Část 1: Epigenetická regulace cirkadiánního genu Per1 přispívá ke změnám hippocampu souvisejícím s věkem
Mar 19, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Janine L. Kwapis1,2,3, Yasaman Alaghband1,2, Enikö A. Kramár1,2, Alberto J. López1,2, Annie Vogel Ciernia4, André O. White5, Guanhua Shu1,2, Diane Rhee1,2,
Christina M. Michael1,2, Emilie Montellier6, Yu Liu7,8, Christophe N. Magnan7,8, Siwei Chen7,8, Paolo Sassone-Corsi6, Pierre Baldi7,8, Dina P. Matheos1,2 & Marcelo A. Wood1,2 ,3
Stárnutí je doprovázeno poruchami jak cirkadiánní rytmicity, tak dlouhodobýmPaměť. I když je jasné, žePaměťvýkon je ovlivněn cirkadiánním cyklováním, není známo, zda narušení cirkadiánních hodin související s věkem způsobuje zhoršení hipokampuPaměť. Zde ukazujeme, že represivní histondeacetyláza HDAC3 omezuje dlouhodobou paměť, synaptickou plasticitu a zkušenostmi indukovanou expresi cirkadiánního genu Perlin ve stárnoucím hipokampu bez ovlivnění rytmických vzorců cirkadiánní aktivity. Ukazujeme také, že hippocampal Per] je kritický z dlouhodobého hlediskaPaměťformace. Naše data společně zpochybňují tradiční myšlenku, že změny v základních cirkadiánních hodinách řídí změny související s cirkadiánními hodinami.Paměťa místo toho argumentují pro autonomnější roli pro funkci cirkadiánního hodinového genu v hipokampálních buňkách, aby byla brána pravděpodobnost tvorby dlouhodobé paměti.
Zvířata mají vnitřní cirkadiánní hodiny, které řídí rytmický cyklus biologických procesů každých ~24 hodin. Cirkadiánní rytmy řídí četné fyziologické události, včetně cyklu spánku a bdění, chování při příjmu potravy, tělesné teploty a metabolismu. V hlavních cirkadiánních hodinách, suprachiasmatickém jádře (SCN), skupina genů pro jádrové hodiny osciluje v negativní zpětnovazební smyčce, která se cykluje každých ~24 h1,2. Kromě regulace základních biologických procesů mají na cirkadiánní hodiny také silný vlivPaměť. Dlouhodobá paměť, která je závislá na transkripci, vykazuje silný vliv na denní dobu s maximální výkonností paměti během dne (neaktivní fáze) u myší3,4. Pozoruhodně obojí dlouhodoběPaměťa cirkadiánní rytmičnost se zhoršuje s věkem5, což naznačuje, že společné molekulární mechanismy mohou být základem obou procesů. Jedna myšlenka je, že hodinové geny se nacházejí vPaměť-příslušné struktury, jako je dorzální hipokampus, mohou bránit schopnost zvířete tvořit se dlouhodoběPaměťpodle denní doby 6. V souladu s tím může narušení několika individuálních hodinových genů v mozku poškodit hipokampální dlouhodobou paměť u mladých zvířat. Protože žádná studie dosud selektivně nenarušila cirkadiánní genovou funkci v dorzálním hipokampu, není jasné, zda hodinové geny působí v hipokampálních buňkách tak, aby ovlivnily dlouhodobéPaměťnebo zda tyto deficity paměti vyplývají z mimocílových efektů v jiných oblastech mozku, jako jsou narušené cirkadiánní rytmy, spánkové deficity nebo dokonce vývojové abnormality.
Genová exprese je snížena ve stárnoucím mozku, což může být důsledkem represivnější struktury chromatinu. Transkripce je částečně řízena změnami ve struktuře chromatinu, které mohou dynamicky podporovat nebo omezovat přístup k neuronální DNA po události učení. Jedna hypotéza, kterou předložili Barnes a Sweatt, předpokládá, že epigenom je ve stárnoucích neuronech změněn, což má za následek represivní chromatinovou strukturu, která brání normální genové expresi potřebné pro tvorbu dlouhodobé paměti7. Několik studií podporuje tuto myšlenku, která ukazuje pozměněné mechanismy modifikace histonů ve stárnoucím mozku8–10. Nicméně, zda mechanismy modifikace chromatinu abnormálně regulují cirkadiánní genovou expresi v klíčovém učení aPaměťoblast mozku není známa. Zde jsme zkoumali tuto možnost zaměřením se na roli histon deacetylázy 3 (HDAC3) závislé regulace paměti a genové exprese související s věkem. Zjistili jsme, že delece nebo narušení HDAC3 v dorzálním hipokampu zlepšuje poškození dlouhodobé paměti a synaptické plasticity související s věkem u 18-měsíčních myší, což je účinek, který se zdá být částečně zprostředkován základními cirkadiánními hodinami gen Period1 (Per1). Obecně tato práce naznačuje, že Per1 může být mechanismem přispívajícím k poruchám souvisejícím s věkem v dlouhodobém horizontu.Paměťa cirkadiánní rytmičnost, v závislosti na struktuře.
