Produkce lipázy Yarrowia Lipolytica při fermentaci v pevné fázi s použitím vedlejších produktů z ovoce Amazonky a sójové moučky jako substrátu, část 2

2.5. Hydrolýza rybího oleje

Lipázy byly použity při hydrolýze mastných kyselin ke koncentraci polynenasycených mastných kyselin (PUFA) [44,45]. Hlavní výhodou aplikace lipáz při výrobě polynenasycených mastných kyselin je specifičnost enzymu a reakcí probíhajících za mírných teplotních podmínek, což podporuje zachování struktury PUFA [44]. Použití lipáz je preferováno před chemickými metodami, protože poskytují glyceridy s nízkým výtěžkem a čistotou [46]. Úlohou lipáz při selektivní hydrolýze nasycených mastných kyselin (SFA) a mononenasycených mastných kyselin (MUFA) z triacylglycerolů (TAG) je produkce glyceridů bohatých na PUFA. Principem této metody je sterická zábrana způsobená molekulární konfigurací dvojných vazeb uhlík-cis v PUFA, které způsobují skládání řetězců mastných kyselin. Enzymaticky aktivní místa tedy nemají přístup k esterovým vazbám těchto mastných kyselin s jejich glycerolovým skeletem [47,48]. Se začleněním mastných kyselin do stravy je spojena řada výhod, jako je vývoj dítěte, prevence kardiovaskulárních onemocnění, rakoviny a různých duševních poruch (deprese, poruchy pozornosti, hyperaktivita), kromě protizánětlivého potenciálu a potenciální hypertenze. ovládání [49].

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a má schopnost vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý reparační účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na Cistanche Tubulosa

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Výroba enzymových extraktů pro použití v procesech, jako je hydrolýza, může být nákladným úkolem. Zajímavou alternativou tak může být výzkum surovin, které snižují náklady na výrobu. Použití pevného biokatalyzátoru je žádoucí, protože tento pevný biokatalyzátor může být znovu použit v enzymatických reakcích, kromě toho, že má vynikající stabilitu při skladování při pokojové teplotě, bez nákladů na chlazení a snadnou přepravu [41]. Neexistují žádné zprávy o použití pevného biokatalyzátoru z Yarrowia lipolytica k výrobě PUFAS enzymatickou hydrolýzou rybího oleje. Byla tedy studována aplikace surového enzymatického extraktu a pevného biokatalyzátoru vyrobeného za použití andiroba olejového koláče a sójového šrotu (50:50), aby se vyhodnotila potenciální aplikace enzymů při hydrolýze rybího oleje k další produkci polynenasycených mastných kyselin vhodným způsobem. (Obrázek 6). Je možné pozorovat vysoký stupeň hydrolýzy (DH) v kratších reakčních časech při použití pevného biokatalyzátoru (63, 70,8, 72,5 a 74,7 procenta) než u enzymatického extraktu (47,5, 61,5, 66,5 a 74,8 procenta) po 24,8 procentech. 48, 72 hodin a 144 hodin.

K získání koncentrovaných polynenasycených mastných kyselin je neustále aplikován proces enzymatické hydrolýzy. Gao a kol. [50] použili lipázu při hydrolýze tresčího oleje a obsah EPA a DHA se zlepšil 324-krát a 1{4}}krát. Aarthi a kol. [20] použili koncentrovanou lipázu (1000 U/ml) při hydrolýze rybích olejů a také zjistili rychlost hydrolýzy nad 60 procent po 72 hodinách. V této práci bylo dosaženo lepších stupňů hydrolýzy za použití surového enzymatického extraktu lipázy (tj. bez čištění) při srovnání stejné doby hydrolýzy. Jiní autoři studovali hydrolýzu jaterního oleje Musteleus mustelus a oleje z tuleního tuku, kteří uvádějí 75 procent a 70 procent hydrolýzy po 24 a 9 hodinách reakce [25,26].

Martins a kol. [51] použili pro hydrolýzu rybího oleje komerční lipázu z Burkholderia cepacia (Amano) a po 48 hodinách reakce získali 55,6 procenta DHA ve srovnání s maximálním vypočteným obsahem. V naší práci jsme v předběžné studii získali 70,8 procent hydrolýzy po 48 hodinách reakce s použitím pevného biokatalyzátoru.

