Intratumor Childhood Vaccine specific CD4+ T-cell Recall Coordinates Protinádorové CD8+ T-buňky a eozinofily
Oct 17, 2023
ABSTRAKTNÍ
Pozadí
Protinádorové mechanismy CD4+ T-buněk zůstávají hrubě definovány a prostředky k účinnému využití pomoci CD4+ T-buněk pro imunoterapii rakoviny chybí. Již existující paměťové CD4+ T buňky mají potenciál být využity pro tento účel. Kromě toho zůstává role preexistující imunity ve viroterapii, zejména rekombinantní imunoterapii poliovirem, kde je imunita specifická pro dětskou polio vakcínu všudypřítomná, nejasná. Zde jsme testovali hypotézu, že paměťové T buňky specifické pro dětskou vakcínu zprostředkovávají protinádorovou imunoterapii a přispívají k protinádorové účinnosti polio viroterapie.
Výhody cistanche tubulosa-Antitumor
Metody
Na modelech syngenního myšího melanomu a karcinomu prsu byl testován vliv imunizace proti obrně na polio viroterapii a protinádorové účinky vyvolání dětské obrny a tetanu. CD8+ knockout T-buněk a B-buněk, deplece CD4+ T-buněk, adoptivní přenos CD4+ T-buněk, blokáda CD40L, hodnocení protinádorové imunity T-buněk a deplece eozinofilů definovala protinádorové mechanismy paměťových antigenů. K posouzení relevance těchto nálezů u lidí byly použity datové soubory transkriptomů pan-rakovin a koreláty klinických studií polio viroterapie.
Výsledek
Předchozí vakcinace proti polioviru podstatně posílila protinádorovou účinnost polioviroterapie u myší a intratumorová obnova polioviru nebo tetanová imunita zpomalila růst nádoru. Intratumorové reminiscenční antigeny zvýšily protinádorovou funkci T-buněk, způsobily výraznou nádorovou infiltraci vrozených lymfoidních buněk typu 2 a eozinofilů a snížily podíly regulačních T-buněk (Tregs). Protinádorové účinky paměťových antigenů byly zprostředkovány CD4+ T buňkami, omezeny B buňkami, nezávisle na CD40L a závislé na eozinofilech a CD{4}} T buňkách. Inverzní vztah mezi signaturami eozinofilů a Treg byl pozorován u typů rakoviny The Cancer Genome Atlas (TCGA) a deplece eosinofilů zabránila snížení Treg po vyvolání dětské obrny. Titry neutralizačních protilátek proti obrně před léčbou byly vyšší u pacientů žijících déle a hladiny eozinofilů se u většiny pacientů zvýšily po polio viroterapii
Závěr
Preexistující imunita proti obrně přispívá k protinádorové účinnosti polio viroterapie. Tato práce definuje potenciál dětských vakcín pro imunoterapii rakoviny, odhaluje jejich užitečnost k zapojení pomoci CD4+ T-buněk pro protinádorové CD8+ T buňky a implikuje eozinofily jako protinádorové efektory CD4+ T buňky.
ÚVOD
Ačkoli jsou CD4+ T buňky klíčovými mediátory adaptivní imunitní funkce a paměti, chybí 1–3 způsoby, jak využít jejich potenciál pro imunoterapii rakoviny. Adaptivní imunitní paměť umožňuje robustní imunitní reakce na dříve zjištěné patogeny. Reakce na vyvolání, tj. aktivace adaptivních paměťových buněk příbuzným antigenem, organizují lokalizovaný vrozený a adaptivní zánět.4 5 Na základě nedávné práce demonstrující užitečnost intratumorálních antivirových CD8+ T-buněčných odpovědí pro imunoterapii rakoviny. , 6 7 jsme předpokládali, že v nádoru lokalizované CD4+ T-buňky související s vakcínou mohou zapojit protinádorové funkce CD4+ T buněk. PVSRIPO (nyní známý jako „Lerapolturev“), živá atenuovaná vakcína polioviru typu 1 (Sabin), modifikovaná vnitřním ribozomálním vstupním místem lidského rinoviru typu 2,8, prokázala časné důkazy o účinnosti u recidivujícího glioblastomu (rGBM)9 a recidivujících , neresekabilní melanom10 11 po intratumorovém (it) podání. Očkování proti polioviru (polio) je součástí standardního pediatrického imunizačního schématu po celém světě, a to buď živými atenuovanými (Sabin), nebo inaktivovanými (IPOL) vakcínami. Kódující sekvence PVSRIPO je identická s Sabinovou vakcínou typu 1. Preexistující sérová reaktivita protilátek proti PVSRIPO/polio byla potvrzena u všech pacientů léčených PVSRIPO.{21}} Kromě toho klinické použití PVSRIPO vyžaduje předchozí posílení trivalentním IPOL alespoň 1 týden před jeho podáním, což způsobilo neutralizaci PVSRIPO v séru u všech pacientů se zvyšuje počet protilátek.{23}} Protinádorové účinky polio viroterapie zahrnují poškození neoplastických buněk a subletální virovou infekci myeloidních buněk, která řídí trvalou signalizaci interferonu typu I (IFN).12–15 Imunitní paměť proti obrně pravděpodobně brání replikaci PVSRIPO v nádoru, ale může poskytnout alternativní protinádorový mechanismus účinku prostřednictvím vyvolání T buněk specifických pro vakcínu proti obrně. Pomocí myších nádorových modelů melanomu a rakoviny prsu prokazujeme, že již existující imunita vůči obrně zesiluje protinádorovou účinnost polio viroterapie zapojením protinádorových funkcí CD4+ T buněk. Dětská obrna nebo tetanus spustily označené CD4+ T buňky, vrozené lymfoidní buňky typu 2 (ILC2) a příliv eozinofilů; zprostředkování protinádorové účinnosti prostřednictvím CD8+ T buněk a eozinofilů nezávislým způsobem na CD40L. V kohortách pacientů s rGBM léčených Lerapolturevem (PVSRIPO) byly vyšší hladiny neutralizačních protilátek proti obrně před léčbou spojeny s delším přežitím a u pacientů s melanomem byla po léčbě Lerapolturevem pozorována periferní indukce eozinofilů. Dětská viroterapie a antigeny spojené s vakcínou proti dětské obrně tedy koordinují protinádorovou imunitu typu I a II prostřednictvím CD4+ T-buněk.
cistanche doplněk výhody-zvyšuje imunitu
MATERIÁLY A METODY
Rozšířené materiály a metody jsou uvedeny v online doplňkových informacích.
