ČÁST 1: Fenylethanolglykosidový lipozom inhibuje aktivaci HSC indukovanou PDGF prostřednictvím regulace signální dráhy FAK/PI3K/Akt

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye a Tao Liu 1,*

1 Katedra toxikologie, School of Public Health, Xinjiang Medical University, Xinjiang Ujgurská autonomní oblast, Xinyi Road č. 393, Urumqi 830011, Čína

2 Klíčová laboratoř pro ujgurskou medicínu, Institute of Materia Medica of Xinjiang, Ujgurská autonomní oblast Xinjiang, oblast Tianshan, Xinhua South Road č. 140, Urumqi 830004, Čína

Pro více informací prosím kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola má mnoho účinků, klikněte sem a dozvíte se více

Abstraktní: Cistanche tubulosaje tradiční čínská bylinná medicína, která se široce používá k regulaci imunity afenylethanoidové glykosidy(CPhG) patří mezi primární složky odpovědné za tuto činnost. Aplikace CPhG je však negativně ovlivněna jejich špatnou absorpcí a nízkou perorální utilizací. Cílená dodávka léčiv je důležitým směrem vývoje farmacie. Předchozí studie ukázaly, že CPhG by mohly blokovat vedení signálních drah v TGF-p1/smad a inhibovat aktivaci hepatických hvězdicových buněk (HSC). Cílem této studie bylo vyhodnotit účinek lipozomů CPhG proti jaterní fibróze inhibicí aktivace HSC, podporou apoptózy, blokováním buněčného cyklu, potlačením vedení signálních drah v fokální adhezní kináze (FAK)/fosfatidylinositol-3- kináza (PI3K)/protein kináza B(Akt), a stanovení jejich in vitro hepatoprotektivní aktivity. Studie uvolňování in vitro prokázaly, že lipozomy CPhG mají účinek prodlouženého uvolňování ve srovnání s léčivými CPhG. Proliferace HSC byla inhibována po ošetření liposomy CPhG (29,45, 14,72, 7,36 ug/ml), s hodnotami IC50 42,54 Rg/ml v testu MTT. Různé koncentrace CPhG liposomů by mohly inhibovat proliferaci HSC, podporovat apoptózu a blokovat buněčný cyklus. Metoda MTT ukázala zjevnou inhibici proliferace HSC po ošetření liposomem CPhG a rekombinantním krysím růstovým faktorem-BB(rrPDGF-BB) odvozeným od krevních destiček. Hladiny kolagenu-1, inhibitoru metalopeptidázy 1 (TIMP-1), aktinu hladkého svalstva (a-SMA) a fosforylovaného PI3K/Akt byly sníženy a matrix metaloproteinázy-1 (MMP{ {23}}) byla upregulována předběžnou úpravou různými koncentracemi lipozomů CPhG. Navíc 29,45 Rg/ml CPhG liposomů by mohlo snížit expresi proteinu FAK a fosforylovaného proteinu PI3K a Akt downstream od FAK nadměrnou expresí genu FAK. Tento experiment naznačuje, že lipozomy CPhG mohou inhibovat aktivaci HSC inhibicí FAK a poté snížením exprese fosforylovaného Akt/PI3K, čímž poskytují nové poznatky o aplikaci CPhG pro jaterní fibrózu.

klíčová slova: fenylethanoidové glykosidylipozom; jaterní hvězdicové buňky; proliferace; apoptóza; buněčný cyklus; FAK/PI3K/Akt,

faktory, jako je TGF-p1, alkohol, toxiny a steatóza, mohou vést k aktivaci HSC. PDGF může také vést k aktivaci HSC [4]. V současnosti terapeutické strategie zaměřené na HSC k prevenci jaterní fibrózy zahrnují inhibici aktivace, proliferace a buněčného cyklu HSC a také stimulaci apoptózy HSC [5].

