Jak vodní extrakt z Cistanche podporuje střevní peristaltiku a zlepšuje zácpu?

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 a Hai-hua Qian3

Tradiční čínská medicína měla údajně dobré účinky při léčbě funkční zácpy. Tato práce se pokusila prokázat účinky vodných extraktů HerbyCistanche(AEHC) na léčbu STC a určit možné mechanismy pomocí modelu pomalé tranzitní zácpy (STC) vyvolané loperamidem. Pro identifikaci a potvrzení bioaktivních složek v AEHC byla provedena HPLC. Bylo zjištěno, že AEHC zeslabuje odpovědi STC na základě zvýšeného množství stolice, obsahu vlhkosti a rychlosti střevního průchodu, stejně jako sérových hladin GAS, MTL, SS a CGRP. Hladiny proteinu a mRNA c-kitu, značení intersticiálních buněk Cajal (ICC), se také zvýšily. Mezitím se zvýšila pouze hladina proteinu SCF, ligandu ckit. Analýza našich dat naznačila, že AEHC by zjevně mohl zlepšit funkci ICC prostřednictvím signální dráhy zahrnující PI3K, SCF a c-kit a zvýšit indexy motility tlustého střeva, jako jsou GAS, MTL, SS a CGRP. Je zajímavé poznamenat, že AEHC se zdál být účinný na zácpu, takže jsou nutné další experimenty, aby se objasnily přesné mechanismy.

Pro více informací prosím kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

akteosid v cistanche má dobré účinky na antioxidant

1. Úvod

Zácpa je běžným funkčním gastrointestinálním onemocněním a veřejným zdravotním problémem, charakterizovaným trvale obtížnou, vzácnou nebo neúplnou defekací [1]. Prevalence zácpy se na celém světě pohybuje od 0,7 procenta do 81 procent, zejména u starších osob [2, 3]. Pomalá tranzitní zácpa (STC) je běžnou gastrointestinální obtíží u 13–37 procent pacientů s chronickou zácpou rezistentní na léčbu [4, 5]. Epidemiologická data naznačují vyšší výskyt STC u mladých žen než u mužů [6]. STC způsobuje neřešitelnou zácpu, vykazuje malou odezvu na konzervativní léčbu a tendenci k neurodegenerativní poruše. Není tak jednoduché jako funkční onemocnění, ale vyžaduje invazivní a agresivní léčbu [7].

Univerzálně se používá řada současných chemických léků, jako jsou osmotická nebo sekreční laxativa a objemová činidla

léčí zácpu [8], i když jejich použití je omezené kvůli vysokým výdajům a vedlejším účinkům na břicho, jako jsou bolesti, křeče a nadýmání [9]. V současné době je hlavním cílem léčby zácpy regulace gastrointestinálního traktu. Cisaprid byl nejprve vytvořen jako podpůrný prostředek pro léčbu žaludečních onemocnění, ale později byl stažen z důvodu rizika srdečních arytmií [10].

Tegaserod je selektivní antagonista 5-hydroxytryptaminového receptoru, který může stimulovat střevní peristaltiku a sekreci [11, 12]. Prucaloprid je nový derivát dihydrobenzofurankarboxamidu a agonista {{3}HT receptoru s vysokou selektivitou a specificitou, který může zlepšit motilitu žaludku, tenkého střeva a tlustého střeva a pracuje rychleji v dynamice [13–15]. Jako derivát prostaglandinu E1 může lubiproston selektivně aktivovat kanál CIC, aby podpořil gastrointestinální sekreci a zvýšil účinky střevního přenosu [16].

Motilita při zácpě je rozšířeným problémem, ale její etiologie není dosud jasná. Nicméně přesvědčivé důkazy prokázaly příspěvek intersticiálních buněk Cajal (ICC) k patogenezi zácpy [17]. ICC se nachází mezi nervovými zakončeními a buňkami hladkého svalstva v gastrointestinálním traktu. ICC je obecně uznáván jako kardiostimulátorové buňky pro gastrointestinální aktivitu a jako mediátory neuromuskulárního přenosu [18]. Studie ukázaly, že hustota ICC v tlustém střevě pacientů s pomalou tranzitní zácpou je výrazně nižší ve srovnání s hustotou u normálních pacientů [19]. V souladu s tím může klesající počet ICC vést k nedostatku aktivity pomalých vln, a tak ovlivnit kontraktilní odpověď a indukovat opožděný tranzit u pacientů se zácpou s pomalým tranzitem. V tomto bodě může být zlepšení ICC pomocí léčiv zásadní pro vyléčení pomalé tranzitní zácpy.

Různé bylinné léky a tradiční čínská formula Mula nedávno přitáhly pozornost jako nová terapeutika pro léčbu chronické zácpy v důsledku zlepšené produkce stolice [20, 21]. HerbaCistancheje tradiční rostlinný lék používaný při léčbě chronického onemocnění ledvin, ženské neplodnosti, profuzní menoragie a impotence [22, 23]. HerbaCistanchezabraňuje apoptóze mozkových neuronů expresí faktorů souvisejících s apoptózou a neurotrofních faktorů v buňkách MES23.5 [24]. Herba Cistanche také prokázala farmaceutický potenciál při léčbě syndromu nedostatečnosti ledvin Yang-Qi-Yang. Nedávná studie prokázala, že HerbaCistanchezvyšuje mitochondriální dýchání a antioxidační status glutathionu v kardiomyocytech H9c2 [25].