Myši, buněčné linie, viry, poly(I:C) a protilátky in vivo stupně
(Tokyo, Japonsko). Wildtype (wt) (#000664), CD8 knockout (k/o) (#002665), B-cell k/o (#002288), OT-I (#003831) a CD45.1 C57BL/6 myši (# 002014) byly z The Jackson Laboratory. Myši OT-I a CD45.1 C57BL/6 byly zkříženy, aby se vytvořily myši CD45.1+OT-I myši. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, USA), E0771hCD155, B16.F10hCD155 a B16. F10.9hCD155-OVA buňky byly pěstovány v Dulbeccově modifikovaném Eaglově médiu s vysokým obsahem glukózy (DMEM, Gibco) obsahujícím 10% fetální bovinní sérum (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. Buňky F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 a E0771hCD155 byly dříve odvozeny.{44}} Všechny buněčné linie byly potvrzeny jako negativní na mykoplazmy. Laboratorní stupeň PVSRIPO, myší adaptovaný PVSRIPO (mRIPO) a UV-inaktivovaný PVSRIPO (UVP) byly generovány v HeLa buňkách a následně purifikací výsledného supernatantu vylučováním velikosti, jak bylo popsáno dříve.12 13 K vakcinaci byl použit PVSRIPO; UVP byl použit k izolaci účinků polio kapsidy (která obsahuje epitopy specifické pro vakcínu proti obrně); mRIPO je verze PVSRIPO přizpůsobená myším, která byla použita k testování plného dopadu polio viroterapie u myší. VacciGrade vysokomolekulární poly(I:C) (InvivoGen) byl rekonstituován podle pokynů výrobce. Protilátky in vivo stupně proti interleukinu (IL)-5 (TRFK5) nebo kontrola (HRPN), CD4 (GK1.5) nebo kontrola (LTF-2), CD40L (MR-1) nebo kontrola (#BP0091) a CD40 (FGK4.5) nebo kontrola (2A3) byly od Bio X Cell.
Vakcíny, imunizace a titry virů
Pokud není uvedeno jinak, vakcíny používající PVSRIPO (1×107 jednotek tvořících plak (pfu)/myš), tetanový toxoid (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/myš) nebo hemocyanin-keyhole limpet (KLH, Sigma -Aldrich; 100 ug/myš) byly zředěny ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS) s Alhydrogelem (1:1; InvivoGen); 50 ul vakcíny bylo podáno bilaterálně do čtyřhlavého svalu stehenního. Kombinovaná imunizace IPOL a Tenivac (Sanofi Pasteur) byla podávána jednostranně pro každou vakcínu. O 14 dní později došlo k posílení vakcíny. Pro to virové titry byly nádory sklizeny, zváženy a mechanicky homogenizovány v 1 ml PBS. Homogenát byl testován plakovým testem.16
Experimenty s myším nádorem
Výhody cistanche tubulosa-Antitumor
Pro implantace B16 bylo 2x105 buněk implantováno subkutánně do boku samců a samic myší; pro implantace E0771 bylo 5 x 105 buněk implantováno do čtvrtého prsního tukového polštáře samic myší. Myši hCD155-tg C57BL/6 byly použity s mRIPO k rekapitulaci polio viroterapie (aktivní virová replikace ± již existující imunita); zatímco myši wt C57BL/6, které nejsou permisivní k dětské obrně, byly použity s UVP k izolaci účinků vyvolání dětské obrny. Nádory byly ošetřeny buď DMEM nebo PBS (vehikulum), mRIPO (1 x 107 pfu), UVP (1 x 108 pre-inaktivovaného pfu), Tet (0,5 ug) a/nebo poly(I: C) (30 ug), jak je uvedeno v legendách o postavách. Léčebné skupiny byly randomizovány podle objemu nádoru (měření posuvným měřítkem, s použitím rovnice L × W × W/2) první den léčby. Myši byly usmrceny, když objem nádoru přesáhl 1000 mm3, pokud tomu nepředcházela ulcerace (která nebyla častá a nebyla spojena s žádnou konkrétní léčbou), v takovém případě byly myši ze studie vyloučeny. Velikosti skupin byly založeny na hodnocení síly z pilotních experimentů nebo předchozích zkušeností.12 Měření nádoru byla prováděna naslepo u skupiny léčené it, počínaje po poslední dávce it terapie/antigenu. Myši s odlehlým počátečním objemem nádoru v době randomizace (1 SD od průměru) byly vyloučeny.
Analýza nádorů průtokovou cytometrií
Nádory byly odebrány v časových bodech označených v legendách obrázků a disociovány v RPMI-1640 médiu (Thermo Fisher) obsahujícím 100 ug/ml Liberase-TM (Sigma-Aldrich) a 10 ug/ml DNAse I (Roche) po dobu 30 minut při 37 stupních s následným průchodem přes 70uM (Olympus Plastics) buněčným sítem, centrifugací a promytím v PBS. Pro experimenty s použitím Zombie Aqua (BioLegend) byly buňky obarveny pomocí Zombie Aqua v PBS (1:500) podle pokynů výrobce. Buněčné suspenze byly poté inkubovány s 1:50 myší TruStain FcX (BioLegend) s následným panelově specifickým barvením v PBS obsahujícím 2 % FBS. Barvení intracelulárních transkripčních faktorů, cytokinů a granzymu B bylo provedeno pomocí Foxp3/Transcription Factor Stained Buffer Set (Thermo Fisher) podle pokynů výrobce. Informace o použitých panelech a protilátkách naleznete v doplňkových informacích online. Data byla shromážděna na Fortessa X20 v Duke Cancer Institute Flow Cytometry Core Facility; Soubory FCS byly analyzovány pomocí FlowJo V.10 (BD Biosciences). Strategie hradlování jsou uvedeny v online doplňkových informacích; K definování pozitivity byly použity izotypové kontroly, fluorescence minus jedna kontrola a srovnání se zavedenými negativními buněčnými populacemi.
Analýzy spojené s klinickým hodnocením
Testy neutralizačního titru PVSRIPO byly provedeny podle protokolu klinické studie9 a hodnoty pro obě klinické studie rGBM byly použity z testů pro zařazení do klinických studií. Titry rGBM fáze I (NCT01491893) byly dříve hlášeny a přežití bylo aktualizováno k 29. dubnu 2020; fáze II (NCT02986178) přežití byla aktualizována k 27. dubnu 2021. Melanom (NCT03712358)10 11 procenta bílých krvinek účastníků klinické studie byla získána z klinických testů kompletního krevního obrazu (CBC).
