Vzorce exprese Arc MRNA v mozku krysy po duálním vyvolání sociálně získaných informací založených na strachu a odměně(2)

Oblouk ve vybavování si přímých a společensky získaných asociací strachu.

Naše schopnost interpretovat naše zjištění týkající se našich krys, které si vybavují strach získaný přímým učením, je významně podporována tím, jak dobře je charakterizován systém, který je základem učení a vybavování strachu. Řada oblastí, které jsme zkoumali, se týká učení o strachu nebo zániku (u posledně jmenovaných předpokládáme, že byly zahájeny v demonstrátorech, protože prošly nezpevněnou prezentací CS během FCbP), konkrétně ACC, PLC a ILC30–32 ,37. Ačkoli je k dispozici o něco menší soubor výzkumů týkajících se nervových mechanismů sociálního strachu, navrhované modely učení sociálního strachu předpokládají, že podobné systémy jsou základem sociálního a přímého učení strachu28. Naše zjištění nenaznačují žádnou celkovou roli ACC, PLC nebo ILC ani při vzpomínce na asociaci sociálně získaného strachu, ani na asociaci přímo získaného strachu (i když viz také „Diskuse“ o rozdílech mezi pohlavími v aktivitě PLC níže). Jak je však uvedeno v předchozí části, pravděpodobně to jen naznačuje, že Arc v tomto případě neslouží jako spolehlivý indikátor aktivity. Zkoumání těchto oblastí po získání strachu by pravděpodobně řeklo jiný příběh. Tvrdý explicitní výzkum aktivity Arc po připomenutí si strachu je omezený, existuje několik minulých výzkumů, ze kterých lze čerpat. Chia a Otto35 zjistili, že krysy podmiňující strach měly ve srovnání s nepodmíněnými kontrolami významně vyšší expresi proteinu Arc v dorzálním i ventrálním hipokampu. Je pozoruhodné, že Arc byl v tomto experimentu kvantifikován analýzou Western Blot homogenizovaného ventrálního a dorzálního hipokampu, takže přesná lokalizace hipokampální aktivity nebyla k dispozici. Tato zjištění pravděpodobně naznačují, že stejně jako v případě STFP může být transkripce Arc indukována v určitých oblastech hipokampu v 48-h vybavovacím časovém bodu pro vzpomínku na strach. Naše nulové výsledky mohou být také potenciálně způsobeny neúspěšným vyvoláním ze strany pozorovatelů, protože na rozdíl od předchozích studií v naší laboratoři12–14,26 jsme u pozorovatelů nezaznamenali vyšší zmrazení CS ve srovnání s kontrolami. Není jasné, zda je to ve skutečnosti kvůli neúspěšnému vyvolání u pozorovatelů nebo kvůli našemu jedinému postupu stažení CS a předběžnému vystavení ovládacích prvků CS.

Co dělá cistanche - Zlepšení paměti

Potenciální role ventrálního orbitofrontálního kortexu při vybavování sociálně získaných informací.

V přelomové studii Lesburguères et al.24. byli schopni prokázat, že zatímco aktivita dorzálního hipokampu (dHPC) byla nezbytná pro získání a krátkodobé vyvolání získaného STFP, paměť STFP byla nakonec přenesena do OFC pro dlouhodobé uložení. Kromě toho Lesburguères et al. byli schopni prokázat, že značení neuronů v orbitofrontálním kortexu během akvizice STFP je nezbytné pro dlouhodobé uchovávání sociálně přenosných potravinových preferencí a že interference s aktivitou OFC po akvizici zhoršuje vybavování paměti 30 dní po akvizici (viz také38). Tato zjištění by naznačovala komunikaci mezi dHPC a OFC v prvních dnech nebo týdnech po akvizici STFP a probíhající reorganizaci OFC v tomto časovém bodě, aby se přizpůsobila dlouhodobému ukládání paměti STFP. Zatímco nedostatek celkových rozdílů ve ventrální nebo laterální expresi OFC Arc mezi demonstrátory, kontrolami a pozorovateli v této studii by tuto interpretaci zpochybnil, zjistili jsme významnou negativní korelaci mezi naší kombinovanou mírou celkového výkonu sociálního učení a buňkami exprimujícími dual-Arc. ve VOC. Kromě toho nebyla tato korelace pozorována mezi podobnou metrikou vytvořenou pro demonstrátory na základě výkonu vybraného testu a zmrazením na CS. Vzhledem k tomu, že spoléhání se na společensky získané informace lze považovat za volbu mezi potenciálně nespolehlivými sociálními informacemi a nebezpečím učení prostřednictvím přímé zkušenosti, může být tato zjevná inhibiční role hlasu při vyjadřování společensky získaných informací spojena s širší rolí OFC v hodnotě rozhodování na základě39–42.

Experiment Cistanche deserticola

Pohlavní rozdíly v Arc transkripci.

několik statistických a metodických důvodů. Za prvé, naše příležitostně malá velikost vzorku pro samice, s velikostí skupiny pro kombinace pohlaví/stavu v rozmezí od n=2 do n{1}} po odstranění krys bez dostatečného množství životaschopných sekcí (ačkoli zejména n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Ačkoli bylo málo zkoumáno rozdíly mezi pohlavími v expresi Arc, existují některá zjištění, která naznačují, že samice potkanů ​​exprimují více Arc v určitých oblastech dorzálního hipokampu po opakované expozici relativně obohacenému prostředí43, ačkoli trend byl také opačný. pozorované u potkanů ​​testovaných bez předchozí behaviorální intervence43. Naše zjištění mohou naznačovat, že rozdíly mezi pohlavími v transkripci Arc jsou přítomny po určitých obecných behaviorálních úkolech nebo zkušenostech. V oblasti CG1 ACC jsme zjistili, že samci měli celkově více buněk aktivních v obou časových bodech, pravděpodobně kvůli vyšší základní Arctrankripci v ACC u samců nebo zvýšené transkripci po změnách kontextu / opětovné expozici (domácí klec → STFP zkušebna → klimatizační komora), protože existují určité důkazy – i když omezené – pro roli ACC v dlouhodobém vyvolávání kontextových vzpomínek44. Samci potkanů ​​také vykazovali vyšší počty jader a duálních oblouků v ILC. To lze vysvětlit úlohou ILC při vymírání a inhibici strachu31,45,46 a pozorovanými poruchami v inhibici a zániku naučeného strachu u žen47–49. Pokud je tomu tak, vyvolává to otázku, proč nebyly pozorovány žádné celkové rozdíly mezi našimi kontrolními, pozorovatelskými a demonstračními potkany, pokud byla exprese Arc spouštěna infralimbickou aktivitou vyvolanou CS.

