Neuroprotektivní vlastnosti 4-aminopyridinu

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Michael Dietrich, PhD, Hans-Peter Hartung, MD, PhD, FRCP, a Philipp Albrecht, MD

Abstraktní

Jako antagonista napěťově řízených draslíkových (Kv) kanálů se 4-aminopyridin (4-AP) používá jako symptomatická terapie u několika neurologických poruch. Zlepšení zrakových funkcí a motorických dovedností a úleva od únavy u pacientů s RS byly připisovány 4-AP. Jeho léková forma s prodlouženým uvolňováním (fampridin) byla schválena pro symptomatickou léčbu poruchy chůze u RS. Příznivé účinky byly vysvětleny blokádou axonálních Kv kanálů, čímž se zlepšilo vedení podél demyelinizovaných axonů. Přibývající množství důkazů však naznačuje, že 4-AP může mít další vlastnosti nad rámec symptomatického způsobu působení. V tomto přehledu shrnujeme preklinická a klinická data o možných neuroprotektivních vlastnostech 4-AP.

4-Aminopyridin u neurologického onemocnění

Aminopyridiny jsou skupinou monoaminových a diaminoderivátů pyridinu, které inhibují napěťově řízené draslíkové (Kv) kanály. Jako výzkumné nové látky byly použity zejména 2 širokospektrální blokátory draslíkových kanálů 4-aminopyridin (4-AP) a 3,4-aminopyridin (3,4- DAP). u různých neurologických onemocnění. I když je 3,4-DAP silnějším antagonistou draslíkových kanálů, 4-AP prostupuje snadněji hematoencefalickou bariérou1 a byl klinicky lepší u pacientů s RS, zejména pokud jde o zlepšení zrakových funkcí,2 únavu ,3 kognice,4 a rychlost chůze.1 Kromě toho se uvádí, že 4-AP usnadňuje nervové vedení u neurologických onemocnění jiných než MS.5,6

Účinky cistanche: Chraňte neurony

Ve zdravých axonech jsou kanály Kv1.1 a Kv1.2 seskupeny poblíž Ranvierových uzlů.7 Tyto kanály se po demyelinizaci obnaží a migrují přes demyelinizovaný segment. Současně se exprese těchto kanálů několikanásobně zvýší.8 Toto nesprávně zaměřené přerozdělení Kv kanálů zhoršuje přenos akčních potenciálů, což vede k trvalé invaliditě. 4-AP blokuje tyto exponované draslíkové kanály, a proto zvyšuje přenos signálu.9,10 Kanál Kv1.3 byl objeven v lidských T-buňkách,11 bylo zjištěno, že je vysoce exprimován na zánětlivých infiltrátech v mozku MS12 a je exprimované na makrofázích, mikrogliích a efektorových paměťových T buňkách.13 Selektivní a neselektivní blokátory Kv1.3 kanálů by tak mohly poskytovat imunomodulační vlastnosti inhibicí buněčné proliferace a prozánětlivé sekrece cytokinů.14 Studie před rokem 2009 nedokázaly 4-AP jako symptomatická léčba RS, protože hladiny léku v krvi u pacientů byly nepředvídatelné, přičemž nadměrné dávky byly spojeny s rizikem epileptických záchvatů a poruchy vědomí.15–18 Proto byl vyvinut fampridin, léková forma 4-AP s prodlouženým uvolňováním a byl následně schválen pro symptomatickou léčbu poruchy chůze u RS.19–23 Je zajímavé, že v poslední době stále více důkazů naznačuje, že kromě těchto Pokud jsou potvrzeny symptomatické účinky, 4-AP může mít další ochranné vlastnosti.