Statistická analýza a kohorty klinických studií
Statistické testy specifické pro test jsou uvedeny v příslušných legendách obrázků. K provádění statistických analýz byl použit GraphPad Prism V.8. Dvoucestná analýza rozptylu (ANOVA) byla použita k posouzení rozdílu v růstu nádoru v průběhu času mezi skupinami a testování ANOVA post hoc bylo použito k zohlednění vícenásobných srovnání, pokud není uvedeno jinak na obrázku a/nebo legendě obrázku. Statistická pravděpodobnost (str<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
VÝSLEDEK
Očkování proti obrně potencuje polio viroterapii
Nejprve jsme testovali produkci protilátek proti obrně (tj. sérokonverzi) u myší transgenních pro receptor lidského polioviru CD155 (hCD155-tg) při imunizaci IPOL nebo PVSRIPO (napodobující Sabin typu 1) s adjuvans kamencem a bez něj ( Alhydrogel; ALH), součást licencovaných vakcín (např. Pentacel, Pediarix, Kinrix). protilátková odpověď; ALH posílila protilátkové odpovědi na oba (online doplňkový obrázek S1A, B). Abychom rekapitulovali vysoké hladiny protilátek proti obrně u pacientů s rakovinou9, zvolili jsme očkování PVSRIPO+ALH (dále jen „dětská obrna“), abychom určili roli preexistující imunity proti obrně v imunoterapii PVSRIPO. Modely myších nádorů a myši exprimující hCD155 byly dříve vyvinuty tak, aby umožňovaly vstup a replikaci PVSRIPO, a PVSRIPO byl adaptován na myší buňky, aby rekapituloval virovou replikaci v myších rakovinných buňkách (mRIPO).13 19 V předchozích studiích u vakcíny proti obrně dosud neočkované modely syngenních myších nádorů, jediná injekce mRIPO vyžadovala blokádu proteinu programované buněčné smrti-1 (PD1)/ligandu programované smrti-1 nebo nádorovou expresi imunogenního proteinu ovalbuminu (OVA) ke zprostředkování trvalých protinádorových účinků .12 13 Nicméně mRIPO zprostředkovával trvalou protinádorovou účinnost u myší imunizovaných proti obrně v modelech melanomu (B16) a rakoviny prsu (E0771) ve srovnání s kontrolními (KLH) imunizovanými protějšky (obrázek 1A, B, online doplňkový obrázek S1C) . Dřívější imunizace proti obrně tedy zvyšuje protinádorovou účinnost polio viroterapie. Polio viroterapie je spojena se zánětem T-buněk v nádoru.12 13 Replikace mRIPO v nádorech byla u myší imunizovaných obrnou podstatně snížena 2 dny a 5 dnů po léčbě (obrázek 1C, D), což je v souladu s vysokou neutralizační protilátkou titry (online doplňkový obrázek S1B). Přesto jsme pozorovali zvýšenou celkovou hustotu imunitních buněk (CD45.2+) u myší imunizovaných obrnou po terapii mRIPO, což bylo z velké části vysvětleno přílivem konvenčních CD4+ T buněk a myeloidních buněk (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (obrázek 1E, online doplňkové obrázky S2A, S3). Následná analýza odhalila, že zvýšené CD11b+ myeloidní buňky u myší imunizovaných poliomyelitidou léčených mRIPO byly eozinofily (obrázek 1F); hladiny dendritických buněk (DC) nebyly významně změněny. Zvýšený tumor nekrotizující faktor (TNF), faktor stimulující kolonie granulocytů a makrofágů (GM-CSF), hladiny IL-1 a IL-17A v nádorovém homogenátu a vyšší IL-4 a IL{ {51}} v kulturách explantovaných tumor-drenážujících lymfatických uzlin (TDLN) z myší imunizovaných poliomyelitidou léčených mRIPO indikovaly odlišné zánětlivé reakce po terapii mRIPO (online doplňkový obrázek S2B). GM-CSF a IL-5 jsou známé induktory produkce a náboru eozinofilů20, což možná vysvětluje influx eozinofilů v nádorech (obrázek 1F). Konvenční CD4+ T buňky a eosinofilní infiltrace v reakci na léčbu mRIPO u myší imunizovaných obrnou byly také pozorovány v samostatném modelu E0771 (online doplňkový obrázek S2C, D). Preexistující imunita vůči obrně tedy zvýrazňuje zánětlivé reakce na mRIPO, které jsou spojeny se zvýšenou protinádorovou účinností.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000 mm3; viz online doplňkový obrázek S1C; zástupce ze dvou experimentů. (C) Schéma pro experimenty v D–H. (D) titry virového homogenátu nádoru po mRIPO; ND, nezjištěno. (E) Analýza nádorů průtokovou cytometrií v den 7 (n=13/skupina simulovaná; n=14/skupina mRIPO). (F) Analýzy průtokovou cytometrií pro myeloidní buňky a dendritické buňky (DC: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) v den 11. (G) Aktivační markery v TIL ve dnech 7 a 12; byly spojeny ze dvou experimentů; jsou ukázány násobky středních hodnot KLH-DMEM. (H) exprese transkripčního faktoru TIL v den 12; stejné vzorky jako 12. den (A); jsou ukázána reprezentativní data tří opakování. Rozšířená data viz online doplňkové obrázky S1–S4. (E–H) Tukeyho post hoc test str< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Rozšířené funkční fenotypy T-buněk u myší imunizovaných poliomyelitidou léčených mRIPO
CD8+ a CD{1}} tumor-infiltrující lymfocyty (TIL) u myší vakcinovaných obrnou exprimovaly vyšší hladiny intracelulárního IFN-, TNF a granzymu B po léčbě mRIPO, což naznačuje zlepšený funkční stav (obrázek 1G , online doplňkový obrázek S4). TIL z myší imunizovaných obrnou léčených mRIPO také vykazovaly zvýšenou expresi transkripčních faktorů T-bet, GATA3 a RORt; stejně jako indukce IRF4, promotoru aktivace a funkce T-buněk (obrázek 1H).21 Exprese markerů vyčerpání T-buněk PD1 a imunoglobulinu T-buněk a proteinu 3 obsahujícího mucinovou doménu (TIM3) na CD{{20 }} T buňky v nádoru a TDLN u myší očkovaných proti obrně léčených mRIPO byly sníženy (online doplňkový obrázek S2E). Změny v markerech aktivace/ diferenciace T-buněk byly konzistentní v modelu ortotopického karcinomu prsu E0771 (online doplňkové obrázky S2F, G). Vybavovací reakce na obrnu tedy zvyšují funkční fenotypy u TIL po intratumorální polio viroterapii.
Protinádorovou účinnost zprostředkovávají antigeny vyvolávající obrnu a tetanus
Reovirus-specifické paměťové CD8+ T buňky přímo zabíjejí rakovinné buňky infikované reovirem během onkolytické reovirové terapie22 a paměťové CD4+ T buňky specifické pro tetanus zabíjejí rakovinné buňky infikované Listerií exprimující Tet.23 Alternativně: zánětlivé reakce způsobené paměťovými T-buňkami v mikroprostředí nádoru (TME) mohou také posílit imunitní dohled.6 7 Předpokládali jsme, že zánět vyvolaný vyvoláním paměti zvýšil protinádorovou účinnost polio viroterapie u myší očkovaných proti obrně od virové replikace – potřebný pro produkci virového antigenu v nádorových buňkách, onkolýzu a antivirový zánět12 – byl u myší imunizovaných obrnou prudce snížen (obrázek 1D). Ke zkoumání protinádorových účinků vyvolání dětské obrny v TME jsme použili model bez hCD155 (myši a nádory; myši wt C57BL/6) a nádory jsme ošetřili UV-inaktivovaným PVSRIPO (UVP), aby se zabránilo virové infekci/replikaci. Zahrnuli jsme srovnání s dalším antigenem asociovaným s vakcínou, Tet, u kterého bylo v jiných studiích prokázáno, že zprostředkovává protinádorové účinky.{18}} Terapie UVP vykazovala protinádorovou účinnost výhradně u myší imunizovaných obrnou; Léčba Tet zprostředkovala přechodné protinádorové účinky u myší imunizovaných Tet (obrázek 2A–C, online doplňkový soubor 1). Přirozené zpětné reakce se vyskytují v přítomnosti lokalizované vrozené imunitní odpovědi na replikaci patogenu. Aby se to napodobilo, myši imunizované Tet nebo poliomyelitidou byly ošetřeny poly(I:C) samotným nebo v kombinaci s UVP nebo Tet. UVP i Tet zprostředkovaly v tomto kontextu výrazné protinádorové účinky (obrázek 2D). Tato data ukazují, že vybavování paměťových T buněk v TME – nezávisle na prezentaci exprese/hlavního histokompatibilního komplexu (MHC) jejich příbuzného antigenu maligními buňkami – zprostředkovává protinádorovou účinnost.