TCM věří, že zácpa má úzký vztah k ledvinám. Ledvina, která se otevírá na vnějších genitáliích a konečníku, řídí močení a defekaci. Přeprava odpadu závisí na podpoře ledvinové čchi a vyživování ledvinového jinu. Pokud je nedostatečný jang ledvin nebo vyhasne brána života, chladné překrvení tlustého střeva bude mít za následek stagnaci odpadu. Zácpa je také způsobena suchým pohybem střev, protože nedostatek ledvinové esence nevytváří dostatek tekutin [26].

HerbaCistancheje běžná jednotící bylina, která má sladkou a slanou chuť a teplou povahu. Připisuje se meridiánům tlustého střeva a ledvin, může tonizovat jang ledvin a zvlhčovat střevo, aby zmírnil zácpu. Tato jediná bylina a její čínské farmaceutické přípravky byly široce používány k léčbě zácpy s pozoruhodnou účinností [27].

V Číně účinky HerbyCistanchekořeny na zácpu byly zaznamenány [28, 29] a v Shen Nongově čínské Materia Medica jsou označovány jako „sušené sukulentní stonkyCistanchedruh" [30]; nicméně vědecký důkaz o účinku HerbyCistanchekořeny na zácpu dosud neexistují, klinicky účinná dávka je v čínském lékopisu 20 g denně a klinický účinek se s dávkováním dále nezvyšuje.

Od HerbyCistancheje tak vzácné [31], standardizace jeho klinického dávkování pro léčbu STC pomocí experimentální studie nejen zabraňuje neúspěšné léčbě v důsledku nedostatečného dávkování, ale také chrání pacienty před ekonomickými ztrátami a dokonce i neúspěchem při léčbě nadměrným užíváním. Doufáme

výsledky by mohly položit vědecký základ pro nové léky na zácpu. Proto je důležité zkoumat vodnou HerbuCistanche'sfunkce střevní podpory a její působení na ICC v této studii.

2. Materiály a metody

2.1. Příprava vodného extraktu z Herba Cistanche.

Vše HerbaCistanchebyly zakoupeny od Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Čína), které byly sklizeny, shromážděny a zpracovány podle standardních etnobotanických postupů z plantáží v oblasti Sinkiang v Číně. Identitu rostliny morfologicky zjistil profesor Tu Lin Lu z Nanjingské univerzity čínské medicíny, Nanjing, Čína. Vzor voucheru (NUCMCHS-2015628) byl uložen na College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Čína.

Plátky HerbaCistancheo hmotnosti 500 g byly rozmělněny na prášek pomocí elektrického mixéru a extrahovány v 5000 ml destilované vody, poté byl vodný extrakt čištěn při 100 °C po dobu 2 hodin pomocí cirkulačního extrakčního zařízení.

membránový pór (Millipore, Billerica, MA, USA) a zbytek získaný z extraktů byl rozpuštěn ve 4000 ml vody. Po refluxní extrakci byly extrakty shromážděny a odpařeny, čímž byl získán konečný vzorek produktu. Vodné extrakty byly koncentrovány na suché pelety (1 g/ml) za použití a

pro následné použití. Pevné vzorky byly rekonstituovány v destilované vodě, aby se získaly požadované dávky 10, 20 a 40 mg/kg tělesné hmotnosti pro experiment.

2.2. Zvířata.

Experimentální protokol použitý v této studii byl přezkoumán a schválen na základě etických postupů a vědecké péče Výborem pro ústavní péči a použití zvířat v Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Suzhou, Čína (SHTCM-IACUC; číslo schválení: PNU{{2} }). Všichni samci krys (kmen Sprague Dawley) s ag byli zakoupeni od Shanghai Laboratory Animal Research Center v souladu s pokyny National Institutes of Health. Zvířata měla volný přístup ke standardní stravě (AIN-93 M) a vodě z vodovodu ad libitum a byla chována individuálně v nerezové oceli s procentuální relativní vlhkostí a denně vystavena 12 hodin přirozenému světlu a 12 hodin tmě.

2.3 Experimentální design.

Loperamid byl použit k vyvolání zácpy u potkanů ​​v souladu s předchozími studiemi [32, 33]. Celkem 60 krys bylo náhodně rozděleno do 5 skupin (na skupinu): A: normální skupina (NG), B: modelová skupina (skupina léčená Lop plus vehikulem), C: skupina krys se zácpou léčených nízkým obsahem vodného extraktu Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus LAEHC), D: skupina krys se zácpou léčenou středně vodným extraktem z Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus MAEHC) a E: skupina krys se zácpou léčenou vysoce vodným extraktem z Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus HAEHC). Skupina A byla ošetřena normálním fyziologickým roztokem (10 ml/kg); Skupina B byla ošetřena loperamidem

(4 mg/kg); Skupina C byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a nízkým obsahem vodného extraktu Herba Cistanche (1 g/kg); Skupina D byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a středním vodným extraktem Herba Cistanche (2 g/kg) a skupina E byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a vysoce vodným extraktem Herba Cistanche (4 g/kg). kg). Všem potkanům z normální skupiny byl injikován 0,9% chlorid sodný, zatímco ostatním byl injikován loperamid v 0,9% chloridu sodném dvakrát denně po 3 po sobě jdoucí dny, aby se vyvolala zácpa. Vodný extrakt Herba Cistanche byl suspendován ve vodě a byl perorálně podáván jednou denně od 4. dne do 18. dne ve skupině C, skupině D a skupině E, zatímco skupiny A a B dostávaly konzistentní objem vody sondou.

