy podobným způsobem jako verapamil (reprezentativní inhibitor P-gp), což znamená modulátor P-gp; není však jisté, zda je ACT dostupný jako substrát P-gp. Je zajímavé, že nedávné objevy dietních flavonoidů-D-glukosidů ukázaly, že protein mnohočetné lékové rezistence (MRP2) maskuje na sodíku závislý transportér glukózy (SGLT)1-zprostředkovaný příjem kvercetinu 4'-O- -glukózy[18] ,19], který je zodpovědný za velmi špatnou absorpci. O citlivosti polyfenolických glukosidů na absorpční transportéry, včetně transportérů glukózy, je však známo jen velmi málo. Informace o absorpčních charakteristikách kvercetin4′-glukosidu a rychle propustné hematoencefalickou bariérou ECH nás přiměly prozkoumat vychytávání fenylethanoidových glykosidů v potravě C citlivé na transportéry. tubulosa.

V této studii jsme zkoumali absorpci intaktní ECH a ACT zprostředkovanou glukózovým transportérem pomocí monovrstev lidských buněk Caco{1}}. Současně probíhá absorpční transport ECH a ACT indietněExtrakt z Cistanche tubulosabyl charakterizován in-vitromodelem a in-situ střevním perfuzním systémem se vzorkováním portální krve, který může snadno rozlišit mezi rozsahem absorpce a vyhnutím se jaterní dispozici prvního průchodu.

Materiály a metody

Materiály

Intact ECH a ACT byly štědré dary od společnosti EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japonsko). Phloridzin a phloretin byly zakoupeny od Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokio, Japonsko). Verapamil a kyselina p-kumarová, používané jako vnitřní standardy pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC), byly získány od Sigma-Aldrich (St Louis, MO ,USA). Všechny ostatní použité chemikálie byly analytické čistoty a komerčně dostupné.

Rostlinný materiál a příprava jeho ethanolického extraktu

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) je víceletá parazitická rostlina rostoucí na kořenech druhu Salvadoraor Calotropis a rozšířená v severoafrických, arabských a asijských zemích. Sušené stonky C. tubulosa byly rozdrceny na prášek a extrahovány třikrát methanolem pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Odpařením rozpouštědla za sníženého tlaku se získá methanolický extrakt. Metanolický extrakt (komerční jakost, šarže č. 20070130; registrační obchodní název, Sabaku Ninnjinn Kanka) byl velkorysým darem od Eishin Trading Co., Ltd prostřednictvím Muraoka a Morikawa (Kinki University, Japonsko) a botanickou identifikaci provedl profesor Jia Xiaoguang v roce Institut tradiční čínské a etnologické medicíny Xinjiang.

Analýza rostlinného extraktu: chromatografie

Stanovili jsme obsahy ECH a ACT vExtrakt z Cistanche tubulosa(Šarže č. 20070130) analýzou HPLC popsanou níže. Získaná data jsou uvedena v tabulce 1.

Buněčná kultura

Buňky Caco{{0}}, zakoupené od American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA), byly použity v pasážích 38–53. Byly pěstovány v kultivačním médiu sestávajícím z Dulbeccova modifikovaného Eagleova média (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japonsko) doplněného 0,1 mM neesenciálními aminokyselinami, 10 procent tepelně inaktivovaného fetálního hovězího séra, 100 U/ml penicilinu G a 0,1 mg/ml streptomycin sulfátu.