CD4+ T buňky zprostředkovávají protinádorovou účinnost paměťových antigenů
Abychom určili, který adaptivní kompartment (kompartmenty) vysvětlují protinádorovou účinnost reakcí na vyvolání dětské obrny (nezávisle na virové replikaci), porovnali jsme léčbu UVP u CD8+ T-buněk a B-buněk k/o myší ve srovnání s wt myši (obrázek 3A). Myši CD4 k/o nebyly testovány kvůli úloze CD4+ T-buněk při umožnění odpovědi CD8+ T-buněk i B-buněk na vakcinaci. Jak se očekávalo, imunizace proti obrně u WT a CD8 k/o myší, ale ne B-buněčných k/o myší, vedla k produkci anti-PVSRIPO protilátek (obrázek 3B). Růst nádoru B16 byl podobný v každém genetickém kontextu po simulované léčbě. Ve srovnání s wt myšmi byla protinádorová účinnost UVP u myší imunizovaných poliomyelitidou omezena u CD8 k/o myší v pozdějších časových bodech, ale byla zvýšena u B-buněčných k/o myší (obrázek 3C; p=0.007wt vs B-buňky k/o ošetřené křivky UVP, dvoucestná ANOVA). Kromě toho k/o B-buněk nezabránilo přílivu eozinofilů nebo CD{23}} TIL (online doplňkový obrázek S6A) spojenému s vyvoláním obrny (obrázek 1). Protinádorová účinnost obrny je tedy částečně závislá na CD8+ T buňkách a je omezena B buňkami. Tato pozorování spolu se zvýšenými CD4+ TIL po terapii mRIPO u myší imunizovaných poliomyelitidou (obrázek 1E) naznačují, že CD4+ T buňky určují protinádorovou účinnost reakcí na vyvolání dětské obrny. Dále jsme tedy testovali protinádorový účinek vyvolání dětské obrny s přechodnou deplecí CD4+ T-buněk a bez ní (obrázek 3D, počínaje 1-denní předléčbou). Navzdory silné depleci CD4+ T-buněk v TDLN byla deplece CD4+ T-buněk v nádoru neúplná a přednostně snižovala populace regulačních T-buněk (Treg), což možná vysvětluje mírné protinádorové účinky a zvýšenou CD 8+ Hustoty T-buněk po vyčerpání CD4+ T-buněk (obrázek 3D, online doplňkový obrázek S6B). Nicméně deplece CD4+ T-buněk téměř odstranila protinádorovou účinnost UVP u myší imunizovaných obrnou a zabránila náboru eozinofilů v reakci na UVP (obrázek 3D); Deplece CD4+ T-buněk také zabránila indukci granzymu B v CD8+ T-buňkách po léčbě UVP (online doplňkový obrázek S6B). Souhrnně tato zjištění naznačují, že protinádorové a zánětlivé účinky vyvolání dětské obrny jsou závislé na CD4+ T-buňkách. Potvrzení, že CD4+ T buňky specifické pro obrnu jsou dostatečné k zesílení protinádorové účinnosti polio viroterapie (s aktivní virovou replikací), adoptivního přenosu CD4+ T buněk ze slezin myší imunizovaných obrnou, ale nikoli to Tet, posílilo protinádorovou účinnost mRIPO (obrázek 3E, online doplňkový obrázek S6C).
Antigenová terapie zesiluje protinádorovou funkci CD{0}} T-buněk
Bylo prokázáno, že nádorově specifické CD4+ T buňky přímo zabíjejí nádorové buňky25–27 zapojují cytotoxické buňky přirozené imunity28 29 a poskytují pomoc efektorovým CD8+ T buňkám.1–{ {7}} V souladu s posledně jmenovaným byly protinádorové účinky paměťových antigenů pozorovány po dodání do TME (obrázky 2 a 3), byly částečně závislé na CD8+ T buňkách (obrázek 3C) a CD{{12 }} TIL měly zlepšené polyfunkční fenotypy po terapii mRIPO u myší očkovaných proti obrně (obrázek 1G).