2.4. Chromatografický stav.

Profilování HPLC bylo provedeno v systému Shimadzu Liquid Chromatographic System (Tokio, Japonsko), který se skládal z čerpadla LC-20AT a

byly monitorovány při 330 nm při 30 C. Izokratická mobilní fáze sestávala z methanolu 0,1% kyseliny mravenčí (80:20, obj./obj.) a běžela při průtoku 1,0 ml/min. . Chromatografická separace byla

velikost částic 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Čína).

2.5. Analýza cvičení, příjmu potravy, příjmu vody, těla

Orná guma (vodná suspenze 20 procent aktivního uhlí a 10 procent orné gumy) byla podávána orálně v objemu 25 ml/kg každému zvířeti. Po 30 minutách byla zvířata humánně usmrcena cervikální dislokací a vypreparována. Byly překročeny tenké střevo od pyloru po slepé střevo a byla měřena vzdálenost, kterou urazila moučka z dřevěného uhlí, a celková délka tenkého střeva. Pro jednotlivou krysu bylo procento střevního průchodu vypočteno jako procento vzdálenosti ujeté potravou z aktivního uhlí vzhledem k celkové délce tenkého střeva. Následující rovnice vypočítá rychlost střevního průchodu (v procentech): vzdálenost ujetá aktivním uhlím/vzdálenost od pyloru do slepého střeva 100 procent.

2.6. Vzorek krve a odběr tkání. Na konci experimentálního období byly krysy podrobeny 12 hodinovému hladovění, ale byl jim umožněn volný přístup k vodě. Všechny krysy byly poté anestetizovány o 30 minut později intraperitoneální injekcí pentobarbitalu sodného (50 mg/kg) a umístěny na stůl s regulovanou teplotou. Vzorky krve byly odebrány a centrifugovány při 3500 otáčkách za minutu po dobu 15 minut, aby se získalo sérum. Tlusté střevo bylo okamžitě rozděleno a propláchnuto normálním fyziologickým roztokem při 4 °C a poté rozděleno na dva kusy. Jeden fragment byl fixován v 10% formalínu a zpracován v štěpeném parafínu pro následnou imunohistochemickou (IHC) analýzu, zatímco druhý byl Weight a Hair. Změny ve cvičení, příjmu potravy, vody

skladovány při 80 °C, dokud nebyly testovány. příjem, tělesná hmotnost a vlasy byly sledovány a zaznamenávány denně po celou dobu experimentu. Pozorovali jsme "změny ve cvičení" po konkrétních krocích: vlastnoručně vyrobený box (60 cm vysoký, 50 cm dlouhý a 80 cm široký s tmavou obvodovou stěnou) byl použit pro test v otevřeném poli; bílá země byla rozdělena na diamanty (12 cm) černou čarou v tmavé a tiché místnosti; 100 W žárovka zavěšená 1 m nad středem krabice; krysy byly umístěny do středu boxu 4., 6., 12. a 18. den modelování. Počet čtverců, kterými krysy prošly během 5 minut, byl použit jako skóre horizontálního pohybu a doba vzpřímení krys během 5 minut byla použita jako skóre vertikálního pohybu. Horizontální skóre a skóre pohybu plus skóre vertikálního pohybu indikují množství cvičení krys. Každý potkan byl měřen jednou [34, 35].

2.7. Měření fekálních parametrů.

Poslední den orálního podání byly čerstvé pelety stolice od každého SD potkana shromážděny do zkumavek s kulatým dnem uzavřených po dobu 6 hodin a byly zaznamenány celkové hmotnosti z každé skupiny. Ke stanovení obsahu fekální vlhkosti jsme použili elektrické váhy k sušení pelet stolice, dokud nebylo dosaženo konstantní hmotnosti, a měřili jsme suchou hmotnost. Obsah vlhkosti

2.8. Hodnocení GAS, MTL, SS a CGRP.

Koncentrace gastrinu (GAS), motilinu (MTL), somatostatinu (SS) a kalcitoninového genu souvisejícího peptidu (CGRP) v séru byly odhadnuty pomocí ELISA za použití komerčně dostupných kitů.

2.9. Histologická analýza.

Příčné tlusté střevo odebrané z SD potkanů ​​bylo fixováno 10% formalínem po dobu 12 hodin, zapuštěno

m tlusté plátky, které byly obarveny hematoxylinem a eosinem (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Morfologické rysy těchto řezů byly pozorovány pod světelnou mikroskopií, poté byla měřena délka klků, tloušťka krypty a tloušťka svalu pomocí Leica Application Suite (Leica Microsystems, Švýcarsko).