Dopravní studie

Buňky Caco{0}} byly naneseny v hustotě 6,4 × 103 buněk/cm2 na polykarbonátové filtry. Monovrstvy byly použity pro transportní experimenty 21–25 dní po vysetí. Neporušené ECH a ACT, které byly ekvivalentní jejich obsahu vExtrakt z Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinakosid vExtrakt z Cistanche tubulosa

In-situ střevní perfuze

Samci potkanů ​​Wistar (230–250 g) byli získáni od SLCJapan (Hamamatsu, Japonsko). Zvířata byla chována v klimatizované místnosti v 12hodinovém cyklu světlo/tma po dobu 1 týdne před použitím. Krysy byly krmeny standardní laboratorní potravou (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokio, Japonsko) vodou ad libitum a před testem byly přes noc hladověny. Studie cirkulující perfuze v místě byla provedena podle upraveného postupu popsaného Miharou et al. [20] Stručně řečeno, krysy byly anestetizovány 25% uretanovým roztokem (1 mg/kg), aby se zabránilo poklesu krevního tlaku. Byla provedena střední čára abdominální incize a bylo obnaženo tenké střevo. Žlučovod byl podvázán, aby se zabránilo sekreci žluči do perfuzátu. Celé tenké střevo jako jeden segment (od duodena po ileum) bylo proplachováno normálním fyziologickým roztokem při 37 stupních po dobu 10 minut, dokud se výplach neobjevil čirý. Skleněné hadičky spojené se silikonovými hadičkami byly poté kanylovány do obou konců tenkého střeva a zajištěny šicím závitem. Poté bylo tenké střevo nahrazeno v břiše a kanyly byly připojeny k peristaltické pumpě. Portální žíla byla kanylována polyetylenovou hadičkou (PE10).Extrakt z Cistanche tubulosakomerčně dostupný byl suspendován v Krebs-Henseleitově hydrogenuhličitanovém pufru (pH 7,4), čímž byla získána konečná koncentrace 4,5 mg/ml a byl centrifugován po dobu 10 min při 8000 ot./min., aby byly odstraněny nerozpustné složky. Supernatant v nepřítomnosti nebo přítomnosti floridzinu (1 mM) byl znovu shromážděn do rezervoáru, který byl v průběhu experimentu udržován na teplotě 37 ± 0,5 stupně. V uvedených časech byla krev odebrána kanylou portální žíly. Po odstředění krevních vzorků byla výsledná plazma zbavena proteinů acetonitrilem obsahujícím vnitřní standard a byla odstředěna při 3000 otáčkách za minutu. Supernatanty byly odpařeny a zbytek byl rozpuštěn v mobilní fázi sestávající z acetonitrilu a 0,5% kyseliny octové. Smíšený roztok byl nanesen na HPLC kolonu. Krysy byly použity v souladu s etickými postupy podle Směrnice pro péči a použití laboratorních zvířat vydaných japonskou vládou a Kinki University.

HPLC analýza

HPLC analýza byla provedena na systému vybaveném aShimadzu SPD{{0}}A, UV detektorem, čerpadlem Shimadzu LC-10A a integrátorem Shimadzu C-R4A chromatopac (Kyoto, Japonsko). ECH a ACT byly separovány pomocí Inertsil ODScolumn (5 μm, 4,6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japonsko). Byla použita mobilní fáze acetonitrilu a 0,5% kyseliny octové v poměru 15:85 (obj./obj.) při průtoku 1,0 ml/min. Detekce byla provedena při 334 nm

Kinetická analýza

Zdánlivé koeficienty propustnosti (Papp) byly odhadnuty ze sklonu lineární části časového průběhu transportu sloučeniny přes monovrstvy buněk Caco-2 takto: P dQ dt AC app=( ) ( )

kde dQ/dt je míra permeability, C0 je počáteční koncentrace rozpuštěné látky v donorové komoře a A je povrchová plocha membrány (4,7 cm2).

Ve studii in-situ střevní perfuze u potkanů ​​byla plocha pod křivkou plazmatické koncentrace-čas (AUC0-90) v portální žíle od času nula do posledního měření vypočtena podle lineárního lichoběžníkového pravidla.

Akteosid vExtrakt z Cistanche tubulosa

Fyzikálně chemické vlastnosti

Polární povrchová plocha a nepolární povrchová plocha sloučenin byla vypočtena pomocí programu SAS (verze 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, USA). Experimentálně stanovené hodnoty log P a pKa byly získány z literatury.