Obrázek 2 Antigeny vyvolávající obrnu a tetanus zprostředkovávají protinádorovou účinnost. Myši B16 (A) nebo E0771 (B) s nádorem imunizované poliomyelitidou nebo Tet byly intratumorálně ošetřeny Tet nebo UV-inaktivovaným PVSRIPO (UVP). (C) Naivní myši stejného věku nebo myši imunizované Tenivac a IPOL byly ošetřeny PBS, Tet nebo UVP. (D) Myši imunizované jako v (A, B) byly intratumorově ošetřeny simulovaným poly(I:C) (30 ug), poly(I:C) + Tet nebo poly(I:C) + UVP, jak je ukázáno. (A–D) je zobrazen průměr + SEM z reprezentativního experimentu s alespoň dvěma opakováními; hvězdičky označují Dunnettův test p< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Dále jsme se tedy snažili zjistit, zda polio (UVP) a Tet reminiscence zvyšují funkci protinádorových CD8+ T buněk. Za tímto účelem jsme adoptivně přenesli CD45.1+OT-I CD8+ T buňky (OVA-specifické) myším očkovaným proti dětské obrně nebo Tet a určili jsme dopad UVP a Tet-indukovaného vyvolání paměti na B{ {7}} OVA OT-I TIL fenotypy (obrázek 4A). Indukce vybavovacích odpovědí v nádoru po UVP nebo Tet byla spojena se zpožděným růstem nádoru a zvýšenou infiltrací endogenních CD45.2+ buněk, eozinofilů a konvenčních CD4+ T buněk; zejména hladiny protinádorových OT-I T buněk byly nevýznamně zvýšeny (obrázek 4B). Nicméně analýza tumor infiltrujících OT-I CD8+ T buněk odhalila zvýšený granzym B, TNF a IFN-; a snížená exprese markeru terminálního vyčerpání TIM3 po dětské obrně nebo Tet odvolání (obrázek 4C). Byla pozorována různá exprese transkripčního faktoru spojeného s Th jak v OT-I, tak v endogenních T buňkách, včetně exprese GATA3, RORt a BCL6 (obrázek 4C). Transkriptomická analýza OT-I TIL po vyvolání obrny odhalila zvýšenou expresi granzymů; geny spojené s aktivací, funkcí nebo homeostázou T-buněk (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 a BCL6); geny spojené s imunitou Th1 (Ptger4, Fgl2); stejně jako geny spojené s imunitou Th2 (Alox15, Ccl8 a GATA3) (obrázek 4D, online doplňkový obrázek 8C). Tato pozorování jsme potvrdili testováním dopadu vyvolání dětské obrny na endogenní TRP2-specifické (endogenní antigen B16) CD8+ TIL v nádorech B16 bez exprese OVA. TRP2-specifické CD8+ TIL vykazovaly zvýšenou expresi granzymu B a sníženou expresi TIM3 po vyvolání dětské obrny způsobem závislým na CD4+ T-buňkách (online doplňkový obrázek S9). Společně tato data naznačují zlepšené cytolytické a funkční fenotypy protinádorových T buněk po vyvolání dětské obrny. Funkčně prokazující zvýšenou protinádorovou imunitu T-buněk po jejím vyvolání, T buňky izolované ze slezin myší ošetřených jím vyvolávajícím antigenem (UVP u dětské obrny očkované nebo Tet u vakcíny Tenivac) zpomalily růst nádoru po přenosu k naivním příjemcům (obrázek 4E). CD4+ T-buňky pomáhají podporovat protinádorovou funkci CD8+ T-buněk částečně prostřednictvím signalizace CD40L k CD40 na buňkách prezentujících antigen1, ale mohou také pomoci protinádorovým CD8+ T-buňkám nezávislým CD40L.31 blokáda CD40L nezabránila UVP-indukovanému eosinofilu, konvenčním CD4+ T buňkám nebo protinádorovému OT-IT T přílivu; také neantagonizoval protinádorové účinky (online doplňkový obrázek S10). Kromě toho ligace CD40 nerekapitulovala příliv eozinofilů pozorovaný po terapii vyvolaným antigenem (online doplňkový obrázek S10). Vyvolání CD4+ T-buněk tedy potencuje protinádorovou funkci protinádorových CD8+ T-buněk způsobem nezávislým na CD40L.
Obrázek 3 CD4+ T buňky zprostředkovávají protinádorovou účinnost vyvolání dětské obrny. (A) Návrh pro experimenty v (B, C). (B) ELISA na protilátky proti obrně v každém genetickém pozadí v den 0 (n=4/skupina). (C) Průměrný objem nádoru + SEM po simulované léčbě (vlevo) nebo simulované léčbě proti UVP (pravé panely) pro každý genotypový kontext; Hodnoty p jsou z porovnání dvoucestné analýzy rozptylu (ANOVA) UVP s kontrolní skupinou. (D) Myši imunizované poliomyelitidou byly ošetřeny simulovanou nebo UVP jako v (A), intraperitoneálními (ip) injekcemi IgG (kontrola) nebo CD4+ protilátky poškozující T-buňky (250 µg podávaných každé 3 dny počínaje dnem −1); je ukázán průměrný objem nádoru + SEM a analýza průtokovou cytometrií CD4 T buněk a eozinofilů infiltrujících nádor; n=9 na skupinu; p hodnota je z dvoucestné ANOVA srovnávající UVP IgG versus UVP CD4; (*) označuje Tukeyho post hoc p<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Obrázek 4 Terapie intratumorovým vybavovacím antigenem potencuje protinádorovou funkci CD8+ T-buněk. (A) Myším imunizovaným polio nebo Tet (Tenivac) byly implantovány nádory B16-OVA, následoval adoptivní přenos aktivovaných OT-I (CD45.1+) buněk a léčba buď Tet nebo UVP . (B) Objem nádoru a průtoková cytometrická analýza imunitních buněk (B) a TIL podskupin (C); online doplňkový obrázek S7 představuje hradlování OT-I TIL. (D) Byly analyzovány transkriptomy OT-I TIL izolovaných z myší imunizovaných obrnou 12 dní po léčbě (DMEM nebo UVP). Středové a škálované průměrné normalizované počty jsou uvedeny pro přepisy, které se významně lišily po úpravě p-hodnoty míry falešného objevu ve dvou samostatných experimentech (horní panel, n=4/skupina, respektive n{14}}/skupina ) nebo pro znaky relevantní pro (C), které se přiblížily významnosti v obou souborech dat, včetně granzymů, IRF4, BCL6 a GATA3 (spodní panel); n=4 replikátů/skupin je zobrazeno na teplotní mapě. Online doplňkový obrázek S8B a C představuje normalizované počty pro jednotlivé vzorky a rozšířená data. (E) Progrese nádoru u naivních myší adoptivně přenesených s T buňkami ze slezin myší v A–C. Je ukázán průměrný objem nádoru + SEM; p-hodnota je z obousměrné analýzy rozptylu. Všechny datové sloupce představují průměr + SEM; tepelné mapy v (C) byly normalizovány násobkem průměru kontrolního antigenu s nesprávným párováním; Tukeyho post hoc test str<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Nádor infiltrující eozinofily se inverzně spojují s Tregs v lidských nádorech
Zapojení dalších protinádorových imunitních efektorů prostřednictvím sekrece cytokinů je klíčovým CD40L-nezávislým mechanismem CD4+ T buněk.31 32 Kapsida obrny (UVP) a viroterapie (mRIPO) trvale způsobily silnou infiltraci eozinofilů ( obrázky 1, 3 a 4), způsobem závislým na CD4+ T-buňkách (obrázek 3D). Nádorový eozinofilní influx souvisí s imunoterapeutickou odpovědí33–35 a nedávné práce prokázaly, že CD4+ T buňky získávají protinádorové funkce eozinofilů po blokádě PD1 prostřednictvím IL-5.36 Nejprve jsme se zeptali, zda hustota eozinofilů koreluje s CD4+ T-buněk nebo jiné rysy v TME lidských nádorů dotazem na soubor údajů o pan-rakovinách z The Cancer Genome Atlas (TCGA).37 Pomocí CIBERSORT38 predikce buněčných infiltrátů bylo 37 vzorků z každého typu rakoviny byly stratifikovány podle přítomnosti nebo nepřítomnosti detekovaných signatur eosinofilní genové exprese (obrázek 5A, online doplňkový obrázek S11,12); Testikulární nádory ze zárodečných buněk (TGCT) a uveální melanom (UVM) byly vyloučeny kvůli omezeným případům s obohacením eozinofilů (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém
Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity
【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Protinádorová imunita typu II po léčbě mRIPO myší imunizovaných obrnou
Dále jsme se snažili určit význam infiltrace eosinofily po vyvolání dětské obrny u myší. Eozinofily jsou mediátory imunitních odpovědí typu II, které hrají roli v antihelmintové imunitě a alergickém zánětu.39 Nábor eozinofilů může být zprostředkován jinými imunitními mediátory typu II, včetně ILC2, které koordinují Th2 reakce prostřednictvím přímých interakcí s CD{{4} } T buňky,40 exprimují transkripční faktor GATA3 a eozinofily podporující cytokin IL-5, ale postrádají expresi T-buněčného receptoru. Buňky GATA3+ CD3Neg skutečně vzrostly v nádorech myší poté, co si to vzpomněly (obrázek 5C), pravděpodobně odrážející příliv ILC2. Dále jsme testovali, jak eozinofily ovlivňují polio viroterapii (mRIPO) u myší imunizovaných obrnou, a přímo měřili ILC2. Deplece eosinofilů (prostřednictvím neutralizace IL-541) zmírnila protinádorové účinky mRIPO u myší imunizovaných proti dětské obrně nesoucích B16-OVAhCD155 (obrázek 5D, E); nesnížilo příliv CD4+ T-buněk; ale zablokovala snížení podílu Treg (obrázek 5F). Kromě toho vedla obrna viroterapie (mRIPO) k přílivu ILC2 (obrázek 5F) a změnila fenotypy ILC2 u myší imunizovaných obrnou, se sníženým IL-5 a indukovala expresi PD1 a granzymu B (obrázek 5G). Kromě své role při kontrole hladin eozinofilů je IL-5 také kritický pro diferenciaci B-buněk.42 Protože však protinádorové účinky vyvolání dětské obrny jsou nezávislé na B-buňkách – a možná je potlačují (obrázek 3C), a vzhledem k trvale silné eosinofilní infiltraci při vyvolání dětské obrny docházíme k závěru, že neutralizace IL-5 snižuje protinádorové účinky vyvolání dětské obrny prostřednictvím deplece eozinofilů. Souhrnně tato data demonstrují protinádorovou roli eozinofilů a nábor ILC2 se změněnými fenotypy po vyvolání dětské obrny a naznačují, že eozinofily regulují hustotu Treg.
