Zlepšení produkce echinakosidu a akteosidu dvoustupňovou elicitací v buněčné suspenzní kultuře Cistanche Deserticola

další informace:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen a kol

Abstraktní

Ve vhodných koncentracích polyaminy podporovaly růst kalusu aechinakosidobsahCistanche deserticolazatímco Ag plus zvýšil obsahechinakosidaakteosid. V 20-denní kultivační periodě, kdy byl 8. a 16. den přidán putrescin (25 lM) a Ag plus (10 lM), resp.echinakosidprodukce (1,7 gl–1) aakteosidprodukce (0,4 gl–1) dosáhla maxima, což byl 1.4-násobek a 1.{6}}násobek těchto jednorázových putrescinových ošetření, 1.6-násobek a 1,{10}}násobek těch, kteří jsou léčeni jedním Ag plus. Exogenní putrescin zvýšil životaschopnost buněk a antioxidační enzymatickou aktivitu výrazně zvýšil výslednou biomasu. Ag plus přídavek významně zvýšil obsah H2O2 a aktivitu fenylalaninammonia-lyázy, což vedlo k vyššímuechinakosidaakteosidobsah.

Klíčová slovaakteosid,Cistanche deserticola, Echinakosid, Elicitor, Suspenzní kultura

Zkratky

APOX askorbát peroxidáza

CAT Catalase

H2O2 Peroxid vodíku

PAL Fenylalanin-amonium-lyáza

PeGs Fenylethanoidové glykosidy

ROS reaktivní formy kyslíku

SOD Superoxiddismutáza

Cistanche deserticola

Klikněte na produkty Cistanche UK a Cistanche extract

Úvod

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​široce používán v tradiční čínské medicíně. Fenylethanoidové glykosidy (PeG) jsou hlavními bioaktivními složkami této rostliny.echinakosidaakteosidjsou hlavními složkami pro zlepšení sexuální potence, regulaci imunitních funkcí, vychytávání volných radikálů a vlastnosti proti stárnutí (Song et al. 2003). Kvůli nadměrnému využívání, obtížné kultivaci a zhoršenému životnímu prostředí divoká Cistanche deserticolarostliny jsou na pokraji vyhynutí. Kultura rostlinných buněk může být atraktivní alternativou k získání těchto bioaktivních složek. Hlavní problémy, se kterými se setkáváme při kultivaci in vitroCistanche deserticolamají nízkou biomasu a nízký obsah PeG. Bylo popsáno, že mnoho elicitorů stimuluje PeGsyntézu (Cheng a kol. 2005, 2006; Lu a Mei 2003; Ouyang a kol. 2003a; Xu a kol. 2005), ale bohužel většina elicitorů snižovala buněčnou biomasu.

V posledních letech se v suspenzní kultuře rostlinných buněk zkoumá kombinace různých elicitorů. Díky rozdílným účinkům různých elicitorů může kombinace různých elicitorů dosáhnout synergického účinku. Elicitory mohou být přidány současně, například do suspenzní kultury Taxus spp. (Yuan et al. 2002) a ženšen (Bae et al. 2006). Na druhé straně přidání různých elicitorů ve fázi růstu biomasy a ve fázi produkce sekundárního metabolitu poskytlo maximální produkci biomasy a taxolu v suspenzní kultuře Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Nicméně je k dispozici jen málo zpráv týkajících se použití kombinujících elicitorů v buněčné kultuře Cistanche deserticola.

EhcinacosidevCistanche deserticola

Předchozí zprávy oCistanche deserticolase zaměřil na zvýšení obsahu PeG, ale elicitory, jako jsou polyaminy pro podporu biomasy, byly částečně ignorovány. Polyaminy mohou podporovat biomasu kalusu zvýšením buněčné proliferace a zmírněním stárnutí buněk (Bais a Ravishankar 2002). Nedávno bylo oznámeno, že polyaminy se podílejí na interakci s ethylenem a tolerancí vůči abiotickému stresu, zatímco ethylen a druhy reaktivního kyslíku (ROS) z abiotického stresu vedly k stárnutí a smrti buněk (Cona et al. 2006). Na druhé straně oxidační stres způsobený elicitory vedl k akumulaci ROS, včetně peroxidu vodíku (H2O2) a superoxidového aniontu (O2–), o kterých bylo hlášeno, že zprostředkovávají programovanou buněčnou smrt a syntézu sekundárních metabolitů jako signální molekuly (Yuan et al. 2001 Xu andDong 2005). Například H2O2 indukoval genovou expresi fenylalanin amonné lyázy (EC 4.3.1.5), klíčového enzymu pro obrannou odpověď a sekundární metabolismus (Desikan et al. 1998), který reguloval produkci PeG v buněčné kultuřeCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). S ohledem na oxidační stres některé kovové ionty, jako Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, účinně podporovaly syntézu sekundárních metabolitů v mnoha rostlinách (Zhao et al. 2005). Možná mohou zvýšit aktivitu PAL a produkci PeG. V této studii byly polyaminy a kovové ionty, stejně jako kombinace těchto elicitorů, použity ke zvýšení růstu kalusu,echinakosid, aakteosidobsah Cistanche deserticola. Kromě toho byl také zkoumán vztah mezi elicitory a obsahem H2O2 a také jejich vliv na aktivity PAL a antioxidačních enzymů.

