Vakcína proti COVID na bázi MRNA-19: Jsou nové, ale ne neznámé!

Abstraktní:

mRNA vakcíny využívají mechanismus, který naše buňky používají k produkci proteinů. Naše buňky produkují proteiny na základě znalostí obsažených v naší DNA; každý gen kóduje jedinečný protein. Genetická informace je nezbytná, ale buňky ji nemohou využít, dokud ji molekuly mRNA nepřevedou na instrukce pro produkci specifických proteinů. mRNA vakcinace poskytují mRNA instrukce připravené k použití pro konstrukci specifického proteinu. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) a mRNA-1273 (Moderna) jsou nově schválené COVID-19 vakcíny založené na mRNA, které prokázaly vynikající ochranu a účinnost. Celkem existuje pět dalších kandidátů na vakcínu na bázi mRNA pro COVID-19 v různých fázích klinického vývoje. Tato recenze se konkrétně zaměřuje na vakcíny proti COVID{11}} na bázi mRNA a zahrnuje její vývoj, mechanismus a klinické aspekty.

cistanche výhody pro muže-posilují imunitní systém

klíčová slova:

vakcína proti COVID-19; mRNA vakcíny; vývoj vakcín; vektorových vakcín

1. Úvod

Pandemie koronavirové nemoci{{0}} (COVID-19) způsobená koronavirem těžkého akutního respiračního syndromu-2 (SARS-CoV-2) se rozšířila po celém světě. V současnosti je celosvětově 662 milionů potvrzených případů COVID-19, včetně 6,6 milionů úmrtí hlášených Světové zdravotnické organizaci (WHO) [1]. Virus postihuje více než 200 zemí světa, přičemž většina případů je hlášena v Brazílii, Rusku a Spojených státech [2]. První zpráva o propuknutí COVID-19 byla z města Wuhan v provincii Chu-pej v Číně dne 30. prosince 2019. Ve Wuhanu byly zaznamenány shluky případů zápalu plic. Později 7. ledna 2020 byl jako původce zjištěn nový koronavirus (2019-nCoV). WHO nakonec nemoc pojmenovala COVID-19 [3,4]. Odhadovaná úmrtnost se pohybuje v rozmezí 0,5–1,5 %. SARS-CoV-2 patří do rodinyCoronaviridaea pořadíNidovirales. SARS-CoV-2 patří k Betacoronaviru, který má úzkou genomickou příbuznost se dvěma viry, SARS-CoV a koronavirem blízkovýchodního respiračního syndromu (MERS CoV). Ve srovnání se SARS a MERS je SARS-CoV-2 vysoce nakažlivý. COVID-19 je závažné onemocnění celosvětového významu. Onemocnění nelze léčit specifickou antivirotikum, klíčem k prevenci šíření onemocnění je přerušení řetězce přenosu [5]. Ke snížení prevalence a úmrtnosti se používá hromadná imunizace proti pandemii [6,7]. Od zveřejnění genomové sekvence SARS-CoV{10}} dne 11. ledna 2020 bylo studováno více než 150 autoritních imunizačních projektů. Hlavním cílem očkování je vyvolat imunitní odpověď, která poskytuje dlouhodobou ochranu proti závažnosti onemocnění [8]. Jak vyhodnotil Paddy Ssentongo a kolegové [9], účinnost vakcíny (VE) proti všem infekcím SARS-CoV-2 klesla z 83 % v prvním měsíci po dokončení první série očkování na 22 % po 5 měsících nebo více . Podobně se VE proti symptomatickému COVID-19 snížil z 94 % v prvním měsíci na 64 % během čtvrtého měsíce po očkování. Celkově byla VE proti těžkému COVID-19 silná ve všech věkových kategoriích, s úrovní 90 % (95% CI, 87–92 %) pět měsíců nebo více po úplném očkování.

Koronavirus má na svém povrchu obohacený (S) protein; tento S protein bude interagovat s receptor-vazebnou doménou receptoru angiotenzin-konvertujícího enzymu (ACE) [10,11]. Většina kandidátů na vakcínu se zaměřuje na tento protein S viru [12]. Vakcína Pfizer BioNtech COVID-19-BNT162b2 je první imunizace schválená Úřadem pro kontrolu potravin a léčiv (FDA). Je založen na messenger RNA (mRNA) vyrobené společností Pfizer, která získala povolení k nouzovému použití pro osoby ve věku 12–15 let nebo starší pro prevenci onemocnění COVID{11}}. US Food and Drug Administration (USFDA) schválila vakcínu Pfizer dne 23. srpna 2021 [13]. Různé studie uvádějí, že imunizace má účinnost 89,1 % v prevenci infekce SARS-CoV-2; navíc vakcíny také snížily počet hospitalizací souvisejících s COVID{19}}, úmrtí a prevenci přijetí na JIP. Kontrolovatelného šíření SARS-CoV-2 lze dosáhnout dříve, když je velká část populace imunizována (např. 70–80 %). Imunizace výrazně snižuje výskyt COVID-19. Vakcína poskytuje silnou a účinnou imunitní odpověď k vymýcení infekce SARS-CoV-2 z lidského těla. Lidé, kteří byli infikováni, měli silnou odpověď T-buněk na virus, což může pomoci v jejich schopnosti zotavit se z infekce [14,15]. Neutralizace zůstala silně korelována s ochranou před symptomatickou infekcí variantami SARS-CoV-2, které vyvolávají obavy [16]. Očkování je tedy strategií pro kontrolu pandemie.

cistanche tubulosa - zlepšení imunitního systému

Vakcíny proti COVID-19 se vyvíjejí na různých platformách. Živý atenuovaný virus, inaktivované vakcíny, nereplikující se virové vektory, RNA a DNA jsou příklady těchto. Různé typy vakcín s příklady jsou uvedeny na obrázku 1. Strategií pro vývoj vakcíny je použití usmrceného viru SARS-CoV-2, není schopen se replikovat, ale může zůstat neporušený v těle. Imunitní systém spustí svou reakci proti viru tvorbou protilátek proti viru. COVAXIN® (BBV152) vyráběný Bharat Biotech, Hyderabad, Indie a CoronaVac také známý jako sinovac® vyvinutý společností Sinovac Biotech, Peking, Čína použil k vývoji vakcíny přístup inaktivovaného viru [17]. Nereplikující se virový vektor je také technika přijatá společnostmi pro výrobu vakcín. Adenovirus (Ads) je široce používaný virový vektor, který má dvouvláknový genom působící jako původce běžného nachlazení. Společnost CanSino Biologics Tianjin, Čína vyvinula Ad5-nCoV (Convidecia®), který kóduje celou délku S-proteinu viru SARS-CoV-2. Virový vektor nemá replikační vlastnosti, a proto nezpůsobuje skutečné onemocnění. Jakmile se virová DNA dostane do těla, je prezentována na buňkách prezentujících antigen a je proti ní generována imunitní odpověď. Oxford/Astraneca použila šimpanzí adenovirus (ChAdOx1), který má potenciál minimalizovat interakci s převládajícími protilátkami proti adenoviru. Vakcína se jmenuje AZD122 (Vaxzevria™). Výzkumný ústav Gamaleya, Moskva, Rusko vyvinul vakcínu Sputnik V™, která je také virovým vektorem s rekombinantním lidským sérotypem Ad26. Vakcínu Janssen vyrobila společnost Johnson and Johnson, New Jersey, USA za použití stejného přístupu [18].

mRNA je také považována za nový přístup k formulaci vakcíny. mRNA vakcíny jsou pro veřejnost novinkou, ale vědci se jimi zabývají již dlouhou dobu. Tyto mRNA vakcíny jsou syntetizovány z templátu DNA, který kóduje spike protein a jsou zabaleny do nosiče na bázi lipoproteinů, aby se urychlil vstup mRNA do těla a zabránilo se degradaci [19]. Když je vakcína podána intramuskulární cestou, je injikována do hlubších tkání a molekuly mRNA vstoupí do buňky, což usnadní proces translace [20]. Po vstupu do těla bude mRNA rozpoznána jako antigen a bude aktivována humorální imunitní odpověď, která bude stimulovat B buňky, aby se vyvinuly do paměťových B buněk. Tím při sekundární expozici antigenu; paměťové B buňky neutralizují a blokují antigeny [21]. FDA schválila vakcíny založené na mRNA, jednou z nich je Pfizer-BioNTech's, New York, NY, USA BNT162b2 (Comirnaty®) a další je mRNA Moderna™, Cambridge, MA, USA-1273 také známá jako Spikevax. FDA schválila mRNA-1273 pro nouzové použití (EUA) pro použití u lidí ve věku 18 let a více. Aktuální přehled poskytne podrobné informace o vakcinologii a faktech o COVID-19, vývoji vakcín na bázi mRNA, o tom, jak vakcíny mRNA fungují, o složení a použitých složkách, bezpečnosti a účinnosti a regulačních výzvách pro vakcíny.

