Echinakosid z cistanche tubulosa účinně léčí osteoporózu
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Část Ⅰ: Účinnost a bezpečnost echinakosidu v modelu krysí osteopenie
Xiaolin Yang, 1 Fei Li, 2 Yanan Yang, 3 Jinyang Shen, 2 Run Zou, 2 Panpan Zhu, 2 Chunfeng Zhang, 2 Zhonglin Yang, 2 a Ping Li
Cílem této studie bylo prozkoumat účinnost a bezpečnostEchinakosid(ECH) za použití krysího modelu osteopenie. Čtyřicet osm 6-měsíčních samic potkanů Sprague-Dawley bylo náhodně rozděleno do jedné skupiny s falešnou operací (SHAM) a pěti podskupin s OVX (ovariektomií): SHAM s vehikulem 0,5 procenta sodné soli karboxymethylcelulózy ( 0,5 procenta CMC-Na) a OVX s vehikulem (OVX), OVX s 17 estradiolem (E2) a OVX sECH (echinakosid) odstupňovaných dávek (ECH (echinakosid)ECH-L, ECH-M a ECH-H). Účinky ECH(echinakosid)a E2 na biochemické parametry séra, kostní minerální hustotu (BMD), biomechanické vlastnosti kosti, kostní mikroarchitekturu a imunohistochemii a byla také hodnocena hodnocení bezpečnosti. Výsledky ukázaly, že ECH(echinakosid)léčby zlepšily celkovou BMD femuru, kostní mikroarchitekturu a biomechanické vlastnosti a snížily hladiny sérových markerů ve srovnání se skupinou OVX. Navíc ECH (echinakosid)podání významně zvýšilo hladinu osteoprotegerinu (OPG) a snížilo hladinu receptorového aktivátoru ligandu nukleárního faktoru (RANKL) v séru i v proximálním femuru. Důležité je,ECH (echinakosid)léčba zlepšila lipidové parametry bez celkového výskytu nežádoucích účinků na dělohu a mléčnou žlázu ve srovnání se skupinami OVX a SHAM. Tato studie prokázala, že podáváníECH (echinakosid) po dobu 12 týdnů může účinně a bezpečně zabránit indukci OVXosteoporózau potkanů zvýšením poměru OPG/RANKL.
cistanche echinacoside může léčit osteoporózu
1. Úvod
Osteoporózaje jeden druh metabolické poruchy skeletu charakterizovaný úbytkem kostní hmoty a mikroarchitektonickým poškozením kostní tkáně, což může vést ke křehkosti skeletu a zlomeninám. Již se stala jednou z hlavních hrozeb pro zdraví stárnoucí populace [1, 2], o čemž svědčí odhadovaná prevalence 200 milionů lidí na celém světě a roční související náklady na tuto nemoc přesáhly přibližně 10 miliard dolarů [ 3, 4]. Deplece estrogenu narušuje kostní homeostázu, mění diferenciaci a aktivitu osteoblastů a osteoklastů, a proto hrála velmi důležitou roli v iniciaci a rozvojiosteoporózaa ukázalo se, že je hlavním rizikovým faktorem pro rozvoj postmenopauzyosteoporózau žen [5, 6]. Estradiolové estery a konjugované estrogeny mají silné supresivní účinky naosteoporotickéčinnosti v kosti [7]. V současné době jsou podávání bisfosfonátů a estrogenní substituční terapie (ERT) dvě hlavní formy léčby a prevenceosteoporózaa dokonce snížit výskyt zlomenin v postmenopauzálním obdobíosteoporózaženy [8, 9]. Bisfosfonáty však vedou k atraumatické zlomenině kosti v důsledku adynamického stavu podobného tomu, který je popsán u pacientů na chronické udržovací hemodialýze [10] a dlouhodobá léčba estrogeny je provázena nežádoucími vedlejšími účinky, zejména vyšším výskytem koronárních srdečních onemocnění. onemocnění, invazivní karcinom prsu, mrtvice, plicní embolie, karcinom endometria, kolorektální karcinom a zlomenina kyčle [11]. Tedy nové účinné a bezpečné léčebné strategie proosteoporózajsou velmi potřebné.
Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight (parazitická rostlina Orobanchaceae)je široce rozšířen v severní Africe a asijských zemích a stonky C. tubulosa se běžně používají k léčbě deficitu ledvin a neurodegenerativních onemocnění jako podpůrný prostředek [12].ECH (echinakosid) (Obrázek 1) je jednou z hlavních složek slavné tradiční čínské medicíny HerbaCistanches(stonkyCistanchedeserticola,Cistanchesalsa, popřCistanchetubulosa) [13]. Výzkum to prokázalECH (echinakosid), jako přírodní polyfenolová sloučenina, má různé druhy farmakologických aktivit, jako jsou antioxidační, protizánětlivé, neuroprotektivní, hepatoprotektivní, oxid dusnatý pohlcující radikály [14] a vazodilatační [15]. V současné době nejsou k dispozici žádné zprávy o terapeutických účincíchECH (echinakosid) a jeho záchranaECH (echinakosid) naosteoporózav modelech potkanů OVX.
Obrázek 1: Chemická struktura echinakosidu z cistanche tubulosa
Naše předchozí studie to ukázalaECH (echinakosid)může stimulovat kostní regeneraci zvýšením poměru OPG/RANKL v buňkách MC3T3-E1 [16]. To naznačujeECH (echinakosid)vyžaduje další vyšetřování. Abychom to dále prozkoumali, provedli jsme experimenty na krysím modelu OVX [17], standardním modelu pro zkoumání morfologických aECH (echinakosid)změny po různé léčběosteoporóza. V této zprávě jsme hodnotili účinky 12 týdnůECH (echinakosid)léčby biochemických parametrů v séru, kvalitě kostí, kostní mikroarchitektuře a imunohistochemii, stejně jako bezpečnostních ukazatelů včetně lipidových parametrů, karcinoembryonálního antigenu (CEA) a hladin rakovinného antigenu 125 (CA-125) v séru, děloze a prsu histologie žlázy u OVX potkanů. A co je nejdůležitější, nejprve jsme informovali o účinkuECH (echinakosid)na systému OPG/RANKL vyšetřením hladin OPG/RANKL v séru a kostech.
Cistanche tubulosa
2. Materiály a metody
2.1. Rostlinné materiály a zvířata.
Čerstvé stonkyCistanchetubulosa(Schrenk) R. Wight, sklizené v listopadu 2010 v Xinjiang, Čína, byly zakoupeny od Institutu ekologie a geografie Čínské akademie věd v Xinjiang, Čína. Materiály byly identifikovány profesorem Ping Li, School of Traditional Chinese Medicine, China Pharmaceutical University. Vzorek voucheru (č. 02369433) byl uložen v naší laboratoři na China Pharmaceutical University.
Všechny materiály byly sušeny při teplotě místnosti do konstantní hmotnosti.ECH (echinakosid)se oddělil a čistil od ethanolového extraktuCistanchetubulosa(Schenk) R. Wight naší laboratoří podle metody popsané dříve [18] s mírnou modifikací a její struktura byla potvrzena UV, IR, MS a NMR spektroskopií. Jeho čistota (98,5 procent) byla stanovena pomocí Agilent 1260 Series HPLC s DAD detektorem (Agilent Scientific, Co., USA). 17-estradiol (E2, Sigma; čistota větší nebo rovna 98 procentům) byl použit jako pozitivní kontrola.
Echinacoside z Cistanche tubulosa
2.2. Farmaceutická léčba.
Potkani byli náhodně rozděleni do šesti skupin (8 potkanů v každé skupině): falešně operované (SHAM), bilaterálně ovariektomizované (OVX), léčba OVX a E2 a tři další OVX a různé dávkyECH (echinakosid)léčebné skupiny. Všechny krysy byly anestetizovány intraperitoneální (ip) injekcí 300 mg/kg chloralhydrátu (Sinopharm, Čína) a poté byly v týdnu 0 odstraněny ovariektomie a skupina SHAM podstoupila falešnou ovariektomii. Chirurgický postup byl proveden za aseptických podmínek podle protokolu University of China Pharmaceutical University Animal Care. Krysy byly ponechány neléčené po dobu 4 týdnů, aby se umožnilo potkanům zotavit se a rozvinout osteopenie. Po 4 týdnech potkani ve skupině OVX a E2 dostávali denně intragastrické (ig) podávání E2 (50 g/kg/den) po dobu 12 týdnů; falešné a OVX krysy byly podrobeny dennímu intragastrickému podávání 0,5 procenta CMC-Na (Sinopharm, Čína) jako vehikula. E2 aECH (echinakosid)byly rozpuštěny ve vehikulu 0,5 procenta CMC-Na a potkani v OVX aECH (echinakosid)skupiny dostávaly denně podávání igECH (echinakosid)(ECH-L, 30 mg/kg/den; ECH-M, 90 mg/kg/den; a ECH-H, 270 mg/kg/den) po dobu 12 týdnů. Tělesná hmotnost byla měřena týdně aECH (echinakosid)dávka byla odpovídajícím způsobem upravena.