Materiály a metody

Rostlinné materiály

Cistanche deserticolabuněčné linie byly indukovány z kmene. Po sterilizaci byl stonek nakrájen na kousky o velikosti asi 1 cm3 a kultivován na médiu B5 (Gamborg et al. 1968) obsahujícím 5 1M kyseliny naftalenoctové (NAA), 9 1M 6-benzyladeninu (6-BA), 4 lM 2,4-kyselina dichlorfenoxyoctová (2,4-D) a 30 g sacharózy l–1. Po 30 dnech byl světle žlutý kalus vyjmut a subkultivován na médiu B5 s 5 lMNAA, 9 lM 6-BA a 1 lM 2,4-D a kultura buněčné suspenze byla založena podle metod of Ouyang a kol. (2003b).

Kalusová kultura

Asi 1,5 g čerstvého kalusu (0,125 g DW) z 20-denní suspenzní kulturyCistanche deserticolabyl naočkován do 250-ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 50 ml média B5. B5medium bylo před autoklávováním doplněno 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D a 30 g sacharózy l–1 při pH 5,6. Všechny experimenty byly provedeny se třemi opakováními při 25 stupních ve tmě na rotační třepačce (110 ot. min-1) po dobu 20 dnů.

ActedosievCistanche deserticola

Léčba elicitorem

V jediném elicitačním experimentu byly filtrem sterilizované roztoky putrescinu (Put), sperminu (Spm), spermidinu (Spd), dusičnanu stříbrného a chloridu kobaltnatého přidány do média v určených koncentracích, aby se prozkoumaly jejich účinky na růst oncallus a obsah PeG. S optimálním typem a koncentrací elicitoru byl zkoumán vliv doby krmení. Poté, na základě optimální koncentrace a doby podávání, byla navržena kombinace různých elicitorů pro zvýšení produkce PeG ve dvoufázovém elicitačním experimentu. Jako kontrola fungovala kalusová kultura bez elicitorů. Pro prozkoumání mechanismu působení elicitorů byl kalus vyjmut v určeném čase po přidání elicitoru pro další analýzu ve dvoustupňovém experimentu.

Biochemické testy

V určeném čase po přidání elicitoru byly buňky filtrovány a jemně promyty destilovanou vodou. Poté byla buněčná životaschopnost stanovena barvením 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloridem podle metody Verleysenet al. (2004), Index životaschopnosti je definován jako absorbance měřená na gram čerstvé tkáně. Obsah H2O2 v čerstvých buňkách byl stanoven podle metody Velikové et al. (2000). Stanovení aktivity fenylalanin amonné lyázy (PAL) (EC 4.3.1.5) bylo založeno na metodě Koukola a Conna (1961). Metody použité pro superoxiddismutázu (SOD) (EC1.15.1.1), katalázu (CAT) (EC 1.11.1.6), extrakci askorbátperoxidázou (APOX) a stanovení byly stejné jako metody Jebara et al. (2005).

Měření biomasy, echinakosidu a akteosidu

Pro stanovení suché hmotnosti (DW) byl kalus filtrován a promyt destilovanou vodou a poté lyofilizován na konstantní hmotnost, aby se zaznamenala suchá hmotnost.

Suché buňky (20 mg) byly extrahovány 10 ml 50 procent (v/v) methanolu při pokojové teplotě v ultrazvuku (40 kHz, 160 W) po dobu 15 minut. Po filtraci přes filtr 0,22 lm byly vzorky o objemu 20 1 nastříknuty do systému HPLC (Waters 2695) vybaveného kolonou C18 (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, velikost částic 5 um). Mobilní fáze sestávala z methanolu a 0,05% roztoku kyseliny octové ve vodě (v/v) v poměru 35:65 (v/v). Průtok byl 1,0 ml min^–1Teplota kolony byla 30 stupňů a vlnová délka UV detekce (Waters 2996) byla 334 nm.