Obrázek 1. Různé typy vakcín proti infekci COVID-19. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 31. prosince 2022)

2. Vakcinologie a fakta o COVID-19

V prosinci 2019 byla v Číně hlášena skupina jedinců trpících plicními poruchami z neznámého důvodu. Čínské centrum pro kontrolu a prevenci nemocí (CDC) poté zkoumalo nejistotu v případech souvisejících s pneumonií a jejich původ odběrem vzorků z těla pacienta, které byly detekovány pomocí polymerázové řetězové reakce v reálném čase [22]. Později byla příčina plicní poruchy známa a bylo zjištěno, že ji způsobil koronavirus, který byl dále pojmenován SARS-CoV-2 (těžký akutní respirační syndrom) nebo COVID-19. Od té doby se proměnila v celosvětovou pandemii. Patří do skupiny -koronavirů. Strukturálně je to obalený, nesegmentovaný, patřící do podrodu Sarbecovirus a podčeledi Orthocoronavirinae. Genomický materiál přítomný v jeho struktuře je jednořetězcová sekvence RNA s pozitivním smyslem [23]. Nacházejí se především u ptačích a savčích hostitelů. Genomová struktura koronaviru byla znázorněna na obrázku 2, který představuje, že virová struktura má spike proteiny, které mají na vnější membráně podjednotky S1 a S2. RNA virový genom je zapouzdřen uvnitř membrány spolu s nukleokapsidou. Můžeme tedy říci, že existují čtyři strukturální proteiny, tj. spike protein (S), nukleokapsidový protein (N), membránový protein (M) a obalový protein (E) [24]. Kromě toho jsou přítomny také nestrukturální proteiny (Nsp), kterých je celkem šestnáct. Špičkové proteiny jsou prominentní receptorová vazebná místa, kde mohou proteiny interagovat s receptory přítomnými v těle [25]. S1 podjednotka zahrnuje receptorovou vazebnou doménu (RBD), kde se angiotensin-konvertující enzym II váže na spike protein. Skládá se také z N-terminální domény (NDT). Podjednotka S2 obsahuje fúzní proteiny (FP) a transmembránové proteiny (TM) [26]. Po vstupu viru do hostitelských buněk to vede k fúzi a odkrytí virové membrány, následované transkripcí a translací mRNA, která je nezbytná pro vytvoření virového seskupení, které pak exodusuje z hostitele exocytózou a infikuje jiné buňky. Vstup virových částic do ostatních buněk těla vede ke stimulaci imunitní odpovědi a tvorbě protilátek [27].

Obrázek 2. Genomová struktura koronaviru. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 31. prosince 2022).

Celosvětově je očkování široce používáno a je účinné při snižování úmrtnosti. Na základě spolehlivých vědeckých poznatků a znalostí lze zlepšit hodnocení bezpečnosti a účinnosti vakcín a hodnocení jejich absorpce [28]. Vakcíny se vyvinuly z tradičních vakcín, jako jsou živé atenuované nebo usmrcené vakcíny, na podjednotkové vakcíny a nakonec na homologní nebo heterologní primární imunizační strategie [29]. Různé vakcinační strategie jsou znázorněny na obrázku 3. Ve starověku bylo prokázáno, že živé atenuované vakcíny jsou záchranou proti různým patogenním virům a jsou považovány za bezpečné proti milionům populací, ale často jsou opomíjeny. Mnoho vakcín včetně MMR (spalničky, příušnice, zarděnky) a vakcíny proti planým neštovicím jsou živé oslabené vakcíny [25,30]. Oslabených forem viru lze dosáhnout jeho vystavením nepříznivým podmínkám nebo genetickými modifikacemi. Tento typ vakcíny, konkrétně orální vakcína proti obrně (OPV), může být podáván neinvazivními cestami. Naproti tomu usmrcené vakcíny, což jsou inaktivované verze virů, mají z hlediska imunologické odpovědi omezené použití, ale v současnosti používaná indická vakcína COVAXIN®, vyráběná společností Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, Indie používá inaktivovanou verzi virus ve své vakcíně [31]. Inaktivovaný virus je dostatečně schopen udržet si svou epitomovou shodu, která napomáhá modulaci humorální imunitní odpovědi [32].

Obrázek 3. Interakce vakcín s hostitelskými buňkami a virovou částicí. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 31. prosince 2022)

Nejnovější technologie, jako jsou vakcíny na bázi mRNA nebo vakcíny na bázi vektorů, je maximálně využívají pro bezpečnost a účinnost vakcín proti COVID-19 [33]. Vakcíny založené na vektoru jsou také známé jako heterologní prime-boost vakcinace, která pomáhá při indukci buněčných i humorálních imunitních odpovědí, zatímco živé podjednotkové vakcíny vyvolávají pouze humorální odpověď [34–39]. Podle studie 5–10násobné zvýšení imunitní odpovědi zprostředkované T buňkami v případě vakcíny na bázi heterologního vektoru ve srovnání se stejnou formulací připravenou pomocí homologního přístupu [40]. Vakcíny založené na vektoru, konkrétně na bázi DNA a RNA, jsou tedy výhodnější než vakcíny založené na podjednotkách, často jsou považovány za robustnější ve srovnání s vakcínami RNA a jsou účinné, protože kódují spike protein struktury viru. V případě viru Chikungunya vyvolala koimunizační strategie využívající DNA a viru podobných částic lepší imunitní odpověď ve studiích na zvířatech [41]. Někdy DNA vakcíny vyžadují specializované dodávací systémy, jako je elektroforéza, mikrojehličková pole a systémy založené na nosiči, jako jsou lipozomy, aby se zvýšila permeabilita. Mikrokuličky na bázi kyseliny polymléčné-ko-glykolové byly formulovány pro podání HIV-1 DNA vakcíny intramuskulární cestou [42]. Vakcíny na bázi DNA však vytvářejí mizivou imunitní odpověď a často vyžadují další dávkování. To lze překonat použitím vakcín na bázi mRNA [25,43].

cistanche tubulosa - zlepšení imunitního systému

3. Vývoj vakcíny na bázi mRNA

Dříve byly pro formulaci vakcíny použity různé formy RNA, včetně in vitro transkribované mRNA, siRNA (malá interference RNA), aptamerů na bázi RNA, riboswitchů, antisense molekul a později mRNA. Povědomí o messenger ribonukleové kyselině, tj. mRNA, pochází z její základní, navíc ekonomické tvorby, jejího přechodného pohybu a pomalého rozpadu v cílových buňkách a jejích bezpečnostních výhod kontrastuje s DNA terapeutiky, protože nekoordinuje lidský genom a inhibuje inzerci. mutageneze a je okamžitě dostupný pro interpretaci na protein v buněčné cytoplazmě [44]. Počátkem 90. let výzkumníci intenzivně pracovali na úspěchu ve vývoji vakcín na bázi mRNA. Byly provedeny různé experimenty in vitro a výsledky ukázaly následnou produkci požadovaných proteinů; proto se dospělo k závěru, že jelikož je mRNA dostatečně schopná produkovat proteiny, může být pravděpodobným terapeutickým režimem k léčbě onemocnění [45]. Podle Martinona a kol. byla mRNA vakcína na bázi nukleoproteinů pro léčbu chřipky syntetizována in vitro transkripcí a byla začleněna do lipozomálních vezikul. Výsledky prokázaly indukci cytotoxických T-buněk a protilátek in vivo [46]. Od té doby došlo k progresivnímu vývoji v používání mRNA jako terapeutického nástroje díky její významné účinnosti, snadnému rozšíření a nákladové efektivitě, což je primární požadavek pro léčbu vysoce nakažlivých onemocnění a terapii rakoviny. Nedávné výzkumné studie odhalily, že terapie založené na mRNA významně chránily myši před symptomy Chikungunya a udržovaly žádoucí hladiny protilátek po dvou dávkách [47]. Vakcíny na bázi RNA se zaměřují na imunitní buňky těla tím, že mění jejich funkce, zaměřují se na ribozomy pro translaci, čímž generují imunitní odpověď [19].