Samice vykazovaly vyšší hladiny exprese Arc pro všechny počty ve vCA3. Rozdíl v počtu jader mohl být potenciálně důsledkem větší aktivace po expozici CS nebo opětovné expozici kondicionační komoře u samic, zatímco vyšší hladiny exprese cytoplazmatického oblouku ve vCA3 po potravě mohou naznačovat rozdíly mezi pohlavími role Arca ve vCA3 buď rozpoznání "známého" jídla (dokonce i pro pozorovatele by vůně byla známá díky jejich předchozí interakci s demonstrátorem) nebo odměňování/obecné konzumační procesy. Tato žena také vykázala významně vyšší duální značení ve vCA3 – i když tento účinek byl malý – může také naznačovat generalizované zvýšení transkripce vCA3 Arc u žen. Samice potkanů ​​také vykazovaly vyšší nukleární transkripci Arc ve vOFC a vyšší duální hladiny Arc mRNA v lOFC, i když tyto výsledky je obtížnější interpretovat kvůli nízkému počtu samic kontrolních potkanů, jejichž mozková tkáň byla dostatečně intaktní, aby bylo možné počítat OFC (n=2 a 3 pro laterální a ventrální OFC). Údaje z dostupných kontrolních potkanů ​​naznačují možné zvýšení produkce OFC Arc mRNA zprostředkované pohlavím, ale je stejně možné, že tento účinek nepřetrvává s vyšší n. Některé minulé výzkumy zejména ukázaly strukturální rozdíly v OFC a funkční rozdíly v chování zprostředkovaném OFC mezi samicemi a samci hlodavců50–52.

Prášek z extraktu cistanche

V PLC byly detekovány naše možná nejzajímavější rozdíly mezi pohlavími v Arc mRNA. Samci vykazovali celkově vyšší počet buněk exprimujících Arc v cytoplazmě a jak v cytoplazmě, tak v jádře (duálně exprimující) než samice. Zjistili jsme také, že zatímco mužští demonstrátoři a pozorovatelé nevykazovali zvýšení transkripce Arc oproti kontrolám v časovém bodě strachu-vyvolání strachu, ženy demonstrátorů vykazovaly výrazně vyšší transkripci jaderného oblouku než kontrolní skupiny, zatímco ženské pozorovatelky byly uprostřed mezi těmito dvěma. Tento sexuální efekt může být řízen výše uvedenými deficity pozorovanými u naučené inhibice a vymírání strachu, které jsou pozorovány u žen ve věku 47–49 let, protože minulý výzkum naznačil, že PLC se kriticky podílí na stimulaci strachového chování45,53,54. Kromě toho několik studií implikovalo rozdíly v signalizaci a struktuře PLC jako potenciální hnací faktory těchto pohlavně specifických poruch v inhibici strachu a zániku55–58. I když jsme nezjistili žádný významný rozdíl v chování ženského a mužského zmrazení vůči narážce, upregulace Arc mRNA v reakci na nezesílený strach spojený s CS u specificky ženských demonstrátorů může naznačovat rozdílnou neurální restrukturalizaci v PLC, která by mohla nakonec vést k rozdíly mezi pohlavími ve výrazu strachu.

Závěry

Zatímco zjištění této studie nerozšířila naše chápání mozkových mechanismů zapojených do získávání společensky získaných vzpomínek tolik, jak jsme doufali, naše výsledky poskytují určité potenciální poznatky o rozdílech mezi pohlavími ve výrazu Arc a také o roli (neboli nedostatek) Arku při vyvolání dlouhodobé paměti. Naše zjištění naznačují, že – přinejmenším v prefrontálním kortexu a vCA3 – se zdá, že indukce mozkové aktivity prostřednictvím vyvolání sociálně získaných informací není dostatečná k tomu, aby způsobila zvýšení exprese Arc oproti těm, které jsou způsobeny samotným testovacím postupem. Platnost tohoto přístupu je však jistě zpochybňována neprůkaznými výsledky našich behaviorálních testů, protože za tento nedostatek účinku může špatné uchovávání společensky získaných informací. Domníváme se, že by to mohlo být proto, že minimální neurální restrukturalizace je spuštěna, když dojde k odvolání před konsolidací systémů. Další výzkum role proteinu Arc v procesech sociálního učení je stále oprávněný vzhledem k tomu, že naše výsledky chování neprokazují sociální učení u krys Observer. Budoucí výzkum zkoumající překrývání neurálních mechanismů, které řídí různé formy sociálního učení, by mohl také těžit ze zahrnutí zvířat podstupujících akviziční procedury a zvířat podstupujících procedury vzdáleného stažení, protože tyto časové body mohou s větší pravděpodobností vyvolat změny plasticity a tím i změny v expresi oblouku. .

