Část 1: Odtok hořčíku z buněk Drosophila Kenyon je kritický pro normální a dietou vylepšenou dlouhodobou paměť

další informace:Ali.ma@wecistanche.com

Pls klikněte sem pro část 2

Yanying Wu1, Yosuke Funato2, Eleonora Meschi1, Kristijan D Jovanoski1, Hiroaki Miki2, Scott Waddell1*

1Centre for Neural Circuits and Behaviour, The University of Oxford, Tinsley Building, Oxford, United Kingdom; 2Katedra buněčné regulace, Výzkumný ústav pro mikrobiální choroby, Osaka University, Suita, Japonsko

Abstrakt Suplementace hořčíkem (Mg2 plus) ve stravě může zlepšitPaměťu mladých a starých potkanů.Paměť-zlepšovací kapacita byla z velké části připisována zvýšení hipokampální synaptické hustoty a zvýšené expresi podjednotky NR2B glutamátového receptoru typu NMDA. Zde ukazujeme, že Mg2 plus krmení také zlepšuje dlouhodoběPaměťv Drosophila. Normální a Mg2 plus - vylepšená muškaPaměťse zdá být nezávislý na NMDA receptorech v těle houby a místo toho vyžaduje expresi konzervovaného CNNM-typu Mg2 plus-efluxního transportéru kódovaného neprodlouženým (uex) genem. UEX obsahuje domnělou cyklickou nukleotidovou vazebnou homologickou doménu a její mutace odděluje zásadní roli pro uex od funkce vPaměť. Navíc je změněna lokalizace UEX v houbových tělních Kenyonových buňkách (KCs).Paměť- defektní mouchy nesoucí mutace v genech souvisejících s cAMP. Funkční zobrazení naznačuje, že pro pomalé rytmické udržování KC Mg2 plus je nutný eflux závislý na UEX. Navrhujeme, že regulovaný neuronální Mg2 plus eflux je kritický pro normální a Mg2 plus - zvýšenýPaměť.

Klikněte naVitamin shop Cistanche a Cistanche pro paměť

Úvod

Hořčík (Mg2 plus) hraje kritickou roli v buněčném metabolismu a je považován za nezbytný kofaktor pro více než 350 enzymů (Romani a Scarpa, 2000; Vink a Nechifor, 2011). V důsledku toho jsou změny Mg2 plus homeostázy spojeny s širokou škálou klinických stavů, včetně těch, které ovlivňují nervový systém, jako je glaukom (DeToma et al., 2014), Parkinsonova nemoc (Hermosura et al., 2005; Hermosura a Garruto, 2007; Lin et al., 2014; Shindo et al., 2016), Alzheimerova choroba (Andra´si et al., 2000; Andra´si et al., 2005; Cilliler et al., 2007; Durlach et al. ., 1997; Glick, 1990; Lemke, 1995; Chui a kol., 2011; Vural a kol., 2010), úzkost (Sartori a kol., 2012), deprese (Whittle a kol., 2011; Murck, 2002; Murck, 2013; Rasmussen a kol., 1990; Ghafari a kol., 2015) a mentální postižení (Arjona a kol., 2014).

Možná překvapivě, zvýšení mozkového Mg2 plus prostřednictvím stravy může zvýšit neuronální plasticitu aPaměťvýkonnost mladých a starých hlodavců, měřená v různých behaviorálních úlohách (Slutsky et al., 2010; Landfield a Morgan, 1984; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013). Kromě toho zvýšený Mg2 plus snížil kognitivní deficity u myšího modelu Alzheimerovy choroby (Li et al., 2013) a zvýšil zánik vzpomínek na strach (Abumaria et al., 2011). Tyto zjevně příznivé účinky vedly k návrhu, že dietní Mg2 plus může mít terapeutickou hodnotu pro pacienty s různými druhyPaměť-související problémy (Billard, 2011).

