Chemické Vlastnosti Mannoglukanu Z Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materiály

Byly použity perorální pasty pro koně od dvou různých výrobců obsahující 10 mg/g (A) nebo 20 mg/g (B) ivermektinu, v daném pořadí. Kvantitativní stanovení na ivermektin bylo provedeno a jeho obsah byl 104,4–107,7 % deklarované koncentrace.

2. Disoluční test

Test byl proveden s Ph. Eur. lopatkový přístroj (Pharma Test, Heinberg, Německo), při míchání 75 otáček za minutu nebo 50 otáček za minutu, při 37 -0,5 C. Laurylsulfát sodný (BDH Chemicals, Poole, Anglie) 0,5 procenta (w /v) vodný roztok byl použit jako rozpouštěcí médium (900 ml). Pasta (4 g A nebo 2 g B) byla umístěna do nádoby injekční stříkačkou s kanylou (A) nebo kapáním vzorku na povrch rozpouštěcího média (B). Po časových intervalech (15, 30, 45, 60 minut a 2 h) byl odebrán vzorek rozpouštěcího média (2 ml), filtrován přes skleněný filtr a analyzován.

3. HPLC analýza

Stanovení ivermektinu bylo provedeno modifikovanou metodou HPLC, jak je popsáno v Ph. Eur. Analyzované roztoky byly zředěny methanolem (1:10). Systém HPLC sestával z oktadecylové kolony (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integrátoru D-12500 A, detektoru UV-Vis L{{7} }, čerpadlo L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Německo). Jako mobilní fáze byla použita směs acetonitril:methanol:voda (64:24:16) s průtokem 1,9 ml/min. Objem injikovaného vzorku byl 20 ml a detekce byla provedena při 254 nm.

4. Studie rozpustnosti

Přístup látky byl třepán v těsně uzavřených skleněných baňkách s vhodným rozpouštědlem (tabulka 1) po dobu 20 h při 37 0,1 C. Suspenze byly zfiltrovány a filtrát byl po zředění v methanolu analyzován pomocí HPLC .

5. Stabilita v kyselém roztoku

Roztoky ivermektinu v HCl {{0}}.1 M byly skladovány v těsně uzavřených skleněných lahvičkách při 20 C a 37 C. Chromatogramy roztoků byly zaznamenávány při t¼ 0 a po 1, 2 a 6 hodinách. Byla vypočtena plocha ivermektinu (retenční čas 10,5 min) a další píky.

Reference

Pokyny FDA pro průmysl: SUPAC-SS nesterilní polotuhé lékové formy. Změny v měřítku a po schválení: chemie, výroba a kontroly; testování uvolňování in vitro a dokumentace bioekvivalence in vivo. Květen 1997. Pokyny FIP pro testování rozpouštění pevných perorálních přípravků (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Pokyny FIP/AAPS pro testování rozpouštění/in vitro uvolňování nových/speciálních lékových forem, AAPS PharmSciTech, 4 (1) článek 7 Moderní výzkumné centrum tradiční čínské medicíny, škola of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, Peking, Čína

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Přijato 13. února 2004, přijato 4. dubna 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Centrum moderního výzkumu tradiční čínské medicíny, Fakulta farmaceutických věd, Centrum zdravotních věd Pekingské univerzity, č. 38, Xueyuan Road , Haidian District, Peking 100083, Čína Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Nový mannoglukan zCistanche deserticolaz Číny se vyznačuje. Sloučenina je zodpovědná za mírnou stimulaci mitogenem indukované proliferace T a B lymfocytů.

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​holoparazit rostoucí na kořenech dvouděložné rostliny Haloxylon ammodendron Bunge, která je široce rozšířena na severozápadě Číny. Protože jde o důležité tonikum v orientální medicíně, bylo uplatněno mnoho aktivních složek a farmakologických aktivit (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Tyto vlastnosti mohou být spojeny s některými polysacharidovými složkamiCistanchekteré dosud nebyly vyšetřeny. Byly izolovány a charakterizovány mitogenní pektické polysacharidy a neutrální polysacharidyCistanche deserticolaz Mongolska (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Božena et al. 1999). Zde uvádíme chemické vlastnosti nového mannoglukanu zCistanche deserticolaz Číny, který je zodpovědný za mírnou stimulaci mitogenem indukované proliferace T a B lymfocytů. Po stopkách zCistanche deserticolaYC Ma byly extrahovány 95% ethanolem, k extrakci zbytku byla použita studená destilovaná voda. Studený vodní extrakt byl vysrážen EtOH, protein byl odstraněn a dialyzován, čímž byl získán surový polysacharid CCDP. Surový polysacharid byl frakcionován na koloně DEAE a koloně Sephadex G-150, čímž byl získán polysacharid bez proteinů (CDP-6), který obsahoval glukózu (89,2 procenta) a manózu (1{{58} },4 procenta ), z nichž průměrný Mr byl odhadnut na 6.8 -104. Polysacharid CDP-6 ukázal [a20D 42 (c 1, H20). Absolutní konfigurace cukrů byly stanoveny pomocí GC TMS (– )-2-butylglykosidů. CDP-6 byl methylován (Needs et al. 1993), hydrolyzován, převeden na alditolacetáty a analyzován pomocí GC a GC-MS (tabulka). Tento výsledek spolu s údaji o molárním poměru z metylační analýzy naznačoval, že CDP-6 má převážně 1,{21}}propojenou Glcp a páteř 1,6- spojenou v menší míře rozvětvenou na O{{ 24}} manózy. Methylační analýza dvou polymerů (CDP-6-1, CDP-6–2) z částečné hydrolýzy potvrdila, že CDP-6 má hlavní řetězec tvořený 1,6-spojenými glukosylovými zbytky a 1,6-vázané mannosylové zbytky, které jsou substituovány na O-3 manózy větvemi sestávajícími z koncových, 1,6- spojených glukosylových zbytků a 1,3,{{38} } vázané mannosylové zbytky. Podle molárních poměrů a literatury (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996) 13C NMR spektrum CDP-6 ukázalo signály způsobené anomerními uhlíky a-d-Glcp (C{{45 }} při 98,4 ppm), bd-Map (C-1 při 104,3–104,9 ppm) a ad-Map (C-1 při 100,0 ppm). 'H NMR spektrum CDP-6-2 v D2O ukázalo protonové signály odpovídající ad-Glcp (H-1 při 4,94–4,95 ppm) a a-d-Map (H-1 při 4,96–5,00 ppm). 13C NMR spektrum CDP-6-2 v D20 ukázalo protonové signály odpovídající aD-Glcp (C-1 při 98,6 ppm) a ad-Map (C-1 při 98,4 ppm). Uvádí se, že mannoglukany mají 1,4-vázaný glukopyrannan a 14-vázaný mannopyrannanový hlavní řetězec (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 má některé odlišné strukturální rysy díky své a-1,6-propojené Glcp a b-1,6-propojené páteřní mapě mapy a je nahrazena mannoglukanovými větvemi (obr.). Aby bylo možné prozkoumat použitíCistanche deserticolav lidovém léčitelství byl hodnocen účinek CDP-6 na systémy T a B buněk. Bylo zjištěno, že mírně stimuluje mitogenem indukovanou proliferaci T a B lymfocytů.