2.3. Eutanazie zvířat a odběr vzorků.
Při pitvě byla brzy ráno v celkové anestezii odebrána krev z krční tepny. Krev se nechala srazit a centrifugovala při 3,000 x g po dobu 10 minut. Sérum bylo sklizeno a skladováno při -20 °C až do použití pro biochemické testy. Po eutanazii zvířat byly izolovány femory pro BMD, Micro-CT a ECH (echinakosid) a imunohistochemická analýza a mléčné žlázy a děloha byly odstraněny, zbaveny tuku a fixovány v 10% pufrovaném formaldehydovém roztoku fosforečnanu sodného (PBS) a poté skladovány při 4 °C, dokud nebyly použity pro histologické a imunohistochemické vyhodnocení k posouzení bezpečnostECH (echinakosid)
2.4. Posouzení účinnosti.
2.4.1. Biochemická analýza séra.
Je známo, že alkalická fosfatáza (ALP) souvisí s kostním metabolismem a diferenciací osteoblastů a její aktivita je jedním z nejčastějších ukazatelů diferenciace osteoblastů a osteogenních vlastností [19]. Hladina ALP v séru byla tedy stanovena pomocí soupravy pro stanovení aktivity ALP (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute; Nanjing, Čína). Kyselá fosfatáza 5b rezistentní na tartrát (TRACP-5b), secernovaná osteoklasty, koreluje s aktivitou kostní resorpce při abnormálním kostním metabolismu [20]. U markerů kostní resorpce byly hladiny TRACP-5b měřeny pomocí souprav ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) (R&D Systems Inc.) v séru. Sérový OPG a RANKL byly také testovány pomocí souprav ELISA (R&D Systems Inc.). Všechna měření souprav ELISA byla provedena podle protokolů poskytnutých výrobci.
2.4.2.Měření kostní minerální hustoty.
Minerální hustota kostí (BMD) pravé totální femory byla měřena pomocí rentgenové absorbometrie s duální energií Discovery W (DEXA, Hologic Inc., Boston MA, USA) vybavené vhodným softwarem (vydání 13.1.2) pro hodnocení hustoty kostí u malých laboratorních zvířat. Po skenování byla pro statistickou analýzu získána BMD v pravém totálním femoru. Výzkumník provádějící měření si nebyl vědom léčby, kterou krysy dostaly.
2.5. Statistika.
Všechny výsledky jsou uvedeny jako průměr ± standardní odchylka (SD). Statistické rozdíly mezi falešnou kontrolou, OVX kontrolou a různými léčebnými skupinami byly analyzovány pomocí jednocestné analýzy rozptylu (ANOVA) následované post hoc vícenásobným srovnáním pomocí Fisherova t-testu s nejmenším významným rozdílem (LSD). Všechny výpočty byly provedeny pomocí SPSS verze 15.0 pro Windows (SPSS, Chicago, IL, USA). Ve všech analýzách byla P-hodnota<0.05 was="" considered="" to="" be="" statistically="">