Navzdory velkému počtu potenciálních míst působení Mg2 plus v mozku,Paměť-zlepšující vlastnost u hlodavců byla z velké části připisována zvýšení hipokampální synaptické hustoty a aktivitě N-methyl-D-aspartát glutamátových receptorů (NMDAR). Extracelulární Mg2 plus blokuje kanálové póry NMDAR, a tím brání průchodu dalších iontů (Mayer et al., 1984; digest Příslovečné rčení „jste to, co jíte“ dokonale shrnuje koncept, že naše strava může ovlivnit jak naši psychiku, tak i fyzické zdraví. Víme, že potraviny, které jsou dobré pro srdce, jako jsou ořechy, mastné ryby a bobule, jsou také dobré pro mozek. Víme také, že vitamíny a minerály jsou nezbytné pro celkové dobré zdraví. Existují však nějaké důkazy že zvýšení příjmu konkrétních vitamínů nebo minerálů by mohlo pomoci posílit váš mozek?

I když to může znít až příliš dobře, než aby to byla pravda, existují určité důkazy, že tomu tak je alespoň u jednoho minerálu, hořčíku. Studie na hlodavcích ukázaly, že přidání doplňků hořčíku do potravy zlepšuje, jak dobře zvířata plní paměťové úkoly. Z přídavku hořčíku těží jak mladá, tak stará zvířata. Dokonce i starší hlodavci s onemocněním podobným Alzheimerově chorobě vykazují méněPaměťztráta při podávání doplňků hořčíku. Ale co ostatní druhy?

Wu a kol. nyní ukazují, že doplňky hořčíku také zvyšují výkonnost paměti u ovocných mušek. Jedna skupina much byla několik dní krmena standardní kukuřičnou moukou, zatímco druhá skupina dostávala kukuřičnou mouku doplněnou hořčíkem. Obě skupiny byly poté vycvičeny, aby spojily vůni s odměnou za jídlo. Mouchy, které dostaly extra hořčík, ukázaly lépePaměťna zápach při testování 24 hodin po tréninku.

Wu a kol. ukazují, že hořčík se zlepšujePaměťu much prostřednictvím jiného mechanismu, než jaký byl dříve hlášen u hlodavců. U hlodavců hořčík zvýšil hladiny receptorového proteinu pro mozkovou chemickou látku zvanou glutamát. Naproti tomu u ovocných mušekPaměťboost závisel na proteinu, který transportuje hořčík z neuronů. Mutanti, kterým tento transportér chyběl, vykazovaly poruchy paměti. Na rozdíl od normálních much nevykazovaly ty bez transportéru žádné zlepšení paměti po požití potravy obohacené hořčíkem. Výsledky naznačují, že transportér může pomoci upravit hladiny hořčíku v mozkových buňkách v reakci na nervovou aktivitu.

Lidé produkují čtyři varianty tohoto přenašeče hořčíku, z nichž každá je kódována jiným genem. Jeden z těchto transportérů se již podílel na vývoji mozku. Zjištění Wu a kol. naznačují, že transportéry mohou také působit v dospělém mozku, aby ovlivnily kognici. Jsou zapotřebí další studie, aby se otestovalo, zda by cílení na přenašeč hořčíku mohlo být nakonec příslibem pro léčbuPaměťpostižení.