Preexistující protilátky proti obrně jsou spojeny s delším přežitím po léčbě Lerapolturevem (PVSRIPO); zvýšení periferních eozinofilů po Lerapolturevovi
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 měsíců po Lerapolturevovi (typický medián přežití v rGBM je ~9 měsíců)9 43 měl významně vyšší titry neutralizačních protilátek před léčbou (obrázek 6A, B). Abychom zjistili, zda imunitní reakce typu II mohou být zapojeny u pacientů léčených touto polioviroterapií, analyzovali jsme longitudinální CBC dostupné z malé studie s eskalací dávky Lerapoltureva u recidivujícího, neresekovatelného melanomu (fáze I, n{6}}) .10 11 Tyto údaje odhalily zvýšené hladiny eozinofilů v krvi po Lerapolturevově léčbě u 8/12 pacientů (obrázek 6C), což se shoduje se snížením počtu neutrofilů (10/12 pacientů). Tato zjištění mohou naznačovat, že již existující imunita přispívá k protinádorové účinnosti polio viroterapie a že polio viroterapie indukuje imunitní reakce typu II u pacientů s rakovinou.
Obrázek 5 Eosinofily inverzně asociované s Tregs v lidských nádorech; mRIPO indukuje protinádorovou imunitu typu II u myší imunizovaných obrnou. (A) CIBERSORT dekonvoluovaný podskupiny T-buněk v typech rakoviny The Cancer Genome Atlas (n=29) stratifikovaných podle stavu eozinofilů, hodnoty p z párového t-testu. (B) HR (přežití) ± 95 % CI pro stav eozinofilů podle typu rakoviny; typy rakoviny s méně než 20 úmrtími byly vyloučeny; Hodnoty p jsou z testu log-rank testu Mantel-Cox. (C) Procento GATA3+ CD3Neg buněk z dat na obrázku 4C, hodnoty p jsou z nepárového t-testu. (D) Design pro (E–H): imunizované proti obrně, B16-OVAhCD155 tumor-nesoucí hCD155-transgenní myši byly léčeny falešným nebo PVSRIPO ± eozinofilní deplecí (anti-IL{18}} nebo kontrolní IgG, 1 mg týdně). Průměrný objem nádoru + SEM (E), hustota eozinofilů a ILC2 v nádorech (F) a fenotyp nádorů infiltrujících ILC2 (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+ ) versus linie negativní CD Je zobrazeno 90+ buněk pro srovnání (G). (E) (*)Obousměrná analýza rozptylu Str<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Čínská bylina cistanche rostlina-Protinádorová
DISKUSE
Tato práce odhaluje imunoterapeutický potenciál nádorově lokalizovaných CD4+ T-buněk. Pomoc CD4+ T-buněk je klíčová pro vytvoření plně funkční protinádorové CD8+ imunity T-buněk1 44 a dlouhodobé paměti.2 45 Protinádorové CD8+ T lymfocyty vykazovaly větší polyfunkční fenotypy po vyvolání, adoptivní přenos T lymfocytů z myší ošetřených reminiscenčním antigenem zpomalil růst nádoru u naivních příjemců a protinádorové účinky UVP byly oslabeny u myší imunizovaných obrnou bez CD8+ T buněk. To naznačuje, že poskytování CD4+ T-buněk pomáhá protinádorovým CD8+ T-buňkám. Pomoc CD4+ T-buněk je skutečně spojena s regulací markerů vyčerpání, zvýšenou expresí TNF/IFN-/granzymu B a indukcí Tbet/IRF4 v „pomocných“ efektorových T buňkách3, které se všechny vyskytly u dětské obrny viroterapie u imunizovaných myší. Taková pomoc T-buněk je pravděpodobně mnohostranná, včetně „licenčních“ DC; CD4+ sekrece cytokinů T-buňkami (např. IL-21, IFN-); přeprogramování TME; nebo prostřednictvím pozitivních účinků rekrutovaných eozinofilů na imunitní dozor CD8+ T-buněk.{30}} Pravděpodobně kvůli aktivitě protilátek neutralizujících obrnu, které omezují aktivaci CD4+ T-buněk snížením dostupnosti vybavovacího antigenu nebo persistence, B buňky byly kontraproduktivní k protinádorovým účinkům vyvolání dětské obrny. V našich studiích byla dětská obrna konzistentně zprostředkována silnější protinádorovou a zánětlivou reakcí než Tet. Jednou z možností je, že je to způsobeno rozdíly v intenzitě a/nebo kvalitě již existující imunity navozené po obrně oproti očkování proti Tet v našich modelových systémech. Na podporu této možnosti byly protinádorové účinky Tet a UVP podobné, když byly myši imunizovány vakcínou IPOL klinického stupně (obrázek 2C), která vyvolala slabší imunitu proti obrně než strategie imunizace proti obrně (PVSRIPO+ALH) použitá pro jiné experimenty v naše studie (online doplňkový obrázek S1B). Je však také dobře známo, že povaha antigenu (např. hustota epitopu, která je pravděpodobně vyšší u kapsidy obrny) může ovlivnit adaptivní imunitní reakce. 47 48 Protinádorová účinnost vyvolání obrny pouze částečně závisela na CD8+ T buňkách. Antigenová terapie Recall způsobila influx eosinofilů a ILC2 a deplece eosinofilů snížila protinádorové účinky u myší imunizovaných poliomyelitidou léčených mRIPO. Zdůraznění důležitosti kontextu bylo prokázáno, že jak eozinofily, tak ILC2 také zprostředkovávají protumorigenní účinky.{43}} U astmatu CD4+ T buňky získávají eozinofily51 prostřednictvím ILC2s.52 ILC2 exprimují MHC třídy II a šíří odpovědi Th2 v hlístové infekce.40 U rakoviny je infiltrace nádorovými eozinofily spojena s odpovědí na imunoterapii, 33 34 eozinofily prokazatelně podporují imunitní sledování CD8+ T-buněk46 a ILC2 přispívají k protinádorové účinnosti proti PD1. 35 53 Naše práce ukazuje, že protinádorové funkce eozinofilů, a možná i ILC2, mohou být zapojeny do CD4+ T buněk. Zbývá plně určit, jak CD4+ T-buněčná paměť rekrutuje eozinofily do nádoru, avšak nedávná práce poskytuje potenciální vysvětlení tím, že ukazuje, že během blokády PD1 sekrece IL-5 pomocí CD4+ T buňky indukují expanzi eozinofilů a jejich nábor.36 Navíc cytokinová analýza nádorových homogenátů a explantátů TDLN po polio viroterapii také odhalila zvýšený eozinofily podporující GM-CSF a IL-5 u myší imunizovaných obrnou (online doplňkový obrázek S2B ).