Statistická analýza

Data byla analyzována jednosměrnou analýzou rozptylu následovanou Tukeyho post-hoc testem. Hodnoty pravděpodobnosti menší než 5 procent byly považovány za významné.

Výsledek

Absorpční transport echinakosidu a akteosidu přes Caco-2 buněčné monovrstvy

U myší a potkanů ​​se intaktní ECH[10,14] a ACT[12,21] podávají perorálně v dávkách 100–1000 mg/kg. TheExtrakt z Cistanche tubulosapoužitý obsahoval přibližně 30 procenta ECH a 15 procent ACT na dávku. Protože extrakt změnil osmotický tlak a pH v inkubačním médiu, byly na základě orálního dávkování stanoveny koncentrace 4,5 a 13,5 mg/ml (neporušené sloučeniny: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g tělesné hmotnosti) u myší. Extrakt v nízkých (4,5 mg/ml) a vysokých dávkách (13,5 mg/ml) obsahoval 2.0 a 6,1 mg pro ECH a 1.0 a 3,{39}} mg pro ACT. Aplikovali jsme množství extraktu C. tubulosa, která byla mnohem nižší než orální dávka ECH a ACT uváděná u lidí (doporučená dietní dávka extraktu: 150 mg obsahující přibližně 45 mg pro ECH a 22,5 mg pro ACT). Při nízkých a vysokých dávkách neporušených sloučenin se absorpční profily (obrázek 2) a Papp významně nelišily mezi ECH a ACT jako ekvivalentem ECH (tabulka 2). Když byl do média nanesen extrakt C. tubulosa ve vysoké dávce 13,5 mg/ml, Pappvalues ​​(1,27 ± 0,13 a 0,34 ± 0,03 × 10-6 cm/s, v tomto pořadí) ECH a ACT konkomitantů byly třikrát vyšší než ty (0,38 ± 0,09 a 0,10 ± 0,03 x 10-6 cm/s, v tomto pořadí) intaktní ECH a ACT (tabulka 2). Extrakt na rozdíl od intaktních sloučenin významně zvýšil absorpční transport ECH a ACT.

Inhibiční účinek floridzinu, phloretinu a verapamilu

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) phloretinu nebylo možné použít z důvodu patrné buněčné toxicity. Kromě toho byl P-gp identifikován jako důležitý hráč odpovědný za interakci mezi rostlinnými léky a klinicky významnými substráty P-gp. Verapamil nezvýšil absorpční transport intaktních sloučenin (obrázek 3).

Absorpční transport ECH a ACT v extraktu (nízká dávka) byl významně inhibován floridzinem (tabulka 2 a obrázek 4). Extrakt ve vysoké dávce potlačil inhibici citlivou na floridzin, ačkoli transport intaktní ECH a ACT byl citlivější na floridzin (tabulka 2).

Studie in-situ střevní perfuze

V in-situ studii jsme testovali, zda ECH a ACT vExtrakt z Cistanche tubulosabyly transportovány SGLT1 umístěným na apikální straně tenkého střeva. Když byl dietní extrakt v nízké dávce (4,5 mg/ml) perfundován, ECH a ACT se rychle objevily v portální krvi (obrázek 5). AUC byla stanovena jako 2702,8 ± 384,1 μm·min pro ECH a 698,3 ± 197,2 μm·min pro ACT. Poté, co byla AUC normalizována s obsahem zExtrakt z Cistanche tubulosaabsorbované množství se významně nelišilo mezi ECH a ACT. Na SGLT1-senzitivní floridzin, na rozdíl od phloretinu, významně potlačil absorpční transport doprovodných ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) a ACT (nezjištěno).