Doplněk Cistanche v mé blízkosti – Zlepšení paměti

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Improve Memory

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Metody

Předměty. Subjekty byli samci a samice krys Sprague-Dawley chovaní interně v Animal Resource Center na University of Texas v Austinu. Sedm chovných párů produkovalo subjekty pro kohortu 1 (n=27 samic, n=36 samců) a osm chovných párů produkovalo subjekty pro kohortu 2 (n=27 samců, žádné samice). Samicemi byly krysy Sprague–Dawley (při příjezdu mezi 215 a 260 g) získané od Charles-Rivers (Wilmington, MA, USA), zatímco samci byli potkani Sprague-Dawley (při příjezdu mezi 230 a 300 g) získaní od společnosti Harlan (nyní Envigo) (Houston, TX, USA). Všechny krysy byly umístěny v kleci se společníkem opačného pohlaví, dokud samice nevykazovala jasné známky březosti, kdy byly samice umístěny samostatně. Štěňata byla odstavena do triád sourozenců stejného pohlaví 21. den po narození (P21), aby se zajistilo učení se sociálnímu strachu26. Náhradní mláďata byla odstavena do triád nebo dyád s nepříbuznými krysami a použita v dalších experimentech na University of Texas v Austinu. V dalších experimentech byly použity samice z našeho druhého vrhu kohorty. Mláďatům bylo umožněno dospívat s minimálními poruchami kromě rutinních postupů chovu zvířat (např. změny klecí), dokud nezačaly postupy zvykání (samičí triády) nebo postupy hodnocení dominance (samčí triády) (postupy dominance a výsledky podrobně uvedené v doplňkových materiálech). Potkani kohorty 1 zahájili procedury mezi P106–P112 dny věku a potkani kohorty 2 začali mezi P99–P118 dny věku. Všechny subjekty byly udržovány v 12-hodinovém reverzním cyklu tma-světlo s vypnutými světly v 15:00. Všechny experimentální postupy byly dokončeny během temného cyklu subjektů pod červeným světlem. Všechny části tohoto experimentu byly provedeny v souladu s National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Experimental Animals a byly schváleny pro použití The University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

Přístroje a podněty. Podmiňování strachu. Všechny procedury podmiňování strachu a podmiňování strachu pomocí proxy byly dokončeny ve standardních klimatizačních komorách (30,48 cm × 25,4 cm × 30,48 cm) zkonstruovaných z čirých stěn z plexiskla vpředu a vzadu, dvou ocelových stěn po stranách a stropu z plexiskla s díra ve středu. Podlahou komory byla řada tyčí z nerezové oceli připojených k rázovému generátoru (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Všechny komory byly uzavřeny v akustických izolačních boxech (Coulbourn Instruments) a osvětleny vnitřním červeným světlem. Chování bylo zaznamenáváno kamerami s uzavřeným okruhem (Panasonic™ WV-BP334) namontovanými nad klimatizačními komorami s čočkou vloženou otvorem ve stropě z plexiskla. Komůrky byly mezi každým subjektem úplně vytřeny 70% roztokem alkoholu. Veškeré podávání stimulů bylo řízeno pomocí softwaru Freeze Frame (Coulbourn Instruments). CS byl kámen 20 (5 kHz, 80 dB) a v postupech s vícenásobnými prezentacemi CS byl variabilní inter-trial interval (ITI) v průměru 180 s. Nepodmíněným stimulem (US) byl šok 1 mA, který trval 500 ms a byl ukončen současně s podmíněným stimulem.

Sociální přenos preference potravin. Všechny procedury STFP probíhaly v místnosti sousedící s místností obsahující kondicionační komory. Nové diety byly složeny smícháním 100 g práškového krmiva pro hlodavce 5LL2 Purina buď s 1 g McCormick mleté ​​skořice (dieta Cin) nebo 2 g kakaového prášku Hershey (dieta Co). Obyčejná strava, která byla podávána všem krysám během období omezení potravy a kontrolním krysám v závěrečný den experimentálních postupů, byla nefalšovaná prášková potrava pro hlodavce 5LL2 Purina. Všechny práškové pokrmy – jak během omezování potravy, tak během experimentálních postupů – byly prezentovány v závěsných kelímcích na jídlo, které byly vyrobeny ze 4 uncí. skleněné nádoby a 12-ocelový užitkový drát. Kelímky s jídlem byly opláchnuty a poté otřeny 70% roztokem etanolu, než byly mezi každým použitím důkladně umyty mýdlem a vodou. Všechny závěrečné fáze STFP experimentálních postupů probíhaly ve standardních klecích pro krysy (26,7 cm × 48,3 cm × 20,3 cm), přičemž každá krysa dostala čerstvou klec. Fáze interakce (fáze získávání STFP) probíhala ve velké plastové nádobě (50,5 cm × 39,4 cm × 37,5 cm) s podlahovou podestýlkou ​​z dřevěných štěpků, která byla vyměněna mezi každou skupinou. Plastové nádoby byly mezi každým sezením důkladně vytřeny pomocí Windexu.

Přehled experimentálního designu a postupů sociálního učení.

(Grafický přehled viz obr. 2).

Všechny krysy byly po dobu pěti dnů omezeny na potravu a navykly si na manipulaci a místnost, kde by probíhaly procedury STFP, po dobu čtyř dnů bezprostředně před dnem 1 experimentálních procedur. Zatímco přivykací postupy skončily před 1. dnem experimentálních postupů, restrikce potravy pokračovala až do konce experimentu. Jedna krysa z každé triády byla přiřazena k jedné ze tří podmínek: demonstrátor, pozorovatel nebo kontrola. Samčí triády kohorty 2 byly hodnoceny z hlediska dominance a všechny vykazovaly jasnou hierarchii a byly přiřazeny tak, že dominantní krysa byla Demonstrátor a podřízená byla Pozorovatelem, aby se zlepšil společenský přenos strachu13. Jednotlivé triády byly dále náhodně rozděleny do skupin, kde by Demonstrátor a Pozorovatel obdržel test výběru při STFP odvolání (Choice) a skupiny, kde by dostávali pouze demonstrované jídlo (Cin).