Dosud taková zjištění naznačovala životaschopnost použití vedlejších produktů k výrobě lipázy při fermentaci v pevném stavu jako způsob zmírnění poškození životního prostředí, hodnocení vedlejších produktů a nákladové efektivity. Kromě toho výsledky ukazují potenciální aplikaci enzymu lipázy při hydrolýze rybího oleje k další produkci polynenasycených mastných kyselin ve vhodném procesu.

Navzdory velkému množství levných vedlejších zemědělsko-průmyslových produktů je stanovení a standardizace složení spolu s odhadem nákladů na získání enzymatického extraktu a pevného biokatalyzátoru z levných vedlejších zemědělsko-průmyslových produktů stále výzvou, ale extrémně závisí na typu vedlejšího produktu, sezónnosti a generovaném množství, stejně jako na použitém procesu a geografické poloze, mimo jiné. Je tedy třeba překonat mimo jiné problémy, jako je složitost řetězce a jeho logistické náklady, používání složitých a nákladných procesů, vysoká spotřeba energie a regulační problémy. V tomto smyslu musí zpracování vedlejších produktů překonat několik překážek, než se stane ekonomicky životaschopné, včetně potřeby zpracovávat velké množství surovin, kapacity pro zpracování heterogenních surovin, integrované logistiky s různými zpracovatelskými průmysly a možnosti integrace. proces ve zpracovatelské jednotce, aby mimo jiné umožnil generování vysoce hodnotných složek [52–55].

3. Materiály a metody

3.1. Materiál

Sójový šrot byl zakoupen od Caramuru Alimentos (Goiás, Brazílie). Olejový koláč Andiroba vyrobený z těžby ropy poskytl Beraca Ingredientes Naturais (Pará, Brazílie). Oba substráty byly standardizovány o granulometrii (<1.18 mm) and properly stored under refrigeration in polypropylene packages until use. The fish oil was purchased from Mundo dos Óleos, and according to the manufacturer, it is extracted by cold pressing and filtration, obtained from raw material with guaranteed origin. All other chemicals used were of analytical grade and used as received without any further purification, being obtained from Tedia (acetone), Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA, glucose, azocasein, agar, yeast extract, ethanol, methanol), Vetec (Tween 80), Oxoid (peptone), Isofar (sodium hydroxide, gum Arabic), and Precision Plus Protein Kaleidoscope—Bio-rad (molecular mass markers, kDa).

3.2. Podmínky kultivace mikroorganismů a inokula

Yarrowia lipolytica IMUFRJ50682, izolovaná z ústí v zálivu Guanabara, Rio de Janeiro, Brazílie [56] byla kultivována při 28 ◦C v YPD—agarovém médiu (hmotnost/objem: kvasnicový extrakt 1 procento; pepton, 2 procenta; glukóza, 2 procenta agar, 3 procenta). Buňky byly pěstovány v kapalném médiu obsahujícím kvasnicový extrakt 1 procento (w/v), pepton, 2 procenta (w/v) a glukózu 2 procenta (w/v) po dobu 72 hodin, 160 ot./min. při 28 °C.

3.3. Charakterizace agroprůmyslového vedlejšího produktu

Fyzikálně-chemické složení sójového šrotu a andiroba olejového koláče bylo stanoveno z hlediska vlhkosti, bílkovin, sacharidů, popela, éterového extraktu, nerozpustné vlákniny a obsahu rozpustné vlákniny podle metodiky zveřejněné Asociací oficiálních analytických chemiků (AOAC). ) [57]. Navíc, protože produkce lipázy Y. lipolytica je ovlivněna provzdušňováním [58], byla pórovitost lože v SSF hodnocena podle rovnice (1), kde ε je pórovitost (vyjádřená v m3 vzduchu·m−3 lože); ρsuchá pevná látka je sypná hustota suchého vzorku (kg·m−3 ); a ρvlhká pevná látka je hustota vzorku po přidání vody (kg·m−3 ) [58].

3.4. Výroba lipázy od SSF

Pevná matrice obsahující sójový šrot a koláč andiroba oleje byla připravena před inokulací v reaktoru typu tácu s různými poměry substrátu a autoklávována při 121 ◦C po dobu 20 min. Pevné parametry procesu používané pro produkci lipázy byly vlhkost 55 procent a koncentrace inokula 0,71 mg suché biomasy/g substrátu [24]. Reaktory byly inkubovány v komoře s biochemickou spotřebou kyslíku (BOD) při 28 °C a během fermentace byly odebírány obětní vzorky (tj. jeden tácový reaktor po dobu vzorkování) pro analýzu.