Bekkers a Stevens, 1993; Jahr a Stevens, 1990; Nowak a kol., 1984). Důležité je, že k uvolnění bloku Mg2 plus na NMDAR a umožnění přílivu Ca2 plus řízeného glutamátem je nutná předchozí neuronální depolarizace, řízená jinými vysílačovými receptory. NMDAR proto hraje důležitou roli v neuronální plasticitě jako potenciální detektor Hebbovy koincidence. Akutní zvýšení extracelulární koncentrace Mg2 plus ([Mg2 plus ]e) ve fyziologickém rozmezí (0,8–1,2 mM) může antagonizovat indukci dlouhodobé potenciace závislé na NMDAR (Dunwiddie a Lynch, 1979; Malenka et al., 1992; Malenka a Nicoll, 1993; Slutsky et al., 2004). Naproti tomu zvýšení [Mg2 plus ]e po dobu několika hodin v neuronových kulturách vede ke zvýšení proudů zprostředkovaných NMDAR a usnadnění exprese LTP (Slutsky et al., 2004). Zesilující účinky zvýšeného [Mg2 plus ]e byly také pozorovány in vivo v mozku krys krmených Mg2 plus -L-threonátem (Slutsky et al., 2010). Hippokampální neuronální okruhy podléhají homeostatické plasticitě (Turrigiano, 2008), aby se přizpůsobily zvýšenému [Mg2 plus ]e upregulací exprese NMDAR obsahujících podjednotku NR2B (Slutsky et al., 2004; Slutsky et al., 2010). Předpokládá se, že vyšší hustota hipokampálních synapsí s NR2B obsahujícími NMDARs kompenzuje chronické zvýšení [Mg2 plus ]e zvýšením NMDAR proudů během výbuchu. Na podporu tohoto modelu vykazují myši, které jsou geneticky upraveny tak, aby nadměrně exprimovaly NR2B, zvýšený hipokampální LTP a behaviorálníPaměť(Tang a kol., 1999).

ČichovýPaměťu Drosophila zahrnuje heterosynaptický mechanismus řízený posilováním dopaminergních neuronů, což vede k presynaptickému útlumu cholinergních spojení mezi pachem aktivovanými houbovými buňkami (MB) Kenyonovými buňkami (KC) a downstream houbovými výstupními neurony (MBON) (Schwaerzel et al., 2003 ; Aso et al., 2010; Aso et al., 2012; Claridge-Chang et al., 2009; Burke et al., 2012; Liu et al., 2012; Plac¸ais et al., 2013; Owald et al. ., 2015; Hige a kol., 2015; Barnstedt a kol., 2016; Parisse a kol., 2016; Aso a kol., 2014; Oswald a Waddell, 2015). Kromě toho je čichová informace přenášena do KC cholinergním přenosem z neuronů čichové projekce (Yasuyama et al., 2002; Leiss et al., 2009). I když je možné, že glutamát je dodáván do sítě MB prostřednictvím dosud neidentifikované cesty, v současné době neexistuje žádné zřejmé místo pro plasticitu závislou na NMDAR ve známé architektuře cholinergních vstupních nebo výstupních vrstev (Barnstedt et al., 2016 ). Moucha proto poskytuje potenciální model pro zkoumání dalších mechanismů, jejichž prostřednictvím může Mg2 plus v potravě posílitPaměť.

Posilující účinky dopaminu závisí na dopaminovém receptoru typu Dop1R D1- (Kim et al., 2007; Qin et al., 2012; Handler et al., 2019), který je pozitivně spojen s produkcí cAMP (Tomchik a Davis, 2009; Boto a kol., 2014). Navíc rané studie u Drosophila identifikovaly cAMP fosfodiesterázu kódovanou duncem a rutabagou a adenylátcyklázu stimulovanou Ca2 plus typu I jako nezbytné pro čichovéPaměť(Dudai a kol., 1976; Byers a kol., 1981; Dudai a Zvi, 1984; Chen a kol., 1986; Livingstone a kol., 1984; Levin a kol., 1992). Studie na savčích buňkách ukázaly, že hormony nebo činidla, která zvyšují hladinu buněčného cAMP, často vyvolávají významnou extruzi Mg2 plus závislou na Na plus do extracelulárního prostoru (Romani a Scarpa, 1990b; Romani a Scarpa, 1990a; Romani a Scarpa, 2000; Vink a Nechifor, 2011; Vormann a Gu¨nther, 1987). Není však jasné, zda extruze Mg2 plus hraje nějakou roli při zpracování v paměti.