V den 1 experimentálního postupu byly krysy přiřazené ke stavu demonstrátoru přesunuty do komor pro úpravu strachu a ponechány 10 minut zvyknout si, než byly vystaveny 3 CS, které skončily bolestivým šokem (viz „Přístroje a podněty“ pro specifika). Po procedurách podmiňování strachu byli demonstranti přemístěni zpět do své původní domovské klece. V den 2 experimentálních procedur, 24 hodin po kondicionování strachem, byli demonstranti vráceni do klimatizačních komor se svým kamarádem v kleci přiřazeným ke stavu pozorovatele a podrobeni postupu FCbP (obr. 2). Bezprostředně po postupu FCbP byly krysy Observer vráceny do jejich domácí klece, zatímco demonstranti byli přemístěni do sousední místnosti a dostali 1 hodinu na konzumaci práškového krmiva ochuceného skořicí. Po hodině byli pozorovatelé přesunuti do interakčního koše se svými demonstranty a bylo jim umožněno interagovat s nimi po dobu 30 minut, aby bylo možné získat společensky přenášenou potravinovou preferenci. Předchozí výzkum z naší laboratoře potvrdil, že tyto časové body jsou dostatečné pro přenos STFP33. Poté byly krysy Observer vráceny do jejich domovské klece, zatímco Demonstrační krysy byly přemístěny do samostatného ustájení, aby se zabránilo dalšímu přenosu STFP na Pozorovatele nebo Kontrolu. V den 3 experimentálních procedur byly kontrolní krysy přesunuty do kondicionačních komor samostatně a po 10 minutách přivykání na komoru byly prezentovány tři 20s CS bez doprovodného šoku. To bylo provedeno v samostatný den, aby se minimalizovala možnost přetrvávajících poplašných feromonů – o kterých je známo, že je uvolňují krysy v reakci na ohrožující podněty a ovlivňují konspecifické učení59 – které jsou stále přítomny v komoře.

V konečný den experimentu, den 4, bylo zahájeno vyvolání jak sociálně přenášených potravinových preferencí, tak vzpomínek na podmiňování strachu/podmiňování strachu prostřednictvím proxy paměti. Všem pozorovatelům a demonstrátorům z triád přiřazených k podmínce Choice byl umožněn 10 minut ad libitum přístup ke skořicové i kakaové dietě, zatímco pozorovatelé a demonstranti z triád přiřazených k podmínce Cin dostali 10 minut ad libitum ke skořicové dietě- pouze. Ve všech triádách dostaly kontrolní krysy 10 minut ad libitum přístup k obyčejné práškové potravě. Ihned poté byly krysy vráceny do jejich domovské klece a ponechány v klidu po dobu 10-min, než byly přesunuty zpět do laboratorního prostoru a umístěny do kondicionačních komor. Všem krysám bylo poté poskytnuto 3-minutové přivykání v komoře, než jim byla předložena jediná 20s CS. 5 minut po skončení CS byly všechny krysy usmrceny injekcí roztoku pentobarbitalu a fenytoinu (Euthasol; Virbac Animal Health) a perfundovány. Jejich mozky byly později zpracovány pro expresi Arc mRNA. Vzhledem k časovému průběhu našeho terminálního postupu a známému časovému rámci migrace Arc mRNA28 by zvýšení cytoplazmatické exprese Arc mRNA bylo způsobeno procedurami STFP vyvolání, zatímco jaderná exprese by byla způsobena procedurami FC/FCbP odvolání, přičemž buňky vykazující duální aktivaci mají byly aktivovány v obou časových rámcích (viz obr. 1; také viz "Analýza tkání" pro podrobnosti o léčbě a zpracování tkáně).

Pouštní žijící cistanche

Postupy.

Zvykání a omezování potravy. Veškerá habituace proběhla těsně před prvním dnem experimentálních procedur. Habituace spočívala v tom, že každá klec potkanů ​​byla přemístěna do místnosti, ve které by probíhaly všechny STFP experimentální procedury, a bylo jim umožněno zvyknout si na místnost po dobu 15 minut. Během tohoto období byla každá krysa zvednuta a manipulována experimentátorem, který měl běžet po dobu 2 minut, aby si zvykl na manipulaci a daného jedince. Všechny postupy přivykání probíhaly v temné místnosti pod červeným světlem a všechny krysy si přivykaly po dobu 4 dnů. Omezení potravy začalo den před začátkem přivykání a přetrvávalo až do konce experimentu. Na začátku omezování potravy byly z klece odstraněny potravinové pelety, které všichni jedinci jedli. Následně měly všechny klece denně ad libitum přístup k závěsné nádobě plné obyčejné práškové stravy Purina 5LL2 v jejich domácí kleci po dobu 1 hodiny. Potkani byli denně váženi počínaje začátkem omezení potravy až do konce experimentu, aby se zajistilo, že nedojde k neobvyklé ztrátě hmotnosti.

Behaviorální bodování.

Veškeré hodnocení chování pro tento experiment bylo dokončeno pomocí interaktivního softwaru pro výzkum chování (BORIS)60.

Podmiňování strachu pomocí skórování sociálních kontaktů proxy. Minulé výzkumy z naší laboratoře ukázaly, že existuje silný vztah mezi mírou strachu, kterou pozorovatelé projevili při testu dlouhodobé paměti, a dobou strávenou interakcí s jejich demonstrátorem během CS u mužů13 a po CS u žen14,26. Jako taková byla videa z fáze sociální akvizice podmiňování strachu pomocí proxy hodnocena pro sociální interakci mezi pozorovatelem a demonstrátorem pro každé období 20- během prezentace CS a období 20- bezprostředně po každém Prezentace CS, která poskytuje sekundární index osvojování strachu. Sociální kontakt byl skórován, když krysy pozorovatel a demonstrátor navázaly kontakt jinak než při průchodu během naváděcí periody (během CS kontaktu) nebo 20 s po CS (po CS kontaktu). Bylo vypočteno procento každého bodovacího období stráveného v kontaktu s demonstrátorem. Data pro procentuální kontakt během signální periody pro muže a data pro procento kontaktu bezprostředně následující po signální periodě pro ženy byla vytažena a zkombinována do jediné míry "relevantního kontaktu", která se použije ve všech konečných statistických analýzách.