Kalibrační křivkyechinakosidaakteosidbyly v dobré linearitě v rozsahu {{0}},2–6,4 lg(r=0,9997) a 0,16–4,6 lg (r {{1{{ 24}}}},9995. Průměrné výtěžnosti echinakosidu a akteosidu (n=5) byly 98,7 procenta (RSD=1,5 procenta) a 98,2 procenta (RSD=1 0,28 procenta), resp. Experimenty s přesností a přesností ukázaly dobré výsledky, relativní směrodatná odchylka byla menší než 2 procenta. Limity kvantifikace byly 0,04 a 0,06 lg pro echinakosid a akteosid. Echinakosidové a akteosidové standardy byly zakoupeny od NICPBP (Národní institut pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů, Peking, Čína). Produkce echinakosidu/akteosidu=obsah echinakosidu/akteosidu (mg g–1 DW) x Biomasa (g DW l^–1).

Statistické analýzy

Všechny experimenty a stanovení byly opakovány třikrát a všechny hodnoty byly průměry z triplikátů ± SE. Data byla podrobena analýze rozptylu (jednocestná ANOVA, Tukeyův test), aby se detekovaly významné rozdíly pomocí PROC ANOVA SAS verze 6.12.

Výsledek

Účinky polyaminů na růst kalusu,echinakosid, aakteosidobsah.

Tabulka 1 ukazuje účinky polyaminů na růst kalusu,echinakosid, aakteosidobsahCistanche deserticola. Put a Spm významně podpořily růst kalusu při vhodné koncentraci. Asi 25 lM Put bylo nejúčinnější a biomasa (11,2 g DW l–1) byla 1.3-násobek kontroly. Současně vylepšeny polyaminyechinakosidobsah výrazně. Když bylo přidáno 25 lM Put,echinakosidobsah byl zvýšen o 46 procent ve srovnání s kontrolou, přičemž nebylo zjištěno žádné významné zvýšení obsahu akteosidů.

Účinky Ag plus a Co2 plus na růst kalusu, obsah echinakosidu a akteosidů

Účinky kovových iontů na růst kalusu,echinakosid, aakteosidObsah echinakosidu a akteosidu byl silně podporován Ag plus, zatímco růst kalusu byl mírně inhibován. Když bylo přidáno 10 lM Ag plus,echinakosidobsah aakteosidobsah se zvýšil o 73 procent a 62 procent v porovnání s kontrolou. Současně nebyl žádný významný rozdíl v biomase mezi úpravou Ag plus a kontrolou. Co2 plus sotva prokázal pozitivní účinky na růst kalusu a obsah PeG.

Účinky doby krmení na růst kalusu, echinakosid a obsah akteosidů

Pro další experimenty byly vybrány Put (25 uM) a Ag plus (10 uM). Účinky doby krmení na růst kalusu,echinakosid, aakteosidobsah je uveden v tabulce 3. Když byl 8. den přidán Put (25 lM), bylo získáno maximální množství biomasy (11,8 g DW l–1). Mezitím,echinakosidobsah byl přitom zvýšen na 107,2 mg g–1 DWakteosidobsah byl téměř stejný jako u kontroly.

Ag plus přidání v dřívější době vedlo k menšímu množství biomasy. Přidáním Ag plus (10 uM) v den 16, obojíechinakosidobsah (127,9 mg g–1 DW) aakteosidobsah (34,2 mg g–1 sušiny) dosáhl maxima, což bylo 2{4}}násobek a 1{6}}násobek obsahu v kontrolní skupině.

Kombinované účinky Put a Ag plus na růst kalusu, produkci echinakosidu a akteosidů

Jak ukazují výsledky jednotlivých elicitorů, přídavek Put v raném stádiu zvýšil biomasu a přídavek Ag plus v pozdním stádiu podpořil obsah echinakosidu a akteosidu, aniž by došlo k výraznému snížení biomasy. Proto byl navržen dvoustupňový protokol. Put (25 uM) a Ag plus (10 uM) byly přidány v příslušných optimálních stádiích.