3. Výsledky
3.1. Posouzení účinnosti
3.1.1. Biochemická analýza séra.
Hladiny ALP v séru a markery kostního obratu TRACP{0}}b byly hodnoceny na konci léčby, OVX vedl k významnému zvýšení hladin ALP a TRACP{1}}b v séru ve srovnání se skupinami s falešnou operací. Po podání echinakosidu nebo E2 byly hladiny ALP a TRACP-5b v séru významně sníženy ve všech třech skupinách echinakosidu nebo skupině E2. Navíc vysoká dávka echinakosidu měla významně nejnižší hladiny 25,82 procenta a 38,05 procenta ve srovnání se skupinou OVX (P< 0.01).="" all="" three="" doses="" of="" echinacoside="" treatments="" had="" a="" similar="" effect="" as="" e2="" in="" changing="" bone="" turnover="" markers="">< 0.05).="" at="" the="" end="" of="" the="" protocol,="" assays="" for="" serum="" opg="" and="" rankl="" levels="" were="" performed.="" all="" doses="" of="" echinacoside="" treatment="" groups="" had="" significantly="" higher="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios,="" as="" well="" as="" significantly="" lower="" rankl="" levels="" than="" e2-treated="" or="" vehicle-treated="" ovx="" groups="" (table="" 1).="" the="" highest="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios="" were="" observed="" in="" the="" ech-h="">(Echinakosid) léčebná skupina, 150,14 procenta, respektive 197,64 procenta, ve srovnání se skupinou OVX (P<0.01). however,="" no="" differences="" in="" rankl="" levels="" and="" the="" opg/rankl="" ratio="" were="" observed="" in="" the="" e2="" group,="" as="" compared="" with="" the="" ovx="">
3.1.2. Hodnocení BMD.
Výsledky celkové BMD femuru pomocí DXA jsou uvedeny v tabulce 2. Podle očekávání byla celková BMD femuru snížena pomocí OVX ve srovnání se skupinou SHAM (P< 0.01).="" however,="" all="" the="" treated="" groups="" significantly="" increased="" bmd="" than="" the="" ovx="" group="" after="" 12="" weeks="" of="" treatment="">< 0.01),="" but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" between="" treated="" groups.="" the="" three="">(echinakosid)- léčené skupiny zvýšily celkovou BMD femuru na 109,25 procenta, 115,27 procenta a 124,53 procenta, v tomto pořadí, ve srovnání se skupinou OVX. E2 zvýšila celkovou BMD femuru na 113,82 procenta ve srovnání se skupinou OVX.
3.1.3. Mikropočítačová tomografie (Micro-CT).
Mikro-CT skenování je velmi přesná metoda měření vertebrální architektury, protože kvantifikuje trabekulární strukturu ve třech rozměrech. Kvantitativní výsledky v oblasti metafýzy v blízkosti růstové ploténky distálního femuru z Micro-CT hodnocení byly vyjádřeny jako BV/TV, Tb. N, Tb.Sp, Tb.Th a SMI v Tabulce 2. Parametry Trabecular Micro-CT v Tabulce 2 ukázaly, že OVX způsobil významný pokles BV/TV, Tb. N a Tb.Th a zvyšuje se Tb.Sp a SMI (P< 0.01).="" furthermore,="" the="" indices="" bv/tv,="" tb.="" n,="" and="" tb.="" thin="" ech-h="">(echinakosid)skupiny byly významně vyšší než ve skupině OVX (P< 0.01="" for="" bv/tv,="" and="" tb.th,="">< 0.05="" for="" tb.n),="" and="" ech-h="">(echinakosid)léčba významně zvýšila hodnoty BV/TV o 169,23 procenta, Tb.N o 157,73 procenta a Tb. Th o 148,23 procenta ve srovnání se skupinou OVX. Kromě toho ECH-H také zabránil OVX-indukovanému zvýšení hladin Tb.Sp a SMI (P<0.01 for="" tb.sp,="">< 0.05="" for="" smi).="" the="" preventive="" effects="" of="" echinacoside="" on="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" deterioration="" are="" further="" proved="" by="" the="" 3d="" micro-ct="" images="" (ovx="" group="" presented="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" trabecular="" number="" and="" trabecular="" area="" when="" compared="" with="" the="" sham="" group.="" echinacoside="" and="" e2="" partially="" prevented="" ovx="" induced="" bone="" loss="" and="" significantly="" improved="" the="" trabecular="" bone="" mass="" and="">
