E-mailem:joanna.jia@wecistanche.com

Antidepresivum a aktivity na zlepšení kognitivních funkcí tradiční čínské byliny Cistanche

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 a Li Gu2

1Státní klíčová laboratoř biokontroly, Institut vodních hospodářských zvířat a klíčová laboratoř pro vodní hospodářská zvířata v provincii Guangdong, School of Life Sciences, Univerzita Sun Yat-sen, Guangzhou 510275, Čína

2Výzkumné centrum potravinářského a zdravotnického inženýrství ministerstva školství, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275, Čína

Korespondence by měla být adresována Li Gu; Přijato 20. února 2017; Revidováno 11. května 2017; Přijato 28. května 2017; Publikováno 28. června 2017 Akademický redaktor: Ki-Wan Oh Copyright © 2017 Dongfang Wang et al. Toto je článek s otevřeným přístupem distribuovaný pod licencí Creative Commons Attribution License, která umožňuje neomezené použití, distribuci a reprodukci na jakémkoli médiu za předpokladu, že je původní dílo řádně citováno. Více než deset procent lidí trpí alespoň jednou epizodou deprese a souvisejících duševních poruch za život a deprese a související duševní poruchy jsou jedním z největších světových problémů veřejného zdraví. Teorie více systémů tvrdí, že dysregulace více systémů je základem patogeneze deprese a souvisejících duševních poruch, a že jsou naléhavě potřeba nové terapie založené na teorii dysregulace více systémů. V této studii je antidepresivní účinek odvaru z bylinCistanchedeserticolaYCMa a Cistanchetubulosabyl vyšetřen. BylinaCistancheodvar významně snížil dobu nehybnosti v testu zavěšení myšího ocasu. Myši ošetřené bylinkovým odvarem prokázaly zlepšenou schopnost prostorového učení a paměti v Morrisově testu vodním bludištěm. Skupiny ošetřené bylinkovým odvarem vykazovaly sníženou aktivitu monoaminooxidázy (MAO); koncentrace dopaminu (DA) v mozku byla zvýšena, což ukazuje na bylinuCistancheodvar zlepšil dráždivost nervů; sérová koncentrace kortikosteronu (CORT) byla snížena, což ukazuje, že myši měly prospěch ze snížené úrovně stresu. Proto je antidepresivní účinnost a mechanismus tradičníčínštinabylinaCistanchebyly zkoumány v této studii. BylinaCistancheukázaly potenciál být vyvinuty jako doplňková a alternativní terapie deprese.

Předcházejte Alzheimerově chorobě pomocí cistanche

1. Úvod

Deprese a související poruchy nálady, s odhadem, že 12-17 procent populace prodělá alespoň jednu epizodu za život, patří mezi hlavní příčiny mentálního postižení a jsou považovány za jeden z hlavních celosvětových problémů veřejného zdraví.[1].Zvláště důležité je, že značná část pacientů s depresí trpí ztrátou paměti, problémy s koncentrací, sníženou energií nebo únavou, ztrátou zájmu nebo potěšení z koníčků a činností, potížemi se spánkem, ranním probouzením nebo přílišným spánkem. Ačkoli nervové substráty pro abnormality u deprese a souvisejících syndromů nejsou jasné, obecně se uznává, že poškození neuroplasticity a buněčné odolnosti vede k patofyziologii deprese a úspěšná léčba může záviset na zásahu úrovně neurotransmiterů[2]. Přístup k léčbě deprese je v podstatě založen na klasickém monoaminovém systému

hypotéza, která tvrdí, že dysregulace monoaminů, zejména serotoninu (5-HT) a norepinefrinu (NE) přispívá k patogenezi deprese, a intervence neurotransmiterového systému agonisty dopaminu a dopamin-noradrenergními modulátory by zmírnila příznaky velké deprese porucha [3]. Přestože je antidepresivum široce předepisováno, jeho léčebná účinnost je sporná a vedlejší účinek nelze ignorovat, protože značná část pacientů nereaguje na manipulaci s monoaminovým systémem.4]. V poslední době nové teorie patogeneze deprese naznačují, že mnoho systémů, včetně zánětlivých drah, dráhy oxidačního stresu, osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny (HPA), metabolického a bioenergetického systému, neurotrofických drah, glutamátového systému, opioidního systému a cholinergního systému úzce souvisí s výskytem deprese [3]. Důkazy ukazují, že intervence s více cíli přinesla lepší účinnost než intervence s jedním cílem [5]. Naléhavě potřebujeme nové terapie založené na teorii vícenásobné systémové dysregulace.