Cistanche tubulosa(čeleď Orobanchaceae), parazitická rostlina, se hojně pěstuje v jižní oblasti Xinjiang v Číně.C. tubulosabylo prokázáno, že vykazuje různé aktivity, včetně posílení imunity organismu, zlepšení odolnosti organismu, výživy ledvin, léčby impotence a zvýšení inteligence;

1. Úvod

má také antioxidační vlastnosti a vlastnosti proti stárnutí [6]. Tato rostlina obsahuje fenylethanoidní glykosidy (CPhG), iridoidy a polysacharidy, z nichž CPhG jsou některé z hlavních aktivních bioaktivních druhů [7]. V předchozí studii jsme zjistili, že CPhG mohou blokovat vedení signálních drah v TGF-p1/smad, inhibovat aktivaci HSC a vykazovat preventivní účinky na jaterní fibrózu u potkanů ​​indukovanou hovězím sérovým albuminem [7,8]. CPhG však mají dobrou rozpustnost ve vodě a špatnou rozpustnost v lipidech a jsou ovlivněny vnějšími faktory, jako je kyselost a rozkladné enzymy, které snižují stabilitu a účinnost CPhG [9]. Po intragastrickém podání jsou CPhG v gastrointestinálním traktu potkanů ​​nestabilní a snadno by mohlo dojít k hydrolýze glykosidových vazeb. Perorální biologická dostupnost potkanů ​​byla pouze 0,83 procenta, takže je obtížné určit její terapeutickou roli [10]. Proto musíme najít bezpečné, účinné, trvalé a cílené antifibrotické léčivo pro HSC, abychom zlepšili jejich terapeutickou účinnost. Systémy pro dodávání léčiv nanočástic poskytují alternativní strategii k překonání těchto nedostatků kvůli jejich výhodám, včetně vysoké kapacity léku a dlouhého krevního oběhu [11]. Mají silnou afinitu k játrům a mohou přímo dodávat léky do buněk prostřednictvím endocytózy a fúze. Nemodifikované lipozomy jsou distribuovány především ve tkáních nebo orgánech vyvinutých retikuloendoteliálním systémem (RES) a mají funkci pasivně zacílit na játra [12]. Proto byly lipozomy CPhG připraveny membránovou disperzí a sekundární enkapsulací, aby se dosáhlo antifibrózního účinku. V této studii jsme se zaměřili na zkoumání účinků lipozomů CPhG na proliferaci HSC, apoptózu a buněčný cyklus, stejně jako jeho mechanismy.

2. Výsledky

2.1. Fyzikální vlastnosti CPhG liposomu

Fyzikální vlastnosti takto připravených lipozomů CPhG byly následující: Velikost částic byla (216,7 ± 3,47) nm, potenciál Zeta byl (-55,6 ± 1,3) mV. Jak je znázorněno na obrázku 1, částice byly kulaté, potažené stejnoměrnou tloušťkou na povrchu a distribuce velikosti částic byla stejnoměrná. Plnění léčivem a účinnost enkapsulace CPhG lipozomů byly (3,71 ± 0,32) procent a (38,46 ± 7,85) procent.

2.2. Uvolnění in vitro z CPhG lipozomů a CPhG

Odhadovaná kumulativní rychlost uvolňování byla vypočtena a vynesena do grafu jako funkce času pro CPhG lipozomy a CPhG (obrázek 2). V této studii; rychlost uvolňování CPhG po 12 hodinách byla normalizována na 100 procent, zatímco u lipozomů CPhG byla po 24 hodinách blízko 100 procent a rychlost uvolňování CPhG se s časem zvyšovala. Data byla analyzována pomocí různých modelů přizpůsobení pro mechanismy řízeného uvolňování, včetně rovnic nultého řádu, prvního řádu a Higuchiho rovnice. Proložené rovnice a korelační koeficienty pro tři modely uvolňování jsou uvedeny v tabulce 1.

Nejlepším modelem pro CPhG a lipozomy CPhG jsou Higuchiho rovnice a rovnice prvního řádu. Studie uvolňování CPhG liposomů in vitro neprokázala žádný nárazový efekt. Pro výpočet parametrů rozpouštění T50 (rozpouštění 50 procent) byla vybrána nejvhodnější distribuční funkce. Výsledky ukazují, že průměrný retenční čas CPhG liposomů je delší než CPhG a T50 CPhG liposomů je 9,39 h. Ve srovnání s 1,69 h pro CPhG vykazují lipozomy CPhG zjevný efekt prodlouženého uvolňování (tabulka 2).