3.1.4. Tříbodové ohýbání femuru.
Výsledky experimentu biomechanického tříbodového ohybu jsou uvedeny v tabulce 2. Ve skupině OVX byly pozorovány významné poklesy mezního zatížení, tuhosti a absorpce energie ve srovnání se skupinou SHAM (P< 0.01).="" echinacoside="" treatment="" improved="" bone="" mechinacosideanical="" strength,="" evidenced="" by="" increased="" levels="" of="" ultimate="" load,="" stiffness,="" and="" energy="" absorption=""><0.01 for="" ultimate="" load="" and="" energy="" absorption,="">< 0.05="" for="" stiffness);="" however,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" the="" three="">ECH (Echinakosid)-léčené skupiny. mChinakosideanické hodnoty ECH-H(Echinakosid)skupina léčená byla zvýšena o 55,51 procenta pro maximální zatížení, 34,05 procenta pro tuhost a 183,33 procenta pro absorpci energie ve srovnání se skupinou OVX léčenou vehikulem (P<0.01). e2="" increased="" ultimate="" load="" by="" 49.51%,="" stiffness="" by="" 28.63%,="" and="" energy="" absorption="" by="" 55.56%="" compared="" to="" the="" ovx="" group,="" respectively,="" but="" its="" effect="" on="" mechinacosideanical="" values="" was="" less="" than="" the="">ECH-H (echinakosid)skupina.
3.2. Posouzení bezpečnosti
3.2.1. Analýza séra.
Jsou shrnuty účinky na lipidový profil. V týdnu 12 vykazovala E2 zvýšení hladin TC a TG oproti výchozí hodnotě. Tři dávky ECH (echinakosid)(ECH-L,ECH-M aECH-H) snížila hladiny TC a TG ve srovnání se skupinami OVX a SHAM. Kromě toho ECH-H(echinakosid)skupina snížila hladiny TG významně o 30,87 procenta oproti OVX (P< 0.05),="" or="" by="" 19.07%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.05).="" moreover,="" the="" effects="" of="">ECH (Echinakosid) -L aECH (Echinakosid)-M na hladinách TG byly marginální. Na konci protokolu byla shromážděna měření hladin CEA a CA-125 v séru, jak je uvedeno v tabulce 3. Skupina E2 zvýšila hladiny CEA a CA-125 významně o 54,38 procenta a 59,58 procenta oproti OVX ( P< 0.01),="" or="" by="" 49.53%,="" 28.87%="" versus="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" ech="">Echinakosid) podání vedlo k významnému snížení hladin CA-125 v séru (P< 0.05)="" compared="" to="" the="" sham="" group,="" but="" echinacoside="" did="" not="" show="" any="" significant="" effect="" on="" the="" serum="" cea="" concentrations="" versus="" the="" sham="" group="" or="" ovx="" group.="" in="" addition,="" the="" ech-h="">echinakosid)skupina snížila hladiny CA-125 významně o 29,31 procenta ve srovnání se skupinou OVX (P<0.05), or="" by="" 42.91%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" echinacoside="" administration="" resulted="" in="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" serum="" ca-125="" and="" cea="" levels="">< 0.01)="" compared="" to="" the="" e2="" group.="" moreover,="" the="" ech-h="">echinakosid)skupina snížila hladiny CA-125 a CEA významně o 44,30 procenta a 64,70 procenta ve srovnání se skupinou E2.
3.2.2. Histologie a imunohistochemie dělohy a mléčné žlázy.
Nejčastější nežádoucí účinky dělohy a mléčných žláz nebyly pozorovány u všech skupin, ale ne u skupiny E2 (tabulka 3). E2 (50 g/kg/den) podávání po dobu 12 týdnů zvýšilo tloušťku endometria a proliferaci mléčné žlázy ve srovnání se skupinou OVX nebo SHAM. Dále, tři mléčné žlázy exprese CEA mohly být také detekovány ve skupině E2 imunohistochemickou analýzou, ale žádná děloha. Skupiny léčené echinakosidem nebyly spojeny s žádnou abnormalitou dělohy a mléčné žlázy.
Reference
[1]T. Nakamura, T. Matsumoto, T. Sugimoto a M. Shiraki, "Studie závislosti odpovědi na dávce denosumabu na kostní minerální hustotě a markerech kostního obratu u japonských postmenopauzálních žen sosteoporóza," OsteoporózaInternational, sv. 23, s. 1131–1140, 2012.
[2]XL Wang, LZ Zhen, G. Zhang, MS Wong, L. Qin a XS Yao, "Osteogenní účinky flavonoidních aglykonů z osteoprotektivní frakce Drynaria in vitro eficacy study," Phytomedicine, sv. 18, č. 10, str. 868–872, 2011.
[3]JY Reginster a N. Burlet, "Osteoporóza: stále rostoucí prevalence," Bone, sv. 38, č. 2, příloha 1, s. S4–S9, 2006.
[4]A. Katrina a BE McDonald, Experimentální a konečný prvek vyšetřováníEchinakosidkompresních zlomenin obratlů [Ph.D. disertační práce], Queensland University of TEchinacosidenology, 2009.