Obrázek 6 Preexistující protilátky proti obrně jsou spojeny s delším přežitím po léčbě Lerapolturevem (PVSRIPO); zvýšení periferních eozinofilů po Lerapolturevovi. (A, B) Předléčení Lerapolturev sérové neutralizační titry byly měřeny ve studiích fáze I (A, Ph1, NCT01491893) a fáze II (B, Ph2, NCT02986178) s rekurentním glioblastomem (rGBM). Přežití po separaci středním neutralizačním titrem (1:2000), spolu s průměrem + titr SEM pro pacienty, kteří přežili
Také jsme objevili inverzní vztah mezi přílivem eozinofilů v nádorech a hustotou Treg u lidských nádorů a terapie vyvolávajícím antigenem vedla ke snížení podílu Tregs, které se kryly s přílivem eozinofilů, což naznačuje reciproční roli eozinofilů při kontrole CD4+ T-buněk biologie. Přesné určení, jak eozinofily zprostředkovávají protinádorové účinky po vyvolání CD4+ T-buněk, a zda ILC2 přispívají k tomuto procesu, vyžaduje další studii. Rozdíly v hustotě eozinofilů samotné se nezdají být prognostické u většiny typů rakoviny, s potenciální výjimkou LGG, kde byly hladiny eozinofilů také nejvyšší ze všech ostatních typů nádorů. Je zajímavé, že byla hlášena negativní korelace mezi periferními eozinofily a stupněm gliomu54; a respirační alergie a atopie jsou spojeny s nižší incidencí gliomů.55 Použili jsme Th2 polarizační vakcinační strategie v souladu s klinickým používáním vakcín proti dětské obrně a tetanu k dešifrování protinádorového potenciálu CD4+ T-buněk. Zatímco – kanonicky – polarizace Th1/Tc1, Th2/Tc2 a Th17/Tc17 se vzájemně vylučují, terapie vyvolaným antigenem v tomto kontextu vytvořila Th1 (CD8+ zapojení T-buněk, exprese Tbet/IFN v CD{{ 20}} T buňky); Th2 (nábor eozinofilů/ILC2, exprese GATA3 v CD4+ T buňkách); a v menší míře Th17 (exprese ROR t v CD4+/CD8+ T buňkách) polarizační rysy. Tato data přispívají k rostoucím důkazům, že různé polarizace CD4+ T-buněk, které přesahují polarizaci Th1, mohou generovat kompatibilní a produktivní protinádorové imunitní reakce.56–58 Naše práce ukazuje, že zatímco již existující imunita omezuje replikaci viru v nádoru, zvyšuje protinádorovou účinnost polio viroterapie. Omezení této práce spočívá v tom, že byla provedena na myších systémech, které nezachycují heterogenitu CD4+ T-buněk s pamětí obrny/Tet ani TME u lidí. Navíc v důsledku rychlého růstu použitých nádorových modelů byly nádory v době zahájení léčby relativně malé. Nicméně, což naznačuje aplikovatelnost našich pozorování na lidi, titry neutralizačních protilátek proti obrně před léčbou byly vyšší u pacientů s rGBM, kteří žili déle po polio viroterapii, a hladiny eozinofilů v krvi se zvýšily u většiny pacientů s melanomem (8/12) po jeho léčbě. viroterapie obrny (Lerapolturev). Upozornění: vyšší titry neutralizačních protilátek proti dětské obrně mohou odrážet lepší imunitní funkční stav. I když tuto možnost nemůžeme vyloučit, tato data minimálně ukazují, že preexistující imunita nevylučuje úspěšnou polio viroterapii u pacientů. Naše pozorování také naznačují, že vícenásobné dávkování Lerapoltureva může být oprávněné ke zdůraznění protinádorových účinků vyvolání dětské obrny. Odpovědi u pacientů s melanomem léčených přípravkem Lerapolturev se skutečně seskupily v kohortě s nejvyšším počtem léčebných metod.10 Vzhledem k eminentní důležitosti CD4+ T-buněk v imunoterapii rakoviny1 32 je rostoucí úsilí zaměřeno na využití Pomoc CD4+ T-buněk v nádorech, například s CD40 agonistickými protilátkami,59 nebo s peptidovými vakcínami včetně epitopů MHC třídy II44, které primují neoantigen-specifické CD4+ a CD8+ T Naše práce odhaluje potenciál využití paměťových CD4+ T buněk specifických pro dětskou vakcínu k zapojení mnohostranných protinádorových mechanismů CD4+ T buněk.