Bylinné produkty údajně konzumuje více než polovina americké populace[6];Zájem a poptávka po bylinkách nebo bylinných produktech jako doplňkovém způsobu léčby deprese roste po celém světě. Bylo zjištěno, že mnoho léčivých rostlin prokazuje příznivý účinek na zmírnění deprese. Mezi byliny, o kterých se uvádí, že mají účinek na potlačení deprese a zlepšují kognitivní funkce, patří rakytník [7], Ginkgo biloba[8], Piper nigrum[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. Kombinované podávání kyseliny ferulové a piperinu vykazovalo synergický účinek podobný antidepresivu u myší manipulací s monoaminergním systémem[7]. Albiflorin se vyznačoval vysokou selektivní afinitou k neurotransmiterovým receptorům a transportérům a významně zvýšeným extracelulárním koncentracím 5-HT a NE v hypotalamu volně se pohybujících potkanů[12]. Léčivá bylina Melissa officinalis L. zmírňovala depresivní chování myší tím, že měla vliv na hladinu serotonergních neurotransmiterů[13].Tyto bylinky nebo odvary, vyvinuté jako alternativní léky na depresi, pomáhají zmírňovat příznaky deprese a poskytují nový zdroj pro vývoj antidepresiv. BylinaCistanchedruhy, rozšířené ve vyprahlých zemích a pouštích severní části Číny, jsou byliny tradiční čínské medicíny a široce používané k léčbě různých nemocí po dobu více než 1,{1}} roku v Číně. Mnohonásobná účinnost bylinCistancheodvar se pohybuje mezi afrodiziakem [14], podporující imunitu[15], antioxidační [16] a hepatoprotektivní [17] vlastnosti. Odvary z C. deserticola indukují testikulární steroidogenní enzymy [18], podporují erektilní odpověď penisu a zkracují dobu latence erektilní reakce u kastrovaných potkanů ​​[19]. BylinaCistanchebylo popsáno, že inhibuje aktivity dopaminergních neuronů regulací inhibičních genů apoptózy a neurotrofických faktorů [20]. C.tubulosaodvary upravily kognitivní dysfunkci způsobenou A� 1-42 blokováním ukládání amyloidu a oživily cholinergní a hipokampální dopaminergní neuronální funkci [21]. Neuroprotektivní vlastnost bylinné Cistanche implikuje terapeutický potenciál u kognitivních onemocnění. Deprese je běžným smíšeným způsobem emocionálních reakcí se zapomnětlivostí a úpadkem kognitivních funkcí jako běžnými příznaky [22]. Bylina Cistanche se běžně používala jako tradiční čínská medicína k léčbě zapomnětlivosti; nedávná zpráva navíc ukazuje, že počáteční podávání kukuřičné mouky doplněné o C.tubulosaje prospěšný pro podporu dlouhověkosti a pro zlepšení čichového učení a paměti u modelu Drosophila bez obratlovců [23]. Tyto skutečnosti svědčí o kognitivních zlepšujících vlastnostech bylinyCistanche; zde v tomto výzkumu jsme poprvé charakterizovali antidepresivní vlastnosti a jejich vztah ke kognitivním zlepšením na savčím modelu regulací monoaminového systému a osy HPA. Osvětlující antidepresivní vlastnosti a předběžný mechanismus bylinyCistancheby mohla rozšířit aplikační spektrum byliny Cistanche, která by mohla být vyvinuta jako alternativní lék na deprese.

2. Materiály a metody

1.1. Rostlinný materiál a příprava odvaru. C. deserticola YCMa byl získán z autonomní oblasti Nei Mongol, Čína; C.tubulosabyl získán z Ujgurské autonomní oblasti Xinjiang v Číně. Před odvarem byla bylina (C. deserticola YCMa nebo C. tubulosa) zkontrolována, aby se zjistil obsah echinakosidu a verbascosidu pomocí HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) (Milford, MA, Waters, USA), a způsobilý produkt (podle k lékopisu Čínské lidové republiky) byl použit pro pokusy na zvířatech. Odvar byl získán na základě metody vodní páry vyvinuté Výzkumným střediskem potravinářského a zdravotnického inženýrství ministerstva školství, Sun Yat-sen University. Sušená Cistanche deserticola YCMa o hmotnosti 125 g byla rozdrcena a proseta sítem 120-mesh a poté byl prášek rozpuštěn ve 3 litrech ultračisté vody a zahřát

při 10}0°C po dobu 2 h, poté ochlazena na pokojovou teplotu a proseta; supernatant byl recyklován. Sediment byl poté rozpuštěn ve 2 1 ultračisté vody a poté zahříván po dobu 1,5 hodiny a ochlazen, jak je uvedeno výše, aby se supernatant recykloval; sediment byl poté použit pro recyklaci supernatantu. Obsah veškerého supernatantu byl obohacen rotačními vakuovými odparkami při 60 °C; nakonec byla koncentrace surového léčiva nastavena na 0,5 g/ml a produkt byl skladován při -20 °C.