Bodování testu výběru. Videozáznamy testu výběru k vyvolání vzpomínek na společensky přenášenou potravinovou preferenci byly hodnoceny podle doby, kterou daná krysa strávila interakcí s kelímkem na jídlo, podle toho, zda obsahoval předvedenou/již zkonzumovanou stravu (dieta Cin) nebo román dieta (dieta Co). Bylo to provedeno jako potenciální sekundární měřítko preference jídla, protože jsme předpokládali, že kvůli tomu, že test volby je abnormálně krátký (10 minut), nemusíme být schopni detekovat preference na základě samotného snědeného množství. Interakce s kelímkem se skórovala vždy, když byla krysa fyzicky v kontaktu s miskou a aktivně se od ní nepohybovala (tj. přední tlapky v kontaktu s nádobou, hlava uvnitř nádoby, vylézání na nádobu nebo aktivní pojídání potravy ze sklenice). Pro statistickou analýzu jsme vypočítali procento času stráveného interakcí s šálkem obsahujícím danou dietu na základě celkového množství času stráveného interakcí s každým šálkem (např. pro dietu Cin, Percent time= TimeDiet Cin/ (TimeDiet Co plus TimeDiet Cin)). Celá 10-minutová testovací relace byla hodnocena pro všechny krysy, které ji podstoupily.

Analýza tkání.

Aby se minimalizovala degradace mRNA ribonukleázou (RNase), veškeré vybavení a povrchy používané během přípravy a zpracování mozku byly pravidelně dezinfikovány buď RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, USA) nebo RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , USA).

Příprava mozku. Bezprostředně po eutanazii byly subjekty intrakardiálně perfundovány pomocí 4% roztoku paraformaldehydu (PFA). Mozky byly poté odstraněny a ponořeny do 4% PFA, aby byla umožněna postfixace po dobu 24–48 hodin. Jakmile byla postfixace kompletní, byly mozky přeneseny do roztoku 30% sacharózy ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem pro kryoprotekci. Jakmile mozky klesly na dno lahvičky, což ukazuje na dostatečný příjem sacharózy pro kryoprotekci, byly bleskově zmraženy v práškovém suchém ledu a přemístěny do mrazáku při teplotě -80 stupňů, kde se skladovaly až do nakrájení. Mozky byly poté koronálně rozřezány na posuvném mikrotomu o tloušťce 30 µm na šest sérií (takže následné řezy v jedné sérii byly od sebe vzdáleny 180 µm) a ihned namontovány a ponechány uschnout na vzduchu, než byly umístěny do vakuové komory s houbičkami na vlhkost, kde byly necháme 24 hodin úplně vyschnout. Byly nařezány a zpracovány pouze hipokampální řezy (přibližně - 3,2 až - 5,2 od bregmy) nebo prefrontální oblasti (přibližně plus 3,7 až plus 1,4 od bregmy) obsahující oblasti zájmu. Namontované řezy byly poté umístěny do utěsněného podložního boxu bez RNázy a skladovány při -80 stupních až do zpracování.

Zpracování tkání. Všechny postupy byly modifikovány z protokolů použitých v Lee et al.61 a Petrovich et al.62. Před zpracováním tkáně byla zkonstruována cRNA sonda pro Arc mRNA počínaje plazmidem obsahujícím plnou délku cDNA (~3 0 kbp) Arc transkriptu. Pro vytvoření sondy byla DNA nejprve rozštěpena smícháním plazmidu s 10x trávicím pufrem (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, USA), 10x EcoRI restrikčním enzymem (Biolabs) a purifikovanou vodou bez nukleázy. inkubováno při 37 stupních po dobu 2 hodin. Správné štěpení DNA bylo ověřeno pomocí elektroforézy, po které byla DNA purifikována přes noc v ethanolu. Po purifikaci byla DNA peleta odstředěna, promyta v EtOH, zcela vysušena a resuspendována v TE pufru. Pro ověření, že DNA byla správně linearizována, vypočítat koncentraci Arc a zkontrolovat, že nejsou přítomny žádné kontaminanty, byl vzorek DNA testován pomocí spektrofotometrie (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Sonda značená digoxigeninem (DIG) byla transkribována kombinací linearizované DNA s vodou bez RNázy, 10x transkripčním pufrem (Ambion), blokem RNázy (Ambion), značící směsí DIG RNA (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) a T7 RNA polymeráza (Ambion) před inkubací roztoku při 37 stupních po dobu 2 hodin. Nakonec byla sonda zředěna ve vodě bez nukleázy a purifikována v mini koloně Quick-Spin (Roche).

Jakmile byla zkonstruována cRNA sonda, byla sklíčka obsahující tkáň od samců krys ponořena na 4 0 min do 4% roztoku PFA, aby se zvýšila integrita tkáně během zpracování in situ. Tkáň krysích samic byla zpracována bez tohoto promytí PFA. Sklíčka pak byla promyta a inkubována v pufru proteinázy K (PK) při 37 stupních a poté byla ošetřena 0,5% roztokem acetanhydridu/1,5% triethanolaminu obsahujícím ledovou kyselinu octovou pro permeabilizaci. Sklíčka byla poté promyta v pufru fyziologický roztok-citrát sodný (SSC) a poté byla dehydratována ponořením do stoupajících koncentrací ethanolu a vysušena na vzduchu. Nakonec bylo každé sklíčko pokryto 300 µl hybridizačního pufru obsahujícího kvasinkovou tRNA (Invitrogen; Carlsbad, CA, USA), DNA spermatu lososa (Ambion), dithiothreitol (Sigma; St. Louis, MO, USA) a sondu cRNA (1:100). Každé sklíčko bylo poté zakryto krycím sklíčkem a utěsněno kolem okrajů DPX mountantem (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, USA) před inkubací v hybridizačním roztoku po dobu 20 hodin při 60 stupních. Je pozoruhodné, že krycí sklíčko chránilo tkáň před jakýmkoli přímým kontaktem s montážním prostředkem DPX, takže pozdější odstranění vytvrzeného DPX nezpůsobilo žádné poškození tkáně.