Hodnocení 4-AP pomocí modelů in vitro

In vitro byly na mnoha modelech pozorovány neuroprotektivní účinky 4-AP. Když byly motorické neurony (MN) diferencované z indukovaných pluripotentních kmenových buněk pacientů s amyotrofickou laterální sklerózou nesoucí mutace genu FUS a SOD1 vystaveny 4-AP, nerovnováha iontových kanálů byla opravena, hladina neuronální aktivity zvýšena, endoplazmatické retikulum stres se zmenšil a aktivace kaspázy se utlumila. Mutované MN vykazovaly nižší sodíkové proudy a poměry Na plus/K plus, což může být alespoň částečně důvodem jejich hyperexcitability. To se zvrátilo po 4-léčbě AP, která vedla ke snížení draslíkových proudů a obnovení vzorců spontánní aktivity a synaptického vstupu v MN.{5}}Léčba AP snížila uvolňování prozánětlivých mediátorů z lidských mikroglií napadených amyloidem- beta a chráněné kultivované krysí hipokampální neurony koupané v supernatantech z mikroglií ošetřených beta-amyloidem. Jiné studie in vitro uvádějí, že 4-AP zvyšuje fosforylaci proteinu vázajícího element na cAMP, chráněnou před buněčným stresem glutamátem, NMDA a 3-nitropropionovou kyselinou vyvíjenou na neurony cerebelárních granulí novorozenců potkana. Glutamát vede ke snížené životaschopnosti také v buňkách předkondicionovaných 4-AP, ale bez významné aktivace kaspázy-3. Tato pozorování naznačují, že 4-AP je primárně účinný proti nekrotické excitotoxicitě.27 Bylo také prokázáno, že chrání primární kultury neuronů před nedostatkem kyslíku a glukózy nebo před toxicitou ouabainu/DL-tři{21}}benzyloxyasparagové kyseliny.28

neuroprotektivní účinek Cistanche

Předklinické studie in vivo na 4-AP

Několik studií zkoumalo ochranné účinky 4-AP u různých modelů onemocnění (tabulka 1). V modelech poškození periferních nervů při rozdrcení nervů profylaktická a časná 4- léčba AP vyvolala obnovení rychlosti nervového vedení, podpořila remyelinizaci a zvětšila axonální oblast. Posledně jmenovaná pozorování byla vysvětlena účinky podobnými těm, které se objevují po elektrické stimulaci, například zvýšení hladin neuronálního mozkového neurotrofického faktoru (BDNF). krysy indukovaly poškození neuronů a zvýšenou mikrogliální aktivaci. Bylo zjištěno, že denní podávání 1 mg/kg 4-AP potlačuje mikrogliální aktivaci a poskytuje neuroprotekci. To bylo přičítáno 4-schopnosti AP blokovat neinaktivující navenek usměrňující K plus proud v aktivovaných mikrogliích a snižovat buněčnou produkci prozánětlivých cytokinů.25 Výzkumy využívající in vivo model hipokampální neurotoxicity indukované kainátem odhalily silné neuroprotektivní účinky { {11}}AP, která by mohla být zrušena nekompetitivním antagonistou NMDA receptoru MK-801 a antagonistou adenosinu A1 8-cyklopentylteofylinem. Tato pozorování naznačují, že receptory NMDA jsou v tomto modelu relevantní pro 4-ochranu zprostředkovanou AP.30 Na zvířecím modelu autoimunitní neuropatie u potkanů ​​Lewis 4-AP zlepšila klinickou závažnost a patologické elektrofyziologické nálezy. Autoři navrhli, že axonální ochrana byla zajištěna blokováním sodíkem zprostředkovaných vnitřních proudů v časné fázi, protože vysoké membránové potenciály v akutní fázi zánětu mohou být neurotoxické. V chronické fázi se nervové vedení potenciálně zlepšilo zablokováním draslíkem zprostředkovaného vnějšího proudu.1

U experimentální autoimunitní encefalomyelitidy (EAE), modelu imunitně zprostředkovaného zánětu CNS replikujícího základní rysy RS, bylo hlášeno, že blokáda Kv kanálu inhibuje aktivaci T-buněk, potenciálně blokováním kanálů podrodiny Kv1.3 a zeslabenou axonální demyelinizací. a degenerace působením na kanál K.3.1 na astroglii, potenciálně indukující signál BDNF. ling. U proteolipidových proteinů indukované EAE u SJL myší 4-ošetření AP významně zlepšilo digitální skóre, které bylo potvrzeno patologicky. Bylo pozorováno, že exprese gliálního fibrilárního kyselého proteinu je u myší ošetřených 4-AP snížena a aktivace T-buněk a polarizace Th1/17 byly zmírněny. Avšak v chronickém modelu EAE indukovaném myelinovým oligodendrocytovým glykoproteinem (MOG) u myší C57BL/64-AP nezměnil průběh EAE.5 Jiná studie také zkoumala účinky {{19} } AP v modelu MOG-EAE u myší C57BL/6 a hlášeny symptomatické, ale žádné chorobu modifikující účinky. Ani profylaktické, ani terapeutické 4-AP ošetření nezmírnilo závažnost digitálního průběhu EAE, zatímco 4-AP léčená zvířata vykazovala zlepšenou pohyblivost hodnocenou pomocí analýzy stopy a rotarodu. Demyelinizace míchy, poškození neuronů a zobrazení změn objemu mozku MRI zůstalo nezměněno. Proliferace, IL17 nebo produkce IFN-y CD4* T-buněk také nebyly ovlivněny.3