Imunizace na bázi mRNA obsahují jednovláknovou mRNA, která kóduje požadovaný antigen. Mohou být přenášeny jako nahá mRNA nebo zapouzdřeny do vhodných nosných systémů pro usnadnění dodání do buněk. Jakmile mRNA vstoupí do buňky, je přirozenými mechanismy buňky přeložena do struktur na bázi proteinů. Dále je podroben posttranslačním modifikacím, aby se získal požadovaný protein a generuje imunitní odpověď, jak je stanoveno signálními peptidy [44,48]. Vakcíny na bázi mRNA čelí minimálně dvěma překážkám: jaderné degradaci při injekční aplikaci zvířatům a vrozené imunogenicitě podobné imunogenicitě antigenu [49]. Abychom tento problém překonali, pseudouridin (Ψ) je dobře známá modifikace RNA. Ψ nahradit uridin in vitro transkribovanou (IVT) mRNA, což je vysoce převládající a přirozeně se vyskytující nukleotid ve všech buňkách s RNA. Očkování proti COVID{10}}, vyráběné společnostmi Moderna a Pfizer-BioNTech, sestává z nové modifikované Ψ s účinností až 90 % proti příznakům [50]. Vakcína vyvinutá společností CureVac NV přitom postrádala Ψ-modifikovanou mRNA a klinické studie potvrdily účinnost pouze 48 % [51].

Během translačního procesu primárně existují dvě různé kategorie mRNA vakcín, a to neamplifikující mRNA (NMR) a samoamplifikující mRNA (SMR). Pracovní mechanismus neamplifikující mRNA a samoamplifikující mRNA je vysvětlen na obrázku 4. Strukturálně, jak je znázorněno na obrázku 5, mají obě struktury CAP, 50 a 30 netranslatovaných oblastí (UTR), otevřený rámec (ORF), a společný culík [52,53].

Obrázek 4. Kategorie mRNA. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 31. prosince 2022)

Kromě toho má SMR replikázu jako segment, který pomáhá při amplifikaci mRNA intracelulárně. Dále jsou segmenty translatovány ribozomy za vzniku požadovaných proteinů. Vylučované proteiny vedou ke vzniku imunitní odpovědi [54]. SMR jsou srovnatelně větší než NMR a aniontové molekuly. Nedávné studie sebereplikující RNA prokázaly lepší in vitro subgenomovou expresi nestrukturálních proteinů replikonu venezuelské koňské encefalitidy (VEE), když byly pozorovány různé mutace. V současné době probíhá podobná studie klinické studie zaměřená na glykoprotein vztekliny s použitím samoamplifikační RNA viru VEE-Sindbis formulované do nanoemulzí [55]. Hlavní kritické atributy kvality (CQA), které definují účinnost terapií mRNA, jsou shrnuty v tabulce 1 [54].

Obrázek 5. Optimalizace sekvence mRNA. (Upraveno z [56] s právy a oprávněními).

Tabulka 1. CQA pro mRNA vakcíny.

Výroba mRNA je dvoustupňový proces, který zahrnuje produkci a čištění. V systémech výroby mRNA nejsou přítomny žádné nečistoty, protože neobsahuje žádné živočišné nebo buněčné suroviny, výroba je relativně bezpečnější [65]. Produkce sekvence mRNA může být jednokrokový enzymatický proces nebo dvoukrokový enzymatický proces. V případě jednostupňového výrobního procesu, který se obecně používá v laboratorním měřítku, se používá analogový uzávěr. Proces je poté dokončen purifikací, která zahrnuje separaci pomocí chromatografických technik, jak je znázorněno na obrázku 6. Dvoustupňová enzymatická reakce pro produkci mRNA zahrnuje in vitro transkripci templátu DNA za vzniku sekvence RNA polymerázy [66]. Takto vytvořený templát mRNA může být zakryt s použitím enzymu capping vaccinia a donoru methylu. Produkce mRNA je relativně vysoká a v průmyslovém měřítku je obtížné dosáhnout reprodukovatelnosti [67].

Obrázek 6. Výrobní proces sekvence mRNA. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 1. ledna 2023)

4. Jak fungují mRNA vakcíny?

mRNA je nestabilní záporně nabitá molekula, která je zapouzdřena v lipidických nanočásticích. Prostřednictvím endocytózy se tyto lipidické nanočástice dostávají do buněk. Jakmile tyto endozomy vstoupí do cytoplazmy, jsou okamžitě nasměrovány do lysozomů k degradaci. Studie ukazují, že ionizovatelné lipidy hrají důležitou roli při úniku endozomů a uvolňování mRNA. Hlavní skupina lipidů je protonována v kyselém prostředí endozomů a tento kationtový stav je následně připojen k aniontové hlavě fosfolipidu v endozomální membráně. Hydrofobní konec kationtového lipidu a fosfolipidu se poté rozšíří, naruší dvouvrstvou fosfolipidovou strukturu a umožní mRNA uniknout do cytoplazmatického kompartmentu. Ribozomy transformují mRNA na proteiny, když se uvolní. Tento protein může aktivovat imunitní odpověď dvěma způsoby: (1) Proteazom tyto proteiny degraduje na peptidy, které jsou pak prezentovány jako antigen na buněčném povrchu molekulami MHC (major histocompatibility complex) třídy I, které se vážou na TCR (T buněčný receptor) k aktivaci CD8+ T buněk, které zabíjejí infikované buňky; protein sám může aktivovat imunitní odpověď dvěma způsoby. (2) Extracelulárně vylučované proteiny jsou pohlceny APC (buňkami prezentujícími antigen) a degradovány na peptidy, které jsou prezentovány na buněčném povrchu pomocí MHC třídy II a rozpoznávány CD4+ T buňkami, které vylučují cytokiny za vzniku buněčného reakce a koaktivace B buněk k produkci humorální imunitní reakce, jak je znázorněno na obrázku 7. Kromě toho mRNA vakcíny dodávaly dvouvláknovou a jednovláknovou RNA, která se váže na TLR (Toll-like receptor) v endozomu, což vede k stimulace četných genů stimulovaných IFN{10}} (interferon typu I), čímž se aktivují antivirové vrozené imunitní reakce.

Obrázek 7. Mechanismus, kterým mRNA vakcína vyvolává imunitu vůči hostiteli. (Vytvořeno pomocí BioRender.com s přístupem 1. ledna 2023)

5. Aspekty formulace vakcín na bázi mRNA

Jakmile je transkribovaná mRNA injikována, bude exprimovat proteiny uvnitř těla. Imunologická odpověď je pozorována díky exprimovanému proteinu z mRNA. Tento proces je převážně základem vývoje mRNA vakcíny [68].

5.1. DNA šablona

Identifikace antigenu z cílového patogenu je prvním krokem. Vývoj imunizace mRNA vyžaduje přidání kódovaného antigenu do templátu DNA, což pomůže při translaci mRNA in vitro. Specifický antigen bude produkován in vivo transkripcí transkribované mRNA, která se dostane pouze do cytoplazmy; to pomůže vyvolat imunitní odpověď. Plazmidová DNA (pDNA) obsahuje promotorovou sekvenci se silnou afinitou k DNA-dependentní RNA polymeráze, jako je T7, SP6 nebo T3, stejně jako vhodnou sekvenci pro konstrukt mRNA. Enzym bude procházet templátem a prodlužovat transkript RNA, dokud nedosáhne konce templátu [69].