Nejprve jsme zkoumali cytotoxické účinky lipozomů CPhG na HSC pomocí testu MTT in vitro. HSC byly vystaveny různým koncentracím liposomů CPhG v rozmezí od 0 do 117,79 µg/ml po dobu 24 hodin. Liposomy CPhG snižovaly životaschopnost HSC způsobem závislým na dávce a jejich hodnota IC50 byla 42,535 (např./ml. Účinek lipozomů CPhG (29,45, 14,72 a 7,36 ug/ml) na buňky při 24, 48 a 72 h je znázorněno na obrázku 3. Po ošetření liposomy CPhG byla proliferace HSC významně inhibována v různých časových bodech (obrázek 3).

Uvolňování laktátdehydrogenázy (LDH) HSC bylo detekováno po 24 hodinách léčby různými koncentracemi liposomu CPhG. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3. HSC ošetřené lipozomy CPhG neměly žádný významný účinek na uvolňování LDH.

2.4. Lipozomy CPhG indukují apoptózu HSC a zastavují buněčný cyklus

HSC byly vystaveny CPhG lipozomům (29,45, 14,72, 7,36 µg/ml) po dobu 24 hodin a bylo provedeno dvojité barvení annexinem-V-FITC/PE pro detekci apoptózy průtokovou cytometrií, jak je znázorněno na obrázku 4a. Celková apoptóza buněk se statisticky zvýšila ve srovnání s kontrolní skupinou (p < 0,05).="" po="" 24="" hodinách="" léčby="" na="" hsc="" pro="" každou="" dávkovou="" skupinu="" mohly="" lipozomy="" cphg="" (29,45="" ug/ml)="" indukovat="" pozdní="" apoptózu="" hsc="" a="" procento="" pozdních="" apoptotických="" buněk="" bylo="" vyšší="" než="" u="" časných="" apoptotických="" buněk.="" podíl="" časných="" apoptotických="" buněk="" byl="" mnohem="" vyšší="" než="" pozdně="" apoptotických="" buněk="" ve="" skupinách="" ošetřených="" cphg="" liposomem="" (14,72="" a="" 7,36="" |^g/ml).="" tyto="" výsledky="" jasně="" ukazují,="" že="" lipozomy="" cphg="" indukují="" apoptózu="" hepatocytů,="" zejména="" v="" pozdních="" stádiích="" hsc.="" kromě="" toho="" se="" celková="" apoptóza="" zvýšila="" s="" dávkou="" cphg="" liposomů.="" tyto="" výsledky="" naznačují,="" že="" lipozomy="" cphg="" mohou="" inhibovat="" aktivaci="" hsc="" a="" jaterní="" fibrózu="" indukcí="" apoptózy="">

Pro stanovení účinku lipozomů CPhG na buněčný cyklus HSC byly HSC ošetřeny lipozomy CPhG v koncentracích 29,45, 14,72 a 7,36 µ/ml po dobu 24 hodin a analyzovány průtokovou cytometrií (obrázek 4b). Výsledky ukázaly, že podíl buněk ve fázi G0/G1 se významně zvýšil (p < {{10}},05),="" zatímco="" procento="" buněk="" ve="" fázi="" s="" bylo="" významně="" snížena="" (p="">< 0,05).="" kromě="" toho="" byl="" podíl="" buněk="" ve="" fázi="" g2/m="" významně="" snížen="" ve="" srovnání="" s="" kontrolní="" skupinou=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. Studie mechanismu(ů) působení liposomů C PhG in vitro

2.5.1. Lipozomy CPhG inhibují proliferaci HSC stimulací rrPDGF-BB

K dalšímu zkoumání účinků lipozomů CPhG na proliferaci stimulovanou rrPDGF-BB HSC byl proveden test MTT k měření životaschopnosti HSC, které byly ošetřeny předem nastavenými koncentracemi lipozomů CPhG po dobu 24, 48 a 72 hodin ( Obrázek 5).