Obrázek 1 ukazuje účinky kombinace přidání Putand Ag plus na růst kalusu,echinakosid, aakteosidprodukce v kontrastu s kontrolou. Když byl 8. den přidán Put (25 lM) a 16. den Ag plus (10 lM), optimální obsah biomasy (11,4 g DW l–1), obsah echinakosidu (152,4 mg g–1 DW) a obsah akteosidů (36,1 mg g–1 DW) bylo dosaženo 20. den (obr. 1). Theechinakosidprodukce (1,7 gl–1) aakteosidprodukce (0,4 gl–1) činila 3.3-násobek a 2{6}}násobek počtu v kontrolní skupině, v tomto pořadí, které byly vyšší než u jednotlivých elicitací (tabulka 3) . Ve srovnání s léčbou jedním elicitorem,echinakosidaakteosidprodukce kombinováním elicitorů byla 1.4-násobek a 1.5-násobek těchto v jediné léčbě Put, 1.6-násobek a 1.{7}}násobek těchto jednotlivých Ag plus léčba , resp. Prodloužená kultivace snížila biomasu, produkci echinakosidu a produkci akteosidů (obr. 1)

1 Profily biomasy (A), Obr.echinakosid, aakteosidprodukce (B) s/bez kombinování elicitorů v suspenzní kultuřeCistanche deserticola. Svislé pruhy představují standardní chybu tří replikací. Kalus, 0,125 g DW, byl naočkován do 250-ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 50 ml média B5. Put (25 uM) a Ag plus (10 uM) byly přidány v den 8 a den 16, v daném pořadí. Experimenty byly prováděny při 25 stupních ve tmě na rotační třepačce (110 ot. min-1) po dobu 20 dnů

Vliv Put a Ag plus na životaschopnost buněk, obsah H2O2 a aktivity PAL a antioxidačních enzymů

Pochopit mechanismus působení elicitorů na buněčný růst a sekundární metabolismusCistanche deserticolaVe dvoufázové elicitační kultuře byly zkoumány změny buněčné životaschopnosti, obsahu H2O2 a aktivity PAL a antioxidačních enzymů po přidání Put a Ag plus. Když byl 8. den přidán Put (0 h na obr. 2), obsah H2O2 rychle klesl, což bylo pouze 48,9 procenta kontroly v 6. hodině, v tomto pořadí, a obnovil se na úroveň kontroly postupně po 24 hodinách (obr. 2A). Životaschopnost buněk se zvyšovala až do 12 hodin a poté trvale klesala, což bylo o 26,9 procenta a 16,7 procenta vyšší než u kontroly po 24 hodinách a 48 hodinách (obr. 2B). Aktivity SOD a APOX se výrazně zvýšily po 6 hodinách a aktivita SOD klesla na podobnou úroveň kontroly po 24 hodinách, zatímco aktivita APOX byla stále 1,{24}}násobek kontroly (obr. 2C, D). Putaddice nevykázala žádný významný vliv na aktivitu CAT (obr. 2E). Snížení obsahu H2O2 a růst aktivity antioxidačních enzymů znamenalo menší oxidační poškození a udrželo více buněk životaschopných než kontrola.

Obr. 2 Změny obsahu H2O2, viability buněk, aktivity APOX, SOD, CAT a PAL po přidání v den 8 insuspenzní kulturyCistanche deserticola. Svislé pruhy představují standardní chybu tří opakování

Aktivita PAL zároveň dosáhla maxima ve 12. hodině a poté postupně klesala na úroveň podobnou kontrole po 48 hodinách (obr. 2F).

Buňky byly kontinuálně kultivovány po přidání Put a Ag plus byl přidán do média v den 16 (0 h na obr. 3). Obsah H2O2 se rychle zvyšoval a udržoval si významně vyšší hladinu než kontrola až do 48 hodin (obr. 3A). Nicméně životaschopnost buněk byla významně inhibována a zmenšila se (obr. 3B). Aktivita APOX se udržovala na konstantní úrovni a po 24 hodinách se snížila (obr. 3C). Aktivita SOD a CAT prudce vzrostla po 3 hodinách a svého maxima dosáhla po 12 a 6 hodinách, což bylo 1.{14}}násobek a 1{16}}násobek vyšší než u kontrol a poté pomalu klesaly (obr. 3D , E). Aktivita PAL se zvýšila na 2{19}}násobek kontroly po 24 hodinách, což bylo stále o 22,5 procenta vyšší než u kontroly po 48 hodinách (obr. 3F).