5.2. Uzavírací enzym

Pro účinnou translaci mRNA z templátu DNA je velmi důležité zakrytí na konci mRNA. Kromě toho je pro ochranu mRNA před degradací, genovou expresí a náborem ribozomů vyžadováno 50 capping ve zralé mRNA. 5 0 -50 -trifosfátový můstek spojuje 50 čepiček eukaryotické mRNA s 7-methylguanosinem (m7G) (m7GpppN). Nová ko-transkripční technika, která používala kit čistého uzávěru k přesnému přidání přirozené 50 cap1 struktury do počátečního místa během IVT reakcí, učinila generování 50 cap1 mRNA pomocí T7 polymerázy běžně používanou capping metodou s dobrou translací a minimální reaktogenitou. Do mRNA vakcín COVID-19 BNT162b1 byly 5 0 uzávěry přidány metodou čistého uzávěru [70]. Cap analogem transkribovaná mRNA má poly 1 konec a 30 (poly-A) konec je přítomen na 30 koncích eukaryotické mRNA. Tento poly A konec vykonává funkce transportu, translace a stability mRNA. Konec 30 poly A a čepička 50 vytvoří stabilní uzavřenou smyčkovou strukturu s komplexem eIF4F pro začátek procesu translace. Díky 120 nukleotidům (nt) ve 30 poly(A) ocasu má vakcína BioNTech mRNA vynikající stabilitu a účinnost translace [71].

5.3. Nukleotidtrifosfátové substráty (NTP)

Když jsou DNA plazmidy integrovány s T7 polymerázou a nukleotidtrifosfáty, je mRNA translatována efektivněji a je produkováno více výtěžků. Po podání vakcíny se objevuje obava z imunogenicity. Při aktivaci downstream signalizace tělo rozpozná virové RNA a odpoví na ně. Toto rozpoznání jednovláknové a dvouvláknové RNA je prováděno endozomálními receptory, jako jsou Toll-like receptory (TLR3), TLR7 a TLR8. Dvouřetězcová a 50 -trifosfátem modifikovaná RNA je rozpoznána genem-I indukovaným kyselinou retinovou (RIG-1) cytosolového receptoru a proteinem 5 spojeným s diferenciací melanomu (MDA-5). Alergické reakce a anafylaktický šok byly hlášeny, když byl imunitní systém těla aktivován nekontrolovaným způsobem. Tato nadměrná stimulace imunitního systému na molekulární úrovni omezí translaci proteinů, expresi antigenů a účinnost vakcíny. Toto omezení lze překonat modifikacemi nukleobází. N1-methyl pseudouridin, modifikovaná nukleobáze, zvýší produkci proteinu a sníží aktivaci TLR3. Modifikované nukleotidy prostřednictvím RIG-1 nejen ovlivňují interakci protein-RNA, ale také snižují schopnost mRNA šířit imunologické signály. Účinnost translace mRNA na protein je zlepšena díky N1-methylpseudouridinu. Rychlá iniciace translace koordinovaně prodlouží poločas mRNA [50].

cistanche tubulosa - zlepšení imunitního systému

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Komponenty lipidových nanočástic pro dodávání mRNA

Ve srovnání se všemi ostatními vakcínami se mRNA vakcíny vyvíjejí relativně rychle a jsou účinnější. Největší výzvou při výrobě mRNA vakcín je však jejich špatná stabilita. Stabilita vakcíny a schopnost léčit infekci COVID-19 jsou sníženy, protože vakcína je po porodu rychle rozkládána ribonukleázami, přičemž vznikají rozložené složky, které jsou eliminovány ledvinami. K řešení tohoto problému může být mRNA formulována s lipidovými nanočásticemi (LNP). Vakcína mRNA-LNP bude chránit mRNA před předčasnou degradací a usnadní cytoplazmatické dodání do buněk prezentujících antigen [72]. Lipidy jsou perfektní činidla pro dodání mRNA do cytosolického místa, protože jejich fúze je kompatibilní s lipidovými buněčnými membránami; což vede k cílenému a účinnému uvolnění mRNA. LNP jsou nanočástice s průměrem menším než jeden mikron, které obsahují dva nebo více lipidů v různých poměrech. LNP se liší od lipozomů kvůli přítomnosti lipidových složek v jádře jako nespojité směsi. LNP, které prošly formulací, mají multilamelární vezikulární strukturu, homogenní obal jádra a nanostrukturované jádro [73]. Uvnitř jádra LNP je přítomnost vody, která vystavuje mRNA interakci s vodným médiem. Jak je znázorněno na obrázku 8, mRNA se nachází uvnitř LNP, což ji chrání před vnějším prostředím. Nejběžnějším složením, které tvoří systémy mRNA LNP, jsou kationtový/ionizovatelný lipid, fosfolipid ("pomocný lipid"), cholesterol a polyethylenglykol (PEG). Fyzikálně-chemické vlastnosti uvnitř dodávacího systému LNP, jako je účinnost zapouzdření, náboj vnějšího povrchu, velikost částic a tvar, lze snadno upravit úpravou složení lipidů. Poměry složek se upravují v závislosti na požadované cílové tkáni [74].

Obrázek 8. Struktura lipidových nanočástic používaných pro účinné dodání mRNA. (Vytvořeno pomocí BioRender. com s přístupem 1. ledna 2023)

5.4.1. Kationtové lipidy

S aminovou skupinou, která uděluje čistý kladný náboj, hydrofobní řetězec a vazebnou skupinu, která umožňuje připojení hydrofilní skupiny k hydrofobnímu řetězci, vykazují kationtové lipidy amfifilní vlastnosti. Mají permanentní kladný náboj na své polární hlavě, který napomáhá interakci s negativně nabitými nukleovými kyselinami, čímž se zvyšuje účinnost zachycení. Endosomální únik LNP systému a buněčná absorpce je také zvýšena díky čistému kladnému náboji. Pro podávání mRNA byly zkoumány kationtové lipidy, ionizovatelné lipidy a další typy lipidů. Ve srovnání s neionizovatelnými kationtovými lipidy jsou ionizovatelné lipidy, které jsou kladně nabité při nízkém pH a při fyziologickém pH neutrální, relativně méně toxické kvůli změnám pH. Uvnitř buněčné membrány jsou nabité kladně a v krevním řečišti mají nenabité vlastnosti. Vakcína BNT162b2 obsahuje kationtový lipid ALC-0315, zatímco mRNA-1273 obsahuje SM-102; při nízkém pH jsou oba lipidy protonovány, což snadno vytvoří komplex s mRNA. Proud mRNA ve vodě je kombinován s lipidovou směsí v ethanolu pomocí mikrofluidního zařízení. Aby bylo možné zachytit negativně nabitou mRNA, složky těchto dvou proudů se rychle spojí a vytvoří nanočástice [75]. Pro vakcínu BNT162b2 jsou molární poměry kationtový lipid: PEG-lipid: cholesterol: DSPC (46,3:1,6:42,7:9,4) a pro mRNA -1273 je (50:1,5:38,5:10). Nanočástice mají průměr 80–100 nm a na jednu lipidovou nanočástici připadá přibližně 100 molekul mRNA [73].

5.4.2. Polyethylenglykolové (PEG) lipidy

Pro stabilitu koloidů a prevenci vazby proteinů na nanočástice se používají polyethylenglykol lipidy. Udělují delší systémový oběh tím, že minimalizují clearance nanočástic. LNP mohou způsobit fyzickou agregaci v roztoku, což může zvýšit velikost částic LNP, a PEG lipidy mohou překonat možná i předčasné uvolnění zapouzdřené mRNA, problém. Navíc bude také zvýšena skladovací stabilita LNP [76].

5.4.3. Cholesterol

Pro transfekci buněk a stabilizaci LNP má cholesterol zásadní roli. Nižší teploty přechodu je dosaženo, když se obsah cholesterolu v LNP zvýší, což napomůže uvolnění mRNA z LNP a její translokaci přes endozomální membránu [77]. Ve studii provedené Zhangem et al. byly modifikované lipozomy formulovány s použitím cholesterolem modifikovaného kationtového peptidu DP7 spolu s Dioleoyl-3-trimethylamonium propanem (DOTAP) jako nosičem pro dodávání mRNA. Liposomy byly připraveny technikou hydratace filmu a poté byly vyhodnoceny na účinnost transfekce. In vitro studie transfekce odhalily zvýšení účinnosti transfekce se zvýšením koncentrace peptidu DP7. Kromě toho in vivo protinádorové studie ukázaly, že komplex má lepší účinnost proti nádoru [78].