Po 24 hodinách léčby HSC stimulovanými rrPDGF-BB a 29,45, 14,721 a 7,36 昭/ml CPhG liposomů byla míra přežití buněk v každé dávkové skupině 67,5 procenta, 75,3 procenta a 89,2 procenta, v tomto pořadí. Po 48 hodinách byla míra přežití v buňkách 49,2 procenta, 58,6 procenta a 73,5 procenta.
každé dávkové skupiny. Po 72 hodinách léčby byla míra přežití buněk v každé dávkové skupině 45,3 procenta, 59,2 procenta a 79,2 procenta. Výsledky ukázaly, že lipozomy CPhG měly významný inhibiční účinek na HSC stimulované rrPDGF-BB a tento inhibiční účinek se stal zjevnějším, když se dávka zvýšila. Předpokládá se, že inhibiční účinek lipozomů CPhG na HSC přispívá k antiproliferační aktivitě CPhGliposomo.

2.5.2. Lipozomy CPhG inhibují aktivaci HSC in vitro

HSC v prostoru Disse produkují komponenty ECM, jako je kolagen-1,(s-SMA a kolagen III. Další faktory, které regulují vývoj ECM, jako jsou MMP a TIMP, jsou také produkovány HSC [5]. Abychom dále prozkoumali mechanismy indukované rrPDGF-BB v HSC, hodnotili jsme expresi proteinů souvisejících s ECM, včetně kolagenu-1, Cosma, kolagenu III, MMP-1 a TIMP{{8} Obrázek 6a ukazuje, že skupiny liposomů CPhG (29,45, 14,72, 7.36 4g/ml) mohly snížit hladiny exprese mRNA kolagenu-1, a-SMA a TIMP{{18} } a zvýšit úroveň exprese mRNA MMP-1 více než skupina rrPDGF-BB.

Obrázek 6. Účinky lipozomů CPhG na expresi kolagenu-1, a-SMA, TIMP-1 a MMP-1 v HSC. (a) Exprese mRNA kolagenu-1, a-SMA, TIMP-1 a MMP-1 v HSC (test RT-PCR). (b) Proteinová exprese kolagenu{{10}} a a-SMA. A, kontrolní skupina; B, skupina ošetřená rrPDGF-BB; C, skupina ošetřená rrPDGF-BB plus CPhG liposomem 29,45 g/ml; D, rrPDGF-BB plus CPhG lipozom 14,72 (_ig/ml léčená skupina; E, rrPDGF-BB plus CPhG lipozom 7.3 6 卩g/ml léčená skupina; Data jsou vyjádřena jako průměr 土 SD .** p < 0,01,="" významně="" odlišné="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" hsc="" aktivovaných="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0,05,="" významně="" odlišné="" ve="" srovnání="" s="" kontrolní="" skupinou.="" 6-aktin="" byla="" použita="" jako="" vnitřní="">

Liposomy CPhG také zvýšily hladiny mRNA MMP-1. Hladiny a-SMA a kolagenu-1 byly vysoce exprimovány v rrPDGF-BB-aktivovaných HSC. Naproti tomu lipozomy CPhG snižovaly hladiny a-SMA a kolagenu-1 (obrázek 6b). Zvláště při vysoké koncentraci (29,45 ^g/ml) lipozom CPhG snižoval zvýšenou expresi kolagenu-1 a a-SMA prostřednictvím rrPDGF-BB.

2.53 Lipozomy CPhG inhibují signální dráhu PI3K/Akt

PI3K/Akt je důležitá signální transdukční dráha zprostředkovaná tyrosinkinázovými receptory. Signální dráha PI3K/Akt působí jako senzor v reakci na extracelulární stimuly a zprostředkovává buněčné signály, čímž hraje kritickou roli v buněčné apoptóze a proliferaci ovlivněním aktivity downstream efektorových molekul [13]. Aby se ověřilo, zda se dráha PI3K/Akt účastní antiproliferačních účinků lipozomů CPhG na HSC, byly exprese a hladiny fosforylace PI3K/Akt zkoumány analýzou western blot. Výsledky ukázaly, že hladiny p-PI3K a p-Akt konzistentně klesaly v HSC po 24 hodinách působení liposomů CPhG, což naznačuje, že antiproliferační účinky lipozomů CPhG proti HSC souvisí s deaktivací dráhy PI3K/Akt. , jak je znázorněno na obrázku 7.