Jakmile byla hybridizace dokončena, krycí sklíčka byla opatrně odstraněna a sklíčka byla inkubována v 4xSSC pufru smíchaném s thiosíranem sodným (ST) při 60 stupních po dobu jedné hodiny, než byla ošetřena roztokem na bázi kyseliny ethylendiamintetraoctové pro inhibici aktivity RNAsy při 37 °C. Poté byla sklíčka promyta v sestupných koncentracích roztoku SSC smíchaného s ST znovu při 60 stupních. Tkáň byla poté promyta v roztoku detergentu (Tween20) a poté byla obarvena systémem PerkinElmer TSA Fluorescein (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Sklíčka byla umístěna do vlhké komůrky a ošetřena blokovacím pufrem a následně konjugátem anti-DIG-HRP po dobu 2 hodin. Sklíčka byla poté krátce promyta v roztoku detergentu a poté byla vrácena do tmavé vlhké komory a potažena roztokem obsahujícím fluorescein tyramidové činidlo (FITC) a ponechána sedět po dobu 30 minut. Nakonec byla sklíčka omyta, ponechána uschnout na vzduchu a překryta krycím sklíčkem obsahujícím jaderné barvivo 4′,6-diamidino-2-fenylinodol (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, USA) . Sklíčka byla až do zobrazení uložena ve tmě při -20 stupních.

Zobrazování. Veškeré zobrazování bylo dokončeno pomocí mikroskopu Axio Scope A1 (Zeiss; Tornwood, NY, USA). Oblasti zájmu byly identifikovány pomocí DAPI barvení pomocí 10×objektivu s pomocí Paxinosova a Watsonova atlasu mozku63 a poté zobrazeny pod 40×objektivem (skutečné zvětšení ~900×). Snímky byly pořízeny pro skvrny DAPI i FITC a později obarveny a automaticky sloučeny pomocí vlastního makra v softwaru ImageJ s FIJI (NIH, Bethesda, MD). Vzhledem k degradaci tkáně probíhající in situ nebyly všechny řezy nebo oblasti potenciálního zájmu životaschopné. Snímky jako takové nemohly být spolehlivě složeny do Z a místo toho byly pořízeny v jedné rovině. Byly zobrazeny a spočítány následující oblasti: prelimbická kůra (plus 3,72 až plus 2,52 od bregmy), infralimbická kůra (plus 3,52 až plus 2,2 od bregmy), laterální (plus 3,72 až plus 3,2 od bregmy) a ventrální (plus 3,72 na plus 3,0 z bregma) orbitofrontální kůra, oblast CG1 přední cingulární kůry (plus 3,72 až plus 2,52 z bregma) a oblast CA3 ventrálního hippocampu (– 4,3 až – 4,8 z bregma) (obr. S6). Přestože amygdalarová jádra byla také zvláště zajímavá pro svou dobře zavedenou roli při učení strachu, výše uvedené poškození tkáně mělo tendenci být v této oblasti obzvláště závažné. Jako takový jsme nebyli schopni získat velikost vzorku dostatečně velkou, aby zahrnovala tuto oblast (k tomu, aby byla krysa zahrnuta do statistické analýzy dané oblasti, bylo vyžadováno minimálně 6 životaschopných snímků/oblast).

Počítání byla dokončena oblast po oblasti a všem obrazovým souborům byl přiřazen náhodný číselný kód, který zaslepil experimentátora, který dokončil počítání od jakýchkoli podrobností týkajících se obrazu v době počítání. Všechny počty buněk byly provedeny v ImageJ s balíčkem FIJI a byly provedeny pomocí nástroje pro počítání buněk. Buňky byly počítány pro expresi jaderné a cytoplazmatické Arc mRNA odděleně a buňky vykazující překrývající se expresi byly počítány jako duální exprese. Konečné počty buněk exprimujících jaderný Arc a cytoplazmatických buněk exprimujících Arc zahrnovaly pouze buňky exprimující pouze v této oblasti (tj. nezahrnovaly duálně exprimující buňky). Byly odebrány úplné počty buněk obarvených DAPI a bylo vypočteno procento buněk vykazujících expresi v každé dané oblasti a následně průměrné procento buněk vykazujících každý typ aktivace u jednotlivých potkanů. Abychom předešli tomu, že skóre krys s větším počtem snímků nebude mít neúměrný vliv na naše statistiky, a abychom zabránili nafouknutí velikosti vzorku, byly v naší konečné analýze použity pouze tyto průměry.

Přehled statistických analýz. Všechny statistické analýzy byly dokončeny pomocí R kódovacího softwaru. Celý kód je volně k dispozici k nahlédnutí v našem datovém úložišti na https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. Pokud není uvedeno jinak, limit pro test, který má být považován za statisticky významný, byl nastaven na p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Pro krysy Observer a Demonstrator byly vypočteny bivariační korelace, aby se vyhodnotily potenciální vztahy mezi behaviorálními měřeními a počty buněk Arc pro expresi vyskytující se ve vhodných časových bodech (např. počty cytoplazmatických Arc pro procento zkonzumované skořice). Pearsonovy korelační koeficienty byly použity, pokud nebyly Grubbsovým testem detekovány žádné odlehlé hodnoty v žádném souboru dat. Pokud byly zjištěny odlehlé hodnoty, byl místo nich použit Spearmanův korelační koeficient. Aby bylo možné změřit, zda vztah mezi sociálním učením a Arc v buňkách s duální expresí v pozorovatelích, byla celková metrika sociálního učení – dále označovaná jako metrika sociálního učení (SLM) – vypočtena na základě průměru standardizovaných skóre ( z-skóre) pro procento z celkového množství snědeného jídla, které bylo demonstrovaným jídlem, a procento času stráveného v kontaktu s demonstrátorem během fáze sociálního učení FCbP během prezentace CS (muži) nebo po prezentaci CS (ženy). Pozoruhodné je, že procento zamrznutí na narážku v poslední den nebylo použito pro krysy Observer, protože naše výsledky a výsledky našeho následného experimentu (viz doplňkové materiály) naznačovaly, že podmínky našeho postupu behaviorálního testování vedly k určitému zmrazení i v Kontrolní krysy – alespoň u samců – a jako takové nemusí být nejlepším měřítkem síly sociálně získané reakce strachu. Vzhledem k našim dřívějším zjištěním, že interakce s demonstrátorem během nebo po CS (v závislosti na pohlaví) vysoce předpovídaly pozdější zmrazení na narážku12–14, byla interakce s demonstrátorem v časovém bodě vhodném pro pohlaví testována na korelace s aktivitou jaderného oblouku. místo toho, aby poslední den pro krysy Observer zmrzl na znamení. Pro demonstrátory byla podobná metrika vypočítána na základě standardizovaného zmrazení na narážku v poslední den a procenta z celkového množství snědeného, ​​což byla známá strava (Diet Cin) a kontrolována proti duální aktivitě Arc. Pro korekci vícenásobných testů prováděných na každém souboru údajů o chování (6, pro každou oblast mozku) byla kritická p-hodnota pro korelace Bonferroni upravena na 0,0083.