5.4.4. Jiné pomocné látky

mRNA vakcíny se skládají ze stabilizátorů, např. Tromethamin, který pufruje a udržuje pH 7–8, Soli: Pomáhá vyrovnat kyselost ve vašem těle, Cukr, který pomáhá molekulám udržet si tvar během zmrazování, působí jako kryoprotektant a udržuje dlouhodobou stabilitu formulace lipidové nanočástice-mRNA [73]. Souhrn klíčových složek používaných ve vakcínách na bázi mRNA je uveden v tabulkách 2 a 3.

Tabulka 2. Klíčové složky používané ve vakcínách na bázi mRNA.

Tabulka 3. Složky formulace mRNA vakcín Pfizer a Moderna.

5.5. Jiný doručovací systém pro mRNA

5.5.1. Polymerní nanočástice

Polymerní nanočástice mohou být syntetizovány ze syntetických nebo přírodních polymerů, jako je PLGA [poly (kyselina mléčná-ko-glykolová)], chitosan, PLA (kyselina polymléčná), polykaprolakton, želatina a poly-alkyl-kyanoakryláty. Tyto polymerní nanočástice mohou zapouzdřit hydrofobní a hydrofilní sloučeniny a proteiny, dlouhá skladovatelnost; a může modifikovat podávání terapeutických sloučenin. RNA může být zapouzdřena v samouspořádaných kationtových polymerech s hydrofobní modifikací [80,81].

5.5.2. Kationtové nanoemulze

Kationtové nanoemulze se osvědčily jako účinný prostředek pro dodávání nukleových kyselin. Kationtové lipidy přítomné v nanoemulzích jsou důležité pro komplexy s nukleovou kyselinou prostřednictvím elektrostatických interakcí a zlepšují účinnost transfekce nukleové kyseliny a její stabilitu. Studie odhalují, že systém dodávání kationtových nanoemulzí mRNA zesiluje imunitní odpověď tím, že získává imunitní buňky a vyvolává buněčné reakce na protilátky a T-primáty při srovnatelně nízkých dávkách [80,82].

5.5.3. Nanočástice oxidu křemičitého

Mezoporézní nanočástice oxidu křemičitého se skládají z amorfní matrice oxidu křemičitého s dobře uspořádanou pórovitostí v mezoporézní oblasti. Tyto nanočástice mají velké povrchy s velkými objemy pórů a jejich povrch může být snadno modifikován určitými kladně nabitými skupinami, aby účinně transportovaly záporně nabitou RNA. Kromě toho může být možné cílené doručení RNA připojením specifických ligandů na povrch [81]. Podle studie provedené Adamem et al. byla pro COVID-19 připravena nosní vakcína na bázi modifikovaných porézních mikročástic křemíku (mPSM). Formulace vedla ke zvýšení počtu pomocných T buněk (Th1) a imunitních reakcí a mPSM způsobil vychytávání antigenů nosní cestou. Bylo zjištěno, že virová zátěž je významně snížena [83].

5.5.4. Uhlíkové a zlaté nanomateriály

Uhlíkové nanotrubice, zlaté nanočástice, nanografen oxid a kvantové tečky jsou syntetizované nanostruktury, které mají také potenciál doručit RNA do cílového místa a také ji chránit před degradací [81].

6. Výzvy pro skladování vakcíny

Stabilita a požadavky na skladování jsou hlavním problémem mRNA vakcín. Stabilita závisí na faktorech, jako jsou pomocné látky, pH a teplota. Vakcínu COVID-19 od společnosti BioNTech/Pfizer je třeba skladovat při teplotě -80 ◦C a má trvanlivost až 6 měsíců, zatímco vakcínu COVID-19 od společnosti Moderna je třeba skladovat při teplotě -20 ◦C a má stejnou trvanlivost. Vakcína BioNTech/Pfizer vyžaduje při přepravě balení se suchým ledem. Distribuce obou vakcín v chudých zemích světa je náročná, protože mRNA vakcíny musí být skladovány při ultra nízkých teplotách. Tyto požadavky jsou drahé a v oblastech světa s omezenými zdroji jsou opatření obtížná. Jedním z problémů je vývoj termostabilní mRNA vakcíny, která je klinicky účinná a může být uchovávána po delší dobu bez velkých nákladů na skladování. Podle doporučení EMA pro skladování jsou mRNA vakcíny vyrobené společnostmi Moderna a BioNTech stabilní při zmrazení po dobu až 6 měsíců při teplotě -25 ◦C, až 30 dní při teplotě chladničky (4 ◦C) a až 6 hodin při pokojové teplotě [ 84].

7. Bezpečnost a účinnost mRNA vakcín

7.1. Bezpečnost vakcín na bázi mRNA

Hodnocení výsledků souvisejících s bezpečností bylo provedeno pro mRNA vakcíny. Fáze 1 s eskalací dávky, otevřené zkušební studie mRNA-1273 byly provedeny na účastnících ve věku mezi 18 a 70 lety nebo staršími [85]. Studie byla provedena ve dvou skupinách, ve kterých účastníci ve věku 18–55 let dostali dávku vakcíny 250 µg a starším subjektům byla podána dávka 25 µg nebo 100 µg. Po očkování byly pozorovány vyžádané lokální a systémové nežádoucí příhody, nevyžádané nežádoucí příhody, závažné nežádoucí příhody a rozvoj nových chronických zdravotních stavů. Výsledky neukázaly žádný vývoj závažných nežádoucích účinků. Nejtypičtějšími hlášenými nežádoucími účinky byly bolesti hlavy, únava, myalgie, zimnice a bolestivost v místě vpichu. Bylo prokázáno, že hladiny neutralizačních protilátek korelují s obranou proti různým virům u lidí a s obranou proti SARS-CoV-2 u zvířat. Vakcína mRNA-1273 u starších dospělých produkovala vysoké hladiny vazebných a neutralizačních protilátek a trendy závislé na čase a dávce byly podobné odpovědím u mladších dospělých. Reakce po druhém očkování byly srovnatelné s reakcemi pozorovanými u pacientů, kteří se zotavili z COVID-19 a darovali rekonvalescentní sérum, včetně některých kriticky nemocných. Starší pacienti, kteří dostávali dávku 100 µg, vykazovali vyšší protilátkové a T-buněčné odpovědi ve srovnání s těmi, kteří dostávali 25 µg a odpověď byla identická s reakcí u účastníků ve věku 18 až 55 let, kteří dostali dávku 100 µg. Pacienti starší 56 let potřebují k dosažení neutralizačních protilátek dostat druhou dávku vakcíny. Po podání posilovací dávky se titry protilátek rychle zvyšují. Klíčové bezpečnostní výsledky vakcín Moderna a Pfizer pozorované během různých klinických studií jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 4. Studie bezpečnosti a účinnosti mRNA vakcín v klinických studiích

Tabulka 4. Pokr.

Po druhé dávce vakcíny se frekvence lokální a systémové reaktogenity zvýšila a byly primárně středně závažné. Incidence erytému byla zjištěna u tří účastníků a trvala 5 až 7 dní. Vyžádané systémové nežádoucí příhody, jako je horečka a únava, se vyskytly u starší podskupiny výrazně. Všechna tato zjištění naznačují, že vyžádané nebo nevyžádané nežádoucí účinky byly mírné až středně závažné. Proto byla mRNA-1273 dále testována ve studiích fáze 2/3 za účelem posouzení bezpečnosti a účinnosti ve větších populacích [95]. Klinická studie fáze 3 byla randomizovaná, stratifikovaná, pozorovatelem zaslepená a placebem kontrolovaná studie, do které se zapojilo 30 420 dobrovolníků ve věku 18 let nebo starších, kteří byli náhodně rozděleni tak, aby dostali vakcínu (0,5 ml se 100 µg dávka) nebo placebo. Lokální reakce po dobu 7 dnů po imunizaci, systémové nežádoucí účinky, neočekávané nežádoucí reakce po 28 dnech podávání dávky a jakékoli významné nežádoucí účinky byly sledovány pro hodnocení bezpečnosti. Vyžádané nežádoucí účinky převládaly u mRNA- 1273 ve srovnání se skupinou s placebem (84,2 % vs. 19,8 %). Některé z nejvíce pozorovaných událostí byly bolest v místě vpichu po vakcinaci, erytém, citlivost a zatvrdnutí. Tyto příhody byly odstraněny během 4–5 dnů po vakcinaci. Po druhé dávce si skupina mRNA-1273 vyžádala systémové příhody, které se staly závažnějšími. Přítomnost hypersenzitivních reakcí byla u 1,5 % a 1,1 % účastníků ve skupině s vakcínou a ve skupině s placebem. Kromě těchto stížností nebyly po podání vakcíny vzneseny žádné bezpečnostní obavy [106].