SSF byl hodnocen pomocí různých kombinací andiroba olejového koláče a sójové moučky ({{0}}:1{{10}}}0; 25:75; 50:50; 75 :25 a 100:0) v různých časech (0, 12, 24, 32 a 48 h). Poté bylo vyhodnoceno doplnění pevné matrice obsahující koláč andiroba olejového koláče a sójový šrot (50:50) přidáním 1,5 (% w/v) sójového oleje v průběhu času (0, 12, 14, 20, 24, 28, 48, a 72 h) pro získání zvýšení lipolytické aktivity. Kromě toho byla testována přítomnost Tween 80 (0,001 procenta w/v) ve fermentačním médiu obsahujícím 1,5 (procento w/v) sojového oleje. Fermentace byla monitorována stanovením aktivity lipázy a proteázy, jakož i vlhkosti a pH (popsáno v pododdíle "3.6. Analytická stanovení").

3.5. Extrakce enzymů a výroba pevného biokatalyzátoru

Enzymová extrakce byla provedena přidáním 50 ml 50 mM pufru fosforečnanu draselného pH 7,0 do bioreaktorů s následnou inkubací při 37 °C, 200 rpm, po dobu 20 minut. Následně byl fermentovaný materiál suspendovaný v pufru slisován za použití mačkadla s pohledem a centrifugován při 3000 otáčkách za minutu po dobu 5 minut. Pevný biokatalyzátor byl získán lyofilizací celé hmoty získané na konci fermentačního procesu po dobu 72 hodin a skladován při teplotě místnosti po dobu 7 měsíců pro ověření enzymatické stability.

3.6. Analytická stanovení

3.6.1. Lipázová aktivita

Lipázová aktivita byla provedena za použití metody navržené Freirem et al. [59]. Reakční médium bylo emulgováno v homogenizátoru Ultra Turrax (IKA) s použitím 5 procent (w/v) olivového oleje a 5 procent (w/v) arabské gumy v 100 mM fosfátovém pufru (pH 7.{16}}). Enzymatický extrakt (1 ml) nebo 0,5 g pevného biokatalyzátoru byl přidán do 19 ml reakční směsi a inkubován po dobu 20 minut, 200 ot./min. při 37 °C. Reakce byla přerušena přidáním 20 ml roztoku aceton-ethanol a volné mastné kyseliny byly titrovány v automatickém titrátoru (Metrohm 916—Ti-Touch) s použitím 0,04 mol/l roztoku NaOH. Jedna jednotka lipázové aktivity (U) byla definována jako množství enzymu, které produkuje 1 umol mastné kyseliny za minutu za podmínek testu.

3.6.2. Proteázová aktivita

Proteázová aktivita byla kvantifikována podle metodiky Charneyho a Tomarelliho [60]. Enzymatický extrakt (0,5 ml) byl přidán do 0,5 ml 0,5% (w/v) roztoku azokaseinu připraveného s 50 mM acetátovým pufrem (pH) a inkubován při 32 ◦C po dobu 40 min. Reakce byla zastavena přidáním 0,5 ml 15% roztoku kyseliny trichloroctové (hmotnost/objem) a vzorky byly odstřeďovány při 3000 otáčkách za minutu po dobu 15 minut. Supernatant (100 ul) byl přidán na 96-mikrotitrační destičku obsahující 100 ul 5M hydroxidu draselného a absorbance při 428 nm byla měřena ve čtečce mikrotitračních destiček (SpectraMax, Molecular Devices). Jedna jednotka aktivity byla definována jako množství enzymu schopného podpořit jednotkové zvýšení absorbance za minutu.

3.6.3. Obsah vlhkosti a pH

Obsah vlhkosti byl monitorován pomocí váhy analyzátoru vlhkosti (AND MX-50). pH bylo měřeno na pH metru (TECNAL, model TR-107 PT100, Brazílie).

3.7. SDS-PAGE

Elektroforéza byla provedena podle metody popsané Laemmli [61] v polyakrylamidovém gelu (5 procent stohování, 15 procent separace, 0 tloušťka 0,75 mm). Vzorky byly smíchány v poměru (1:4) z kombinace andiroba olejového koláče a sójových bobů (50:50) se vzorkovým pufrem obsahujícím -merkaptoethanol, zahřátý na 95 °C po dobu 5 minut a nanesen na gel. Elektroforéza byla prováděna při 150 V po dobu 30 minut (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) a gel byl odhalen pomocí Coomassie Blue R-250. Byl použit standardní proteinový marker (Bio-rad, Hercules, CA, USA) s molekulovou hmotností v rozmezí od 10 do 250 kDa.