Diskuse

Některé rostlinné složky jsou substráty P-gp vysoce exprimovaného v játrech, střevech, mozku a ledvinách. P-gp je určujícím faktorem pro biologickou dostupnost, dispozice a distribuci rostlinných přípravků in vivo, včetně třezalky tečkované, kurkuminu, echinacey, ženšenu, ginkga a zázvoru.[22,23]Biologická dostupnost genisteinu{{5} }glukosid, flavonoidní derivát, byl také omezen střevním transportérem MRP2.[24] Proto byla tato studie navržena tak, aby prozkoumala absorpční vlastnosti ECH a ACT současně podávaných v dietě a v lékařstvíExtrakt z Cistanche tubulosa.

Polarizované monovrstvy Caco{{0}} buněk, stejně jako střevo[25], exprimují hlavní střevní transportéry léku, jako je P-gp, MRP a protein rezistence na rakovinu prsu.[26]Flavonoidy ve stravě bylo prokázáno, že kvercetin[27] a myricetin[28] inhibují eflux zprostředkovaný P-gp jak v buněčných liniích, tak na zvířecích modelech. Verapamil, inhibitor P-gp, nezměnil permeabilitu ACT a ECH přes monovrstvy Caco-2buněk (obrázek 3), což ukazuje, že intaktní ECH a ACT nebyly omezeny efluxní pumpou P-gp. Naše předchozí studie ukázaly, že proteiny MRP2 nebyly exprimovány v monovrstvách buněk Caco-2.[29] P-gp a MRP2-zprostředkovaný eflux lze vyloučit v transportu ECH a ACT. Některé glykosidy kvercetinu s nízkou lipofilitou byly absorbovány účinněji než samotný kvercetin.[30] Je také důležité poznamenat, že ACT s cukernou skupinou se rychle distribuuje v mozkových tkáních. Naše pozornost byla zaměřena na kombinované působení dvou přenašečů glukózy v enterocytech: SGLT v membráně kartáčového lemu a facilitovaný difúzní transport glukózy (GLUT) v bazolaterální membráně. Buněčnou kulturu Caco{19}} lze použít jako model pro studium přenašečů GLUT2 citlivých na florretin a SGLT1 a 2 citlivých na floridzin.[31–34]Glukóza je transportována z apikální na bazolaterální stranu monovrstev Caco-2 vysokou rychlostí s Pappof 36,8 ± 1,1×10-6 cm/s.[35] Má vyšší Papp než transcelulární transportní marker propranolol (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Jak je uvedeno v tabulce 2, intaktní ECH a ACT měly mnohem nižší Papp než u glukosy a pasivního propranololu. Vypočítali jsme logaritmus rozdělovacího koeficientu (oktanol-voda), log P, byl vypočten na -2,32 a 0,077 pro ECH a ACT, v daném pořadí. Předpokládá se, že polární hydrofilní sloučeniny jsou transportovány paracelulární cestou (přes těsná spojení). Zdá se, že dva fenylethanoidní glykosidy, jako mannitol, jsou transportovány paracelulární cestou. Phloridzin však dramaticky snížil absorpční permeabilitu intaktní ECH a ACT (tabulka 2), což naznačuje, že apikální SGLT1 hraje hlavní roli ve střevní absorpci intaktní ECH a ACT. Při ekvivalentní dávce byla vyšší permeabilita hydrofobního ACT blízká permeabilitě ECH (obrázek 2 a tabulka 2). Yoshikawa et al.[36] prokázali, že facilitativní transportéry (GLUT 1 a 2), stejně jako SGLT1 citlivý na floridzin, jsou intenzivně exprimovány v tenkém střevě. Protože absorbovaná množství sloučenin jsou založena na hmotnostní rovnováze mezi příjmem a eliminací, hodnotili jsme účast GLUT2. Glukóza prochází přes apikální membrány enterocytů pomocí SGLT1 s vysokou afinitou a nízkou kapacitou a vystupuje přes bazolaterální membránu přes GLUT2 s nízkou afinitou a vysokou kapacitou. Ploretin (specifický inhibitor GLUT2) nezrušil transport intaktní ECH a ACT (obrázek 3). Funes a kol.[37] prokázali, že ACT silně interaguje s fosfátovými skupinami fosfolipidových membrán. Vzhledem k tomu, že hydroxylové skupiny jsou ve struktuře ACT hojné, vodíkové vazby mezi těmito skupinami a glycerolovými polárními hlavicemi nebo fosfátovými skupinami fosfolipidů jsou nejpravděpodobnější interakce, ke kterým dochází. Když byly inkubovány intaktní ECH a jeho ekvivalentní ACT s monovrstvami Caco{62}} po dobu 11 hodin, byla buněčná akumulace ACT (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) třikrát větší než akumulace ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Mysleli jsme si, že ECH a ACT citlivé na SGLT se pomalu přesunuly z enterocytů do krevního řečiště, což možná vedlo k pozorované nízké Papp. Ve srovnání s vysoce hydrofilní ECH může být nízká permeabilita ACT způsobena interkalací do buněčných membrán.