Výsledek
HDAC3 přispívá k věkuPaměťpostižení. Nejprve jsme testovali, zda represivní histondeacetyláza HDAC3 hraje roli v souvislosti s věkemPaměťpokles. HDAC3 je silný negativní regulátor tvorby paměti a narušení HDAC3 u mladých zvířat může přeměnit podprahovou událost učení na jednu generující trvalou dlouhodobou paměť pro více úkolů11–14. Použili jsme dvě metody narušení HDAC3 v dorzálním hipokampu stárnoucích (18-měsíčních) myší. Nejprve jsme vytvořili fokální homozygotní delece HDAC3 infuzí AAV2.{10}}CaMKII-Cre rekombináza (1 μl na stranu) do dorzálních hipokampů HDAC3flox/flox myší (doplňkový obrázek 1a). Za druhé, k selektivnímu blokování enzymatické aktivity HDAC3 jsme použili dominantně-negativní bodový mutantní virus, AAV2.{18}}CMV-HDAC3(Y298H)-v5, který specificky blokuje aktivitu HDAC3 deacetylázy, aniž by ovlivnil interakce protein-protein (viz ref. 12,15–17 Doplňkový obr. 1b). Viry dostaly infuzi dvětýdny před tréninkem, což umožňuje těsnou prostorovou a časovou kontrolu nad našimi manipulacemi s HDAC3, abychom se vyhnuli potenciálním vedlejším účinkům, které by mohly nastat z dlouhodobého narušení HDAC3 během vývoje18,19. Dva týdny po infuzi AAV-CaMKII-Cre (doplňkový obrázek 1c) jsme pozorovali, že exprese mRNA Hdac3 nebyla ovlivněna tréninkem v umístění objektuPaměť(OLM), ale genetická delece hipokampálního Hdac3 narušila expresi mRNA Hdac3 (doplňkový obrázek 1d) kromě proteinu HDAC3 (doplňkový obrázek 1a).
Chcete-li zjistit, zda se delece HDAC3 zlepšujePaměťu stárnoucích myší jsme testovali účinky hipokampální delece HDAC3 (HDAC3flox/flox) nebo narušení aktivity (HDAC3 (Y298H)) na dlouhodobou paměť pro OLM (obr. 1a). V souladu s četnými zprávami o deficitech paměti v hipokampu souvisejících s věkem jsme zjistili, že stárnoucí myši 18-mo wildtype (HDAC3 plus / plus ) vykazovaly špatnou paměť na OLM po 10-minutovém tréninku a nevykazovaly žádné významné zvýšení DI mezi tréninkem a testováním (obr. 1b, šedé pruhy). Důležité je 10-minutové školení.