3.8. Hydrolýza rybího oleje: Potenciální aplikace

Stupeň hydrolýzy (DH) rybího oleje byl měřen navážením 1 g rybího oleje a přidáním 25 ml fosfátového pufru pH 7.0 pro ověření potenciální aplikace enzymu při hydrolýze rybího oleje. Poté bylo 5 ml enzymatického extraktu (37 U) v jantarových baňkách mícháno po dobu 168 hodin. Reakce byla zastavena 20 ml acetonu a volné mastné kyseliny byly titrovány v automatickém titrátoru 0,1 M methanolickým KOH. Slepý reakční vzorek byl získán přidáním enzymu až na konci reakce.

Stupeň hydrolýzy (DH) byl vypočten podle rovnice (2):

kde As je kyselost vzorku; Aa je kyselost z autohydrolýzy; Si je index zmýdelnění.

3.9. Statistická analýza

Všechny experimenty byly opakovány třikrát. V každé replikaci byly analýzy provedeny trojmo. Výsledky odpovídaly průměru ± standardní odchylka. Data byla analyzována jednosměrnou analýzou rozptylu (ANOVA), zatímco Tukeyho test (p < 0.05) byl použit k testování rozdílů mezi průměry pomocí Sisvar 5.6.

4. závěr

Fermentační médium získané po smíchání olejového koláče andiroba a sójové moučky bylo velmi účinné při produkci lipázy. Zvolenou fermentační matricí byla směs andiroba olejového koláče a sójového šrotu v poměru 50}:50, produkující 63,70 U·g −1 lipolytické aktivity. Maximální lipolytická aktivita byla získána (82,52 U·g -1) po použití poměru koláče andiroba oleje a sójového šrotu 50:50 po suplementaci Tweenem 80 (0,001 procenta) a sójovým olejem (1,5 procenta). Při elektroforetické analýze byly detekovány pásy proteinů již uváděných v literatuře jako YL Lip2 (37 a 40 kDa). Předchozí aplikace lipázy v olejové hydrolýze poskytla až 63 procent hydrolýzy po 24 hodinách. Tato studie ukázala, že je možné vyrobit lipázu pomocí vedlejších produktů z oblasti Amazonie v kombinaci se sójovou moučkou a aplikovat ji na hydrolýzu rybího oleje za účelem další výroby polynenasycených mastných kyselin ve vhodném procesu.

Příspěvky autora:Konceptualizace, BDR, ACL a MAZC; Metodika, ASSC, JCSS, FVdN, CECdS, BDR, ACL a MAZC; Formální analýza, ASSC, JCSS a FVdN; Vyšetřování, ASSC, JCSS a FVdN; Zdroje, ASSC, JCSS a FVdN; Správa dat, ASSC, JCSS a FVdN; Psaní – příprava původního návrhu, ASSC, JCSS, FVdN a CECdS; Psaní – revize a úpravy, BDR, CECdS, ACL a MAZC; supervize, BDR, CECdSACL a MAZC; Správa projektu, BDR, ACL a MAZC; Získávání finančních prostředků, BDR, ACL a MAZC Všichni autoři si přečetli publikovanou verzi rukopisu a souhlasili s ní.

Poděkování: Autoři uznávají Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brazílie (CAPES – Finanční kód 001); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico (CNPq); a Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ).

Reference

1. Serra, JL; Rodrigues, AMdC; Freitas, RA; Meirelles, AJdA; Darnet, SH; Silva, LHMd Alternativní zdroje olejů a tuků z amazonských rostlin: mastné kyseliny, methylové nástroje, celkové karotenoidy a chemické složení. Food Res. Int. 2019, 116, 12–19. [CrossRef] [PubMed]

2. Penido, C.; Conte, FP; Chagas, MS; Rodrigues, CA; Pereira, JF; Henriques, MG Protizánětlivé účinky přírodních tetranortriterpenoidů izolovaných z Carapa guianensis Aublet na zymosanem indukovanou artritidu u myší. Inflamm. Res. 2006, 55, 457–464. [CrossRef] [PubMed]

3. Penido, C.; Costa, KA; Pennaforte, RJ; Costa, MF; Pereira, JF; Siani, AC; Henriques, MG Antialergické účinky přírodních tetranortriterpenoidů izolovaných z Carapa guianensis Aublet na alergenem indukovanou vaskulární permeabilitu a hyperalgezii. Inflamm. Res. 2005, 54, 295–303. [CrossRef]

4. Santos, KIP; Benjamin, JKF; Costa, KAD; Reis, AS; Souza Pinheiro, WB; Santos, AS Metabolomické techniky použité při výzkumu fenolových kyselin z vedlejšího agroprůmyslového produktu Carapa guianensis Aubl. Arab. J. Chem. 2021, 14, 103421. [CrossRef]

5. Lourenço, JNP; Ferreira, LMM; Martins, GC; Nascimento, DG Produção, Biometria de Frutos e Sementes a Extração do Óleo de Andiroba (Carapa Guianensis Aublet; Sob Manejo Comunitário em Parintins, AM: Brasília, Brazílie, 2017; str. 36.