2.10. Imunohistochemická analýza.

Postupovali jsme podle metod Zhu et al. (2016) [36]; nešpiněné 5 m úseky byly

obarveno králičím anti-c-kitem (1:100) při 4 °C přes noc. Metoda sekundární protilátky a komplexu avidin-biotin-peroxidáza byly použity podle pokynů výrobce. K eliminaci nespecifické vazby byla použita imunoglobulin-negativní kontrola. Úrovně exprese c-kitu

2.11. Analýza rychlosti průchodu střevem.

Poměr střevních průchodů byl proveden podle dříve publikovaných protokolů [36]; krátce, po 14 dnech léčby, byly všechny SD krysy podrobeny 12 hodinovému hladovění, ale byl jim umožněn volný přístup k vodě.

Polymerázová řetězová reakce v reálném čase. Hladiny genové exprese mRNA c-kit, SCF a PI3K v tlustém střevě byly stanoveny pomocí soupravy pro extrakci celkové RNA (TIANGEN Biotech,

Peking, Čína) podle protokolů výrobce. Real-time PCR byla provedena pomocí ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI). K detekci produktů PCR byl použit SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japonsko). Reakce byly prováděny ve třech opakováních. Následně byla čerstvá tkáň tlustého střeva potkana o hmotnosti 0,5 g homologní

l) byl extrahován podle pokynů výrobce za použití činidla TRIzol (Invitrogen, USA). K syntéze prvního vlákna cDNA v souladu s protokolem výrobce byla použita souprava pro reverzní transkripci-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.). Všechny cílové parametry jsou uvedeny v tabulce 1. Cyklovací protokol byl za následujících podmínek: 95 °C po dobu 5 minut (denaturace DNA), následovalo 40 cyklů 95 °C po dobu 15 s, 60 °C po dobu 20 s a 72 °C po dobu 40 s Analýza křivky tání byla provedena na konci amplifikačních cyklů.

2.12. Analýza Western Blot.

Obsah proteinu c-kit a SCF v homogenátech vzorků tlustého střeva byl hodnocen pomocí Western blotu. Stručně řečeno, celkové proteiny homogenátů byly stanoveny pomocí testu s kyselinou bicinchonovou (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Dodecylsulfát-polyakrylamidový gel sodný (SDS-PAGE) byl použit k separaci proteinů v systému elektroforézy BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Proteiny byly poté přeneseny na polyvinylidendifluoridové (PVDF) membrány. Po 2 hodinách působení blokovacím pufrem v TBS obsahujícím 5 procent odtučněného mléka při pokojové teplotě byly PVDF membrány inkubovány přes noc s 1:1000 zředěným anti-c-kitem (Santa Cruz, CA, USA), 1:500 zředěným anti-c-kitem. SCF (Sigma, MO,

USA) a 1:8000 zředěné protilátky proti aktinu (Kangchen, Shanghai, Čína). Vazba primární protilátky byla detekována pomocí odpovídající sekundární protilátky konjugované s HRP (Beyotime, Jiangsu, Čína). Pro detekci chemiluminiscence byla použita vylepšená chemiluminiscenční souprava (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) a Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong). Jako kontrola zatížení byl použit prolaktin. Množství exprese proteinu je prezentováno relativně k hladinám aktinu.

2.13. Statistická analýza.

Data měření byla uvedena jako střední standardní chyba průměru (SEM) a analyzována pomocí SPSS

16.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). K určení významných rozdílů ve všech parametrech byla použita jednocestná analýza rozptylu (ANOVA) následovaná Duncanovými testy s více rozsahy. Hodnoty byly považovány za statisticky významné při

3. Výsledky

3.1. Složení a funkční složky Herba Cistanche.

Jak je znázorněno na obrázku 1, kořeny Herba Cistanche obsahují vysoké koncentrace několika bioaktivních složek souvisejících s laxativními účinky. Koncentrace celkových echinakosidů a celkových verbakosidů byly 0,64 mg/g a 0,16 mg/g, v uvedeném pořadí. Dva píky indikující vysoké hladiny echinakosidu a verbascosidu byly detekovány v LP ve vhodném retenčním čase pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).

3.2. Obecné pozorování.

Potkani SP nezemřeli v průběhu experimentu, což ukazuje na lepší bezpečnost a funkčnost zvířecího modelu. Ve srovnání se skupinou A vykazovaly krysy v modelové skupině nadýchanou srst, malátnost, suchou stolici a

zhoršila s prodloužením doby modelování.