Zde ukazujeme, že Drosophila dlouhodoběPaměť(LTM) lze zvýšit dietou Mg2 plus suplementace. Zjistili jsme, že unextended (uex) (Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) gen, který kóduje funkční muší ortolog savčích cyklin M2 Mg2 plus -efluxních transportérových proteinů (CNNM), je kritický proPaměť-zlepšující vlastnost Mg2 plus . Funkce UEX v MB KC je vyžadována pro LTM a funkční obnovení uex ukazuje, že MB je klíčovým místem pro vylepšení paměti závislé na Mg2 plus. Chronicky se měnící metabolismus cAMP zavedením mutací do genů dnc nebo rut mění buněčnou lokalizaci UEX. Navíc mutace konzervované domény cyklické nukleotidové vazby homologie (CNBH) v UEX odděluje zásadní roli uex od jeho funkce v paměti. Mg2 plus eflux řízený UEX je vyžadován pro pomalé rytmické udržování úrovní KC Mg2 plus, což naznačuje potenciální roli pro zpracování toku Mg2 plus v paměti.

Výsledek

Krmení Mg2 plus zvyšuje LTM mušek divokého typu

Předchozí studie uváděly, že krmení potkanů ​​potravou obsahující vysokou koncentraci Mg2 plus zlepšilo jejich schopnost učení a paměti (Slutsky et al., 2010; Landfield a Morgan, 1984; Abumaria et al., 2011; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013). Proto jsme testovali, zda podobné účinky existují u much, když jsme je před tréninkem krmili potravou obsahující vysokou koncentraci Mg2 plus. Překvapivě mouchy divokého typu krmené po dobu 4 dnů před tréninkem potravou doplněnou o další chlorid hořečnatý (MgCl2) vykazovaly významně zlepšenou 24hodinovou paměť. Zlepšení paměti závisí na koncentraci a bylo maximální, když byla potrava doplněna 80 mM MgCl2 (obrázek 1A). Okamžitý výkon paměti nebyl zjevně zvýšen (obrázek 1B). Zesilující účinek MgCl2 byl také pozorován u much krmených síranem hořečnatým (MgS04), ale ne chloridem vápenatým (CaCl2) (obrázek 1C). Kromě toho krmení much po dobu 4 dnů potravou obsahující 5 až 80 mM chloridu strontnatého (SrCl2) vedlo k vysoké úrovni úmrtnosti a mouchy, které přežily krmení 5 mM SrCl2, nevykazovaly zvýšenou okamžitou nebo 24hodinovou paměť (data nejsou uvedena) . Účinky zlepšující paměť lze proto specificky připsat dietnímu doplňku dvojmocného Mg2 plus.

Paměť vylepšená Mg2 plus je nezávislá na NMDAR v tělech hub

Protože magnézium-L-threonát zlepšená paměť u potkanů ​​korelovala s upregulací hipokampálních NMDAR obsahujících podjednotku NR2B (Slutsky et al., 2010), testovali jsme změny v expresi glutamátového receptoru u much krmených MgCl2. Analýzy RT-qPCR neodhalily významný rozdíl v množství mRNA pro domnělé receptory NMDA (Nmdar1, Nmdar2), AMPA (GluRIA) nebo kainátového typu (GluRIIA) v hlavách odebraných mouchám krmeným po dobu 4 dnů 80 mM MgCl2 oproti těm, kterým byl podáván 1 mM MgCl2 (obrázek ID).

Dále jsme přímo testovali, zda paměť vylepšená Mg2 plus vyžaduje funkci NMDAR, a to snížením exprese genů Nmdar1 nebo Nmdar2 pomocí transgenní interference RNA řízené UAS