Experimentální

1. Obecné postupy

Optická rotace byla měřena automatickým polarimetrem W22-1S. IR spektra byla stanovena na spektrometru Perkin-Elmer 599B. GC analýza byla provedena na přístroji Agilent HP6890N vybaveném FID detektorem. GC-MS byla provedena na přístroji Finnigan Trace GC-MS. Homogenita a Mr of CDP-6 byly odhadnuty z kalibrační křivky elučního objemu standardních dextranů, která byla provedena na

přístroj Agilent řady 1100 s kolonou Shodex KS-805.1H NMR a 13C NMR spektra byla zaznamenána pomocí přístroje INOVA-500. Obsah proteinu byl analyzován metodou Bradforda (Andre et al. 1975). Monosacharidy byly analyzovány na obsah alditolacetátu poté, co byly hydrolyzovány (2 M TFA, 2 h, 110 C), redukovány a acetátovány. Hydrolyzáty byly analyzovány pomocí TLC na silikagelové desce obsahující 5 procent dihydrogenfosforečnanu sodného v BuOH-EtOAc-isopropylalkohol-HOAC--H2Opyridin (3,5:10:6:3,5:3:3) a cukry byly detekovány postřikem orcinolem. -H2SO4. Výsledné alditolacetáty byly analyzovány GLC za použití HP-5 kapilární kolony (30 m 0,32 mm). CDP-6 byl methylován metodou Ciucanu s následnou hydrolýzou a byl analyzován jako částečně methylované alditolacetáty pomocí GC-MS. Po částečné hydrolýze byly produkty dialyzovány a separovány, čímž byly získány dva polymery, CDP-6-1 a CDP-6–2.

2. Rostlinný materiál

Rostlina byla shromážděna z provincie Vnitřní Mongolsko v Číně v srpnu 2001 a byla identifikována Hu-Biao Chenem, Oddělením přírodního lékařství Fakulty farmaceutických věd, Centrum zdravotních věd Pekingské univerzity. Poukazový exemplář [E-1-(9)] této rostliny byl uložen na School of Pharmaceutical Sciences, Peking University. 3. Extrakce, izolace a čištění polysacharidu CDP-6 KmenCistanche deserticolaYC Ma (150}0 g) byly extrahovány 95% ethanolem (6 1) za refluxu. Vysušený zbytek nerozpustný v ethanolu byl macerován třikrát studenou destilovanou vodou za 12 hodin. Studený vodní extrakt se zfiltruje a filtrát se odstředí. Po vysrážení čtyřmi objemy EtOH (míchání a stání po dobu 24 hodin při 4 °C) se získá produkt sraženiny (35,5 g). Protein ve sraženině byl odstraněn Savageovou metodou. Po rozpuštění v destilované vodě byl zbytek (25,5 g) dialyzován a lyofilizován (výtěžek: 10,6 g). Surový polysacharid (8 g) byl rozpuštěn v destilované vodě (100 ml, 8 procent w/v) a separován pomocí DEAE kolony (70 5 cm, gradient 0–2 M NaCl, na 1,5 l). Byla získána frakce eluovaná vodou (600 mg). Vzorek (250 mg) byl purifikován kolonovou gelovou permeační chromatografií na kolonách Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml na frakci). Frakce CDP-6 (1500–1600 ml) byly spojeny, dialyzovány a lyofilizovány. Po odsolení Sephadexem G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) byl získán a stanoven jako jeden pík pomocí HPSGC.

Potvrzení:Autor děkuje Dr. Baomei Shao a prof. Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, za měření imunomodulační aktivity CDP-6.