3.3. Vliv AEHC na počet stolice a obsah vlhkosti u potkanů ​​se zácpou vyvolanou loperamidem.

Ve srovnání s normálními výkaly byly výkaly ve skupinách B, C, D a E suché, malé a tvrdé a nebyly před ošetřením vyleštěny.

koneckonců, krysám byl injikován loperamid (léčení lékem zmírnilo symptomy jako tělo a 3(b)).

hmotnost se mezi všemi experimentálními skupinami významně nelišila, ačkoli skupina E vykazovala mírně nižší tělesnou hmotnost než ostatní skupiny (obrázek 2(a)). Kromě toho SD potkani se zácpou jedli významně méně potravy než skupina A ( ), zatímco rozdíly mezi skupinami B, C, D a E (obrázek 2(b)) nebyly významné. Spotřeba vody se také nezměnila mezi skupinou A a skupinou B. Navíc nebyl v r zjištěn žádný významný nárůst spotřeby vody

že léčba AEHC nevyvolala žádnou změnu. Ačkoli rychlost střevního tranzitu ve skupinách C, D a byla také významně vyšší, skupiny C, D a E měly významně nižší poměry než skupina A.

3.4. Vliv AEHC na rychlost průchodu tenkým střevem u potkanů ​​se zácpou vyvolanou loperamidem.

Jak je vidět z obrázku 4, nebyly mezi pěti skupinami zjištěny žádné rozdíly ve výchozím čase průchodu tenkým střevem. Skupina B má ve srovnání se skupinou A výrazně nižší poměr pohonu práškovým uhlím (𝑃 < 0.01).="" ačkoli="" rychlost="" střevního="" tranzitu="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e="" byla="" také="" významně="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" měly="" významně="" nižší="" poměry="" než="" skupina="">

3.5. Intervence s AEHC částečně zvyšuje funkci indexu motility tlustého střeva.

Hladiny GAS a MTL v séru získané od potkanů ​​skupiny B významně poklesly ve srovnání s hladinami ze skupiny A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.).="" na="" druhé="" straně="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" mají="" efektivně="" vyšší="" hladiny="" gas="" a="" mtl="" z="" podávání="" extraktů="" herba="" cistanche="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" hodnoty="" ss="" u="" potkanů="" ​​skupiny="" b="" byly="" vyšší="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" a="" (𝑃="">< 0,01);="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" mají="" oslabené="" hladiny="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (obrázek="" 5).="" ve="" srovnání="" s="" potkany="" se="" zácpou="" byly="" hladiny="" cgrp="" u="" normálních="" potkanů="" ​​skupiny="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" a="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e,="" kterým="" byl="" podáván="" herba="" cistanche,="" konstantní="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Histologická změna tlustého střeva.

Aby se prozkoumalo, zda léčba AEHC může vyvolat strukturální změnu tkáně tlustého střeva, byla po barvení H&E měřena délka klků, tloušťka vrstvy krypt a tloušťka svalu v příčných tlustých střevech krys v pěti skupinách. Porovnáním patologie tlustého střeva krys v každé skupině byla sliznice tlustého střeva hladká a obsahuje malé tepny a malé žíly v submukóze a velké množství tukových buněk. Svalová vrstva se navíc skládala z buněk hladkého svalstva a subserosa byla kompletní. Průměrná délka klků byla významně kratší ve skupině B než ve skupině A (𝑃 < {{0}}.01).="" průměrná="" délka="" klků="" ve="" skupině="" c="" se="" však="" výrazně="" zvýšila="" o="" více="" než="" 30="" procent="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" (obrázky="" 6="" a="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" mezitím="" se="" průměrná="" délka="" klků="" výrazně="" prodlužuje="" ve="" skupinách="" d="" a="" e="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" (obrázky="" 6(a)="" a="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" navíc="" změna="" tloušťky="" svalu="" byla="" velmi="" podobná="" délce="" klků.="" ve="" skupině="" b="" tloušťka="">

byl dramaticky tenčí ve srovnání se skupinou A. Hladiny svalové tloušťky ve skupinách C, D a E se však zvýšily o 30–35 procent ve srovnání s tloušťkou ve skupině B (obrázky 6 a 7). Celkově tato zjištění naznačují, že AEHC může zvýšit délku klků a tloušťku svalů v tlustém střevě u krys se zácpou.