Obrázek 1. Suplementace Mg2 ve stravě zlepšuje dlouhodobou paměť Drosophila. (A) Mouchy divokého typu byly vycvičeny a testovány na 24hodinovou chuťovou paměť po 1–5 dnech ad libitního krmení potravou doplněnou o Mg2 plus. Paměť byla významně zvýšena u much krmených po dobu 4 dnů 80 mM MgCl2 ve srovnání s mouchami krmenými 1 mM. 80 mM MgCl2 produkovalo nepatrně vyšší výkon než 50 mM nebo 100 mM, a tak bylo považováno za optimální (hvězdičky označují p<0.05, t-test="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" groups="" for="" each="" time="" point,="" n="6–8)." (b)="" 4="" days="" of="" 80="" mm="" mgcl2="" food="" did="" not="" enhance="" immediate="" memory.="" (c)="" appetitive="" 24="" hr="" memory="" was="" enhanced="" by="" feeding="" wild-type="" flies="" for="" 4="" days="" with="" mgcl2="" and="" mgso4,="" but="" not="" cacl2.="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05, anova,="" n="6)" between="" mg2+="" fed="" and="" plain="" groups.="" (d)="" rt-qpcr="" showed="" no="" significant="" differences="" in="" glutamate="" receptor="" mrna="" expression="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" fed="" flies="" (t-test,="" n="5)." (e)="" c739-gal4;="" uas-magfret-1="" flies="" were="" fed="" for="" 4="" days="" on="" food="" supplemented="" with="" mg2+.="" brains="" were="" dissected="" and="" fixed="" and="" a="" fluorescence="" emission="" ratio="" measurement="" (citrine/cerulean)="" was="" taken="" as="" an="" indicator="" of="" [mg2+]i.="" the="" magfret="" signal="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" ab="" lobes="" of="" flies="" fed="" with="" 80="" mm="" mgcl2="" than="" those="" fed="" with="" 1="" mm="" mgcl2=""><0.05, t-test,="" n="52–60)." unless="" otherwise="" noted,="" all="" data="" are="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" the="" mean="" (sem).="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05), individual="" data="" points="" displayed="" as="" open="">

Online verze tohoto článku obsahuje následující dodatky k obrázku 1:

Dodatek k obrázku 1. Knockdown N-methyl-D-aspartát glutamátového receptoru (NMDAR) v tělech hub nezhoršuje paměť Mg2 plus.

(RNAi) konstrukty (Dietzl et al., 2007; Perkins et al., 2015). Ze dvou nezávislých UAS-Nmdar1R-NAi a čtyř UAS-Nmdar2RNAi linií, které jsme testovali, pouze jedna linie Nmdar1RNAi (BDSC 25941), když byla ve všech neuronech řízena neuronálním Synaptobrevinem (nSyb)-GAL4, vykazovala významně snížený výkon 24hodinové paměti, protože ve srovnání s heterozygotními kontrolními mouchami (obrázek 1 – příloha k obrázku 1A). Naproti tomu selektivnější exprese tohoto UAS-Nmdar1RNAi v LTM-relevantních ab KC pomocí c739-GAL4 významně nezhoršila 24hodinový paměťový výkon (obrázek 1 – příloha k obrázku 1B). Kromě toho si mouchy exprimující Nmdar1RNAi v neuronech ab zachovaly robustní paměť Mg2 plus zesílenou paměť (obrázek 1 – doplněk obrázku 1C). Tyto výsledky naznačují, že Mg2 plus - zesílená paměť nemění expresi glutamátových receptorů, ani nevyžaduje funkci NMDAR v ab KC.

Koncentrace Mg2 plus v neuronech ab je zvýšená u much krmených vysokým obsahem Mg2 plus Použili jsme MagFRET, první geneticky kódovaný fluorescenční senzor Mg2 plus (Lindenburg et al., 2013), abychom otestovali, zda Mg2 plus krmení změnilo intracelulární koncentraci Mg2 plus ([Mg2 plus ]i). Zkonstruovali jsme mouchy obsahující UAS-MagFRET-1 transgen a zkombinovali jsme ho s c739-GAL4 k expresi MagFRET- 1 v ab KC. Porovnali jsme signály FRET ve fixních mozcích z c739; Mouchy UAS-MagFRET-1 krmené 1 mM nebo 80 mM potravou MgCl2 po dobu 4 dnů. Signál MagFRET byl signifikantně vyšší v obou kolaterálech a a b ab KC much krmených 80 mM než u much krmených 1 mM (obrázek 1E). Tento výsledek ukazuje, že podávání Mg zvyšuje neuronální [Mg2 plus]i. Vzhledem k afinitě MagFRET-1 (Kd=148 mM) a přibližně 50procentnímu zvýšení signálu FRET po navázání Mg2 plus (Lindenburg et al., 2013) odhadujeme, že přibližně 8procentní zvýšení signál MagFRET měřený u much krmených 80 mM MgCl2 odpovídá v průměru přibližně 50 mM zvýšení ab KC [Mg2 plus]i.