Extrakt z Cistanche tubulosa

Polyfenolické sloučeniny se při klinické aplikaci konzumují v bylinných směsích a jsou komerčně dostupné jako doplňky stravy. Ve studii in vitro bylo prokázáno, že absorpce fenolického epikatechinu nebyla ovlivněna složením složek nápojových potravin.[38] Naproti tomu Hypericum perforatumL. produktové matrice ovlivňují transport kvercetingglukosidů (rutinu a isoquercitrinu) a hyperosidů přes buňky Caco-2 v důsledku rozdílů v matrixfytochemickém složení a transportních charakteristikách, tj. paracelulární přenos a transport zprostředkovaný nosičem nebo aktivní transport.[39] V této studii poskytla C. tubulosa trojnásobně vyšší transepiteliální transport než intaktní ECH a ACT (obrázek 2 a tabulka 2). Spekulujeme, že komponenty vExtrakt z Cistanche tubulosaaktivovat transportér citlivý na floridzin a/nebo urychlit eliminaci intracelulárních ECH a ACT.Extrakt z Cistanche tubulosazdálo se, že vysoká dávka značně maskuje sílu transportu citlivého na floridzin (tabulka 2). Sacharidy[40] a proteiny[41] v potravě interagují s některými polyfenoly v gastrointestinálním traktu. Morikawa et al.[10] prokázali, že pět iridoidů, kankanosidy AD a kankanol, monoterpenový glykosid, kankanosid E, dva fenylethanoidové oligoglykosidy, kankanosidy F a G, a acylovaný oligosacharid, kankanóza, lze izolovat zExtrakt z Cistanche tubulosa

v současnosti používané. Ostatní složky, včetně bílkovin vExtrakt z Cistanche tubulosa, zůstávají nejasné. Společně s výše uvedenými spekulacemi jsme navrženi tak, abychom prozkoumali, zda další složky interagují s SGLT1 a inhibují absorpci ECH a ACT.

Experimenty in vivo nemohou snadno rozlišit mezi rozsahem absorpce a zabráněním dispozice při prvním průchodu játry. Model střevní perfuze in situ má výhodu oproti modelům in vivo a in vitro díky snadné kontrole parametrů experimentu a vyloučení vlivu jiných orgánů a zachování neporušeného zásobení střeva krví.[22] Zapojení glukózového transportéru citlivého na floridzin bylo hodnoceno v anin-situ střevním perfuzním systému. Jak je znázorněno na obrázku 5, absorbovaná množství doprovodných látek ECH a ACT vExtrakt z Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm/s jsou u lidí zcela absorbovány, zatímco léky a peptidy se vstřebávají špatně (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm/s (tabulka 2), což naznačuje vysokou orální biologickou dostupnost u zvířat a lidí. Crespy a spol.[43] prokázali, že eflux ve studii in-situ střevní perfuze se významně nelišil mezi floridzinem a floretinem. Prokázali také [44], že orální biologická dostupnost floridzinu s vysokou citlivostí na SGLT1 byla u potkanů ​​pouze 10 procent. Budoucí studie potřebují vyhodnotit biologickou dostupnost a jaterní first-pass efekt souběžné ECH po perorálním podání dietního extraktu ve vysoké dávce. Výsledky in-situ naznačují, že příjemExtrakt z Cistanche tubulosamůže zlepšit nízkou orální absorpci intaktní ECH a ACT.