2 PŘÍRODA KOMUNIKACE|(2018)9:3323 |DOI: 10.1038/s41467-018-05868-0 |www.nature.com/naturecommunications
Obr. 1 Vymazání nebo narušení HDAC3 zlepšuje věkem podmíněná poškození paměti hipokampu. postup OLM. AAV byl podán 2 týdny před tréninkem. b 18-moní myši HDAC3flox/flox vykazovaly výrazně lepší paměť pro OLM ve srovnání s divokým typem (HDAC3 plus / plus) sourozenci (Dvoucestná ANOVA: Significant Genotype x Session Interakce (F(1,29) {{1{ {12}}}}.96, p < 0.001),="" sidakovy="" posthoc="" testy,="" ***p="">< 0.001,="" n="" {{="" 16}}(5f),="" 17(6f)).="" c="" celkový="" průzkum="" byl="" pro="" obě="" skupiny="" v="" testu="" podobný="" (t(29)="1.67," ***p="0.11)." d="" narušení="" aktivity="" hdac3="" v="" dorzálním="" hipokampu="" pomocí="" aav-hdac3="" (y298h)-v5="" také="" zlepšilo="" poruchy="" paměti="" hipokampu="" u="" 18-mo="" myší="" (dvoucestná="" anova:="" hlavní="" účinek="" relace="" (f(1,16)="" {{35="" }},96,="" p="">< 0,001),="" sidakovy="" post="" hoc="" testy,="" ***p="">< 0,001,="" *p="">< 0,05,="" n="9,10;" všichni="" muži).="" e="" celková="" doba="" průzkumu="" byla="" pro="" obě="" skupiny="" v="" testu="" podobná="" (t(16)="0,28," p="0,78)." f="" orm="" experimentální="" postup,="" 2="" týdny="" po="" dokončení="" olm.="" g="" obě="" 18-mo="" myši="" hdac3flox/flox="" a="" hdac3="" plus="" plus="" sourozenci="" vykazovali="" malou="" preferenci="" pro="" nový="" objekt="" (dvoucestná="" anova,="" žádné="" hlavní="" účinky="" nebo="" interakce,="" n="14(5" f),="" 17(="" 6="" f)).="" h="" celková="" doba="" průzkumu="" byla="" pro="" obě="" skupiny="" v="" testu="" podobná="" (t(29)="0,59," p="0,56)." i="" narušení="" aktivity="" hdac3="" v="" dorzálním="" hipokampu="" pomocí="" aav-hdac3(y298h)="" také="" nemělo="" žádný="" vliv="" na="" orm,="" přičemž="" žádná="" skupina="" nevykazovala="" preferenci="" pro="" nový="" objekt="" (dvoucestná="" anova,="" žádné="" hlavní="" účinky="" nebo="" interakce,="" n="9" ,10;="" všichni="" muži).="" j="" skupiny="" vykazovaly="" podobnou="" celkovou="" dobu="" průzkumu="" při="" testu="" (t(16)="0,28," p="0,78)." data="" jsou="" uvedena="" jako="" průměr="" ±="" sem;="" černé="" kruhy,="" muži;="" šedé="" čtverce,="" samice="" normálně="" produkují="" silnou="" dlouhodobou="" paměť="" u="" mladých="" myší20.="" naproti="" tomu="" 18-mo="" sourozenci="" hdac3flox/flox="" vytvořili="" robustní="" dlouhodobou="" paměť="" (obr.="" 1b,="" modrozelené="" pruhy)="" s="" výrazným="" zvýšením="" preference="" pohybujícího="" se="" objektu="" v="" klidu="" ve="" srovnání="" s="" tréninkem.="" myši="" hdac3flox/flox="" vykazovaly="" signifikantně="" vyšší="" di="" při="" testu="" než="" myši="" hdac3="" plus/plus="" navzdory="" podobným="" úrovním="" celkového="" zkoumání="" během="" testovacího="" sezení="" (obr.="" 1c).="" podobné="" účinky="" jsme="" pozorovali="" u="" viru="" aav-hdac3(y298h)="" specifického="" pro="" aktivitu.="" stárnoucí,="" 18-mo="" prázdné="" vektorové="" (ev)="" kontrolní="" myši="" vykazovaly="" špatnou="" paměť="" na="" olm,="" zatímco="" myši="" s="" infuzí="" aav-hdac3="" (y298h)="" do="" dh="" vykazovaly="" výrazně="" vyšší="" preference="" pro="" pohybující="" se="" objekt="" beze="" změny="" v="" celkovém="" průzkumu="" (obr.="" id,="" e).="" na="" rozdíl="" od="" špatné="" dlouhodobé="" paměti="" pozorované="" u="" 18-mo="" myší="" divokého="">
(obr. 1b, d), krátkodobá paměť pro OLM (testováno 60 m po
získávání; Doplňkový obrázek 2a) byl neporušený pro myši HDAC3 plus / plus a HDAC3flox/flox (doplňkový obrázek 2b, c) a mezi těmito skupinami nebyl žádný významný rozdíl v úzkosti (doplňkový obrázek 2d). Také jsme nepozorovali žádný významný rozdíl v pohybu mezi skupinami během habituace (doplňkové obrázky 2e, f, 8a, b). Tyto výsledky společně ukazují, že poškození OLM související s věkem se zlepšují delecí nebo narušením HDAC3 v dorzálním hipokampu.