1.2. Echinakosidový a verbascosidový test pomocí analýzy HPLC. K měření kvalitativního a kvantitativního testu echinakosidu a verbascosidu byla použita HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie); verbascosid (čistota > 93 procent) a echinakosid (čistota > 93 procent) byly zakoupeny od Národního institutu pro kontrolu potravin a léčiv (Peking, Čína) a použity jako standardní kontrola.

1.3. Péče o zvířata a experimentální chování. Subjekty byli SPF (bez specifického patogenu) samci myší Kunming o hmotnosti 21-25 gramů, dodávaní Medical Experimental Animal Center of Guangdong Province. Zvířata byla umístěna v plastových klecích (deset na klec); podmínky prostředí byly nastaveny následovně: vlhkost 40-70 procent, pokojová teplota 21 ± 1 °C a 12 h: 12 h období světlo-tma. Všechny pokusy na zvířatech byly schváleny Výborem pro etiku zvířat Sun Yat-sen University.

1.4. Test odpružení ocasu. Test zavěšení ocasu byl proveden podle protokolu popsaného Cryanem et al. [24] s mírnými změnami. Stručně, v den 21 byly myši zavěšeny za ocas pomocí kovové šibenice přivázané nylonovým katetrem s hlavou ve výšce 50 mm od podlahy. Myši byly zavěšeny na háčku na lepicích páskách 10-20 mm od konce jejich ocasu a byly izolovány akusticky a vizuálně pomocí šindelů. Pohyby těla myši byly zaznamenány a respirační pohyby byly ignorovány. Před dnem experimentu byly myši suspendovány na 8 minut pro adaptaci.

1.5. Morrisův test vodního bludiště. Test ve vodním bludišti byl proveden podle popisu Vorheese et al. [25–27] pomocí zařízení vyvinutého Čínskou akademií lékařských věd. Kruhový bazén (průměr 150 cm) naplněný vodou (26

± 1 °C; výška ráfku (vzdálenost vodní hladiny od ráfku stěny): 10 cm

Tabulka 1: Obsah echinakosidu a verbascosidu v prášku a odvaru C. deserticola YCMa a C.tubulosa.

byla použita kruhová záchranná plošina (průměr: 11 cm; vzdálenost

Vzorky

Procento ECH Procento VerBS mezi středovým bodem plošiny a stěnou bazénu: 27 cm) bylo ponořeno 1–1,5 cm pod hladinu vody a testovací oblast byla osvětlena nepřímým osvětlením (50 ± 10 luxů), aby se zabránilo odrazům. Byla použita čtyři místa startu, N, S, E a W. Pro test prostorového učení byla zvířata trénována denně ve dnech 9–11 na pevném výchozím místě. Doba únikové latence se měří pro zobrazení prostorové paměti a schopnosti učení myší. Pokud by myši nemohly najít plošinu nebo na ni vylézt, myši by byly vedeny na plošinu a zůstaly by 10 sekund. Po odpočinku po dobu 60 s by začal další trénink. Data získaná z posledního testu prostorového učení byla použita jako základní hodnota pro formování. Ve dnech 23–28 byl proveden test navigace a prostorová sonda. Test navigace na místě trval 6 dní a byl proveden ve 13 hodin, zvířata byla umístěna do vody s hlavou obrácenou ke stěně bazénu ve směru hodinových ručiček a byla zaznamenána doba latence (do 2 minut). Po provedení testu navigace byla plošina odstraněna. Myši byly umístěny do vody s hlavou obrácenou ke stěně bazénu na náhodném místě a byla zaznamenána pohybová stopa a frekvence, kterou myši plavaly přes místo, kde byla plošina během 2 minut. Pohybová stopa byla zaznamenána multifunkčním autonomním záznamníkem pohybu myší (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Čína).

echinakosid v cistanche

1.6. Detekce aktivity MAO. Aktivita MAO byla měřena pomocí detekční soupravy MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Čína) a detekce byla provedena podle protokolu výrobce. Byl získán homogenát z mozkové tkáně; 500 µl bylo smícháno s 300 µl činidla 1 a 300 µl činidla 2, inkubováno po dobu 3 hodin při 37 °C a poté postupně přidáno 300 µl činidla 3, 3 ml činidla 4 a vortexovány pro 2 min. Reakční směs byla odstřeďována při 3,{16}} otáčkách za minutu po dobu 10 minut a optická hustota supernatantu byla stanovena spektrofotometrem v ultrafialovém a viditelném spektru (Lambda 25, PerkinElmer, USA) s použitím excitačního světla 242 nm.

1.7. Enzymově vázaný imunosorbentní test neurotransmiterů a ACTH a CORT. Detekční souprava Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pro dopamin (DA), norepinefrin (NE) a 5-hydroxytryptamin (5-HT) byla zakoupena od společnosti BLUE GENE, Shanghai. Detekční soupravy ELISA byly zakoupeny od Qiyun Biotech, Guangzhou.