REFERENCE
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, et al. Cd4+ T buňky pomáhají v imunologii a imunoterapii rakoviny. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM a kol. Cd4+ T buňky pomáhají vytvářet paměťové CD8+ T buňky s vrozenými a na pomoci nezávislými schopnostmi vybavování. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B a kol. CD4+ t-buňky pomáhají zajistit cytotoxický efektorový program t-buněk včetně koinhibičního snížení receptorů a zvýšené invazivity tkání. Imunita 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, et al. T buněčná paměť. rezidentní paměťové CD8 T buňky spouštějí ochranné vrozené a adaptivní imunitní reakce. Science 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, et al. T buněčná paměť. cd8+t buňky rezidentní paměti kůže spouštějí stav výstrahy na patogen v celé tkáni. Věda 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM a kol. Paměťové t-buňky specifické pro virus osídlují nádory a mohou být znovu použity pro imunoterapii nádorů. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, et al. Využití anticytomegalovirové imunity pro lokální imunoterapii proti solidním nádorům. Proč Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et al. Mezigenerické polioviry rekombinanty pro léčbu maligního gliomu. Proč Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd, et al. Recidivující glioblastom léčený rekombinantním poliovirem. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, et al. Fáze I studie intratumorálního PVSRIPO u pacientů s neresekovatelným melanomem refrakterním na léčbu. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE, et al. Multimodalitní analýza poskytuje prognostický přínos mikroprostředí nádoru infiltrovaného T-buňkami a stavu periferní imunity u pacientů s melanomem. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M, et al. Virová infekce buněk v mikroprostředí nádoru zprostředkovává protinádorovou imunoterapii prostřednictvím selektivní signalizace tbk1-irf3. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D, et al. Imunoterapie rakoviny rekombinantním poliovirem indukuje IFN-dominantní aktivaci dendritických buněk a CTL specifických pro nádorový antigen. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et al. Rekombinantní onkolytický poliovirus, PVSRIPO, má silné cytotoxické a vrozené zánětlivé účinky, zprostředkovávající terapii u xenograftových modelů lidského prsu a prostaty. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, a kol. Polio viroterapie se zaměřuje na myeloidní infiltrát maligního gliomu s difuzní aktivací mikroglií pohlcujících CNS. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobríková EY, et al. Indukce virové, 7-methyl-guanosin cap-nezávislé translace a onkolýzy mitogenem aktivovanou proteinkinázou interagující s kinázou zprostředkovanou účinky na proteinkinázu bohatou na serin/arginin. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Adjuvancia a inaktivovaná vakcína proti dětské obrně: systematický přehled. Vakcína 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Generování a in vivo persistence polarizovaných th1 a th2 paměťových buněk. Imunita 1994;1:543–52.
19 Mosaheb MMet al. Geneticky stabilní poliovirové vektory aktivují dendritické buňky a aktivují protinádorovou CD8 T buněčnou imunitu. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Biologie eozinofilů. Adv Immunol 2009;101:81–121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, et al. Požadavek na transkripční faktor lsirf/irf4 pro funkci zralých b a t lymfocytů. Science 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, et al. Předem indukovaná reovirová specifická t-buněčná imunita zvyšuje protirakovinnou účinnost terapie reoviry. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BCet al. Listeria dodává protein tetanového toxoidu do nádorů slinivky a indukuje smrt rakovinných buněk u myší. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, a kol. Využití již existující imunity k posílení onkolytické imunoterapie rakoviny. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, et al. Nádorově specifické cytolytické cd4 t buňky zprostředkovávají imunitu proti lidské rakovině. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS a kol. Intratumorální cd4+ t buňky zprostředkovávají protinádorovou cytotoxicitu u rakoviny močového měchýře u lidí. Cell 2020;181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS a kol. Nádorově reaktivní CD4 (+) T buňky vyvinou cytotoxickou aktivitu a po přenosu do lymfopenických hostitelů eradikují rozsáhlý melanom. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, et al. Buňky Cd4 mohou být účinnější při odmítnutí nádoru než buňky CD8. Krev 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, et al. Primární protinádorová imunitní odpověď zprostředkovaná CD4+ T buňkami. Imunita 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA a kol. Nádorově specifické CD4+ T buňky udržují efektorové a paměťové nádorově specifické CD8+ T buňky. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, a kol. Cd40-Nezávislé dráhy T buněk pomáhají při aktivaci CD8 (+) cytotoxických T lymfocytů. J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, et al. Ústřední role CD4 (+) T buněk v protinádorové imunitní odpovědi. J Exp Med 1998;188:2357-68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, et al. Akumulace eozinofilů předpovídá odpověď na léčbu melanomu pomocí inhibitorů imunitního kontrolního bodu. Onkoimunologie 2020;9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et al. Studie fáze I adoptivní terapie T-buněk s použitím antigen-specifických CD8+ T-buněk pro léčbu pacientů s metastatickým melanomem. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M a kol. Blokáda koinhibiční molekuly PD-1 uvolňuje u melanomu protinádorovou imunitu závislou na ILC2-. Nat Immunol 2021;22:851–64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H a kol. IL -5-produkující cd4+ t buňky a eozinofily spolupracují na posílení odpovědi na blokádu imunitního kontrolního bodu u rakoviny prsu. Rakovinová buňka 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, a kol. Imunitní krajina rakoviny. Imunita 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL a kol. Stanovení abundance a exprese typu buněk z hromadných tkání pomocí digitální cytometrie. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. Imunita typu 2: rozšiřuje náš pohled. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA a kol. Dialog zprostředkovaný MHCII mezi vrozenými lymfoidními buňkami skupiny 2 a cd4(+)t buňkami potencuje imunitu typu 2 a podporuje vypuzení parazitických helmintů. Imunita 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL a kol. Eradikace velkých zavedených nádorů u myší kombinovanou imunoterapií, která zahrnuje vrozené a adaptivní imunitní reakce. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- a eosinofily zprostředkovaný zánět: od objevu k terapii. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS a kol. Podélné molekulární trajektorie difuzního gliomu u dospělých. Příroda 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et al. Neoantigeny MHC-II formují nádorovou imunitu a odpověď na imunoterapii. Příroda 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. Mnohostranná role CD4 (+) T buněk v paměti CD8 (+) T buněk. Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et al. Signální osa GM-CSF-IRF5 v eozinofilech podporuje protinádorovou imunitu prostřednictvím aktivace odpovědí T buněk typu 1. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, et al. Vliv organizace antigenu na odezvu B buněk. Science 1993;262:1448–51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y, et al. Přirozená imunita zprostředkovává folikulární transport částicových, ale nerozpustných proteinových antigenů. J Immunol 2012;188:3724–33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L a kol. Pro- a protinádorová role ilc2s. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Protichůdné role eozinofilů u rakoviny. Cancer Immunol Immunother 2019;68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. Funkce T lymfocytů u astmatu: více než jen T (H) 2 lymfocyty. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R., Kjarsgaard M, et al. Zvýšený počet aktivovaných vrozených lymfoidních buněk skupiny 2 v dýchacích cestách pacientů s těžkým astmatem a přetrvávající eozinofilií dýchacích cest. J Allergy Clin Immunol 2016;137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, et al. Ilc2S zesiluje blokádu PD-1 aktivací tkáňově specifické protinádorové imunity. Příroda 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z a kol. Eosinofily a další biomarkery periferní krve v klasifikaci gliomů: předběžná studie. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, a kol. Prevalence autoimunity a atopie u dospělých v USA s glioblastomem a meningeomem. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannacone M, et al. Přemístění buněčné polarizace z jednotlivých cytokinů na komplexní pomáhá. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et al. Výrazná role antigenně specifických T helper typu 1 (Th1) a Th2 buněk v eradikaci nádoru in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et al. Adoptivní přenos nádorově specifických Th2 buněk eradikuje nádory spuštěním in situ zánětlivé imunitní reakce. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40 agonistické protilátky v imunoterapii rakoviny. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, et al. Imunogenní osobní neoantigenní vakcína pro pacienty s melanomem. Příroda 2017;547:217–21.