Dále jsme testovali, zda naše fokální manipulace s HDAC3 ovlivnila rozpoznávání objektůPaměť(ORM), který pro vyhledání nevyžaduje dorzální hipokampus20. V tomto úkolu je jeden známý předmět nahrazen novým předmětem (obr. 1f). Vymazání HDAC3 v dorzálním hipokampu nezachrániloPaměťpro ORM, přičemž myši HDAC3 plus/plus a HDAC3flox/flox nevykazovaly žádnou preferenci pro nový objekt při testu ve srovnání s tréninkem (obr. 1g). Skupiny se opět nelišily v celkové úrovni průzkumu během testovacího sezení (obr. 1h). Podobně narušení HDAC3 v hipokampu specifické pro aktivitu nebylo schopno zlepšit věkem podmíněné poruchy ORM (obr. 1i, j). Poškození dlouhodobého ORM související s věkem se tedy nezlepšilo hipokampální delecí nebo narušením HDAC3.
Naše výsledky společně naznačují, že delece nebo narušení HDAC3 v dorzálním hipokampu může dlouhodobě zlepšit věkPaměťdeficity pro úkol závislý na hipokampu (OLM; obr. 1a–e) bez ovlivnění paměti pro úkol nezávislý na hipokampu (ORM; obr. 1f–j). Důležité je, že všechny myši vykazovaly krátkodobě intaktníPaměťpro OLM (doplňkový obr. 2), což naznačuje, že tato zvířata získávají paměť normálně, ale nedaří se jim konsolidovat tyto informace do pozorovatelné dlouhodobéPaměť. Vzhledem k tomu, že krátkodobá paměť je nezávislá na transkripci (pro přehled21), je toto zjištění v souladu s myšlenkou, že genová exprese vyvolaná učením je u stárnoucích myší změněna, což má za následek zhoršení dlouhodobé paměti související s věkem.
Narušení HDAC3 zvrátit věkem podmíněná poškození LTP.
Abychom otestovali, zda HDAC3 také přispívá k poškození synaptické plasticity související s věkem, zkoumali jsme dlouhodobou potenciaci (LTP) v akutních hipokampálních řezech po deleci nebo narušení HDAC3. LTP je také narušena s věkem, zvláště když se stimulační protokol blíží prahu indukce LTP22. Dva týdny po virové infuzi jsme připravili hipokampální řezy a indukovali LTP jediným sledem 5 theta vzplanutí do Schafferových kolaterálních vstupů a zaznamenali pole EPSP z apikálních dendritů CA1b. Tato relativně mírná forma stimulace produkovala stabilní hladinu LTP v mladých řezech HDAC3 plus/plus (obr. 2a). Vymazání HDAC3 v hippocampu zvýšilo LTP, přičemž myši HDAC3flox/flox vykazovaly výrazně vyšší potenciaci než kontroly divokého typu. Jak bylo předpovězeno, stárnoucí-18-mo myši HDAC3 plus / plus vykazovaly zhoršenou LTP a delece HDAC3 tento deficit zlepšila, produkovala LTP srovnatelnou s tím u mladých myší divokého typu (obr. 2b, c) bez vlivu na základní synaptické převod (obr. 2g, h).
Podobné výsledky jsme pozorovali u narušení specifického pro aktivitu. Zde jsme použili návrh v rámci subjektu, ve kterém byly mladým a starým myším divokého typu infuzí podán kontrolní virus (AAV-EV) do jednoho hipokampu a AAV-HDAC3(Y298H) do kontralaterálního hipokampu. Stejně jako dříve jsme zjistili, že narušení aktivity HDAC3 zvýšilo LTP v řezech z mladých myší (obr. 2d) a zlepšilo poškození LTP související s věkem v řezech ze stárnoucích myší (obr. 2e, f), aniž by narušilo základní synaptický přenos (obr. 2i , j). Buď delece nebo narušení HDAC3 může tedy zlepšit věkem podmíněná poškození hipokampální LTP.