Postupy jsou následující: experiment byl proveden při teplotě místnosti. Potáhněte jamky mikrotitrační destičky z PVC záchytnou protilátkou v koncentraci 1–10 µg/ml v uhličitanovém/hydrogenuhličitanovém pufru (pH 9,6). Destičku uzavřete a inkubujte přes noc při 4 °C; destičku promyjte 3krát PBS/tween a nespecifická vazebná místa jsou blokována blokovacím roztokem; poté destičku třikrát promyjte PBS/tween. Standardy a vzorky se zředí v blokovacím roztoku a do jamky destičky se přidá 100 ul a destička se uzavře a inkubuje při 37 °C po dobu 1 hodiny. Přidejte 100 µl naředěné detekční protilátky a inkubujte destičku při

C. deserticola prášek 1,27 ± 0.009 0,52 ± 0,003

C. tubulosaprášek 19,81 ± 0.66 2,45 ± 0,12

C. deserticola odvar {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0.001 C.tubulosaodvar 5,90 ± 0.12 0,54 ± 0,05 Echinakosid, ECH; fenylethanoidové glykosidy, PeG; verbascoside, VerBS.

37 °C po dobu 1 hodiny; destičku 3krát promyjte PBS/Tween. Přidejte 50 µl roztoku pro vývoj barvy a držte destičku mimo dosah světla a inkubujte ji při pokojové teplotě po dobu 15 minut; K zastavení reakce se přidá 50 ul stop pufru. Změřte optickou hustotu (OD) pro každou jamku pomocí čtečky mikrodestiček nastavenou na 405 nm za 30 minut.

1.8. Statistická analýza. Všechna data byla reprezentována jako průměr ± SEM (standardní chyba průměru), významný rozdíl byl analyzován pomocí t-testu nebo jednocestné ANOVA následované Duncanovými testy s více rozsahy pomocí SPSS 16.0, a rozdíly mezi skupiny s � < 0,05="" byly="" považovány="" za="" statisticky="">

2. Výsledky

2.1. Stanovení obsahu hlavních bioaktivních složek v C. deserticola YCMa a C.tubulosaVzorky. Za hlavní bioaktivní složky jsou obecně považovány fenylethanoidní glykosidy, jako je echinakosid a verbascosid; odtud obsah echinakosidu a verbascosidu v C. deserticola YCMa a C.tubulosavzorků byla stanovena pomocí HPLC. HPLC chromatogramy jsou uvedeny na obrázku1a výsledky ukazují, že celkový obsah fenylethanoidových glykosidů z C. deserticola YCMa byl přibližně dvakrát vyšší než z C. tubulosa. Hmotnosti echinakosidu a verbascosidu představují 1,27 ± 0.009 procent a {{10}},52 ± 0,003 procenta prášku připraveného z C. deserticola YCMa a 19,81 ± 0,66 procenta a 2,45 ± 0,12 procenta prášku připraveného z C.tubulosa. Hmotnosti echinakosidu a verbascosidu představují {{0}},90 ± 0.{{10}}01 procento a 0,20 ± 0,001 procenta odvaru C. deserticola YCMa a 5,90 ± 0,12 procenta a 0,54 ± 0,05 procenta prášku připraveného z C.tubulosa(Stůl1).

2.2. Odvar z C. deserticola YCMa a C. tubulosa zmírnil úroveň stresu a deprese. Test zavěšení ocasu (TST) je rychlá a klasická metoda k posouzení antidepresivního účinku léků u myší [24]; v tomto výzkumu byl imobilní stav způsobený krátkodobým a nevyhnutelným stresem zavěšení za ocas použit jako vlastnost odrážející úroveň deprese myší. Zkontrolovali jsme, zda odvar z C. deserticola YCMa a C.tubulosamohl zvrátit nehybnost a podpořit výskyt chování souvisejícího s útěkem. Ve srovnání s kontrolními skupinami se doba imobility u stresové skupiny zvýšila o 27,4 procenta; ve srovnání se stresem

Obrázek 1: HPLC chromatografický profil fenylethanoidových glykosidů z prášku C. deserticola YCMa a C. tubulosa. Píky 1 a 2 představují echinakosid a verbascosid.