Třetí dávka vakcíny byla vyžadována kvůli slábnoucí ochraně po dvou injekcích mRNA SARS CoV{0}} a zavedení variant. Po podání třetí dávky vakcíny mRNA lidem, kteří dříve dostali základní sérii mRNA-1273 ve studii fáze 1, byla hodnocena jejich časná bezpečnost a imunogenicita. Průřezová studie provedená v Neapoli (Itálie) hodnotila připravenost na přeočkování COVID-19. V této skupině bylo přijetí posilovací dávky téměř 86 %. Navíc starší lidé v lepším zdravotním stavu po hlavní sérii vakcín, ti, kteří žijí s přáteli nebo rodinnými příslušníky, kteří byli pozitivně testováni na COVID-19, a ti, kteří obdrželi informace o nemoci od oficiálních veřejných institucí, byli ochotni získat posilovací dávku dávka [107].

Bivalentní vakcinace obsahovala 25 mcg každé mRNA-1273 a mRNA-1273.351, zatímco formulace booster vakcíny obsahovaly 100 mcg mRNA-1273 a 50 mcg mRNA-1273 .351, který kóduje spike protein varianty Beta. Třetí dávka mRNA vakcíny vykazovala adekvátní reaktogenitu a bezpečnost. Ve srovnání s maximálními odpověďmi po druhé dávce byly vakcinací vyvolané zvýšení titrů vazebných a neutralizačních protilátek vůči variantám D614G, Beta a Delta podobné nebo větší. Bylo zjištěno, že neutralizační a vazebné protilátky byly neustále redukovány. Detekce protilátek však byla 10–11 měsíců (před třetí dávkou) u účastníků bez ohledu na věk a počáteční dávku primární série (např. 25, 50, 100 a 250 µg). Bolest v místě vpichu, únava, myalgie a zimnice byly nejčastěji hlášenými nežádoucími účinky po třetí dávce vakcíny mRNA a frekvence těchto příhod byla srovnatelná mezi třemi režimy posilovací vakcíny (monovalentní prototyp, monovalentní varianta a bivalentní skupiny ). Při použití monovalentních nebo bivalentních beta variant vakcín nebyla pozorována žádná specifická výhoda nebo nevýhoda v buněčných odpovědích na epitopy v beta-mutovaných peptidech. Všechna tato zjištění podporují současný návrh, že k zajištění rozsáhlé imunologické zkřížené ochrany mezi variantami se použije monovalentní prototypová mRNA{18}} booster [95]. Podle průzkumu podávání heterologního BNT162b2 (BNT) u účastníků aktivovaných s ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) prokázalo non-inferiorní imunogenicitu oproti homolognímu podávání BNT (primerem i boosterem byly vakcíny BNT, BNT/BNT), s tolerovatelnou reaktogenitou a větší odezvy T buněk. Ve srovnání s homologní vakcinací ChA dOX1 (ChAd/ChAd) vyvolala heterologní vakcinace ChAd/BNT silnější imunogenicitu (ChAd/BNT vs. ChAd/ChAd, poměr titru protilátek: 9,2) [108].

Studie fáze 1 pro BNT162b2 byla provedena na 76 účastnících; byli randomizováni k podání dávek vakcíny 10 µg, 30 µg a 100 µg a druhé skupině bylo podáno placebo. 58,3 % subjektů užívajících 10 ug a 100 % 30 ug a 100 ug zaznamenalo po první dávce vyžádanou lokální reakční bolest v místě injekce. Závažnost všech lokálních reakcí byla mírná až střední. Únava a bolest hlavy u BNT162b2 byly běžné systémové příhody. Kromě toho byla také pozorována zimnice, bolesti svalů a bolesti kloubů. Při zvyšujících se dávkách byly systémové příhody hlášeny více po podání druhé dávky. Celkem 50,0 procent účastníků, kteří dostali buď 10 nebo 30 g BNT162b1, 58,3 procenta osob, které dostali 100 g BNT162b1, a 11,1 procenta příjemců placeba, uvedlo, že se vyskytly nežádoucí účinky. Nebyly hlášeny žádné závažné nežádoucí účinky [109].

V klinické studii vakcíny The Pfizer/BioNTech (BNT162b2), což byla mezinárodní, placebem kontrolovaná, pozorovatelsky zaslepená, randomizovaná a klíčová studie účinnosti, bylo náhodně rozděleno 43 548 účastníků ve věku 16 let nebo starších. Celkem 21 720 dobrovolníkům bylo podáno 30 ug na dávku BNT162b2 a 21 728 dobrovolníkům bylo podáváno placebo. Pro stanovení bezpečnostního profilu BNT162b2 byly hodnoceny charakteristiky, jako je bolest v místě vpichu, která je krátkodobá, mírná až střední v případě závažnosti, únava a bolest hlavy. Všem účastníkům byly podány dvě injekce BNT162b2 nebo placeba, podle randomizace s odstupem 21 dnů, do deltového svalu [98]. Lokální reakce u těch, kteří dostali vakcínu BNT162b2, byly hlášeny více ve srovnání se skupinou s placebem. Mírná až střední bolest v místě injekce byla nejčastější stížností zaznamenanou mezi příjemci BNT162b2 během jednoho týdne. Silná bolest byla hlášena u méně než 1 % populace. Bolest byla pozorována méně u starších účastníků ve srovnání s mladšími. Méně bylo pozorováno zarudnutí nebo otok. Po podání druhé dávky byly lokální reakce hlášeny méně [110].

Mladší účastníci, kteří dostali vakcínu, se setkali s více systémovými událostmi než starší příjemci. Únava a bolest hlavy (59 % a 52 %) byly nejčastěji hlášenými příhodami a velmi méně očkovaných subjektů (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Účinnost mRNA vakcín

Pro hodnocení účinnosti mRNA-1273 byla primárními cílovými parametry vakcíny účinnost prevence symptomatické infekce COVID-19 po 14 dnech od druhé dávky vakcíny. Jako sekundární cílový bod byla použita prevence závažné infekce COVID-19 s přetrvávajícími příznaky. Výsledky po očkování ukazují, že 11 případů COVID-19 bylo v očkované skupině a 185 případů ve skupině s placebem, což ukazuje na 94,1% účinnost mRNA-1273 vakcíny pro léčbu symptomatického COVID-19 . U sekundárních koncových bodů účinnosti bylo provedeno hodnocení prevence závažného onemocnění COVID{11}}. Výsledky ukázaly 100% účinnost vakcíny, protože 30 účastníků s virovou infekcí bylo ve skupině s placebem. Studie provedená v Kataru prokázala účinnost vakcíny (VE) mRNA-1273 95,7 % proti těžké, kritické nebo smrtelné infekci COVID-19. Po 14 dnech nebo více po první dávce byla účinnost 88,1 % proti variantě B.1.1.7 (alfa) a po druhé dávce byla 100 %. 61,3 % a 96,4 % VE bylo hlášeno po první a druhé dávce imunizace proti kmeni B.1.351 (beta). Vakcína je proto docela úspěšná jak proti kmeni, ať už symptomatickému nebo asymptomatickému, tak proti jakékoli hospitalizaci a úmrtí COVID{31}}, a to i po jedné dávce [112].