Delecí HDAC3 je zlepšena podskupina věkem poškozených genů. Naše data naznačují, že odstranění nebo narušení HDAC3 zlepšuje poškození dlouhodobé paměti a synaptické plasticity související s věkem. Dále jsme se zeptali, zda by deficity v expresi hipokampálních genů související s věkem mohly být také zlepšeny delecí HDAC3. Předpokládali jsme, že dysregulace aktivity HDAC3 ve starém mozku vede k neobvykle represivní chromatinové struktuře, která omezuje genovou expresi, což v konečném důsledku zhoršuje dlouhodobéPaměť. Abychom identifikovali, které konkrétní geny jsou regulovány HDAC3 v mladém a stárnoucím mozku, provedli jsme experiment se sekvenováním RNA, ve kterém jsme porovnávali mladé (3-měsíce) myši divokého typu, stárnoucí (18-měsíc) HDAC3 myši plus/plus a stárnoucí (18-měsíc) sourozenci HDAC3flox/flox. K identifikaci změn genové exprese běhemPaměťkonsolidace byla zvířata v každé skupině usmrcena 60 m po 10-min OLM tréninku a porovnána s kontrolami v domácí kleci (HC). Po zmapování a zvážení haploidního genomu23,24 byla hodnocena kvalita sekvenování (doplňkový obr. 3a, b) a byly zkoumány významné rozdíly v profilech exprese mezi všemi páry vzorků pro p <>
Očekávali jsme, že zkušenostmi indukovaná genová exprese bude ve starém mozku změněna, jak bylo popsáno dříve, přičemž podskupina genů se po učení neexprimuje. Zaměřili jsme se proto na ty geny exprimované na významně vyšších úrovních v trénovaných skupinách ve srovnání s kontrolami v domácí kleci. Zatímco každá skupina (Young WT, Old WT, Old HDAC3flox/flox) vykazovala značný počet genů indukovaných tréninkem OLM, každá skupina vykazovala jedinečný profil genové exprese (obr. 3a, doplňkové tabulky 1–3). Staré mozkyupregulovány jak u mladých divokých typů, tak u starých HDAC3flox/flox skupin, které nevykazují zkušenostmi indukované zvýšení u starého hippocampu divokého typu. Jedná se o geny, které se po tréninku OLM ve starém mozku normálně neexprimují, ale jsou zachráněny delecí HDAC3 a mohou proto fungovat jako mechanismus, jehož prostřednictvím delece HDAC3 zlepšuje poruchy paměti související s věkem. V této skupině byly identifikovány čtyři geny: Nr4a1, Egr1, Tsc22d3 a Per1. Všechny tyto geny byly široce zapojeny do tvorby paměti6,26,27, ačkoli toto je první studie, která prokázala, že zkušenostmi indukovaná exprese těchto genů je s věkem narušena a zachráněna delecí HDAC3.
Odstranění HDAC3 zlepšuje deficity související s věkem v Per1. Z genů identifikovaných prostřednictvím našeho RNA-seq byl Period1 (Per1) nejsilněji indukován tréninkem OLM ve skupině HDAC3flox/flox (obr. 3c). Tento cíl je obzvláště zajímavý, protože Per1 je obvykle studován v kontextu cirkadiánních rytmů, ale byl také zapojen do hipokampu.Paměťformace6,28,29. Protože je známo, že stárnutí je doprovázeno poruchami cirkadiánních rytmů5 a paměť je spojena s denní dobou2,30, může tento cíl HDAC3 představovat kritické a nedostatečně prozkoumané rozhraní mezi stárnutím, modifikací chromatinu a cirkadiánními hodinami.
K dalšímu zkoumání exprese Per1 u starých HDAC3 plus/plus a starých HDAC3flox/flox zvířat jsme použili RT-qPCR a ChIP-qPCR. Zjistili jsme, že trénink OLM nedokázal vyvolat upregulaci Per1 v dorzálním hipokampu 18-mo HDAC3 plus / plus myší, ale v nepřítomnosti HDAC3 (HDAC3flox/flox) trénink OLM spustil významný nárůst Per1 mRNA ( Obr. 3f). Také jsme měřili expresi dvou dalších genů, které dlouhodobě hrají dobře zdokumentovanou roliPaměťformace: Arc a cFos31. Zkušeností indukovaná exprese Arc byla neporušená ve stárnoucím mozku divokého typu a nebyla ovlivněna delecí HDAC3 (doplňkový obrázek 3c). Na druhé straně expresi cFos se nepodařilo vyvolat tréninkem OLM ve starém hipokampu HDAC3 plus / plus, ale odstranění HDAC3 nebylo dostatečné k obnovení této neúspěšné indukce (doplňkový obrázek 3d). Vymazání HDAC3 proto pouze obnoví expresi podskupiny genů vyvolaných zkušenostmi ve stárnoucím mozku, včetně Per1.