3.7. Podávání léčby AHEC Zvýšená proteinová exprese c-Kit a SCF.

Jeho imunoreaktivita byla detekována v tlustém střevě, protože buňky ve všech skupinách byly pozitivní na c-kit. Jak ukazuje obrázek 8, úroveň exprese c-kit ve skupině B byla nižší než ve skupině A (𝑃 < 0.05).="" úroveň="" exprese="" c-kitu="" ve="" skupině="" c="" byla="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" zatímco="" více="" c-kit="" bylo="" přítomno="" ve="" skupinách="" d="" a="" e="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" po="" ošetření="" různými="" koncentracemi="" vodného="" extraktu="" herba="" cistanche="" po="" dobu="" 2="" týdnů="" byly="" hladiny="" proteinové="" exprese="" c-kit="" a="" scf="" detekovány="" analýzou="" western="" blot.="" analýza="" western="" blot="" ukázala,="" že="" hladiny="" exprese="" c-kit="" a="" scf="" byly="" po="" ošetření="" loperamidem="" v="" tlustém="" střevě="" krys="" výrazně="" nižší="" (obrázek="" 9).="" obrázek="" 8(e)="" ukazuje,="" že="" snížený="" c-kit="" u="" krys="" se="" zácpou="" významně="" vzrostl="" o="" 31,2="" procenta="" po="" léčbě="" krys="" 500="" ug/ml="" aehc="" (❑="">< 0,05).="" kromě="" toho="" léčba="" 100="" a="" 200="" ug/ml="" aehc="" zvýšila="" hladiny="" exprese="" proteinu="" c-kit.="" exprese="" proteinu="" scf="" se="" významně="" zvýšila="" o="" 20,1,="" 24,7="" a="" 8,4="" procent="" při="" léčbě="" 100,="" 200="" a="" 500="" µg/ml="" aehc,="" v="" daném="" pořadí="" (obrázek="" 9).="" 3.8.="" vliv="" aehc="" na="" expresi="" mrna="" c-kit,="" scf="" a="" pi3k.="" aby="" se="" zjistilo,="" zda="" léčba="" aehc="" může="" ovlivnit="" regulaci="" mrna="" související="" se="" svalovou="" kontrakcí,="" byly="" pomocí="" specifických="" primerů="" pozorovány="" změny="" v="" hladinách="" exprese="" c-kit,="" scf="" a="" pi3k="" v="" tlustém="" střevě="" krys="" se="" zácpou.="" výsledky="" ukázaly,="" že="" hladiny="" mrna="" c-kit="" ve="" skupině="" b="" byly="" významně="" nižší="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" zatímco="" hladiny="" mrna="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e="" byly="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0,05).="" (obrázek="" 10).="" také="" jsme="" zkoumali="">

exprese SCF, ligandu kitu. Exprese mRNA SCF u potkanů ​​skupiny B byla významně nižší než ve skupině A, zatímco léčba AEHC ve skupinách C, D a E zvýšila expresi mRNA SCF (obrázek 1 0). Kromě toho jsme zkoumali účinek AEHC na expresi genu PI3K. V den 14 byla hladina exprese genu PI3K významně vyšší ve skupinách C, D a E než ve skupině B (𝑃 <>

4. Diskuze

Zácpa je velmi časté onemocnění charakterizované špatným vyprazdňováním. Výrazně snižuje kvalitu života a přináší obrovskou ekonomickou zátěž jak pro pacienty, tak pro národní zdravotní pojištění [32]. Přírodní produkty a léčivé potraviny nyní přitahují stále větší pozornost, protože mají potenciál stát se novými léky používanými k léčbě zácpy [37, 38]. Proto jsme studovali terapeutické účinky AEHC na loperamidem indukované krysy se zácpou. Loperamid, atropin-difenoxylát a morfin se široce používají k vyvolání zácpy u laboratorních zvířat. Mezi těmito třemi léky loperamid vyvolává prodlouženou dobu vyprazdňování stolice a zpomaluje průchod střevem luminálním světem, protože inhibuje jak sekreci vody, tak hladký pohyb ve střevní stěně [39]. Analýza tělesné hmotnosti v této studii nezjistila žádný rozdíl v každé skupině. Ani po experimentu nebyl zjištěn žádný rozdíl. Skupina s nízkou dávkou AEHC stále vykazovala nejnižší tělesnou hmotnost, ale modelová skupina a normální skupina byly svědky nejvyšší tělesné hmotnosti. Zácpa je obecně funkční onemocnění. Pomalá tranzitní zácpa vyvolaná v této studii neovlivnila příjem živin krysami a jejich tělesnou hmotnost během experimentu. Rozdíly v množství trusu krys a obsahu jejich vlhkosti mezi skupinami před modelováním neexistovaly; oba se však po modelování výrazně snížily a obsah vlhkosti ve stolici se zvýšil po použití AEHC v různých dávkách. Po prostudování rychlosti pohonné hmoty uhlíkového prášku v tlustém střevě.