Nedávno jsme prokázali, že kromě svých symptomatických účinků na zvýšení nervového vedení může 4-AP zabránit neurodegeneraci sítnice během experimentální optické neuritidy (EAEON) indukované MOG peptidem u myší C5BL6.'Použití optické koherentní tomografie in vivo( OCT zobrazení, testování zrakových funkcí a histologické hodnocení jsme pozorovali snížení rozsahu degenerace vnitřních vrstev sítnice v modelech EAEON, a to jak pro profylaktické, tak pro terapeutické podávání 4-AP. V tomto modelu 4-AP potencoval účinky imunomodulační léčby modulátorem sfingosin-1-fosfátového receptoru fingolimodem, což naznačuje nezávislé způsoby účinku. Je rozumné předpokládat, že tento účinek není omezen na samotný fingolimod a je aplikovatelný na 4-AP v kombinaci s dalšími imunomodulačními léky na RS. V naší studii histologie zrakového nervu odhalila, že na rozdíl od fingolimodu4-AP neměl žádný významný vliv na mikrogliální aktivaci a/nebo infiltraci lymfocytů nebo makrofágů, což naznačuje, že ochranné účinky nesouvisely s protizánětlivým režimem akce. V souladu s tím 4-ošetření AP neinterferovalo s indukcí EAE, ověřeno testem restimulace T-buněk. Kromě toho jsme pozorovali významnou ochranu před neurodegenerací sítnice při léčbě 4-AP také v modelu nezánětlivého rozdrcení zrakového nervu, zatímco zde neměl fingolimod žádný účinek. Je zajímavé, že in vitro 4-léčení AP nedokázalo přímo ochránit gangliové buňky sítnice Místo toho histologické a in vitro experimenty ukázaly 4-stabilizaci myelinu a prekurzorových buněk oligodendrocytů zprostředkovanou AP. Tento účinek byl spojen se zvýšeným přítokem vápníku a jadernou translokací jaderného faktoru aktivovaných T-buněk (NFAT). Již dříve bylo prokázáno, že 4-AP reguluje homeostázu vápníku zvýšením hladin inositoltrifosfátu, a tím způsobuje uvolňování vápníku z intracelulárních zásob vápníku. K potvrzení těchto stavů však mohou být užitečné další studie 4-AP v demyelinizačních modelech, například léčba kuprizonem nebo modely transgenních myší s indukovatelnou ablací oligodendrocytů. Stávající studie na zvířecích modelech demyelinizace se zaměřují hlavně na schopnost 4-AP obnovit akční potenciál, ale postrádají další výzkumy oligodendrogliálních buněk (obrázek).

Je důležité zmínit, že dávky potřebné k dosažení těchto účinků in vitro jsou přibližně 100-1,000xvyšší než koncentrace dosažená u pacientů. Proto mohou být pro pozorování provedená in vivo a in vitro relevantní další nebo jiné mechanismy. Ty zahrnují, ale nejsou omezeny na, sníženou ztrátu energie demyelinizovaných axonů v důsledku zablokování úniku draslíku a silnější ochranné a reparační kapacity v mozku nepřímo vyplývající ze zvýšené mobility a většího cvičení.

