Část 2 Preventivní účinky fenylethanolových glykosidů z Cistanche Tubulosa na albuminem indukovanou jaterní fibrózu u krys.
Mar 06, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Exprese NF-KB p65 a kolagenu I po lékové intervenci v buňkách HSC-T6 Za účelem charakterizace signálů jaterní fibrózy byly pomocí testu RT-PCR určeny dva klíčové regulační geny v játrech. Data ukázala, že buňky tHSC-T6 z kontrolní skupiny měly nižší hladiny NF-κB a kolagenu typu I mRNA. Naopak TGF- 1 indukoval buňky HSC-T6, aby výrazně zvýšily regulaci NF-κB (P < 0.01)="" a="" col-i="" (p="">< 0,01)="" mrna="" s="" hladinami="" vyššími="" než="" ti="" v="" kontrolní="" skupině.="" v="" přítomnosti="" různých="" koncentrací="">fenylethanoidní glykosid z cistanche), výsledky NF-κB p65 [P NF-κB=0,001 pro 100 ug/ml, P NF-κB=0,002 pro 75 ug/ml, P NF-κB {{ 11}}.007 pro 50 ug/ml a P NF-κB=0.012 pro 25 ug/ml, v tomto pořadí] a Col-I [P Col-I=0.006, P Col -I=0.009, P Col-I=0.014, P Col-I=0.019, v tomto pořadí] vykazovaly snížené exprese těchto mRNA (obr. 7).
Western blot analýza hladiny kolagenu I po lékové intervenci v buňkách HSC-T6 Obrázek 8 ukazuje hladiny exprese proteinu kolagenu I v buňkách HSC-T6 různých experimentálních skupin. Hladina exprese proteinu kolagenu I byla významně snížena v různých dávkových skupinách CPhG(fenylethanoidní glykosid z cistanche)(100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml a 25 ug/ml) ve srovnání se skupinou TGF- 1
Diskuse
CPhGs(fenylethanoidní glykosid z cistanche)je fenylethanoidní glykosid izolovaný a čištěný z oddenku Cistanche, který se používá jako tradiční čínská bylinná medicína. V posledních letech se ukázalo, že CPhG mají silnou schopnost předcházet poškození jater [20]. Proto jsme se zaměřili na zkoumání, zda CPhG mají inhibiční účinky na fibrózu hepatitidy způsobenou BSA-indukovanou jaterní fibrózou u potkanů. BJRG se běžně používá jako terapeutické léčivo pro jaterní fibrózu v Číně. Je vyroben z želvího krunýře. Radix Paeonia rubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis atd. mají účinky na doplnění Qi a krve, zmírnění únavy, změkčení uzlin. Předchozí studie navíc ukazují, že má zjevnou funkci blokování časné jaterní fibrózy, inhibici proliferace buněk ukládajících tuk a snížení syntézy kolagenu [21]. Proto byl BJRG v této studii použit jako pozitivní lék.
Patologické změny jaterní fibrózy u potkanů vyvolané injekcemi BSA jsou podobné těm u lidské portální cirhózy [22]. CPhGs(fenylethanoidní glykosid z cistanche)v závislosti na dávce zmírnil stupeň jaterní fibrózy a inhiboval transformaci HSC na buňky podobné myofibroblastům, snížil zvýšené hladiny sérových ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 a jaterního indexu a výrazně potlačil expresi kolagenu I, kolagenu III a TGF- 1 v jaterní tkáni. Stádia jaterní fibrózy korelují se sérovými hladinami HA, LN a IV-C, které jako markery mohou hrát roli při detekci stupně jaterní fibrózy [23]. Bylo popsáno, že HA je hlavním zdrojem extracelulární matrix. IV-C jako základní prvek bazální membrány bude hojně syntetizován a silně ukládán v dřívějších fázích jaterní cirhózy. Sérové hladiny LN a IV-C jsou indexy rychlosti obratu bazální membrány a ukazují stupeň fibrózy v oblasti portálu a sinusových kapilár [24]. PC III je markerem v diagnostice jaterní fibrózy a časné cirhózy, ale jeho senzitivita a specificita není vysoká a v mnoha referencích není žádný významný rozdíl mezi jednotlivými stádii fibrózy [24, 25].