Abychom určili, zda delece HDAC3 obnoví expresi Per1 podporou acetylace histonu spolu s jeho promotorem, dále jsme měřili acetylaci histonu 4, lysinu 8 (H4K8Ac) v místě promotoru Per1 CRE pomocí imunoprecipitace chromatinu (ChIP-qPCR). H4K8Ac je marker aktivace transkripce32 a má se za to, že je cílem HDAC311,12. Trénink OLM nezměnil hladiny H4K8Ac na promotoru Per1 ve starém mozku divokého typu, ale v nepřítomnosti HDAC3 byly hladiny H4K8Ac na promotoru Per1 významně zvýšeny v reakci na trénink OLM (obr. 3g). U Arc a cFos jsme nezaznamenali žádnou změnu obsazenosti H4K8Ac napříč skupinami (doplňkový obrázek 3e, f). Tyto výsledky společně naznačují, že delece HDAC3 zvyšuje acetylaci na promotoru Per1 a expresi Per1 mRNA v reakci na učení.
Jednou z důležitých otázek je, zda pozorované změny v Per1 jsou způsobeny změnami v cirkadiánním rytmu HDAC3flox/flox myší. Pokud delece HDAC3 v dorzálním hippocampu změní cirkadiánní rytmičnost, mohlo by to vysvětlit pozorované změny v expresi Per1 i dlouhodobéPaměťformace. Abychom to vyloučili, hodnotili jsme cirkadiánní rytmus mladých (3-měsíců) a stárnoucích (18-měsíců) myší HDAC3flox/flox a jejich sourozenců HDAC3 plus/plus po infuzi AAV-CaMKII-Cre. Po 2 týdnech strhávání do 12hodinového cyklu světlo/tma (LD) byly myši umístěny do konstantní tmy (DD), aby se změřily endogenní cirkadiánní rytmy (doplňkový obrázek 4a). Nepozorovali jsme žádný rozdíl ve vzorcích cirkadiánní aktivity mezi myšmi HDAC3 plus / plus a HDAC3flox/flox v žádné věkové skupině (doplňkový obr. 4b–f), což naznačuje, že hipokampální HDAC3 nemá žádný vliv na cirkadiánní rytmus. Pozorované změny v expresi Per1 a formování dlouhodobé paměti po deleci HDAC3 tedy nelze vysvětlit změnami v cirkadiánní rytmičnosti.
Per1 je indukován tréninkem OLM a regulován HDAC3.
Dále jsme chtěli zjistit, zda je hipokampální Per1 potřeba dlouhodoběPaměťformace. Nejprve jsme hodnotili, zda učení závislé na hippocampu typicky indukuje expresi Per1 mRNA. Obětovali jsme mladé (3-měsíční) myši divokého typu 60 m po získání buď OLM nebo kontextového podmiňování strachu (CFC)12. Exprese mRNA Per1 byla významně upregulována u zvířat trénovaných buď s OLM (obr. 4a) nebo CFC (obr. 4b) ve srovnání s kontrolami v domácí kleci, což naznačuje, že exprese mRNA Per1 je typicky indukována v hipokampu během konsolidace paměti pro více úkolů.
Abychom určili, zda by toto zkušenostmi vyvolané zvýšení Per1 mohlo být zprostředkováno prostřednictvím HDAC3, dále jsme použili ChIP-qPCR k měření obsazenosti HDAC3 po tréninku OLM na různých místech spolu s promotorem Per1 v mladém hipokampu (obr. 4c nahoře). Zjistili jsme, že obsazenost HDAC3 u promotoru Per1 byla snížena na všech třech testovaných místech po tréninku OLM (obr. 4c, dole). Spolu s naším předchozím zjištěním, že delece HDAC3 obnovuje acetylace při expresi mRNA Per1 i Per1 (obr. 3), to silně naznačuje, že HDAC3 reguluje expresi Per1 v dorzálním hipokampu a dysregulace HDAC3 může přispívat k věkem podmíněným poruchám u zkušenostmi indukovaných Za1 výraz. PER1 proto může být součástí klíčového mechanismu, jehož prostřednictvím delece HDAC3 zmírňuje poškození související s věkem v hipokampu dlouhodoběPaměťformace.