Navíc nelze vyloučit imunomodulační mechanismy 4-AP, zejména proto, že snížená aktivace T-buněk a polarizace Th1/17 byla prokázána u PLP-indukované EAE u myší SJL.3 Kromě toho předklinické studie jiných modelů onemocnění zjistily zeslabená aktivace a snížené uvolňování prozánětlivých mediátorů mikroglií. Tyto kontroverzní výsledky zdůrazňují různé patologické mechanismy různých zvířecích modelů, kde jsou imunitní buňky více či méně citlivé na léčebné strategie. Nesrovnalosti mezi našimi výsledky a předchozími zprávami o pouze symptomatických účincích u EAE indukované MOG peptidem u myší C57BL6“ lze alespoň částečně vysvětlit (1) rozdíly v dávkování, protože jiní používali dávky 100 ug a 600 ug/myš/den, vzhledem k tomu, že jsme podávali 250 ug/myš/den; (2) trvání léčby (40, 60 a 90 dní podle Göbela a kol.* Moriguchiho a kol.3 a Dietricha a kol., „v tomto pořadí); a (3) množství MOG použitého k imunizaci, protože jsme použili 200 ug MOG na myš, zatímco ostatní použili pouze 100 ug MOG na myš. Nedávný výzkum se zaměřuje na roli střevní mikroflóry při ovlivňování indukce a závažnosti EAE změnou rovnováhy efektorových a regulačních T a B buněk. Mikrobiom hlodavců se může v jednotlivých zvířecích zařízeních lišit, což vede k rozdílům v závažnosti EAE, průběhu a možná i odpovědi na terapeutika. Dohromady by tyto faktory mohly odpovídat za heterogenitu výsledků studie.

neuroprotektivní účinek Cistanche

Klinický přístup k 4-AP u pacientů s RS

Několik klinických studií od 80. let již naznačilo příznivé účinky 4-AP u lidí s RS. Mimo jiné zjistili zlepšení motorických40-2 a zrakových funkcí-44 a únavy.5-7 Nicméně omezení studie, absence homogenního designu studie a malý počet pacientů zakazovaly schválení {{ 5}} AP běžnými autoritami a vedly k off-label používání po více než 3 desetiletí.4 Na druhou stranu některé z těchto studií usnadnily vývoj formulace s postupným uvolňováním (SR-4-AP nebo fampridin), protože zjistili, že plazmatické hladiny původní sloučeniny s okamžitým uvolňováním jsou nekonzistentní a nepředvídatelné. První klinickou studii se SR-4-AP provedli v roce 1997 Schwid et al.,49 která prokázala významné zlepšení rychlosti chůze a trend ke zlepšení svalové síly.

Technologický systém s prodlouženým uvolňováním byl vyvinut společností Elan Pharmaceuticals. Používal takzvaný matricový systém absorpce léčiva, sestávající z patentované polymerní matrice, která řídí uvolňování difúzí a erozi gastrointestinálními enzymy. To vedlo k nižším maximálním plazmatickým hladinám léčiva a delšímu trvání účinku.1 Zpočátku byl SR-4-AP testován ve 4 studiích. V roce 2007 Goodman et al.1 provedli u 36 pacientů s RS 5 mg přírůstky od 10 do 40 mg dvakrát denně. V Timed 25 Foot Walk Test (T25FW) nebyla pozorována žádná významná změna, zatímco post hoc analýza převádějící data na rychlost chůze (ft/s) dosáhla významnosti. Kromě toho bylo pozorováno zlepšení sebereportované únavy. Ve studii srovnávání dávek v roce 2008 (randomizované, dvojitě zaslepené, placebem kontrolované) Goodman et al.2 rekrutovali 206 pacientů, kteří dostávali placebo nebo dávky 10, 15 nebo 20 mg dvakrát denně. Opět, post hoc analýza porovnávající zlepšení rychlosti chůze zjistila významně lepší výsledky pro všechny léčebné skupiny jednotlivě a pro všechny pacienty léčené SR-4-AP společně ve srovnání s placebem. Síla múzy se zlepšila u skupin léčených 10-mg a 15-mg, ale ne u skupin léčených 20 mg ve srovnání se subjekty s placebem. Ve 2 následných Ⅲ klinických studiích (21-týdenní dvojitě zaslepená placebem kontrolovaná randomizovaná studie, 301 pacientů a 14-týdenní dvojitě zaslepená placebem kontrolovaná studie, 239 pacientů) s 10 mg dvakrát denně, pacienti byli rozděleni do skupiny reagujících a nereagujících, definovaných konzistentním zlepšením na T25FW. V obou studiích bylo zvýšení rychlosti chůze významné ve srovnání se skupinou nereagující nebo placebovou skupinou. Kromě toho došlo ke zlepšení skóre 12-Item MS Walking Scale(MSWS-12) pro respondenty.2122