Tato studie dosáhla podobného výsledku. Kromě toho pozorování H&E a Massonova trichromem barveného řezu vykazuje normální jaterní tkáně s odlišnými jaterními lalůčky a jaterními sinusoidami. Struktura jaterní tkáně v modelové skupině byla narušena a jaterní tkáň a jaterní sinusoida byly nahrazeny velkým množstvím pojivové tkáně. V léčebných skupinách však bylo pozorováno významné zlepšení ve srovnání s modelovou skupinou. Důležité je, že exprese kolagenu typu I a kolagenu typu III hraje zásadní roli ve vývoji jaterní fibrózy, jejíž blokování může zabránit a léčit jaterní fibrózu. Tvorba a ukládání kolagenu typu I a kolagenu typu III v jaterní tkáni by tedy mohla sloužit jako důležitý determinant účinnosti proti jaterní fibróze. TGF- 1 je také důležitým profibrogenním cytokinem při poškození jater a je biologicky aktivní s četnými farmakologickými účinky [26]. K udržení tkáňové homeostázy je nutná rovnováha mezi těmito akcemi. Aberantní exprese TGF- 1 se podílí na patogenezi jaterních onemocnění [27, 28]. Je známo, že TGF- 1 je klíčový cytokin, který se podílí na časných stadiích jaterní fibrózy.
Oxidační stres spouští TGF- 1, což má za následek stimulaci produkce a ukládání ECM [29]. Proto je jednou z účinných strategií výroby léku proti jaterní fibróze identifikace látek proti TGF- 1. Imunohistochemická analýza ukázala, že exprese kolagenu typu I, kolagenu typu III a TGF- 1 by mohla detekovat patologický proces jaterní fibrózy. Exprese kolagenu typu I, kolagenu typu III a TGF- 1 v léčených skupinách jsou sníženy, které byly významně nižší u vysokých dávek CPhG(fenylethanoidní glykosid z cistanche)a navrhli, že CPhGs je účinný inhibitor kolagenu typu I, kolagenu typu III a TGF- 1. CPhG pravděpodobně mohou zlepšit aktivitu kolagenázy, udržovat dynamickou rovnováhu syntézy a degradace ECM, a tak zpomalit a zabránit vzniku jaterní fibrózy. CPhGs(fenylethanoidní glykosid z cistanche)nejenže by mohly zlepšit BSA-indukovanou jaterní fibrózu u potkanů, ale také by mohly být spojeny s inhibicí aktivace HSC in vitro. Předpokládá se, že aktivace HSC představuje klíčový krok fibrogeneze. V této studii výsledky ilustrovaly, že podávání CPhG od 25 do 100 ug/ml výrazně zeslabilo sníženou expresi NF-KB p65, expresi mRNA kolagenu I a expresi proteinu kolagenu I v HSC. NF-κB hraje důležitou roli v modulaci imunitní odpovědi na infekci nebo podněty [30]. Hromadění NF-κB v jaterních buňkách může vést k náboru zánětlivých cytokinů/mediátorů, a tak indukovat rozvoj fibrózy [31, 32]. Kromě toho je kolagen také citlivým indexem, který odráží úroveň fibrózy a tvoří asi 50 procent celkového proteinu ve fibrózních játrech [33].
V důsledku toho jsme předpokládali, že molekulární mechanismus proti hepatofibróze je spojen s CPhG(fenylethanoidní glykosid z cistanche)- zprostředkovaná inaktivace exprese NF-κB, ve které přínos přispívá k synergické roli zmírnění imunotoxicity a zánětlivého stresu v jaterní tkáni poškozené BSA, dále koriguje dysmetabolismus ke zlepšení jaterních funkcí.