6. Organic, S. Óleo de Andiroba.

7. Conab. Boletim da Sociobiodiversidade; Conab: Brasília, Brazílie, 2017; Svazek 1, str. 67.

8. Souza, ČR; Lima, RMB; Azevedo, CP; Rossi, LMB Andiroba (Carapa guianensis Aubl.); Embrapa Amazônia Ocidental: Brasilia, Brazílie, 2006; 21p.

9. Oliveira, F.; Souza, CE; Peclat, VROL; Salgado, JM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ; Venâncio, A.; Belo, I. Optimalizace produkce lipázy Aspergillus ibericus z olejových koláčů a její aplikace v esterifikačních reakcích. Food Bioprod. Proces. 2017, 102, 268–277. [CrossRef]

10. Pandey, A. Fermentace v pevné fázi. Biochem. Ing. J. 2003, 13, 81–84. [CrossRef]

11. Martínez, O.; Sánchez, A.; Písmo, X.; Barrena, R. Zvýšení bioprodukce aromatických sloučenin s přidanou hodnotou prostřednictvím fermentace v pevné fázi bagasy z cukrové třtiny a melasy z cukrové řepy: Operační strategie a rozšiřování procesu. Bioresour. Technol. 2018, 263, 136–144. [CrossRef] [PubMed]

12. Ano, T.; Jin, GY; Mizumoto, S.; Rahman, MS; Okuno, K.; Shoda, M. Fermentace lipopeptidového antibiotika iturin A v pevném stavu pomocí nového systému fermentačního reaktoru v pevném stavu. J. Environ. Sci. 2009, 21 (Suppl. S1), S162–S165. [CrossRef]

13. Vandenberghe, LPS; Karp, SG; Oliveira, PZ; Carvalho, JC; Rodrigues, C.; Soccol, ČR Kapitola 18 – Fermentace v pevné fázi pro výrobu organických kyselin. In Current Developments in Biotechnology and Bioengineering; Pandey, A., Larroche, C., Soccol, CR, Eds.; Elsevier: Amsterdam, Nizozemsko, 2018; s. 415–434.

14. Sala, A.; Vittone, S.; Barrena, R.; Sánchez, A.; Artola, A. Skenování zemědělsko-průmyslových odpadů jako substrátů pro produkci houbových biopesticidů: Použití Beauveria bassiana a Trichoderma harzianum při fermentaci v pevné fázi. J. Environ. Manag. 2021, 295, 113113. [CrossRef] [PubMed]

15. Banát, IM; Carboué, Q.; Saucedo-Castañeda, G.; de Jesús Cázares-Marinero, J. Biosurfactants: Zelená generace speciálních chemikálií a potenciální výroba pomocí technologie fermentace v pevném stavu (SSF). Bioresour. Technol. 2021, 320, 124222. [CrossRef] [PubMed]

16. Pereira, AS; Sant'Ana, GCF; Amaral, PFF Mango zemědělsko-průmyslové odpady pro výrobu lipázy z Yarrowia lipolytica a potenciál fermentované pevné látky jako biokatalyzátoru. Food Bioprod. Proces. 2019, 115, 68–77. [CrossRef]

17. Brígida, AIS; Amaral, PFF; Coelho, MAZ; Gonçalves, LRB Lipáza z Yarrowia lipolytica: Výroba, charakterizace a aplikace jako průmyslového biokatalyzátoru. J. Mol. Catal. B Enzym. 2014, 101, 148–158. [CrossRef]

18. Treichel, H.; Oliveira, D.; Mazutti, MA; Di Luccio, M.; Oliveira, JV Přehled produkce mikrobiálních lipáz. Food Bioprocess Technol. 2010, 3, 182–196. [CrossRef]

19. Mehta, A.; Guleria, S.; Sharma, R.; Gupta, R. 6 – Lipázy a jejich aplikace s důrazem na potravinářský průmysl. In Mikrobiální biotechnologie v potravinách a zdraví; Ray, RC, Ed.; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2021; s. 143–164.