2.5.4. Liipozomy CPhG mohou down-regulovat expresi proteinů dráhy PI3K/Akt v HSC plazmidu nadměrné exprese FAK zprostředkovaného rrPDGF-BB

FAK je kritický gen, který reguluje signální dráhu PI3K/Akt. Aktivovaný FAK může fosforylovat PI3K, což dále vede k fosforylaci Akt. FAK zprostředkovává signální transdukci tyrosin-proteinkinázového receptoru, integrinu a dalších cest do buněk, které jsou spojením a centrem několika intracelulárních drah během aktivace HSC. Proto jsme spekulovali

že lipozomy CPhG mohou potlačit aktivitu signální dráhy PI3K/Akt tím, že naruší aktivaci FAK. Následně jsme tuto hypotézu potvrdili prokázáním nadměrné exprese genu FAK.

(pEX{0}}NC) plus CPhG liposom 29,45 Lg/ml skupina významně snížila (p < 0,01).

estern blotting se specifickými primárními protilátkami. ** p < 0.01,="" výrazně="" odlišné="" ve="" srovnání="">

stimulace rrPDGF-BB plus skupina pEX-3-FAK. plus p < 0.05,="" významně="" odlišné="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" léčenou="" rrpdgf-bb.="" &="" p="">< 0,01,="" významně="" odlišné="" ve="" srovnání="" se="" stimulací="">

plus pEX-3-skupina NC. -aktin byl použit jako vnitřní kontrola.

cistanche může proti rakovině

3. Diskuse

Bylo prokázáno, že CPhG mají různé biologické aktivity, včetně protizánětlivé aktivity [14,15], aktivity proti osteoporóze [16,17], sedativního účinku [18•], aktivity proti únavě [19], neuroprotektivního účinku [ 20] a hepatoprotektivní aktivita [21,22]. Yang a kol. zjistil, že extrakt zC. tubulosamohly významně zpomalit progresi experimentální chemické jaterní fibrózy inhibicí syntézy kolagenu a snížením oxidačního stresu [22]. Nicméně účinnost CPhGs as

tepelné ochranné prostředky jsou limitovány jejich špatnou propustností a nízkou biologickou dostupností [23]. Proto je nutné rozšířit aplikaci CPhG vyvinutím účinného systému dodávání k překonání těchto překážek.

V posledních letech výzkum léčiv i klinický výzkum potvrdily, že použití nanočástic jako nosičů léčiv může zlepšit účinnost léčiv in vivo. Lipozomy jsou jedny z nejdůležitějších nanočástic [24].

Lipozomy lze použít jako nosiče léků k úspěšnému dodávání protizánětlivých léků, protinádorových léků, antibiotik, antimykotik a dalších různých kategorií léků [25]. Lipozomy mohou také zlepšit stabilitu léčiva, zvýšit rozpustnost léčiva a podporovat biokompatibilitu [26]. Na druhou stranu studie ukázaly, že systém podávání léčiva z pevných nanočástic (v rozsahu 10-1000 nm) může koncentrovat 80 procent dávky léčiva v játrech, což umožňuje léčivu vstoupit jaterní buňky [27]. Jing Zhu a kol. zjistili, že galanin-lipozomy mají dobré cílení na játra [28]. Proto lze pasivního cíleného účinku nanočínských léků využít k léčbě onemocnění jater nebo jiných onemocnění. Velikost částic liposomů CPhG připravených v této studii, které mají určitý stupeň zacílení na játra, je (216,7 ± 3,47) nm. Chování při uvolňování léčiva je důležitou vlastností systémů dodávání nanoléčiv. Protože CPhG mají dobrou rozpustnost ve vodě, používá se jako uvolňovací médium roztok pufru PBS (pH=6.0). Z křivky uvolňování je vidět, že před 2 hodinami bylo procento uvolňování CPhG liposomů menší než 40 procent, nenastalo žádné náhlé uvolňování a ve srovnání s uvolňováním CPhG byl určitý efekt prodlouženého uvolňování. Z rovnice proložené křivky uvolňování vyplývá, že uvolňování CPhG liposomů v roztoku fosfátového pufru při pH=6,0 je v souladu s Higuchiho rovnicí.