Závěr

Dietní a léčivéExtrakt z Cistanche tubulosazvýšení intestinální absorpce ECH a ACT může sloužit k lepšímu řízení lidského zdraví, ačkoli zapojení transportu citlivého na floridzin by mělo být sníženo.

Prohlášení

Střet zájmů

Autoři prohlašují, že nemají žádné střety zájmů, které by mohli zveřejnit

Financování

Tato práce byla částečně podporována High-Tech ResearchCenter z Kinki University.

Poděkování

Autoři chtějí poděkovat Osamu Muraokovi (Kinki University, Osaka, Japonsko) a Toshio Morikawovi (Kinki University, Osaka, Japonsko) za dodávkuExtrakt z Cistanche tubulosaa čisté složky. Jsme velmi vděční Masahiro Iwaki (Kinki University) za studijní podporu.

Extrakt z Cistanche tubulosaprodukty

Z: ' Transport echinakosidu a akteosidu citlivý na floridzin a změněná cesta střevní absorpce po aplikaciExtrakt z Cistanche tubulosa' odTadatoshi Tanino a kol

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, str. 1457–1465,Fenylethanoidní glukosidy transportované SGLT1

Reference

1. Tanaka J a kol. ÚčinekExtrakt z Cistanche tubulosana různá onemocnění mozku. Styl jídla 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J a kol. Funkce proti stárnutíExtrakt z Cistanche tubulosa. Styl jídla 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et al. Funkce pro krásu a růst vlasůExtrakt z Cistanche tubulosa. Styl jídla 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J a kol. Účinek metabolismu tukůExtrakt z Cistanche tubulosa. Styl jídla 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F a kol. Složky Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. izolace a struktura nového fenylethanoidového glykosidu a nového neolignanového glykosidu. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M a kol. Fenylethanoidní oligoglykosidy a acylované oligocukry s vazorelaxační aktivitou z Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF a kol. Analýza fenylethanoidových glykosidů Herba cistances pomocí RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L a kol. Metabolická regulace fenylethanoidních glykosidů z Herba cistanches v psím gastrointestinálním traktu. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X a kol. Neuroprotektivní účinky echinakosidu u myšího MPTP modelu Parkinsonovy choroby. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T a kol. Acylované fenylethanoidové oligoglykosidy s hepatoprotektivní aktivitou z pouštní rostliny Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD a kol. Účinky verbascosidu, biotechnologicky čištěného kulturami rostlinných buněk syringa Vulgaris, na modelu parodontitidy na hlodavcích. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT a kol. Stanovení akteosidu v Cistanche deserticola a Boschniakia rossica a jeho farmakokinetika u volně se pohybujících potkanů ​​pomocí LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A a kol. Studie permeability alkylamidů a konjugátů kyseliny kávové z echinacey pomocí modelu monovrstvy kakaových buněk -2. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C a kol. Stanovení echinakosidu v potkaním séru vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi s ultrafialovou detekcí a její aplikace pro farmakokinetiku a biologickou dostupnost. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbascosidy z olivové mlýnské vody: posouzení jejich biologické dostupnosti a intestinálního příjmu pomocí in vitro systému trávení/kakaa{1}}. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C a kol. Metabolismus echinakosidu, dobrého antioxidantu, u potkanů: izolace a identifikace jeho žlučových metabolitů. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA a kol. Modulace aktivity P-glykoprotein ATPázy některými fytokonstituenty. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA a kol. Efflux dietního flavonoidu kvercetinu 4′-beta-glukosidu přes monovrstvy lidských střevních caco-2 buněk pomocí apikálního proteinu asociovaného s multirezistencí-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA a kol. Buněčný příjem dietního flavonoidu quercetin 4'-beta-glukosidázy na sodík-dependentním glukózovém transportéru SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K a kol. Metabolismus eperisonu při prvním průchodu střevem u potkanů. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B a kol. Antihyperalgetická aktivita verbascosidu ve dvou modelech neuropatické bolesti. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594-601.