Obrázek 2: Účinek odvarů C. deserticola YCMa a C. tubulosa na období imobility myší se zavěšeným ocasem za 5 minut. Po adaptaci byl experimentálním skupinám podáván odvar z byliny Cistanche sondou po dobu 21 dnů a poté byl zavěšen za ocas a pohyb byl sledován 5 minut po suspendování; každá skupina se skládala z 10 myší. L, M a H představují nízké, střední a vysoké; Představují CD a CT

C. deserticola YCMa a C. tubulosa odvar. Všechna data byla uvedena jako průměr ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

skupiny,

skupiny, skupiny léčené střední, vysokou koncentrací odvaru z bylin C. deserticola YCMa vykazovaly statisticky významné snížení doby imobility, každá o 44,1 procenta a 56,1 procenta; skupiny léčené střední, vysokou koncentrací

Odvar z bylin C. tubulosa vykázal statisticky významné snížení doby nehybnosti vždy o 41,9 procenta ao 47,7 procenta (obr.2). Tyto výsledky ukazují, že odvar z C. deserticola YCMa a C.tubulosamohla snížit hladinu stresu a deprese u myší a odvar z C. deserticola YCMa vykazoval mírně vyšší účinnost než C. deserticola YCMa.tubulosavaření.

1.1. Odvar z C. deserticola YCMa a C. tubulosa zlepšil prostorové učení a paměť myší. Lidé (dospívající i dospělí) postižení depresí jsou náchylní

trpí poruchou učení [28]; odvar z C. deserticola YCMa a C.tubulosabylo prokázáno, že zmírňuje úroveň stresu a deprese; poté jsme se rozhodli posoudit, zda by odvar z C. deserticola YCMa a C. tubulosa mohl ovlivnit prostorové učení a paměť pomocí modelu Morrisova vodního bludiště, který je široce používán při posuzování funkce prostorového učení a paměti související oblasti mozku.[29]. Pohybové stopy jsou během latence vyhledávání klasifikovány do čtyř; přímá trajektorie ukázala, že myši přesně určily polohu záchranné plošiny, trajektorie tendence ukázala, že myši vykazovaly v podstatě správnou orientaci, a trajektorie ostrého typu ukázala, že myši byly buď v raném tréninkovém období, nebo trpěly demencí a snažily se lokalizovat cílové místo na základě instinktu; náhodná vyhledávací trajektorie ukázala, že myši měly nízkou schopnost určování polohy a bezcílně prohledávaly cílové místo. Data byla získána podle kritérií.

Vliv odvarů C. deserticola YCMa a C. tubulosa na schopnost vesmírného učení a paměti u myší stresovaných omezováním je znázorněn na Obr.3. Po testu zavěšení ocasu myši vykazovaly významně prodlouženou dobu latence. Ve srovnání se stresovými skupinami vykazovaly myši léčené středně vysokou dávkou odvaru C. deserticola YCMa a nízkou dávkou vysokou dávkou odvaru C. tubulosa zkrácenou dobu latence; frekvence, kdy myši plavaly na skryté plošině, byla významně zvýšena ve skupinách léčených středními, vysokými dávkami odvaru C. deserticola YCMa. Tyto výsledky naznačují, že vystresované myši měly prospěch z podávání odvaru z byliny Cistanche a vykazovaly zlepšení prostorového učení a paměti.

1.2. Odvar z C. deserticola YCMa a C.tubulosaSnižuje aktivitu monoaminooxidázy. MAO katalyzuje oxidační deaminaci aminů, jako je tyramin, katecholamin a 5-hydroxytryptamin (5-HT) v mozku a periferních tkáních; inhibice aktivity MAO vede k antidepresivní účinnosti [30]. Snažili jsme se vysvětlit antidepresivní účinek C. deserticola YCMa a C.tubulosa; poté byla stanovena aktivita MAO v mozku. Po testu zavěšení ocasu byla aktivita MAO významně zvýšena; aktivita MAO ve skupinách ošetřených suspenzí ocasu a poté následována střední, vysokou dávkou

Obrázek 3: Účinek C. deserticola YCMa a C.tubulosaodvary o schopnosti vesmírného učení a paměti omezujících vystresovaných myší. Po adaptaci byl experimentálním skupinám podáván odvar z bylinky Cistanche sondou po dobu 21 dnů a poté testován

Vodní bludiště R. Morrise pro určení prostorového učení a paměti. L, M a H představují nízké, střední a vysoké; CD a CT představují C. deserticola YCMa a C.tubulosavaření. „#“ a „∗“ každý představuje P< 0.05="" and="" p="" <="">

Obrázek 4: Účinek odvarů C. deserticola YCMa a C. tubulosa na aktivitu mozkové monoaminooxidázy (MAO) myší stresovaných se zavěšením ocasu. Po adaptaci byl experimentálním skupinám podáván odvar z bylinky Cistanche sondou po dobu 21 dnů a poté byl na 5 minut suspendován za ocas, každá skupina se skládala z 10 myši a myši byly utraceny, aby se odebrala mozková tkáň a používá se pro měření aktivity MAO. L, M a H představují nízké, střední a vysoké; CD a CT představují C. deserticola YCMa a C. tubulosa odvar. P= 10; všechna data byla uvedena jako průměr ± SEM; P < 0,05="" bylo="" považováno="" za="" významně="" odlišné="" a="" bylo="" označeno="" jako="">

odvar z C. deserticola YCMa vykázal významný pokles přibližně o 13,9 procenta -12,3 procenta; aktivita MAO ve skupinách léčených suspenzí ocasu a poté vysokým dávkováním odvaru z C. tubulosa vykázala významný pokles o asi 13,2 procenta (obr.4).Údaje ukázaly, že odvar z C. deserticola YCMa a C. tubulosa může inhibovat aktivitu MAO a může přispívat k antidepresivu

účinek a odvar z C. deserticola YCMa vykazoval silnější účinnost než u C. tubulosa.