V otevřené prodloužené studii těchto studií bylo prokázáno, že klinické zlepšení se po vysazení léku ztratilo, ale vrátilo se 2 týdny po opětovném zahájení léčby SR-4-AP.Ampyra/Fampyra, tabletová formulace SR{ {3}}AP obdržela plné schválení Food and Drug Administration v lednu 2010 pro zlepšení chůze u pacientů s RS, ale pouze podmíněné povolení k uvedení na trh v roce 2011 od Evropské lékové agentury (EMA). Na základě uvedených zkoušek bylo schválení podmíněno poskytnutím dlouhodobějších údajů o účinnosti a bezpečnosti. Proto byla zahájena průzkumná fáze II (MOBILE) a potvrzující studie fáze I (ENHANCE).

V průzkumné studii MOBLE se 132 účastníky bylo zjištěno zlepšení globálního dojmu změny pacienta (PGIC), MSWS-12 a rychlosti Timed Up and Go (TUG)23 K vyhodnocení dlouhodobé účinnosti a bezpečnosti Byla provedena SR-4-AP, potvrzující studie ENHANCE (10 mg dvakrát denně u 646 pacientů s RS). Kromě zlepšení hlášených ve studii MOBILE autoři zjistili významné zlepšení u pacientů léčených SR-4-AP na 29-item MS Impact Scale.5 EMA poté udělila bezpodmínečné schválení SR{ {11}}AP pro léčbu pacientů s RS s poruchami chůze. Observační studie fáze ENABLE s 901 pacienty prokázala, že léčba SR-4-AP je pro pacienty s RS prospěšná prostřednictvím sebepociťovaného fyzického fungování a psychického zdraví v prostředí reálného světa2 (tabulka 2).

Na základě slibných preklinických údajů o ochraně před neurodegenerací sítnice popsaných výše provedla naše skupina retrospektivní, multicentrickou studii OCT, aby podélně porovnala neurodegeneraci sítnice mezi 52 pacienty na kontinuální 4-terapii AP a 51 kontrolami, které byly shodné pro všechny relevantní kovariáty pomocí předdefinovaného párovacího algoritmu. V souladu s experimentálními údaji se během souběžné 4-AP terapie snížila degenerace vrstvy nervových vláken makuly sítnice během 2 let. Tato zjištění však musí být potvrzena v nezávislých a ideálně prospektivních kohortových studiích, zejména proto, že velikost účinku byla nízká a míra ztenčení peripapilární vrstvy nervových vláken sítnice a ztenčení buněk makulárních gangliových buněk/vnitřní plexiformní vrstvy se mezi skupinami významně nelišila. . Tyto nesrovnalosti ochranného účinku 4AP pouze na mRNFL, ale ani na pRNFL ani na McGill, nelze snadno vysvětlit. Je důležité zmínit, že protože 4AP je licencován pouze pro zlepšení poruchy chůze u pacientů s EDSS 3.5-5, analyzované míry změn byly zkoumány v pozdějších stádiích onemocnění a bez akutní oční neuritidy. V takovém prostředí dochází pouze k velmi jemným změnám sítnice a k detekci účinků léčby by bylo zapotřebí velkých kohort. Retrospektivní studie u pacientů tedy rozhodně nebyla dostatečně silná, aby spolehlivě detekovala účinky ochranné léčby, a není překvapením, že pouze jeden z výsledků byl pozitivní. Nejcitlivější vrstvou pro detekci účinků léčby byla pravděpodobně mRNFL.

Stručně řečeno, rostoucí množství důkazů in vivo naznačuje, že 4-AP kromě svých dobře známých symptomatických účinků může prevencí neurodegenerace upravit průběh onemocnění EAEON a možná i pacientů s RS. Předběžné důkazy in vitro naznačují zapojení hladin buněčného vápníku a dráhy NFAT, ale vyžaduje další výzkumy k objasnění přesných molekulárních mechanismů, které jsou základem neuroprotektivního účinku 4-AP při imunitně zprostředkované zánětlivé demyelinizaci. Tyto nálezy mohou mít výrazný dopad na léčebné strategie RS, pokud budou potvrzeny v prospektivní randomizované kontrolované klinické studii.