Reference

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. Děti s autismem se neorientují na přirozeně se vyskytující sociální podněty. J. Autism Dev. Porucha. 28, 479-485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dapretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Zpracování odměn u autismu. Autism Res.

3, 53–67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Teorie sociální motivace autismu. Trends Cogn. Sci. 16, 231–239 (2012).

4. Öst, L.-G. Způsoby získávání fobií a výsledky behaviorální léčby. Chovej se. Res. Ter. 23, 683-689 (1985).

5. Ollendick, TH & King, NJ Původ dětských strachů: Zhodnocení Rachmanovy teorie získávání strachu. Chovej se. Res. Ter. 29, 117-123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. Kondicionování zážitků u pavoučích fobií. Chovej se. Res. Ter. 29, 333-335 (1991).

7. Jeon, D. a kol. Pozorovací učení strachu zahrnuje defektní systém bolesti a Cav1.2 Ca2 plus kanály v ACC. Nat. Neurosci. 13, 482–488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA Sociální izolace po odstavení zhoršuje podmiňování pozorovacího strachu. Chovej se. Brain Res. 242, 142–149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD Učení se od ostatních, jak se vypořádat s kousavými mouchami: Sociální učení podmíněné analgezie vyvolané strachem a aktivního vyhýbání se. Chovej se. Neurosci. 115, 661-674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Naučit se bát a vyrovnat se s přirozeným stresorem: Individuálně a společensky získaný kortikosteron a vyhýbání se kousavým mouchám. Horm. Chovej se. 43, 99-107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Příbuzenství, známost a sociální status modulují sociální učení o "mikropredátorech" (kousavých mouchách) u jeleních myší. Chovej se. Ecol. Sociobiol. 58, 60-71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. Podmiňování strachu pomocí proxy: Sociální přenos strachu během získávání paměti. Chovej se. Brain Res. 214, 80–84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. Stav dominance předpovídá přenos sociálního strachu u laboratorních potkanů. Anim. Cogn. 19, 1051–1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. Rozdílné účinky známosti/příbuzenství v sociálním přenosu asociací strachu a potravinových preferencí u potkanů. Anim. Cogn. 22, 1013–1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR Omezení obousměrného kontrolního postupu pro vyšetřování imitace u krys: Pachové stopy na manipulandu. QJ Exp. Psychol. B 52, 193-202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW Přenos informací o vzdálených potravinách: Laboratorní šetření hypotézy „informačního centra“. Anim. Chovej se. 31, 748-758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ Sirouhlík: Semiochemický zprostředkující sociálně indukovaný výběr stravy u potkanů. Physiol. Chovej se. 42, 119-124 (1988).

18. Galef, BG Případová studie behaviorální analýzy, syntézy a pozornosti k detailu: Sociální učení o potravinových preferencích. Chovej se. Brain Res. 231, 266–271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ Sociální přenos potravních preferencí u dospělých potkanů. Anim. Chovej se. 31, 265-271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, PJ Fosforylace CREB a exprese c-Fos v hipokampu krys během získávání a vyvolání sociálně přenosné preference jídla. Hippocampus 15, 56–67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Účinky stimulace nucleus basalis magnocellularis na sociálně přenosnou potravinovou preferenci a c -Fosův výraz. Učit se. Mem. 13, 783-793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. Dynamika hipokampální a kortikální aktivace při konsolidaci neprostorové paměti. J. Neurosci. 26, 4852–4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ Časové průběhy exprese Fos v potkaním hipokampu a neokortexu po získání a vyvolání společensky přenášené potravinové preference. Neurobiol. Učit se. Mem. 88, 65–74 (2007).

24. Lesburguères, E. a kol. Včasné značkování kortikálních sítí je nutné pro vytvoření trvalé asociativní paměti. Science 331, 924–928 (2011).

25. Knapska, E. a kol. Mezisubjektový přenos emočních informací vyvolává specifické vzorce aktivace amygdaly. Proč. Natl. Akad. Sci. 103, 3858-3862 (2006).

26. Jones, CE, Říha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. Sociální přenos Pavlovova strachu: Podmiňování strachu pomocí proxy u příbuzných samic potkanů. Anim. Cogn. 17, 827–834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA Okruh intra-amygdaly specificky reguluje učení sociálního strachu. Nat. Neurosci. 20, 459–469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Te neurální a výpočetní systémy sociálního učení. Nat. Neurosci. 21, 197–212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF Exprese bezprostředně raného genu Arc specifická pro prostředí v hipokampálních neuronových souborech. Nat. Neurosci. 2, 1120-1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW Nervové obvody a mechanismy zapojené do Pavlovova podmiňování strachu: Kritický přehled. Neurosci. Biobehav. Rev. 30, 188–202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Inaktivace infralimbické, ale nikoli prelimbické kůry, narušuje konsolidaci a znovuzískání zániku strachu. Učit se. Mem. 16, 520–529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. Neuronální obvody pro strach a úzkost. Nat. Neurosci. 16, 317–331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. Vliv spolehlivosti demonstrátoru a aktuálnosti poslední demonstrace na získání společensky přenášené potravinové preference. R. Soc. Otevřete Sci. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Arc protein: Flexibilní hub pro synaptickou plasticitu a kognici. Semin. Cell Dev. Biol. 77, 33–42 (2018).