u krys, modelová skupina zaznamenala zřejmý pokles rychlosti, zatímco zůstala normální ve skupinách s nízkou dávkou, střední dávkou a vysokou dávkou AEHC. Výsledky ukázaly, že chronická tranzitní zácpa vyvolaná loperamidem léčená různými dávkami Herba Cistanche může obnovit hnací funkci tlustého střeva v různé míře. Gastrointestinální hormony jsou vysoce účinné bioaktivní látky vylučované endokrinními buňkami gastrointestinální sliznice a slinivky břišní, které mají jak excitační, tak inhibiční účinek na regulaci gastrointestinální motorické funkce [40, 41], z nichž hlavní účinky mají GAS, MTL a SS. První dva hormony stimulují sekreci trávicí šťávy, stahují hladké svalstvo trávicího traktu, podporují pohyb obsahu trávicího traktu a stimulují motilitu plynového trointestinálního traktu. SS naopak inhibuje sekreci trávicí šťávy, kontrakci hladkého svalstva gastrointestinálního traktu a vyprazdňování gastrointestinálního traktu [42]. Bylo zjištěno, že hladiny GAS a MTL v tkáni tlustého střeva modelové skupiny jsou nejnižší, což ukazuje, že metoda modelování jistě snížila koncentraci GAS a MTL v tkáni tlustého střeva. Jako hlavní gastrointestinální hormony motility tlustého střeva se koncentrace GAS a MTL zvyšovaly různými dávkami AEHC a tím se zvýšila motilita tlustého střeva. Naproti tomu hladina SS v tkáni tlustého střeva modelové skupiny byla nejvyšší, což naznačuje, že metoda modelování může podporovat koncentraci SS v tkáni tlustého střeva. CGRP je jedním z nejúčinnějších vazodilatátorů a jeho relaxační účinek je 10-krát silnější než účinek kontrakce. Jako důležitý neurotransmiter nebo neuromodulátor, který reguluje trávicí funkce, může CGRP inhibovat většinu gastrointestinální motility a sekreci různých trávicích šťáv [43]. Koncentrace CGRP v modelové skupině byla vyšší než ve skupině A, což naznačuje, že metoda modelování může zvýšit koncentraci CGRP v tkáni tlustého střeva, což může být také jedním z faktorů snížené peristaltiky tlustého střeva, která povede k zácpě. Koncentrace CGRP v tkáni tlustého střeva u skupin AEHC byla nižší než v modelové skupině, což naznačuje, že AEHC měl relativně slabý inhibiční účinek na pohyb tlustého střeva. c-Kit je transmembránový protein. Faktor kmenových buněk (SCF) jeho ligandu je produkován buňkami neuronů a buňkami hladkého svalstva. Podporuje vývoj a diferenciaci ICC a udržuje jeho normální fyziologickou funkci. Značení c-Kit nepřímo odráží množství a hustotu ICC [44, 45]. Kromě toho hraje ICC buňka klíčovou roli v regulaci gastrointestinální motility a působí jako kardiostimulátor gastrointestinálního pohybu. Takže u některých poruch motility plynového trointestinálního traktu může dojít ke snížení množství a funkce buněk ICC. Podle předchozích studií byly počty buněk v tlustém střevě pacientů s chronickou tranzitní zácpou sníženy. Tato studie tedy pozorovala buňky tlustého střeva krys pomocí specifických expresních a imunohistochemických technik. Ve srovnání s normální skupinou se počet buněk v modelové skupině výrazně snížil, ale po léčbě se zvýšil. Studie ukázala, že buňky ICC a faktory kmenových buněk (SCF) úzce souvisí se signální dráhou c-kit/SCF. SCF je přirozený ligand c-kit exprimovaný v různých tkáních těla, ale hlavně

produkované stromálními buňkami v kostní dřeni. Každý monomer c-kit se kombinuje s SCF prostřednictvím extracelulárních domén 1–3. Po dimerizaci SCF se struktura monomeru c-kit mění a produkuje homodimerizaci, která pak vede k autofosforylaci aminokyselinového zbytku v buněčné membráně a stimuluje různé druhé signální molekuly k regulaci buněčných funkcí ICC. Druhou signální molekulou je fosfatidylinositol 3-kináza (PI3K), apolipoprotein, který převádí 4,{7}} difosfoinositid na 3,4,5-trifosfoinositid prostřednictvím kombinace s tyrosinem 721 z c-kitu. Předchozí výzkum ukázal, že inhibitory PI3K Wortmannin a LY294002 způsobily abnormální vývoj ICC blokováním signálu [46]. Náš experiment zjistil, že exprese c-kit a SCF proteinu a mRNA v modelové skupině nejprve poklesly, ale pak se zvýšily ve skupinách AEHC s různými dávkami, i když na úrovni pod normálními hodnotami. mRNA exprese PI3K se pozoruhodně zvýšila. SCF/c-kit se proto může projevit prostřednictvím PI3K. Výsledky ukázaly, že AEHC může regulovat hladké svalstvo gastrointestinálního traktu zvýšením množství ICC buněk. Nízká dávka AEHC neměla žádný významný účinek na zácpu, zatímco střední dávka a vysoká dávka zkrátila dobu první defekace krys, zvýšila obsah vlhkosti ve výkalech, zlepšila rychlost hnacího plynu v tlustém střevě, zjemnila množství výkalů, zvýšila GAS , MTL a CCK a posílily kontraktilitu tlustého střeva. Účinná dávka AEHC je zpočátku 20 g/d po konverzi, což je ekvivalentní střední dávce a vysoké dávce v této studii.

5. Závěry

AEHC podporuje střevní motilitu zlepšením funkce ICC a regulací neurotransmiterů v této studii, která prokázala, že AEHC má potenciál léčit a předcházet zácpě. Extrakty zlepšily produkci pomalými vlnami tlustého střeva a regulovaly rytmus kontrakční aktivity Množství mRNA SCF Množství PI3K mRNA Množství c-Kit mRNA 12 Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine hladkého svalstva zvýšením množství ICC prostřednictvím PI3K/SCF/ signálová cesta c-kitu. Další podrobné experimentální studie by však mohly zlepšit pochopení dalších molekulárních cest AEHC při léčbě STC a pomoci vést prospektivní klinické studie hodnotící jeho účinky a bezpečnost.

Střet zájmů

Autoři prohlašují, že nedochází ke střetu zájmů.

Příspěvky autorů

Shuai Yan a Yin-Zi Yue přispěli k této práci stejným dílem. Všichni autoři závěrečnou práci schválili.