[5]SC Manolagas, „Narození a smrt kostních buněk: základní regulačníEchinakosida důsledky pro patogenezi a léčbuosteoporóza"Endocrine Reviews, sv. 21, č. 2, s. 115–137, 2000.
[6]BL Riggs, S. Khosla a LJ Melton, "Sex steroids and the construction and konzervation of the adult skeleton," Endocrine Reviews, sv. 23, č. 3, s. 279–302, 2002.
[7]M. Tezval, EK Stuermer, S. Sehmisch a kol., "Zlepšení kvality trochanterické kosti vosteoporózamodel po krátkodobé léčbě parathormonem: nový mechinakosideánský test pro trochanterickou oblast stehenní kosti potkana,“OsteoporózaInternational, sv. 21, č. 2, s. 251–261, 2010.
[8]LN Li, Z. Zeng a GP Cai, "Srovnání neo a naringinu na proliferaci a osteogenní diferenciaci v MC3T3-E1," Phytomedicine, sv. 18, s. 985–989, 2011.
[9]W. Qi, YB Yan, W. Lei, ZX Wu, Y. Zhang a D. Liu, „Prevence nepoužíváníosteoporózau potkanů extraktem Cordyceps Sinensis,"OsteoporózaInternational, sv. 9, s. 2347–2357, 2012.
[10]CV Odvina, JE Zerwekh, DS Rao, N. Maalouf, FA Gottschalk a CYC Pak, "Závažně potlačený kostní obrat: potenciální komplikace terapie alendronátem," Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, sv. 90, č. 3, s. 1294–1301, 2005.
[11] Psací skupina pro vyšetřovatele iniciativy Women's Health Initiative, "Riziko a přínos estrogenu a progestinu u zdravých žen po menopauze," The Journal of the American Medical Association, sv. 288, s. 321–333, 2002.
[12]H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa a kol., "NovéfenylethanoidglykosidyzCistanchetubulosa"Chemical & Pharmaceutical Bulletin, sv. 35, str. 3309–3314, 1987.
[13]O. Zhao, J. Gao, W. Li a D. Cai, „Neurotrofické a neurozáchranné účinkyEchinakosidv subakutním MPTP myším modelu Parkinsonovy choroby," Brain Research, sv. 1346, str. 224–236, 2010.
[14]CQ Jia, H. Shi, XM Wu, YZ Li, JJ Chen a PF Tu, "UrčeníEchinakosidv krysím séru pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s reverzní fází s ultrafialovou detekcí a její aplikace na farmakokinetiku a biologickou dostupnost," Journal of Chromatography B, sv. 844, č. 2, str. 308–313, 2006.
[15]WJ He, TH Fang, X. Ma, K. Zhang, ZZ Ma a PF Tu,“Echinakosidvyvolává na endotelu závislou relaxaci v kruzích aorty potkana cestou NO-cGMP,“ Planta Medica, sv. 75, č. 13, str. 1400–1404, 2009.
[16]F. Li, YN Yang, PP Zhu a kol., "Echinakosidpodporuje regeneraci kostí zvýšením poměru OPG/RANKL v buňkách MC3T3-E1,“ Fitoterapia, sv. 8, str. 1443–1450, 2012.
[17]A. Ishihara, T. Sasaki, K. Debari a kol., "Efekty ovariektomie na kostní morfologii v maxilách zralých krys," Journal of Electron Microscopy, sv. 48, č.p. 4, s. 465–469, 1999.
[18]L. Lei, ZH Song, PF Tu, LJ Wu a FK Chen, „OdděleníEchinakosidpreparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi," Chinese Journal of Chromatography, sv. 19, č. 3, s. 200–202, 2001.
[19]L. Malaval, D. Modrowski, AK Gupta a JE Aubin, "Buněčná exprese proteinů souvisejících s kostí během in vitro osteogeneze v kulturách stromálních buněk krysí kostní dřeně," Journal of Cellular Physiology, sv. 158, č.p. 3, s. 555–572, 1994.
[20]W. Qi, YB Yan, W. Lei, ZX Wu, Y. Zhang, D. Liu a kol., „Prevence zneužíváníosteoporózau potkanů extraktem Cordyceps Sinensis,"OsteoporózaInternational, sv. 9, s. 2347–2357, 2012.