1.1. Podání odvaru C. deserticola YCMa a C. tubulosa vedlo k upregulaci centrální koncentrace dopaminu a downregulaci sérové ​​koncentrace kortikosteronu. Úroveň DA a NE v

Obrázek 5: Účinek odvarů C. deserticola YCMa a C. tubulosa na hladiny mozkových neurotransmiterů u myší stresovaných zavěšením ocasu. Po adaptaci byl experimentálním skupinám podáván odvar z bylinky Cistanche sondou po dobu 21 dnů a poté byl suspendován za ocas po dobu 5 minut, každá skupina se skládala z 10 myší a myši byly usmrceny, aby se odebrala mozková tkáň a použity pro mozkový neurotransmiter. měření hladiny. L, M a H představují nízké, střední a vysoké; CD a CT představují C. deserticola YCMa a C. tubulosa odvar. P= 10; všechna data byla uvedena jako průměr ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

centrální

centrální nervový systém byl měřen pro stanovení nervové dráždivosti. Po 4 týdnech testu zavěšení ocasu se ve srovnání se stresovými skupinami hladina DA u skupin léčených střední dávkou C. deserticola YCMa významně zvýšila o 43,5 procenta; hladina DA u skupin léčených střední dávkou C. tubulosa byla také významně zvýšena (obr5(a)). Hladina NE byla mírně upregulována ve skupinách léčených odvarem z obou bylin ve srovnání se stresovými skupinami a nebyl zjištěn žádný statistický rozdíl (obr.5(b)).Tyto výsledky by mohly vysvětlit molekulární mechanismus antidepresivního účinku byliny Cistanche.

Adrenokortikotropní hormon (ACTH), polypeptidový hormon produkovaný a vylučovaný přední hypofýzou, stimuluje sekreci glukokortikosteroidů působením na kůru nadledvin, zona fasciculata [31]; kortikosteron, steroidní hormon produkovaný kůrou nadledvinek, se podílí na regulaci fyziologických procesů, jako je zvýšení energie, imunitní reakce a stresové reakce.32], proto jsme se rozhodli studovat vliv bylinkového odvaru na osu HPA. A byla měřena koncentrace ACTH a kortikosteronu v séru. Po 4 týdnech testu zavěšení ocasu byly koncentrace ACTH a kortikosteronu ve stresové skupině významně zvýšeny (obr.6).Ve skupinách léčených odvarem z byliny Cistanche nebyly pozorovány žádné významné změny ve srovnání se stresovou skupinou (obr6(a)).Ve srovnání se stresovou skupinou byla sérová koncentrace kortikosteronu u skupin léčených středně vysokou dávkou odvaru C. deserticola YCMa významně snížena; koncentrace kortikosteronu u skupin léčených vysokou dávkou C. tubulosa byla snížena, ale ne k významnému statistickému rozdílu

(Postava5(b)).Údaje ukázaly, že odvar z obou

C. deserticola YCMa a C. tubulosa by mohly snížit koncentraci kortikosteronu v séru a mohly by se podílet na regulaci osy HPA a odvar z C. deserticola YCMa vykazoval silnější účinnost než odvar z C. tubulosa.

1. Diskuse

V této studii byly definovány antidepresivní aktivity a zlepšení paměti a učení byliny Cistanche, což by mohlo vrhnout nové světlo na funkci byliny Cistanche a poskytnout vodítko k rozšíření terapeutického rozsahu použití. Předchozí studie ukazují, že bylina Cistanche je multifunkční čínský lék s biologickými účinky proti stárnutí, antioxidačními, estrogenními, antiosteoporotickými, afrodiziakálními a protizánětlivými účinky [33]. Herb Cistanche byla uznána jako lék na nedostatek ledvin, neplodnost a chronickou zácpu (Pharmacopoeia Committee of China, 2010). Odvar Herb Cistanche se skládá z těkavých olejů, netěkavých fenylethanoidových glykosidů (PeG), iridoidů, lignanů, alditolů, oligosacharidů a polysacharidů. Echinakosid a verbascosid jsou obecně považovány za hlavní bioaktivní složky [34]. Existují čtyři hlavní druhy Cistanche včetně C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck a Cistanche salsa var. albiflorashi a kol. [35]; jako model pro stanovení obsahu PeG jsme zvolili C. deserticola YCMa a C. tubulosa a C. deserticola YCMa měla vyšší obsah PeG (obr.1), což může vysvětlit vyšší účinnost C. deserticola YCMa. Výsledky naznačují, že obsah hlavních bioaktivních složek určuje účinnost byliny Cistanche.