Obr. 3 Změny obsahu H2O2, viability buněk, aktivity APOX, SOD, CAT a PAL po přidání Ag plus v den 16 insuspenzní kulturyCistanche deserticolas přidáním Put dne 8. Svislé pruhy představují standardní chybu tří opakování.

Diskuse

Polyaminy a kovové ionty vykazovaly různé vlivy na růst kalusu a produkci PeGCistanche deserticola. Ve správných koncentracích polyaminy hlavně podporovaly růst kalusu, zatímco Ag plus podporoval produkciechinakosidaakteosidvýrazně. Když byly oba Putand Ag plus v optimální koncentraci přidány v různých časech, došlo k některým synergickým účinkům.

U růstu kalusu se podpůrný účinek opíral o typ polyaminů, koncentraci a dobu podávání. 25 lMPut bylo nejúčinnější pro růst kalusu, když bylo přidáno v den 8. Elicitor vykazoval optimální podpůrný účinek v rané fázi růstu. Ačkoli bylo zjištěno, že Ag plus a Co2 plus zesilují sekundární metabolity v různých rostlinách (Zhaoet al. 2005), pouze Ag plus vykazoval pozitivní vliv na obsahechinakosidaakteosid. Protože Ag plus může inhibovat životaschopnost buněk a buněčnou proliferaci, Ag plus přidání v den 16 zvýšilo produkciechinakosidaakteosidaniž by došlo k výraznému snížení biomasy.

Když jsou rostlinné buňky vystaveny působení elicitoru, elicitor iniciuje přenos signálu z povrchu plazmatické membrány a produkci ROS, indukuje obrannou reakci rostlin a zvyšuje sekundární metabolismus rostlin regulací klíčových enzymů, které katalyzují biosyntézu cílových sekundárních metabolitů (Zhao et al. 2005). Oxidativní stres v důsledku léčby elicitorem vede k akumulaci ROS a může být zmírněn antioxidačními enzymy, včetně SOD, APX, CAT a POD. Když je oxidační poškození mimo funkce antioxidačních enzymů, rostlinné buňky mohou zemřít, protože se snižuje životaschopnost buněk.

Předpokládá se, že H2O2, typ ROS, zprostředkovává programovanou buněčnou smrt a reguluje syntézu sekundárních metabolitů indukcí exprese mnoha obranných genů a biosyntetických genů sekundárních metabolitů, jako je PAL. Předpokládá se, že H2O2, typ ROS, zprostředkovává programovanou buněčnou smrt a reguluje syntézu sekundárních metabolitů indukcí exprese mnoha obranných genů a biosyntetických genů sekundárních metabolitů, jako je PAL.

Polyaminy zlepšily toleranci abiotického stresu tím, že účinně vychytávají ROS, chrání nukleovou kyselinu a membránu (Alca´zar et al. 2006) a zvyšují aktivitu antioxidačních enzymů (Tang a Newton 2005). Podle zprávy Papadakise a Roubelakise-Angelakise (2005) Put ukázal lepší blokující účinek na akumulaci ROS než Spd a Spm. Jak je ukázáno v našich výsledcích, konečné zpracování biomasy InPut bylo více než ošetření Spd a Spm. Exogenní Put účinně snížil obsah H2O2, zvýšil aktivity antioxidačních enzymů a životaschopnost buněk. Pravděpodobně vyšší životaschopnost buněk přispěla k větší proliferaci a vyšší biomase. Pak by se dalo vysvětlit, proč Ag plus přidání v dřívější době vedlo k menšímu množství biomasy pro Ag plus zvýšené akumulaci H2O2 a výraznému snížení buněčné životaschopnosti. Aktivita antioxidačních enzymů byla zvýšena pro zmírnění oxidačního stresu bez ovlivnění životaschopnosti buněk. Přidání Ag plus také podpořilo aktivitu PAL a také produkciechinakosidaakteosidznačně. Mechanismus by mohl být v souladu s výsledky Desiken et al. (1998) a Yuan a kol. (2001). H2O2 může hrát klíčovou roli v buněčné proliferaci a produkci PeG. Dejte zvýšenou aktivitu PAL aechinakosidobsah do určité míry, možná nějakým jiným způsobem, aby Put snížil obsah H2O2.