První primární byla účinnost vakcíny BNT162b2 (VE) proti potvrzenému COVID-19 s nástupem nejméně 7 dní po druhé dávce u jedinců, kteří neměli virologické nebo sérologické známky infekce SARS-CoV-2 koncový bod. Druhý primární cílový parametr měřil účinnost u účastníků s důkazy o předchozí infekci a bez nich a prevenci závažné infekce COVID-19. Ve výzkumu s celkem 36 523 lidmi se ve skupině s očkováním objevilo 8 případů COVID{10}} se začátkem 7 dní po druhé dávce, ve srovnání se 162 případy ve skupině s placebem. To ukazuje 95% účinnost vakcíny. Pozorovaná VE proti virovému onemocnění však byla 52 % mezi první a druhou dávkou a 91 % v prvních 7 dnech po dávce 2, čímž bylo dosaženo úplné účinnosti proti onemocnění s nástupem alespoň 7 dní po dávce 2. Pouze 1 z 10 závažných případů COVID{22}}, které byly pozorovány po první dávce, se vyskytl ve skupině, která byla očkována. Toto pozorování je v souladu s vynikající celkovou účinností proti všem pacientům s COVID{23}}. Dva případy infekce se vyskytly u příjemců vakcíny mezi pacienty s hypertenzí a 44 případů ve skupině s placebem. Tento případ uvádí 94,6 % účinnosti vakcíny u pacientů s hypertenzí. Vakcína BNT162b2 tedy u očkovaných účastníků splňuje primární i sekundární cílové parametry účinnosti [113]. Kromě infekce SARS-CoV-2 s jedinou dávkou vakcíny BNT162b2 byla předpokládaná účinnost očkování proti symptomatickému onemocnění s delta variantou (B.1.617.2) asi 36 %. Po dvou dávkách byla VE asi 88 procent [114].

rostlina cistanche zvyšující imunitní systém

8. Regulační výzvy

Regulační věda je základem, na kterém se přijímají regulační rozhodnutí. Jeho primárním cílem je vyvinout nové metody, nástroje a standardy pro hodnocení bezpečnosti, účinnosti, kvality a výkonu regulovaných produktů ve všech fázích jejich životního cyklu [115]. Vakcíny mRNA čelí stejným druhům regulačních překážek jako jakýkoli jiný typ vakcíny, včetně potřeby prokázat bezpečnost a účinnost v předklinických studiích, klinických studiích a postmarketingovém sledování, stejně jako udržovat vysoký standard pro vakcíny. suroviny používané při výrobě a důslednost výroby. Testování vakcín silně závisí na spolehlivosti a reprodukovatelnosti enzymů, nukleotidů a lineárních templátů DNA [116]. Surové složky, jako jsou lipidy, by měly být přísně regulovány a měla by být prokázána jejich čistota. Při vytváření lineárního templátu DNA by se měly dodržovat současné správné výrobní postupy (cGMP). Aby bylo zajištěno, že léčivá látka má nejvyšší kvalitu, je nezbytné sledovat procento uzavřené a polyadenylované mRNA, počet krátkých transkriptů a přítomnost dvouvláknové RNA. Polyadenylační a capping 50 konec mRNA zajišťuje stabilitu a účinnou translaci [21]. Účinnost translace je úzce spojena s poly (A) ocasem [114]. Kvantifikace množství mRNA zapouzdřené v částici a stanovení distribuce velikosti částic je pro lékový produkt kritické, protože umožňuje výrobci zajistit jednotnost výroby. Monitorování se typicky provádí na řadě charakteristik, včetně těch, které se týkají stability, identity a sterility. Jedním z problémů pro vývojáře vakcín, regulátory a uživatele je tepelná stabilita mRNA vakcín [115]. Konvenční vakcinace jsou podrobeny zátěžovému testování, včetně dlouhodobého vystavení zvýšeným teplotám, aby se určila jejich stabilita za různých podmínek skladování. To je nutné provést i u mRNA vakcín, kde je nutné vyhodnotit nejen stabilitu molekuly mRNA, ale i zachování struktury samotné vakcinační částice. Protokoly testování integrity pro jednotlivé složky mRNA ve vícesložkových mRNA vakcínách stále potřebují vývoj. Identifikace vakcíny s nukleovou kyselinou je určena její sekvencí. Obecně platí, že sekvence prvního DNA plazmidu použitého jako templát je dostatečná pro vakcinaci mRNA. Je to proto, že DNA je okamžitě přeložena do RNA. Není známo, že by sekvenování mRNA, buď přímo, nebo jejím převedením na cDNA a pak sekvenování této DNA, poskytlo nějaké další informace. I když je chybovost RNA polymeráz podstatně vyšší než u DNA polymeráz, udávané chybovosti 1 chyba na 104–105 nukleotidů by bylo obtížné v RNA detekovat kvůli náhodné povaze chyb. Na základě současného výzkumu, který naznačuje, že mRNA vakcíny poskytují ochrannou imunitu na zvířecích modelech, se nezdá, že by tato chybovost změnila tvorbu imunogenního antigenu. Kvantifikace lipidů může být provedena pomocí LC-MS/MS [116]. Pokud je protein translatován příliš rychle, nemusí se vhodně sbalit do funkčního antigenu, což může mít nezamýšlený důsledek snížení účinnosti vakcíny.

9. Diskuse

V roce 2021 získaly mRNA vakcíny pozornost pro svou kritickou pozici v reakci farmaceutického průmyslu na COVID-19. Na rozdíl od tradičních virových vakcín, které používají oslabené, nereplikující se kopie virů k zobrazení antigenů a vyvolání imunitní odpovědi, strategie mRNA využívá optimalizované molekuly mRNA s jedním řetězcem, které mohou zajistit biologickou indukci. Jakmile budete mít vakcínu, buňky ji přijmou, „přečtou“ sekvenci mRNA a vytvoří spike protein. Vzhledem k tomu, že vašemu tělu chybí proteiny, které se podobají této špičce, váš imunitní systém to interpretuje jako škodlivé a zahájí proti němu útok. Navíc, pokud jste později infikováni koronavirem, imunitní systém si spike protein pamatuje a dokonce ho rozpozná. Pozoruhodné tempo, jakým byly první dvě vakcíny COVID{4}} vyvinuty a veřejně dostupné v USA, podporuje názor, že mRNA vakcíny od společností Pfizer a Moderna získaly povolení pro nouzové použití od FDA v prosinci 2020-méně než rok poté, co čínští vědci oznámili složení genů koronaviru. Hlavní výhodou vakcinačních technologií na bázi mRNA je jejich potenciál pro rychlou modifikaci pro různá onemocnění, protože zpracování cílového antigenu je „outsourcováno“ hostitelskými buňkami, což znamená, že k návrhu vakcíny se používá pouze genetický kód antigenu. kandidát. Doba mezi výměnou genetické struktury SARS-CoV-2 čínskou vládou a transportem kandidáta na vakcínu společnosti Moderna do National Institutes of Health (NIH) ve Spojených státech ke studii fáze jedna byla pouhých 44 dní. mRNA vakcínové vakcíny historicky nezískaly regulační povolení pro použití u lidstva kvůli vnímanému nedostatku klinických zkoušek pro tuto metodu, stejně jako kvůli technickým problémům souvisejícím se stabilitou a distribucí produktu. S takovým nárůstem mRNA vakcín na trhu je možné přesnější rady, které pomohou při vývoji a hodnocení nových mRNA vakcín. Kontrola je další oblastí, kde je věda o mRNA vakcínách v plenkách. V současné době neexistují žádné oficiální pokyny amerického Úřadu pro kontrolu potravin a léčiv nebo Evropské lékové agentury pro mRNA vakcíny, přestože jsou léky dostatečně bezpečné pro velké klinické studie.

10. Závěrečné poznámky a vyhlídky do budoucna

Před rokem 2020 nebyla mRNA ve světě vakcín příliš známým vědeckým termínem. Více než rok od začátku katastrofické celosvětové pandemie COVID-19 zaznamenaly klinické programy založené na mRNA podstatný nárůst podpory, a to jak ze strany široké veřejnosti, tak ze strany velkých farmaceutických firem. Více než 80 milionů Američanů bylo očkováno proti SARS CoV-2-viru, který způsobuje COVID-19, s využitím možností technologie mRNA, které mění hru. „Oblast vakcíny se kvůli COVID-19 navždy změnila a navždy pokročila,“ říká Dan Barouch, MD, Ph.D., ředitel Centra pro virologii a výzkum vakcín na Harvard Medical School. Většinou v situaci vakcíny COVID-19 je vlákno mRNA navrženo tak, aby produkovalo jedinečný „spike protein“ jedinečného koronaviru, který vytváří imunitní odpověď, která by mohla chránit před infekcí skutečným virem. Vakcíny vyvinuté společnostmi Moderna a Pfizer/BioNTech byly jedinými vakcínami na bázi mRNA, které získaly nouzové schválení od klíčových regulačních orgánů, a skutečné důkazy z celosvětového uvedení COVID{12}} by byly rozhodující pro potvrzení jejich dlouhodobé účinnosti a bezpečnostní prvky proti koronaviru a některým dalším virovým agens. Doručování mRNA na bázi exosomů bude také budoucností terapeutik založených na mRNA [117,118]. Většinou s důsledky technologie založené na mRNA, které jsou zjevné, když se tyto vakcíny první generace začínají nasazovat globálně, v současné době dochází k rozmachu klinického výzkumu mRNA pro infekční onemocnění a průmysloví výzkumníci očekávají nárůst zájmu o platformy mRNA pro další terapeutické oblasti. , zejména onkologie, ale i neobvyklé autoimunitní stavy a neurodové geny.