účinek Cistanche

Reference

1. Leussink VI, Montalban X, Hartung HP. Obnovení axonální funkce pomocí 4-aminopyridinu: klinická účinnost u roztroušené sklerózy i mimo ni. CNS léky 2018;32:637–651.

2. Horton L, Conger A, Conger D a kol. Účinek 4-aminopyridinu na vidění u pacientů s roztroušenou sklerózou s neuropatií zrakového nervu. Neurologie 2013;80:1862–1866.

3. Morrow SA, Rosehart H, Johnson AM. Účinek Fampridinu-SR na kognitivní únavu v randomizované dvojitě zaslepené zkřížené studii u pacientů s RS. Mult Scler Relat Disord 2017;11:4–9.

4. Bratr SD, Filli L, Geissler O, a kol. Pozitivní účinky fampridinu na kognici, únavu a depresi u pacientů s roztroušenou sklerózou nad 2 roky. J Neurol 2018; 265:1016–1025.

5. Hayes KC, Blight AR, Potter PJ, et al. Preklinická studie 4-aminopyridinu u pacientů s chronickým poraněním míchy. Paraplegie 1993;31:216–224.

6. Iaci JF, Parry TJ, Huang Z a kol. Dalfampridin zlepšuje senzomotorické funkce u potkanů ​​s chronickým deficitem po uzávěru střední mozkové tepny. Mrtvice 2013;44: 1942–1950.

7. Trimmer JS, Rhodes KJ. Lokalizace napěťově řízených iontových kanálů v mozku savců. Annu Rev Physiol 2004;66:477–519.

8. Rodr´ ıguez-Rangel S, Bravin AD, Ramos-Torres KM, Brugarolas P, S´anchez Rodr´ ıguez JE. Studie vztahu mezi strukturou a aktivitou čtyř nových blokátorů 4-aminopyridinových K(plus) kanálů. Sci Rep 2020;10:52.

9. Bostock H, Sears TA, Sherratt RM. Účinky 4-aminopyridinových a tetraethylamoniových iontů na normální a demyelinizovaná savčí nervová vlákna. J Physiol 1981;313:301-315.

10. Huynh W, Pickering H, Howells J, et al. Účinek fampridinu na axonální excitabilitu u roztroušené sklerózy. Clin Neurophysiol 2016;127:2636–2642.

11. DeCoursey TE, Chandy KG, Gupta S, Cahalan MD. Napěťově řízené K plus kanály v lidských T lymfocytech: role v mitogenezi? Příroda 1984;307:465–468.

12. Rus H, Pardo CA, Hu L a kol. Napěťově řízený draslíkový kanál Kv1.3 je vysoce exprimován na zánětlivých infiltrátech v mozku s roztroušenou sklerózou. Proč Natl Acad Sci USA 2005;102:11094–11099.

13. Wang X, Li G, Guo J a kol. Kanál Kv1.3 jako klíčový terapeutický cíl pro neurozánětlivá onemocnění: současný stav techniky a dále. Přední Neurosci 2019;13:1393.

14. Wulffff H, Calabresi PA, Allie R, et al. Napěťově řízený Kv1.3 K(plus) kanál v efektorových paměťových T buňkách jako nový cíl pro RS. J Clin Invest 2003;111:1703–1713.

15. Burton JM, Bell CM, Walker SE, O'Connor PW. 4-aminopyridinová toxicita s neúmyslným předávkováním u čtyř pacientů s roztroušenou sklerózou. Neurologie 2008;71: 1833–1834.

16. Johnson NC, Morgan MW. Neobvyklý případ toxicity 4-aminopyridinu. J Emerg Med 2006;30:175–177.

17. Schwam E. Těžké náhodné předávkování 4-aminopyridinem kvůli chybě v lékárně. J Emerg Med 2011;41:51–54.

18. Etemadifar M, Saboori M, Chitsaz A, et al. Vliv fampridinu na riziko záchvatu u pacientů s roztroušenou sklerózou. Mult Scler Relat Disord 2020;43:102188.

19. Goodman AD, Cohen JA, Cross A, et al. Fampridin-SR u roztroušené sklerózy: randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná studie s rozmezím dávek. Mult Scler 2007; 13:357–368.

20. Goodman AD, Brown TR, Cohen JA, et al. Srovnávací studie dávek fampridinu s prodlouženým uvolňováním u roztroušené sklerózy. Neurologie 2008;71:1134–1141.