V posledních letech se většina zpráv soustředila na účinek jediného elicitoru na růst kalusu a obsah PeGsCistanche deserticola. Mnoho elicitorů však nezvyšovalo růst kalusu v optimální koncentraci, jako je aschitosan, funal elicitor (Fusarium solani), methyljasmonát a kyselina salicylová (Cheng et al. 2006; Lu a Mei2003; Xu et al. 2005). Směs prvků vzácných zemin zlepšila buněčný růst a produkci PeG, o 26 procent a 167 procent vyšší než u kontroly (Ouyanget al. 2003b). Opakovaná elicitace jedním elicitorem také značně zvýšila produkci PeG (Cheng et al.2005, 2006). Je to dobrá alternativa k získání optimální produkce biomasy a PeG přidáním různých elicitorů v různých fázích. Když bylo přidáno 25 lM Put a 10 lM Ag plus 8. a 16. den, resp.echinakosidprodukce (1,7 gl–1) a produkce akteosidů (0,4 gl–1) dosáhly maxima, které byly vyšší než ty z jednoho Put nebo Ag plus elicitace, stejně jako z předchozích zpráv.

Od: ' Zlepšeníechinakosidaakteosidprodukce dvoustupňovou elicitací v buněčné suspenzní kultuřeCistanche deserticola' odWen-Hao Chen a kol

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Reference

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Zapojení polyaminů do reakce rostlin na abiotický stres. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Zvýšená produktivita ginsenosidu kombinací ethefonu a methyljasmonátu v náhodných kořenových kulturách ženšenu (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Role polyaminů v ontogenezi rostlin a jejich biotechnologické aplikace. Kult orgánů rostlinné buněčné tkáně 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Opakovaná elicitace zvyšuje akumulaci fenylethanoidových glykosidů v buněčných suspenzních kulturáchCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Zlepšení biosyntézy fenylethanoidových glykosidů vCistanche deserticolabuněčné suspenzní kultury chitosanovým elicitorem. J Biotechnol 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funkce aminoxidáz ve vývoji a obraně rostlin. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin a peroxid vodíku oba iniciují programovanou buněčnou smrt, ale mají rozdílné účinky na expresi obranného genu v suspenzních kulturách Arabidopsis. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Požadavky na živiny suspenzních kultur kořenových buněk sóji. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Změny v
aktivity askorbátperoxidázy, katalázy, guajakolperoxidázy a superoxiddismutázy v uzlech fazole obecného (Phaseolus vulgaris) při stresu ze soli. J Plant Physiol 162:929-936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Zlepšená produkce taxolu kombinací indukujících faktorů v suspenzní buněčné kultuře Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262-269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolismus aromatických a vlastnosti fenylalanindeaminázy z Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Zlepšení produkce fenylethanoidových glykosidů houbovým elicitorem v buněčné suspenzní kultuřeCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Tvorba fenylethanoidových glykosidůCistanche deserticolakalus pěstovaný na pevném médiu. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Účinky prvků vzácných zemin na růstCistanche deserticolabuňky a produkci fenylethanoidových glykosidů. J Biotechnol 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Polyaminy inhibují tvorbu superoxidu zprostředkovanou NADPH oxidázou a putrescin zabraňuje programované buněčné smrti vyvolané peroxidem vodíku generovaným polyaminoxidázou. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Pokroky ve výzkumu farmakologické aktivity v rostlináchCistancheHoffing et Link. Chin Tradit bylinné drogy 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Polyaminy snižují oxidační poškození vyvolané solí zvýšením aktivity antioxidačních enzymů a snížením peroxidace lipidů v borovici virginské. Regulace růstu rostlin 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oxidační stres a některé antioxidační systémy v kyselém dešti ošetřené rostliny chránící roli exogenních polyaminů. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Hodnocení analytických technik k předpovědi životaschopnosti po kryokonzervaci. Kult tkáňových orgánů rostlinných buněk 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2 – z elicitorem indukovaného oxidačního vzplanutí je nezbytný pro spuštění aktivace fenylalanin-ammonia-lyázy a syntézy kataranthinu v buněčných kulturách Catharanthus roseus. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Účinky methyljasmonátu a kyseliny salicylové na syntézu fenylethanoidových glykosidů v suspenzních kulturáchCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Dráha transdukce signálu pro oxidativní vzplanutí a produkci taxolu v suspenzních kulturách Taxus Chinensis var. mairei indukovaný oligosacharidem z Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Působící dráhy elicitorů na dráze biosyntézy taxolu a jejich synergický efekt. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Transdukce elicitorového signálu vedoucí k produkci rostlinných sekundárních metabolitů. Biotechnol Adv 23:283-333