Reference

1. KDO. WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard 2023. Dostupné online: https://covid19.who.int/ (vstup 17. ledna 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. COVID-19 Pandemie v Indii: Současný scénář a strmé stoupání vpřed. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Vznik, šíření, možná léčba a globální zátěž. Přední. Veřejné zdraví 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Vliv COVID-19 na onkologickou péči: aktualizace. Vaccines 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): Přehled literatury. J. Infect. Veřejné zdravotnictví 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Stárlá populace a pacienti s oslabenou imunitou: Vliv na varianty SARS-CoV-2 a výsledky léčby. Biologics 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomika a další imunologické studie. Vaccines 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO Strategie vakcín proti SARS-CoV-2: Komplexní přehled kandidátů fáze 3. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sun, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Rodič, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Účinnost vakcíny proti infekci, symptomatickému a těžkému COVID-19: Systematický přehled a metaanalýza. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vihol, DR COVAX-19® Vakcína: Zcela blokuje přenos viru na neimunní jedince. Clin. Complement Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, VB Intranazální vakcíny proti SARS-CoV-2: Od výzev k potenciálu v léčbě COVID-19. Drug Discov. Dnes 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. COVID-19 Vaccine: Komplexní zpráva o stavu. Virus Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Recenze vakcín proti COVID-19 schválených ve Spojených státech amerických pro nouzové použití. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Účinnost vakcín proti COVID{2}} v reálném světě: přehled literatury a metaanalýza. Int. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagoz, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Čurpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. The Impact of Vaccination to Control COVID{1}} Burden in the United States: A Simulation Modeling Approach. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP Neutralizační titry protilátek jako prediktory ochrany proti variantám SARS-CoV-2 a dopadu posílení: metaanalýza. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; a kol. COVID-19: Aktualizace vývoje vakcíny proti koronaviru. Přední. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID{1}} Průkopníci vakcíny a jejich nanotechnologický design. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Messenger Vakcíny na bázi RNA: Minulé, současné a budoucí směry v kontextu pandemie COVID-19. Adv. Drug Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; a kol. Závažný akutní respirační syndrom – koronavirus-2 Spike (S) kandidáti na proteinovou vakcínu: současný stav a vyhlídky do budoucna. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA vakcíny proti COVID-19: Co, proč a jak. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Song, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; a kol. Nový koronavirus od pacientů s pneumonií v Číně, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MY; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Struktura, biologie a strukturně založený terapeutický vývoj. Přední. Buňka. Infikovat. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Nucleic Acid Vaccines for COVID-19: A Paradigm Shift in the Vaccine Development Arena. Biologics 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. DNA Vaccines for SARS-CoV-2: Toward Third-Generation Vaccination Era. Expert Rev. Vaccines 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Strukturní biologie SARS-CoV-2 a důsledky pro terapeutický vývoj. Nat. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK hostitelská imunitní odpověď a imunobiologie lidské infekce SARS-CoV-2. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Pokročilé vakcinologické vzdělávání: Upravování jeho růstu a globální stopy. Vakcína 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Strategie vakcíny Prime-Boost proti virovým infekcím: Mechanismy a výhody. Vakcína 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM Měl by svět okamžitě spolupracovat na vývoji opomíjených živě oslabených vakcín proti COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. The Vaccine World of COVID-19: Příspěvek Indie. Vaccines 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Vakcíny Bae, YS COVID-19 (revidováno) a orální-mucosální vektorový systém jako potenciální platforma vakcín. Vakcíny 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Očkování proti COVID-19: Srovnávací hodnoty v oblasti veřejného zdraví a přenosu virů. Veřejné zdraví 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Je strategie posilovací dávky dostatečná pro omikronovou variantu SARS-CoV-2? Vaccines 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Replikace virových vektorových vakcín pro COVID-19: Potential Avenue ve Vaccination Arena. Viry 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID-19 Návrh vakcíny a strategie očkování pro vznikající varianty. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Nedávný přehled managementu COVID-19: diagnostika, léčba a očkování. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uverský, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 a očkování: mýty vs věda. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. The Delta and Omicron Variants of SARS-CoV-2: What We Know So Far. Vaccines 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. DNA Vaccines: Developing New Strategies against Cancer. J. Biomed. Biotechnol. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Song, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; a kol. Společná imunizace s CHIKV VLP a DNA vakcínami indukuje u myší slibnou humornou odezvu. Přední. Immunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Bezpečnost a komparativní imunogenicita HIV-1 DNA vakcíny v kombinaci s plazmidovým interleukinem 12 a dopad intramuskulární elektroporace na aplikaci. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Dodávkové systémy pro vakcíny založené na nanočásticích. Vaccines 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. Vakcíny MRNA: minulost, současnost, budoucnost. Asian J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Zamotaná historie vakcín MRNA. Příroda 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined In vivo aplikace RNA vede k indukci specifických cytotoxických T lymfocytů a protilátek. Eur. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; a kol. MRNA zapouzdřená v lipidech kódující silně neutralizující lidskou monoklonální protilátku chrání před infekcí Chikungunya. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutika založená na MRNA – vývoj nové třídy léků. Nat. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Imunitní odpověď T buněk proti SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modifications in a Emergency: The Role of N1-Methylpseudouridine in COVID-19 Vaccines. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; a kol. Účinnost a bezpečnost kandidáta na vakcínu CVnCoV SARS-CoV-2 MRNA v deseti zemích Evropy a Latinské Ameriky (HERALD): Randomizovaná, pozorovatelem zaslepená, placebem kontrolovaná studie fáze 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ Aktualizace vývoje vakcíny s vlastním zesilováním MRNA. Vaccines 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. New Hopes in Vaccine Technology: mRNA Vaccines. Microbiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Příslib MRNA vakcín: Biotechnologická a průmyslová perspektiva. Npj Vaccines 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Self-amplifying RNA vakcíny pro infekční onemocnění. Gen. Ther. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Principy pro navrhování optimální MRNA lipidové nanočásticové vakcíny. Curr. Opin. Biotechnol. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In vitro evoluce vylepšených replikonů RNA pro imunoterapii. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Přizpůsobení vakcíny MRNA k vyrovnání přirozené/adaptivní imunitní odpovědi. Trends Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Ukázka, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Biotechnol. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, TV Inhibice překladu členy rodiny IFIT je určena jejich schopností selektivně interagovat s 50 -koncovými oblastmi Cap0-, Cap1- a 50 Ppp-MRNA. Nucleic Acids Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalská, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; a kol. Cap Analogy modifikované 1,2-dithiodifosfátovou složkou chrání MRNA před odvíčkováním a zvyšují její translační potenciál. Nucleic Acids Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalská, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; a kol. Analogy MRNA Cap substituované v tetrafosfátovém řetězci s CX2: Identifikace O-na-CCl2 jako první přemosťující modifikace, která poskytuje odolnost vůči decapping bez narušení translace. Nucleic Acids Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Příběhy detailních Poly (A) Tails. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Organizační principy náboru eukaryotických ribozomů. Annu. Chem. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. Velké poselství posla pro očkování. Expert Rev. Vaccines 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC Výroba vakcín MRNA: Výzvy a překážky. Vaccine 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Inexpensive Biopharmaceutical. J. Multidiscip. Ing. Sci. Technol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Román, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. The COVID-19 Vaccine Development Landscape. Nat. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA jako transformační technologie pro vývoj vakcín pro kontrolu infekčních nemocí. Mol. Ther. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]