Závěry
Závěrem lze říci, že naše studie naznačují, že CPhG(fenylethanoidní glykosid z cistanche)významně zmírňují rozsah jaterní fibrózy indukované BSA u potkanů. Jeho mechanismus může být alespoň částečně způsoben inhibičním účinkem CPhG na složení ECM a stimulací degradace ECM a/nebo přímou inhibicí syntézy kolagenu typu I, kolagenu typu III a exprese TGF{ {0}}. Proto jsme očekávali, že CPhG mohou být použity ve zdravotnických produktech nebo v klinických lécích pro prevenci fibrózy lidských jater. Budoucí studie jsou nutné ke stanovení účinnosti CPhG jako silného léku proti jaterní fibróze.
Zkratky
CPHG:Fenylethanolové glykosidy z cistanche; BSA: hovězí sérový albumin; HSC-T6: Jaterní hvězdicové buňky; Hyp: Hydroxyprolin; BJRG: Složené tablety Biejiarangan; TGF- 1: Transformující růstový faktor 1; ALT: alaninaminotransferáza; AST: aspartátaminotransferáza; HA: kyselina hyaluronová; LN: Laminin; PC III: prokolagen typu III; IV-C: kolagen typu IV; NF-KB: nukleární faktor kappa-lehký řetězec-zesilovač aktivovaných B buněk; RT-PCR: Reverzní transkriptáza-polymerázová řetězová reakce; SDS-PAGE: Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s dodecylsulfátem sodným.
Konkurenční zájmy Autoři prohlašují, že nemají žádné konkurenční zájmy. Autorské příspěvky TL, JZ, SPY, LM, MT a SLZ koncipovaly a koncipovaly experimenty. SPY, TL a JZ analyzovaly data. SPY a JZ napsali rukopis. TL, LM a JZ rukopis recenzovali. Všichni autoři přečetli a schválili konečný rukopis. Poděkování Tento výzkum byl podpořen Národní nadací přírodních věd Číny (81260624). Autoři by rádi vyjádřili své upřímné poděkování profesoru Tao Liuovi za jeho návrhy na zlepšení pro psaní této práce. Podrobnosti o autorovi 1 Katedra toxikologie, School of Public Health, Xinjiang Medical University, č. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011 Ujgurská autonomní oblast Xinjiang
Oblast, Čína. 2 Klíčová laboratoř pro ujgurskou medicínu, Institute of Materia Medica of Xinjiang, Urumqi 830004, Čína. 3 č. 140 Xinhua South Road, oblast Tianshan, Urumqi 830000 Xinjiang Ujgurská autonomní oblast, Čína. Přijato: 6. srpna 2015 Přijato: 24. listopadu 2015
Reference
Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Současný stav nových antifibrotických terapií u pacientů s chronickým onemocněním jater. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Jaterní hvězdicové buňky a jaterní fibróza. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
Hernandez-Gea V, Friedman SL. Patogeneze jaterní fibrózy. Annu Rev Pathol. 2011;6:425–56.
Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Přehledový článek: reverzibilita cirhózy. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Čínská akademie věd. 23. vyd. Čína: Redakční výbor Flora of China; 2013. str. 1–16.
Komise pro čínský lékopis Ministerstva zdravotnictví Čínské lidové republiky. Čínský lékopis, část 1. Čína: Nakladatelství chemického průmyslu; 2010. str. 126.
Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Pokrok ve výzkumu fenylethanoidních glykosidů z Cistanche tubulosa. Central South Pharm. 2012;10:692–5.
Li J, Huang D, He L. Účinek Rou Cong Rong(Herba Cistanches Deserticola) na reprodukční toxicitu u myší indukovanou glykosidem Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H a kol. ACE a inhibitory agregace krevních destiček z Tamarix Hojnacki Bunge (hostitelská rostlina Herba Cistanches) rostoucí v Xinjiang. Pharmacogn Mag. 2014;10(38):111–7.
Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P a kol. Zlepšení kolitidy vyvolané dextransulfátem sodným u myší pomocí extraktu z Cistanche tubulosa obohaceného echinakosidem. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.