cistancheumětanti-apoptóza

U chronických jaterních onemocnění vede kontinuální aktivace HSC k jaterní fibróze [29]. Proto inhibice aktivace, proliferace a buněčného cyklu HSC nebo indukce apoptózy HSC může být novým výchozím bodem pro cílenou terapii jaterní fibrózy [30-33]. Mnoho studií zjistilo, že apoptóza je klíčem ke zvrácení jaterní fibrózy podporou apoptózy [34]. Rozvoj jaterní fibrózy závisí na aktivaci HSC, která může nabídnout potenciál inhibovat aktivaci HSC a indukovat apoptózu k prevenci nebo léčbě jaterní fibrózy [35,36]. LDH je enzym v buněčném cytosolu, který se uvolňuje v kultivačním médiu při poškození buněčné membrány. Z těchto důvodů jsme provedli in vitro studie o míře životaschopnosti buněk, obsahu LDH v buňkách a apoptóze a buněčném cyklu HSC exponovaných lipozomům CPhG. Výsledky ukázaly, že lipozomy CPhG silně inhibují životaschopnost a proliferaci HSC a zvyšují procento apoptotických buněk způsobem závislým na koncentraci. Kromě toho výsledky buněčného cyklu naznačují, že lipozomy CPhG by mohly vyvolat zastavení buněčného cyklu ve fázi G1. Výsledky ukazují, že klíčem pro CPhG lipozomy k prevenci a léčbě jaterní fibrózy je regulace buněčné proliferace, apoptózy a buněčného cyklu. Ve srovnání s prázdnou kontrolní skupinou má obsah LDH mezi každou skupinou postupně rostoucí trend. Nebyl zde však žádný významný rozdíl (p > 0,05), což naznačuje, že ačkoli aktivita u HSC ovlivněných lipozomy CPhG klesá, většina buněčných membrán zůstává nedotčena. Inhibice proliferace HSC liposomy CPhG není způsobena toxicitou léčiv pro buňky.

PDGF je nejkritičtějším faktorem ovlivňujícím proliferaci HSC. PDGF-receptory (PDGF-Ra a -p) patří do rodiny tyrosinkinázových receptorů. PDGF-AA se váže výhradně na PDGF-Ra, zatímco řetězce PDGF-B se vážou a dimerizují jak s PDGF-Ra, tak s -p [37]. Po navázání ligandu na PDGF-R se receptory dimerizují, což následně vede k fosforylaci vnitřního tyrosinového zbytku a k aktivaci několika downstream signálních drah, což nakonec vyvolá proliferaci a migraci aktivovaných HSC. Tento proces má za následek nadměrnou produkci a ukládání kolagenu a dalších ECM, čímž podporuje rozvoj a progresi jaterní fibrózy [38]. Breitkopf a kol. ukázali, že nadměrná exprese PDGF-BB v játrech vede k proliferaci HSC a jaterní fibróze [39]. V naší studii jsme použili rrPDGF-BB jako stimulátor k aktivaci HSC a každá dávkovaná skupina liposomů CPhG mohla inhibovat proliferaci HSC a představovat zjevný vztah mezi dávkou a účinkem. Předpokládá se, že inhibiční účinek lipozomů CPhG na HSC přispívá k antiproliferační aktivitě lipozomů CPhG.

Aktivace HSC je spojena s mnoha změnami ve vzorcích genové exprese buněk. Zejména změny v genové expresi kolagenu-1 a a-SMA nejvíce korelují s fibrózními vlastnostmi aktivovaných HSC [40]. MMP jsou endopeptidázy závislé na zinku, které hrají důležitou roli při degradaci všech složek proteinu ECM za fyziologických a patologických podmínek. MMP a TIMP zprostředkovávají syntézu a degradaci ECM. MMP mohou podporovat degradaci ECM. Jemná rovnováha mezi MMP a TIMP určuje výskyt jaterní fibrózy [29]. Ve srovnání se skupinou rrPDGF-BB se exprese TIMP-1, a-SMA a kolagenu-1 ve skupinách liposomů CPhG významně zvýšila, zatímco exprese MMP-9 se snížila. Léčba liposomy CPhG výrazně zvrátila abnormální exprese indukované rrPDGF-BB v HSC. Tato data naznačují, že lipozomy CPhG pravděpodobně inhibují tvorbu ECM obnovením rovnováhy mezi MMP a TIMP, čímž zvyšují hladiny MMP-1 a snižují expresi TIMP-1, a-SMA a kolagenu-1 a potenciálně podporuje degradaci extracelulární matrix.