20. Aarthy, M.; Saravanan, P.; Ayyadurai, N.; Gowthaman, MK; Kamini, NR Dvoustupňový proces výroby koncentrátů omega 3-polynenasycených mastných kyselin ze sardinkového oleje pomocí Cryptococcus sp. MTCC 5455 lipáza. J. Mol. Catal. B Enzym. 2016, 125, 25–33. [CrossRef]

21. Nascimento, FV; Castro, AM; Secchi, AR; Coelho, MAZ Pohledy na suplementaci médií při fermentaci sójových slupek v pevné fázi pomocí Yarrowia lipolytica: Vliv na produkci lipázy v bioreaktorech na tácku a v izolovaných bioreaktorech s náplní. Biochem. Ing. J. 2021, 166, 107866. [CrossRef]

22. Prodej, JCS; Castro, AM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Doplnění slupek vodního melounu jako zesilovač produkce lipázy a esterázy Yarrowia lipolytica při fermentaci v pevné fázi a jejich potenciální využití jako biokatalyzátorů při depolymeračních reakcích poly(ethylentereftalátu) (PET). Biocatal. Biotransformace. 2020, 38, 457–468. [CrossRef]

23. Aguieiras, EKG; de Barros, DSN; Fernandez-Lafuente, R.; Freire, DMG Výroba lipáz v bavlníkové mouce a aplikace fermentované pevné látky jako biokatalyzátoru v esterifikačních a transesterifikačních reakcích. Obnovit. Energie 2019, 130, 574–581. [CrossRef]

24. Souza, CEC; Farias, MA; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Přidání hodnoty k zemědělsko-průmyslovým vedlejším produktům z extrakce řepkového a sójového oleje prostřednictvím produkce lipázy pomocí Yarrowia lipolytica při fermentaci v pevné fázi. Zhodnocení odpadní biomasy 2017, 8, 1163–1176. [CrossRef]

25. On, H.; Li, Y.; Zhang, L.; Ding, Z.; Shi, G. Pochopení a aplikace regulace dusíku Bacillus: Perspektiva syntetické biologie. J. Adv. Res. 2022; v tisku. [CrossRef]

26. Almeida, AF; Taulk-Tornisielo, SM; Carmona, EC Vliv zdrojů uhlíku a dusíku na produkci lipázy nově izolovaným kmenem Candida Viswanathan. Ann. Microbiol. 2013, 63, 1225–1234. [CrossRef]

27. Salihu, A.; Alam, MZ; AbdulKarim, MI; Salleh, HM Výroba lipázy: Pohled na využití obnovitelných zemědělských zbytků. Resour. Conserv. Recyklovat. 2012, 58, 36–44. [CrossRef]

28. Liu, X.; Yu, X.; On, A.; Xia, J.; He, J.; Deng, Y.; Xu, N.; Qiu, Z.; Wang, X.; Zhao, P. Fermentace v jedné nádobě pro výrobu erythritolu z destilačních zrn kokultivací Yarrowia lipolytica a Trichoderma reesei. Bioresour. Technol. 2022, 351, 127053. [CrossRef] [PubMed]

29. Wang, W.; Wei, H.; Alahuhta, M.; Chen, X.; Hyman, D.; Johnson, DK; Zhang, M.; Himmel, ME Heterologní exprese xylanázových enzymů v lipogenních kvasinkách Yarrowia lipolytica. PLoS ONE 2014, 9, e111443. [CrossRef] [PubMed]

30. Nascimento, FVd; Lemes, AC; Castro, AMd; Secchi, AR; Zarur Coelho, MA Perspektiva časové evoluce produkce lipázy Yarrowia lipolytica při fermentaci v pevné fázi. Procesy 2022, 10, 381. [CrossRef]

31. Mandari, V.; Nema, A.; Devarai, SK Sekvenční optimalizace a výroba lipázy ve velkém měřítku za použití směsi tří substrátů z Aspergillus niger MTCC 872 fermentací v pevné fázi. Process Biochem. 2020, 89, 46–54. [CrossRef]

32. Malá, JG; Edwinoliver, NG; Kamini, NR; Puvanakrishnan, R. Fermentace v pevném stavu se smíšeným substrátem pro produkci a extrakci lipázy z Aspergillus niger MTCC 2594. J. Gen. Appl. Microbiol. 2007, 53, 247–253. [CrossRef]

33. Barth, G.; Gaillardin, C. Yarrowia lipolytica. In Nonconventional Yeasts in Biotechnology; Wolf, K., Ed.; Springer: New York, NY, USA, 1996; s. 313–388.