Obrázek 6: Účinek odvarů C. deserticola YCMa a C. tubulosa na koncentrace hormonů v séru u zavěšených stresovaných myší. Po adaptaci byl experimentálním skupinám podáván odvar z bylinky Cistanche žaludeční sondou po dobu 21 dnů a poté byl na 5 minut zavěšen za ocas, každá skupina se skládala z 10 myši a krev byla odebrána a použita pro stanovení hladiny sérového adrenokortikotropního hormonu (ACTH) a kortikosteronu (CORT). L, M a H představují nízké, střední a vysoké; CD a CT představují C. deserticola YCMa a C. tubulosa odvar. P=10; všechna data byla uvedena jako průměr ± SEM; P < 0,05="" byly="" považovány="" za="" významně="" odlišné="" a="" byly="" označeny="" jako="">

Předchozí studie naznačují, že bylinné produkty Cistanche jsou prospěšné pro léčbu neurodegenerativních poruch tím, že upregulují nervový růstový faktor (NGF) v hippocampu myší [36,37], ale nebyl popsán žádný výzkum antidepresivních a kognitivních vzdělávacích aktivit byliny Cistanche na savčích modelech. V této studii bylo prokázáno, že odvar z bylinky Cistanche je účinný pro zmírnění hladiny stresu a podstatně zvyšuje chování při přežití v testu zavěšení ocasu (obr.2) a zlepšit kapacitu prostorového učení a paměti v modelu vodního bludiště (obr3). Lin a kol. prokázali, že bylina Cistanche zlepšila čichově asociovanou paměť v modelu ovocných mušek [23]; zaměřili jsme náš výzkum na antidepresivní účinek a přijali jsme jiný zvířecí model; výsledek ukázal, že bylina Cistanche zlepšila variantní typ kognitivní funkce, konkrétně schopnost prostorového učení u myší. Podle monoaminové teorie jsou prožívání stresu a deprese úzce spojeny s mozkovou hladinou monoaminových neurotransmiterů, jako jsou DA, NE, 5-HT a epinefrin [38]. A zjistili jsme, že odvar z bylinky Cistanche by mohl podkopat aktivitu MAO (obr4) a zvýšit centrální koncentraci DA (obr5(A)). Překvapivě byla centrální koncentrace 5-HT snížena léčbou odvarem z bylinky Cistanche (údaje nejsou uvedeny), protože předchozí výzkum ukázal, že snížená centrální 5-aktivita HT je spojena s depresí [39]. Dysregulace osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny je často spojena s depresí [40], intervence systémem glukokortikoidních receptorů (GR) úspěšně zvrátila depresivní fenotyp u myší[41], a zjistili jsme, že bylina Cistanche výrazně zmírnila sérum

koncentrace CORT (obr6(b)).Modulace monoaminového systému a HPA osy přispívají k antidepresivnímu účinku byliny Cistanche. Echinakosid mohl volně procházet hematoencefalickou bariérou a působit na centrální nervový systém [42], což může vysvětlovat, proč měl odvar z bylinky Cistanche antidepresivní funkci. Poprvé jsme charakterizovali antidepresivní vlastnosti a jejich vztah ke kognitivním zlepšením na myším modelu a byl prozkoumán předběžný mechanismus. Mechanismus antidepresivních vlastností Cistanche stále nebyl objasněn na molekulární úrovni a je zapotřebí dalšího výzkumu k objasnění komplexního antidepresivního mechanismu byliny Cistanche.

Vzhledem k tomu, že odvar z bylinky Cistanche je směs sloučenin, může existovat několik způsobů, jak odvar z bylinky Cistanche uplatňovat antidepresivní účinek a podporovat schopnost učení. Oxidační stres ovlivňuje mnoho buněčných funkcí neuronů a nadprodukce reaktivních forem kyslíku (ROS) způsobuje poškození buněk, apoptózu a smrt [43]. Echinakosid extrahovaný ze stonků C. salsa vykazuje neuroprotektivní účinek tím, že snižuje produkci ROS a mitochondriemi zprostředkovanou apoptózu [44]; akteosid, extrémně silná antioxidační sloučenina, může být částečně zodpovědný za neuroprotektivní účinek[45]. Kromě tradičního způsobu odvaru může účinek odvaru z bylin zesílit použití moderních farmaceutických metod, jako jsou glykosidové kapsle s řízeným uvolňováním, protože bioaktivní složky mohou být tráveny a degradovány gastrointestinálním traktem [37].