FAK je druh fokálního adhezního komplexu. PDGF může také aktivovat FAK interakcí s proteinem ECM prostřednictvím integrinu [41]. Fokální adhezní komplex poskytuje přímý senzor pro integritu extracelulárního prostředí. Aktivace FAK má za následek aktivaci PI3K. Ukázalo se, že PI3K se podílí na proliferaci několika typů buněk [42]. Jeho klíčová role v HSC byla prokázána použitím PI3K-specifických inhibitorů LY294002 a wortmanninu k blokování PDGF-indukované mitogeneze a chemotaxe bez ovlivnění autofosforylace PDGF receptoru [43]. PI3K se rekrutuje do dimerizovaných fosforylovaných PDGF receptorů, které aktivují proteinkinázu C (PKC), Akt a p70S6 (p70S6K) [44]. Bylo publikováno, že dominantně negativní FAK (Ad-FAKCD) byl použit k blokování aktivity FAK a inhibici aktivace PI3K indukované proliferací PDGF a HSC po léčbě PDGF [45]. Proto jsme předpokládali, že dráha FAK/PI3K/Akt je možným cílem pro lipozomy CPhG.

Naše výsledky ukazují, že ve srovnání se stimulací rrPDGF-BB plus X-3-FAK skupinou byly hladiny proteinové exprese FAK, fosforylovaného PI3K a fosforylovaného Akt downregulovány při stimulaci rrPDGF-BB plus X-3-FAK plus skupina CPhG liposom 29,45 Lg/ml. Tyto výsledky ukazují, že ošetření CPhG liposomem 29,45 Lg/ml by mohlo snížit expresi proteinu FAK a fosforylovaných proteinů PI3K a Akt downstream od FAK.

S prohlubujícím se výzkumem chemie a farmakologie tradiční čínské medicíny bylo nalezeno a potvrzeno stále více účinných látek tradičních čínských léků. Paclitaxel, artemisinin a další léky jsou široce uznávány jako léky první linie pro léčbu příbuzných onemocnění po celém světě. Zároveň se však zjistilo, že ačkoliv je in vitro farmakologický účinek mnoha čínských medicínských složek velmi silný, mají špatnou rozpustnost ve vodě, krátký poločas rozpadu, špatnou stabilitu, nízkou biologickou dostupnost, toxické vedlejší účinky a mnoho dalších další problémy, které vážně omezují jejich lékařské a klinické použití. Systém dodávání nanoléčiv je nový systém podávání léků s velkým potenciálem rozvoje a je aktivním bodem v moderním farmaceutickém výzkumu. Jeho aplikace ve výzkumu a vývoji nových forem tradiční čínské medicíny nejen zlepšuje tradiční formy čínské medicíny, ale do určité míry zlepšuje i léčebný účinek tradiční čínské medicíny a zvyšuje stabilitu léčiv in vivo. Navíc nemodifikované lipozomy jsou většinou absorbovány RES v závislosti na velikosti jejich částic, povrchových vlastnostech a dalších faktorech. Jsou také pasivně zaměřeny na játra. Aby se zlepšila účinnost cílení na játra běžných lipozomů, může být koncentrace cílové tkáně zvýšena připojením specifických ligandů nebo specifických funkčních skupin.

Proto bychom v budoucím výzkumu měli přikládat důležitost fyzikálním a chemickým vlastnostem extrakce a purifikace CPhG, jako je rozpustnost, stabilita, kyselost a zásaditost, a také studiu biofarmaceutiky a farmakokinetiky. Měli bychom vytvořit jedinečnou teorii návrhu formulace, platformu technologie přípravy a metodu hodnocení kvality pro CPhG a také vyvinout různé systémy pro nano-léky pro CPhG, abychom zajistili co nejdůkladnější využití CPhG. Plné využití těchto výhod bude směrem našeho budoucího výzkumu.