34. Moftah, OA; Grbavc´c, S.; Zuža, M.; Lukovič, N.; Bezbradica, D.; Kneževi´c-Jugovi´c, Z. Přidání hodnoty k olejovému koláči jako odpadu z průmyslu zpracování ropy: Výroba lipázy a proteázy Candida využití při fermentaci v pevné fázi. Appl. Biochem. Biotechnol. 2012, 166, 348–364. [CrossRef]

35. Contesini, FJ; da Silva, VC; Maciel, RF; de Lima, RJ; Barros, FF; de Oliveira Carvalho, P. Analýza povrchu odezvy na produkci enantioselektivní lipázy z Aspergillus niger fermentací v pevné fázi. J. Microbiol. 2009, 47, 563–571. [CrossRef]

36. Rigo, E.; Ninow, JL; Di Luccio, M.; Oliveira, JV; Polloni, AE; Remonatto, D.; Arbter, F.; Vardanega, R.; Oliveira, D.; Treichel, H. Výroba lipázy pevnou fermentací sójového šrotu s různými doplňky. LWT Food Sci. Technol. 2010, 43, 1132–1137. [CrossRef]

37. Slunce, SY; Xu, Y. Fermentace v pevném stavu pro produkci „celobuněčné syntetické lipázy“ z Rhizopus chinensis a identifikace funkčního enzymu. Process Biochem. 2008, 43, 219–224. [CrossRef]

38. Farias, MA; Valoni, EA; Castro, AM; Coelho, MAZ Produkce lipázy Yarrowia Lipolytica při fermentaci v pevné fázi za použití různých agroprůmyslových zbytků. Chem. Ing. Trans. 2014, 38, 301–306.

39. Sidhu, P.; Sharma, R.; Soni, SK; Gupta, JK Produkce extracelulární alkalické lipázy novým termofilním Bacillus sp. Folia Microbiol. 1998, 43, 51–54. [CrossRef]

40. Corzo, G.; Revah, S. Produkce a charakteristiky lipázy z Yarrowia lipolytica 681. Bioresour. Technol. 1999, 70, 173–180. [CrossRef]

41. Souza, CEC; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Charakterizace a aplikace lipázy Yarrowia lipolytica získané fermentací v pevném stavu při syntéze různých esterů používaných v potravinářském průmyslu. Appl. Biochem. Biotechnol. 2019, 189, 933–959. [CrossRef]

42. Fickers, P.; Fudalej, F.; Dall, MTL; Casaregola, S.; Gaillardin, C.; Thonart, P.; Nicaud, JM Identifikace a charakterizace genů LIP7 a LIP8 kódujících dvě extracelulární triacylglycerollipázy v kvasinkách Yarrowia lipolytica. Fungal Genet. Biol. 2005, 42, 264–274. [CrossRef]

43. Cheng, Y.-H.; Hsiao, FS-H.; Wen, C.-M.; Wu, C.-Y.; Dybus, A.; Yu, Y.-H. Smíšená fermentace sójového šrotu proteázou a probiotiky a její účinky na růstovou výkonnost a imunitní odpověď u brojlerů. J. Appl. Anim. Res. 2019, 47, 339–348. [CrossRef]

44. Chakraborty, K.; Paul Raj, R. Selektivní obohacení n−3 polynenasycených mastných kyselin s délkou acylového řetězce C18–C20 ze sardinkového oleje pomocí lipázy Pseudomonas fluorescens MTCC 2421. Food Chem. 2009, 114, 142–150. [CrossRef]

45. Zarai, Z.; Eddehech, A.; Rigano, F.; Oteri, M.; Micalizzi, G.; Dugo, P.; Mondello, L.; Cacciola, F. Charakterizace monoacylglycerolů a diacylglycerolů bohatých na polynenasycené mastné kyseliny produkovaných hydrolýzou jaterního oleje Musteleus mustelus katalyzované imobilizovanou bakteriální lipázou. J. Chromatogr. 2020, 1613, 460692. [CrossRef]

46. ​​Yang, J.; Píseň, X.; Wang, L.; Cui, Q. Komplexní analýza metabolických změn u Schizochytrium sp. kmeny s různým obsahem DHA. J. Chromatogr. B 2020, 1160, 122193. [CrossRef]