Poděkování

Tato práce byla podpořena grantem od National Natural Science Foundation of China (NSFC) a financovaná čínskou vládou (81573979). Studie byla podpořena také technologickým projektem provinční správy tradiční čínské medicíny Jiangsu, Čína (č. YB2017061), Suzhou Scientific and Technological Development Programm, Čína (č. SYSD2015172), Projektem Suzhou Industrial Technology Innovation, Čína ( č. SYSD2016136, č. SYS201775 a č. SYS201776) a vysokoškolský projekt nemocnice tradiční čínské medicíny Suzhou v Číně (YQN2015007). Autoři vděčně oceňují finanční podporu z projektu financovaného China Postdoctoral Science Foundation (2017M620220).

Reference

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally a kol., "Dopad funkčních gastrointestinálních poruch na přežití v komunitě," American Journal of Gastroenterology, sv. 105, č.p. 4, s. 822–832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington a C. Di Lorenzo, "Epidemiologie zácpy u dětí a dospělých: systematický přehled," Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, sv. 25, č. 1, str. 18, 2011. [3] NC Suares a AC Ford, "Výskyt a rizikové faktory chronické idiopatické zácpy v komunitě: systematický přehled a metaanalýza," American Journal of Gastroenterology, sv. 106, č.p. 9, s. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo a M. Camilleri, "Chronická zácpa," The New England Journal of Medicine, sv. 349, č.p. 14, s. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame a SSC Rao, "Clinical utility of colonic manometry in slow-transit constipation," Neurogastroenterology & Motility, sv. 25, č. 6, s. 487–495, 2013. [6] DM Preston a JE Lennard-Jones, "Severe chronic constipation of young women: 'idiopatic slow transit constipation," Gut, sv. 27, č. 1, pp. 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, et al., „Immunoreactivity for Ano1 detekova depleci Kit-pozitivních intersticiálních buněk Cajal u pacientů se zácpou s pomalým tranzitem "Neurogastroenterology & Motility, sv. 23, č. 8, s. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint a TA Dixon, "Systematický přehled a metaanalýza: Polyethylenglykol u dospělých s neorganickou zácpou," International Journal of Clinical Practice, sv. . 64, č.p. 7, s. 944–955, 2010. [9] AC Ford a NC Suares, „Účinek laxativ a farmakologických terapií u chronické idiopatické zácpy: systematický přehled a metaanalýza,“ Gut, sv. 60, č. 2, s. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff a RL Nelson, "Cisaprid pro střevní zácpu," Cochrane Database of Systematic Reviews, sv. 19, č. 1, str. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley a kol., "Tegaserod pro léčbu chronické zácpy: randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná nadnárodní studie," American Journal of Gastroenterologie, sv. 100, č. 2, str. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West a MH Murad, „Systematic review with meta-analysis: Highly Selective {{80} }Agonisté HT4 (prucaloprid, velusetrag nebo naronaprid) u chronické zácpy," Alimentary Pharmacology & Therapeutics, sv. 39, č. 3, s. 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu a kol., "Neurogenic and Myogenic Properties of Pan-Colonic Motor Patterns and their Spatiotemporal Organization in Rats," PLoS ONE, sv. 8, č. 4, ID článku e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro a DJ Angiolillo, "Investigations on 5-HT4 receptor expression and effects of tegaserod on human platelet Agregation in vitro," American Journal of Therapeutics, sv. 17, č. 6, pp. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, et al., "Orální prucaloprid u dětí s funkční zácpou," Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, sv. 57, č.p. 2, s. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini a kol., „Prohlášení o shodě AIGO/SICCR: Diagnostika a léčba chronické zácpy a obstrukční defekace (část I: Diagnostika )," World Journal of Gastroenterology, sv. 18, č. 14, s. 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. He, E. Soffer, et al., "Pan-kolonický pokles intersticiálních buněk Cajal u pacientů s pomalu tranzitní zácpou," Gut, sv. 51, č.p. 4, s. 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding a Q.-Z. Wang, "Intersticiální buňky Cajala zprostředkovávají excitační sympatickou neurotransmisi v prostatě morčete," Cell and Tissue Research, sv. 352, č.p. 3, s. 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang, a Y. Lie, "Snížení intersticiálních buněk Cajal v sigmoidálním tlustém střevě u pacientů s pomalu tranzitní zácpou," International Journal of Colorectal Disease, sv. 19, č. 5, str. 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou a kol., "Tradiční čínská formule, lubrikační střevní pilulka, zlepšuje zácpu u potkanů ​​vyvolanou loperamidem, která se podílí na zvýšení Cl- sekrece přes distální epitel tlustého střeva," Journal of Ethnopharmacology, sv. 130, č.p. 2, s. 347–353, 2010. [21] D.-Y. On a S.-M. Dai, "Protizánětlivé a imunomodulační účinky Paeonia lactiflora Pall., tradiční čínské bylinné medicíny," Frontiers in Pharmacology, sv. 2, článek 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao a C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jeden z nejlepších farmaceutických darů tradiční čínské medicíny," Frontiers in Pharmacology, sv. 7, článek 41, 2016.