Nerozšířený kódovaný transportér Mg2 plus typu CNNM má roli v paměti

Nerozšířenou (uex; Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) jsme identifikovali jako gen měnící apetitivní čichové LTM, posílené sacharózovou odměnou. Mouchy s inzercí uexMI01943 MiMIC (Venken et al., 2011) vykazovaly silný defekt 24hodinové paměti, ale jejich výkon bezprostředně po tréninku byl k nerozeznání od výkonu kontrol divokého typu. Podrobnější analýza much uexMI01943 odhalila stálý úpadek paměti, který se poprvé významně lišil od paměti much divokého typu 12 hodin po tréninku (obrázek 2A). U heterozygotních mušek uexMI01943/ plus nebyl evidentní žádný defekt paměti, což dokazuje, že tato domnělá pohlavní alela je recesivní.

uex upoutal naši pozornost, protože je to ortolog pro jednu mouchu čtyř lidských genů CNNM, které kódují transportéry Mg2 plus (Ishii et al., 2016), a obsahuje také domnělou doménu CNBH, která je strukturně příbuzná těm v cyklických nukleotidech s bránou. kanálů (Zagotta et al., 2003; Flynn et al., 2007; Kesters et al., 2015). Zarovnání 834 aminokyselinové sekvence UEX s CNNM1-4 odhaluje zvláště vysokou konzervaci sekvence s CNNM2 a CNNM4 v doménách DUF21, CBS a CNBH (obrázek 2 – doplněk k obrázku 1A–C). Proto jsme předpokládali, že UEX má potenciál propojit paměť zvyšující účinky dietního Mg2 plus s cAMP závislou neuronální plasticitou.

Although uexMI01943 is assigned to the uex gene, the MiMIC element is annotated to lie 17 kb downstream of the uex coding region (Venken et al., 2011; Figure 2B). RYa (Yoon et al., 2016) is the next nearest gene to uexMI01943 but is >230 kb dále. Nejprve jsme potvrdili polohu MiMIC pomocí inverzní PCR (Attrill et al., 2016). Důležité je, že u těchto mušek nebyla detekována žádná další inzerce MiMIC. Dále jsme testovali, zda je uexMI01943 odpovědný za paměťový defekt přesným odstraněním prvku MiMIC pomocí Minos transposázou zprostředkované excize (Arca` et al., 1997; obrázek 2 – příloha k obrázku 2A a B). Odstranění MiMIC v uexMI01943.ex1 a uexMI01943.ex2 obnovilo normální 24hodinový výkon paměti, což dokazuje, že vložení MiMIC je vyžadováno pro uexMI01943Paměťdefekt (obrázek 2C).

Jak qRT-PCR mRNA, tak western blot analýza proteinových extraktů z hlav much neodhalila významný rozdíl v expresi uex/UEX u much uexMI01943. Použili jsme proto CRISPR k zavedení stop kodonu do pátého kódujícího exonu lokusu uex (obrázek 2B a obrázek 2 – doplněk k obrázku 2C). Mouchy homozygotní pro výslednou mutaci uexD nebyly životaschopné jako dospělí, umírají v larválním stádiu. Naproti tomu heterozygotní mouchy uexMI01943/uexD byly životaschopné, ale jejich 24hodinová apetitivníPaměťbyla významně narušena (obrázek 2D). Tato data ukazují, že uex je esenciální gen a že uexMI01943 je životaschopná hypomorfní alela uex.