47. Yang, Z.; Jin, W.; Cheng, X.; Dong, Z.; Chang, M.; Wang, X. Enzymatické obohacení n-3 glyceridů polynenasycených mastných kyselin selektivní hydrolýzou. Food Chem. 2021, 346, 128743. [CrossRef]

48. Okada, T.; Morrissey, MT Výroba koncentrátu n-3 polynenasycených mastných kyselin ze sardinkového oleje pomocí imobilizované lipázy Candida rugosa. J. Food Sci. 2008, 73, C146–C150. [CrossRef]

49. Riediger, ND; Othman, RA; Suh, M.; Moghadasian, MH Systémový přehled rolí n-3 mastných kyselin ve zdraví a nemoci. J. Am. Strava. Doc. 2009, 109, 668–679. [CrossRef] [PubMed]

50. Gao, K.; Chu, W.; Sun, J.; Mao, X. Identifikace alkalické lipázy schopné lepšího obohacení EPA než DHA díky selektivitě mastných kyselin a regioselektivitě. Food Chem. 2020, 330, 127225. [CrossRef]

51. Martins, PA; Trobo-Maseda, L.; Lima, FA; de Morais Júnior, WG; De Marco, JL; Salum, TFC; Guisán, JM Omega-3 výroba hydrolýzou rybího oleje pomocí lipázy z Burkholderia gladioli BRM58833 imobilizované a stabilizované postimobilizačními technikami. Biochem. Biophys. Rep. 2022, 29, 101193. [CrossRef] [PubMed]

52. Lemes, AC; Egea, MB; Oliveira Filho, JGd; Gauterio, GV; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Biologické přístupy pro extrakci bioaktivních sloučenin z vedlejších produktů agroprůmyslu: Přehled. Přední. Bioeng. Biotechnol. 2022, 9, 1–18. [CrossRef] [PubMed]

53. Lemes, AC; Sala, L.; Rudy, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Přehled nejnovějších pokroků v šifrovaných bioaktivních peptidech z odpadu bohatého na bílkoviny. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef]

54. Lemes, AC; Coelho, MAZ; Gauterio, GV; Paula, LC; Filho, JGdO; Egea, MB Kapitola 11 – Průmyslové odpady a vedlejší produkty: Zdroj funkčních potravin, nutraceutik a biopolymerů. In Biopolymers in Nutraceuticals and Functional Foods; The Royal Society of Chemistry: Londýn, Spojené království, 2023; s. 329–360.

55. Pintado, ME; Teixeira, JA Valorização subprodutos da indústria food: Obtenção de folderes de valor acrescentado. Bol. Biotecnol. 2015, 1, 10–12.

56. Hagler, AN; Mendonça-Hagler, LC Kvasinky z mořských vod a vod ústí s různou úrovní znečištění ve státě Rio de Janeiro v Brazílii. Appl. Environ. Microbiol. 1981, 41, 173–178. [CrossRef]

57. AOAC. Oficiální metody analýzy AOAC International; Association of Official Analytical Chemists: Washington, DC, USA, 1995.

58. Castro, AMd; Castilho, LdR; Freire, DMG Charakterizace zbytkových koláčů babassu, řepky, ricinových semen a slunečnice pro použití jako suroviny pro fermentační procesy. Ind. Crops Prod. 2016, 83, 140–148. [CrossRef]

59. Freire, DM; Teles, EM; Bon, EP; Sant' Anna, GL, Jr. Produkce lipázy Penicillium omezená ve stolním fermentoru: Vliv výživy uhlíkem a dusíkem, míchání a provzdušňování. Appl. Biochem. Biotechnol. 1997, 63–65, 409–421. [CrossRef]

60. Charney, J.; Tomarelli, RM Kolorimetrická metoda pro stanovení proteolytické aktivity duodenální šťávy. J. Biol. Chem. 1947, 171, 501–505. [CrossRef] [PubMed]

61. Laemmli, UK Štěpení strukturních proteinů během shromáždění vedoucího bakteriofága T4. Příroda 1970, 227, 680–685. [CrossRef] [PubMed]

Zřeknutí se odpovědnosti / Poznámka vydavatele:Prohlášení, názory a údaje obsažené ve všech publikacích jsou výhradně výroky jednotlivých autorů a přispěvatelů, nikoli MDPI a/nebo editorů. MDPI a/nebo redaktoři se zříkají odpovědnosti za jakékoli zranění osob nebo majetku vyplývající z jakýchkoli nápadů, metod, pokynů nebo produktů uvedených v obsahu.

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】