35. Chia, C. & Otto, T. Exprese hipokampálního oblouku (Arg3.1) je vyvolána vyvoláním paměti a je nutná pro opětovné upevnění paměti při podmiňování stopového strachu. Neurobiol. Učit se. Mem. 106, 48–55 (2013).

36. Pilarzyk, K. a kol. Ztráta funkce fosfodiesterázy 11A4 ukazuje, že nedávné a vzdálené dlouhodobé vzpomínky mohou být odpojeny. Curr. Biol. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Te Společenský přenos asociativního strachu u hlodavců – individuální rozdíly v podmiňování strachu, Proxy Vol. 17 (Springer, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Orbitofrontální kortex není nezbytný pro získání nebo vzdálené vyvolání sociálně přenosných potravinových preferencí. Chovej se. Brain Res. 208, 243–249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS Samostatné nervové dráhy zpracovávají různé náklady na rozhodování. Nat. Neurosci. 9, 1161–1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Te orbitofrontální kůra a dále: Od afektu k rozhodování. Prog. Neurobiol. 86, 216–244 (2008).

41. Wallis, JD Mezidruhové studie orbitofrontálního kortexu a rozhodování na základě hodnot. Nat. Neurosci. 15, 13–19 (2012).

42. Izquierdo, A. Funkční heterogenita v rámci potkaního orbitofrontálního kortexu v učení o odměně a rozhodování. J. Neurosci. 37, 10529–10540 (2017).

43. Randesi, M. a kol. Pohlavní rozdíly po chronickém stresu v expresi genů souvisejících s opioidem, stresem a neuroplasticitou v hippocampu potkana. Neurobiol. Stres 8, 33–41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Kontextový mozek: implikace pro podmiňování strachu, zánik a psychopatologii. Nat. Neurosci. 14, 417–428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Mikrostimulace odhaluje protichůdné vlivy prelimbické a infralimbické kůry na projev podmíněného strachu. Učit se. Mem. 13, 728-733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ Oddělitelné role prelimbických a infralimbických kortexů, ventrálního hipokampu a bazolaterální amygdaly při vyjádření a zániku podmíněného strachu. Neuropsychopharmacology 36, 529–538 (2011).

47. Baran, SE, Armstrong, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD Chronický stres a rozdíly mezi pohlavími ve vzpomínce na podmiňování strachu a zánik. Neurobiol. Učit se. Mem. 91, 323–332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. Pohlavní rozdíly v regulaci strachu a chování při hledání odměny v úkolu diskriminace strach-bezpečí-odměna. Chovej se. Brain Res. 368, 111903 (2019).

49. Day, HLL & Stevenson, CW Te neurobiologický základ pohlavních rozdílů v naučeném strachu a jeho inhibici. Eur. J. Neurosci. 52, 2466–2486 (2020).

50. van Hasselt, FN a kol. Individuální variace v péči o matku v raném věku korelují s rozhodováním v pozdějším věku a expresí c-fos v prefrontálních subregionech potkanů. PLoS ONE 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM Pohlavní rozdíly v hladinách proteinů spojených s myelinem uvnitř a hustotě projekcí mezi orbitálním frontálním kortexem a dorzálním striatem dospělých potkanů: Důsledky pro inhibiční kontrolu. Neuroscience 300, 286–296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. Pohlavní rozdíly ve zvířecích modelech rozhodování. J. Neurosci. Res. 95, 260–269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ Aktivita v prelimbické kůře je nezbytná pro vyjádření naučené, nikoli však vrozené. Strach. J. Neurosci. 27, 840-844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ Trvalé podmíněné odpovědi v prelimbických prefrontálních neuronech korelují s výrazem strachu a selháním extinkce. J. Neurosci. 29, 8474–8482 (2009).

55. Fenton, GE a kol. Přetrvávající prelimbická kortexová aktivita přispívá ke zvýšenému projevu naučeného strachu u žen. Učit se. Mem. 21, 55–60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW Rozdíly mezi pohlavími v projevu naučeného strachu a vymírání zahrnují změněné gama oscilace v mediálním prefrontálním kortexu. Neurobiol. Učit se. Mem. 135, 66–72 (2016).

57. Kirry, AJ a kol. Signalizace polypeptidu aktivujícího hypofyzární adenylátcyklázu (PACAP) v prefrontálním kortexu moduluje u samic potkanů ​​učení strachu, ale ne prostorovou pracovní paměť. Neurofarmakologie 133, 145–154 (2018).

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW Rozdíly mezi pohlavími v rozlišování sluchového strachu jsou spojeny se změněnou funkcí mediálního prefrontálního kortexu. Sci. Rep. 10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. Alarmový feromon zvyšuje hypertermii vyvolanou stresem u potkanů. Physiol. Chovej se. 72, 45-50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: Bezplatný, všestranný software pro protokolování událostí s otevřeným zdrojovým kódem pro kódování videa/audia a živé pozorování. Metody Ecol. Evol. 7, 1325–1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. Extinkce a aportování plus zánik podmíněného strachu rozdílně aktivují mediální prefrontální kůru a amygdalu u potkanů. Přední. Chovej se. Neurosci. 9, 1–10 (2016).

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar a prefrontální cesty do laterálního hypotalamu jsou aktivovány naučeným podnětem, který stimuluje jedení. J. Neurosci. 25, 8295-8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te Rat Brain in Stereotaxic Coordinates: Hard Cover. (Elsevier, 2006).