22. Cook TJ a kol. Střevní permeabilita chlorpyrifosu pomocí jednoprůchodové intestinální perfuzní metody u potkanů. Toxikologie 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS a kol. P-glykoproteinem a cytochromem P-450-zprostředkovaná interakce rostlinných léků. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK a kol. Transport genistein-7-glukosidu lidskými střevními buňkami CACO-2: potenciální role MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K a kol. Apikální/bazolaterální povrchová exprese lékových transportérů a její role ve vektorovém transportu léků. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L a kol. Buněčné kultury Caco-2 při hodnocení střevní absorpce: účinky některých současně podávaných léčiv a přírodních sloučenin v biologických matricích. (University of Helsinki, Finsko, 2006) Akademická disertace, s. 1–66.
27. Scambia G a kol. Quercetin potencuje účinek adriamycinu v multirezistentní MCF-7 lidské buněčné linii rakoviny prsu: P-glykoprotein jako možný cíl. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH a kol. Vliv myricetinu, antioxidantu, na farmakokinetiku losartanu a jeho aktivního metabolitu EXP-3174 u potkanů: možná role cytochromu P450 3A4, cytochromu P450 2C9 a P- inhibice glykoproteinu myricetinem. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T a kol. Proléčivo paklitaxel-2′-ethylkarbonát může obejít buněčný eflux zprostředkovaný P-glykoproteinem a zvýšit cytotoxicitu léčiva. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC a kol. Absorpce dietních kvercetinových glykosidů a kvercetinu u zdravých dobrovolníků s ileostomií. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL a kol. Difuzní složka střevní absorpce glukózy je zprostředkována glukózou indukovaným doplňováním GLUT2 do membrány kartáčové desky. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K a kol. Třídění endogenních plazmatických membránových proteinů probíhá ze dvou míst v kultivovaných lidských střevních epiteliálních buňkách (Caco-2). Cell 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L a kol. Přítomnost a rozdílná exprese mRNA transportéru hexózy SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 a GLUT5 v buněčných klonech Caco-2 ve vztahu k buněčnému růstu a spotřebě glukózy. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. Exprese fruktózového transportéru GLUT 5 závislá na cukru v buňkách Cac-2. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA a kol. Transport kvercetinu a jeho glukosidů přes lidské střevní epiteliální buňky Caco-2. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T a kol. Srovnávací exprese hexózových transportérů (SGLT1, GLUT1, GLUT2 a GLUT5) v celém myším gastrointestinálním traktu. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L a kol. Účinky verbascosidu, fenylpropanoidního glykosidu z citronové verbeny, na fosfolipidové modelové membrány. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP a kol. Vliv složení čokoládové matrice na biologickou dostupnost kakaového flavan-3-olu in vitro a biologickou dostupnost u lidí. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S a kol. Vysoce variabilní obsahy fenolických látek v produktech z třezalky tečkované ovlivňují jejich transport v modelu Caco{1}} buněk lidského střeva: farmaceutické a biofarmaceutické zdůvodnění standardizace produktů. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD a kol. Účinky potravy na absorpci a farmakokinetiku kakaových flavanolů. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C a kol. Matrice vína bez etanolu a polyfenolů stimulují diferenciaci lidských střevních Caco-2 buněk. Vliv jejich spojení s extraktem z hroznových jader bohatým na prokyanidin. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P a kol. Korelace mezi perorální absorpcí léčiva u lidí a zjevnými koeficienty permeability léčiva v lidských vnitřních epiteliálních (Caco{1}}) buňkách. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V a kol. Srovnání střevní absorpce kvercetinu, floretinu a jejich glukosidů u potkanů. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V a kol. Biologická dostupnost phloretinu a floridzinu u potkanů. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.