Testovali jsme i averzivituPaměťvýkon mutantních mušek uexMI01943. Homozygotní mouchy uexMI01943 se vystavovaly okamžitěPaměťkterý byl k nerozeznání od heterozygotních kontrol a kontrol divokého typu (obrázek 2E). Jejich 24hodinová paměť, vytvořená buď po pěti zkouškách averzivního rozloženého tréninku (Tully et al., 1994; Jacob a Waddell, 2020), nebo jedné zkoušce tréninku usnadněného hladověním (Hirano et al., 2013), byla významně narušena. (Obrázek 2E). Tyto experimenty naznačují, že mouchy uexMI01943 jsou obecněji ohroženy ve schopnosti tvořit LTM. Pokud není uvedeno jinak, všechny následné analýzyPaměťv této studii používají apetitivní kondicionování odměňované cukrem.

Obrázek 2. Mutované mouchy uexMI01943 jsou dlouhodobě defektníPaměť(LTM). (A) Zachování chuti k jídlu bylo testováno v různých časech po tréninku. Mouchy homozygotní pro uexMI01943 vykazovaly významný defekt v paměti od 12 hodin po tréninku ve srovnání s výkonem heterozygotních uexMI01943/plus a kontrolních much divokého typu (p<0.05, anova,="" n="6–10)." (b)="" the="" uex="" locus="" lies="" on="" chromosome="" 2r="" between="" 3,900,285="" and="" 3,949,425="" (light="" blue="" bar).="" the="" four="" alternate="" uex="" transcripts,="" uex-re,="" uex-rg,="" uex-rh,="" and="" uex-rf,="" all="" encode="" the="" same="" protein.="" the="" uexmi01943="" mimic="" (blue="" triangle)="" resides="" ~17="" kb="" downstream="" of="" the="" uex="" coding="" region.="" the="" crispr/cas9="" edited="" uexd="" allele="" replaces="" a="" 3047="" bp="" fragment,="" including="" exon="" 7="" of="" uex="" with="" a="" stop="" signal="" (termination="" codon="" in="" all="" three="" reading="" frames)="" and="" a="" gfp="" cassette,="" truncating="" the="" uex="" reading="" frame="" (dark="" blue="" bar).="" (c)="" precise="" excision="" of="" the="" uexmi01943="" mimic="" restores="" normal="" 24="" hr="" memory="" to="" uexmi01943.ex1="" and="" uexmi01943.ex2="" flies=""><0.05, anova,="" n="8–11)." (d)="" uexd="" fails="" to="" complement="" the="" 24="" hr="">Paměťzávada uexMI01943 (str<0.05, anova,="" n="6–8)." (e)="" flies="" homozygous="" for="" uexmi01943="" showed="" a="" significant="" defect="" in="" aversive="" ltm,="" as="" figure="" 2="" continued="" on="">

Obrázek 2 pokračoval

ve srovnání s výkonem heterozygotních uexMI01943/ plus a kontrolních much divokého typu (str<0.05, anova,="" n="8–12)." an="" ltm="" defect="" was="" also="" observed="" following="" five="" cycles="" of="" aversive="" spaced="" training="" and="" a="" 16="" hr="" fasting="" facilitated="" one-cycle="" training="" protocol.="" immediate="" aversive="">Paměťnebyl ovlivněn u homozygotních mutantních mušek uexMI01943.

Online verze tohoto článku obsahuje následující zdrojová data a dodatky k obrázku 2:

Zdrojová data 1. Tabulka kontrol cukru a čichové senzorické ostrosti pro všechny behaviorální experimenty v tomto rukopisu.

Obrázek dodatek 1. Konzervace UEX s jeho ortology.

Dodatek k obrázku 2. Konstrukční schémata pro excizi uex Mino a vytvoření alely uexD.