21. Goodman AD, Brown TR, Krupp LB a kol. Perorální fampridin s prodlouženým uvolňováním u roztroušené sklerózy: randomizovaná, dvojitě zaslepená, kontrolovaná studie. Lancet 2009;373: 732–738.

22. Goodman AD, Brown TR, Edwards KR a kol. Studie fáze 3 perorálního dalfampridinu s prodlouženým uvolňováním u roztroušené sklerózy. Ann Neurol 2010;68:494–502.

23. Hupperts R, Lycke J, Short C, et al. Fampridin s prodlouženým uvolňováním a chůze a rovnováha u RS: randomizovaná kontrolovaná studie MOBILE. Mult Scler 2016;22:212–221.

24. Naujock M, Stanslowsky N, Bufffler S, et al. 4-Aminopyridinem indukovaná aktivita zachraňuje hypoexcitabilní motorické neurony před pluripotentními kmenovými buňkami vyvolanými pacientem s amyotrofickou laterální sklerózou. Kmenové buňky 2016;34:1563–1575.

25. Franciosi S, Ryu JK, Choi HB, Radov L, Kim SU, McLarnon JG. Širokospektrální účinky 4-aminopyridinu na modulaci amyloidem beta1-42-indukované buněčné signalizace a funkčních odpovědí u lidských mikroglií. J Neurosci 2006;26:11652–11664.

26. Li S, Wei D, Mao Z a kol. Návrh, syntéza, imunocytochemické vyhodnocení a výzkum molekulárního dokování několika 4-aminopyridinových derivátů jako potenciálních neuroprotektivních činidel pro léčbu Parkinsonovy choroby. Bioorg Chem 2017;73:63–75.

27. Smith AJ, Tauskela JS, Stone TW, Smith RA. Předběžná úprava pomocí 4-aminopyridinu chrání neurony cerebelárních granulí před excitotoxicitou. Brain Res 2009;1294: 165–175.

28. Tauskela JS, Aylsworth A, Hewitt M, Brunette E, Blondeau N. Selhání a záchrana neuroprotekce vyvolané prekondicionováním u těžkých inzultů podobných mrtvici. Neurofar mycology 2016;105:533–542.

29. Tseng KC, Li H, Clark A, et al. 4-Aminopyridin podporuje funkční zotavení a remyelinizaci při akutním poranění periferních nervů. EMBO Mol Med 2016;8:1409–1420.

30. Ogita K, Okuda H, Watanabe M, Nagashima R, Sugiyama C, Yoneda Y. In vivo léčba blokátorem K plus kanálu 4-aminopyridinem chrání před kainátem indukovanou smrtí neuronových buněk prostřednictvím aktivace NMDA receptorů u myší hippocampus. Neurofarmakologie 2005;48:810–821.

31. Moriguchi K, Miyamoto K, Kusunoki S. 4-Aminopyridin zlepšuje experimentální autoimunitní neuritidu u potkanů ​​Lewis. J Neuroimmunol 2017;305:72–74.

32. Schmalhofer WA, Bao J, McManus OB a kol. Identifikace nové třídy inhibitorů napěťově řízeného draslíkového kanálu, Kv1.3, s imunosupresivními vlastnostmi. Biochemistry 2002;41:7781–7794.

33. Varga Z, Company T, Papp F, et al. Exprese draslíkového kanálu v lidských CD4 plus regulačních a naivních T buňkách od zdravých subjektů a pacientů s roztroušenou sklerózou. Immunol Let 2009;124:95–101.

34. Jukkola P, Gu Y, Lovett-Racke AE, Gu C. Potlačení zánětlivé demyelinizace a degenerace axonů prostřednictvím inhibice Kv3 kanálů. Front Mol Neurosci 2017;10:344.

35. Moriguchi K, Miyamoto K, Fukumoto Y, Kusunoki S. 4-Aminopyridin zlepšuje relabující-remitující experimentální autoimunitní encefalomyelitidu u myší SJL/J. J Neuroimmunol 2018;323:131–135.

36. Gobel K, Wedell JH, Herrmann AM, et al. 4-Aminopyridin zlepšuje pohyblivost, ale ne průběh onemocnění na zvířecím modelu roztroušené sklerózy. Exp Neurol 2013;248: 62–71.

37. Dietrich M, Koska V, Hecker C, et al. Ochranné účinky 4-aminopyridinu u experimentální optické neuritidy a roztroušené sklerózy. Mozek 2020;143:1127–1142.

38. Grimaldi M, Atzori M, Ray P, Alkon DL. Mobilizace vápníku z intracelulárních zásob, potenciace vápníkových přechodů indukovaných neurotransmitery a kapacitní vstup vápníku 4-aminopyridinem. J Neurosci 2001;21:3135–3143.

39. van Diemen HA, Polman CH, Koetsier JC, van Loenen AC, Nauta JJ, Bertelsmann FW. 4-Aminopyridin u pacientů s roztroušenou sklerózou: dávkování a hladina v séru související s účinností a bezpečností. Clin Neuropharmacol 1993;16:195–204.

40. Davis FA, Stefoski D, Rush J. Orálně podávaný 4-aminopyridin zlepšuje klinické příznaky roztroušené sklerózy. Ann Neurol 1990;27:186–192.

41. Stefoski D, Davis FA, Faut M, Schauf CL. 4-Aminopyridin zlepšuje klinické příznaky roztroušené sklerózy. Ann Neurol 1987;21:71–77.

42. Stefoski D, Davis FA, Fitzsimmons WE, Luskin SS, Rush J, Parkhurst GW. 4- Aminopyridin u roztroušené sklerózy: prodloužené podávání. Neurologie 1991;41: 1344–1348.

43. Jones RE, Heron JR, Foster DH, Snelgar RS, Mason RJ. Účinky 4-aminopyridinu u pacientů s roztroušenou sklerózou. J Neurol Sci 1983;60:353–362.

44. van Diemen HA, Polman CH, van Dongen TM, et al. Účinky 4-aminopyridinu na klinické příznaky roztroušené sklerózy: randomizovaná, placebem kontrolovaná, dvojitě zaslepená, zkřížená studie. Ann Neurol 1992;32:123–130.

45. Polman CH, Bertelsmann FW, van Loenen AC, Koetsier JC. 4-aminopyridin v léčbě pacientů s roztroušenou sklerózou. Dlouhodobá účinnost a bezpečnost. Arch Neurol 1994;51:292–296.

46. ​​Romani A, Bergamaschi R, Candeloro E, Alfonsi E, Callieco R, Cosi V. Únava u roztroušené sklerózy: multidimenzionální hodnocení a reakce na symptomatickou léčbu. Mult Scler 2004;10:462–468.

47. Rossini PM, Pasqualetti P, Pozzilli C, a kol. Únava u progresivní roztroušené sklerózy: výsledky randomizované, dvojitě zaslepené, placebem kontrolované zkřížené studie s perorálním 4-aminopyridinem. Mult Scler 2001;7:354–358.

48. Hauser SL, Johnston SC. 4-aminopyridin: nový život pro starou drogu. Ann Neurol 2010; 68:A8–A9.

49. Schwid SR, Petrie MD, McDermott MP, Tierney DS, Mason DH, Goodman AD. Kvantitativní hodnocení 4-aminopyridinu s prodlouženým uvolňováním pro symptomatickou léčbu roztroušené sklerózy. Neurologie 1997;48:817–821.

50. Goodman AD, Bethoux F, Brown TR, et al. Dlouhodobá bezpečnost a účinnost dalfampridinu při poruchách chůze u pacientů s roztroušenou sklerózou: výsledky otevřených rozšíření dvou klinických studií fáze 3. Mult Scler 2015;21:1322–1331.

51. Hobart J, Ziemssen T, Feys P a kol. Hodnocení klinicky významného zlepšení schopnosti chůze u účastníků s roztroušenou sklerózou: výsledky randomizované, dvojitě zaslepené studie fáze III ENHANCE s fampridinem s prodlouženým uvolňováním. CNS léky 2019;33:61–79.

52. Macdonell R, Nagels G, Lapland DA, et al. Zlepšený zdravotní dopad roztroušené sklerózy hlášený pacienty: studie ENABLE PR-fampridinu. Mult Scler 2016;22: 944–954.

53. Noble M, Tseng K-CC, Li H, Elfar JC. 4-Aminopyridin jako jediná látka pro diagnostiku a léčbu těžkého poranění rozdrcením nervu. Mil Med 2019;184(suppl 1):379–385.