Předchozí studie naznačují, že bylinné produkty Cistanche jsou prospěšné pro léčbu neurodegenerativních poruch tím, že upregulují nervový růstový faktor (NGF) v hippocampu myší [36,37], ale nebyl popsán žádný výzkum antidepresivních a kognitivních vzdělávacích aktivit byliny Cistanche na savčích modelech. V této studii bylo prokázáno, že odvar z bylinky Cistanche je účinný pro zmírnění hladiny stresu a podstatně zvyšuje chování při přežití v testu zavěšení ocasu (obr.2) a zlepšit kapacitu prostorového učení a paměti v modelu vodního bludiště (obr3). Lin a kol. prokázali, že bylina Cistanche zlepšila čichově asociovanou paměť v modelu ovocných mušek [23]; zaměřili jsme náš výzkum na antidepresivní účinek a přijali jsme jiný zvířecí model; výsledek ukázal, že bylina Cistanche zlepšila variantní typ kognitivní funkce, konkrétně schopnost prostorového učení u myší. Podle monoaminové teorie jsou prožívání stresu a deprese úzce spojeny s mozkovou hladinou monoaminových neurotransmiterů, jako jsou DA, NE, 5-HT a epinefrin [38]. A zjistili jsme, že odvar z bylinky Cistanche by mohl podkopat aktivitu MAO (obr4) a zvýšit centrální koncentraci DA (obr5(A)). Překvapivě byla centrální koncentrace 5-HT snížena léčbou odvarem z bylinky Cistanche (údaje nejsou uvedeny), protože předchozí výzkum ukázal, že snížená centrální 5-aktivita HT je spojena s depresí [39]. Dysregulace osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny je často spojena s depresí [40], intervence se systémem glukokortikoidních receptorů (GR) úspěšně zvrátila tlumivý fenotyp u myší[41], a zjistili jsme, že bylina Cistanche výrazně zmírnila sérum

koncentrace CORT (obr6(b)).Modulace monoaminového systému a HPA osy přispívají k antidepresivnímu účinku byliny Cistanche. Echinakosid mohl volně procházet hematoencefalickou bariérou a působit na centrální nervový systém [42], což může vysvětlovat, proč měl odvar z bylinky Cistanche antidepresivní funkci. Poprvé jsme charakterizovali antidepresivum a jeho vztah ke kognitivním zlepšením na myším modelu a prozkoumali jsme předběžný mechanismus. Mechanismus antidepresivních vlastností Cistanche stále nebyl objasněn na molekulární úrovni a je zapotřebí dalšího výzkumu k objasnění komplexního antidepresivního mechanismu byliny Cistanche.

Vzhledem k tomu, že odvar z bylinky Cistanche je směs sloučenin, může existovat několik způsobů, jak odvar z bylinky Cistanche uplatňovat antidepresivní účinek a podporovat schopnost učení. Oxidační stres ovlivňuje mnoho buněčných funkcí neuronů a nadprodukce reaktivních forem kyslíku (ROS) způsobuje poškození buněk, apoptózu a smrt [43]. Echinakosid extrahovaný ze stonků C. salsa vykazuje neuroprotektivní účinek tím, že snižuje produkci ROS a mitochondriemi zprostředkovanou apoptózu [44]; acetonid, extrémně silná antioxidační sloučenina, může být částečně zodpovědný za neuroprotektivní účinek[45]. Kromě tradičního způsobu odvaru může účinek odvaru z bylin zesílit použití moderních farmaceutických metod, jako jsou glykosidové kapsle s řízeným uvolňováním, protože bioaktivní složky mohou být tráveny a degradovány gastrointestinálním traktem [37].

1. Závěry

V této studii jsme zjistili, že odvary z C. deserticola

YCMa a C. tubulosa vykazovaly antidepresivní účinek a zlepšily schopnost prostorového učení a paměti v myším modelu a odvary z C. deserticola YCMa a C. tubulosa měly významný dopad na osu HPA;

C. deserticola YCMa vykazovala silnější farmakologickou funkci. C. deserticola a C. tubulosa by mohly mít potenciál být vyvinuty jako alternativní léčiva pro léčbu deprese.

Zveřejnění

Názory vyjádřené v tomto dokumentu jsou názory autorů a nemusí nutně odrážet názory žádné z těchto agentur.

Střet zájmů

Autoři prohlašují, že nejsou ve střetu zájmů.

Poděkování

Tento projekt byl podpořen granty od National Natural Science Foundation (81503333) a Science and Technology Support by Project v Ujgurské autonomní oblasti Sin-ťiang (Čína) (200840102-15).

Reference

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao a kol., "Celoživotní a 12-měsíční prevalence psychiatrických poruch DSM-III-R ve Spojených státech: výsledky z National Comorbidity Survey," Archives of Obecná psychiatrie, sv. 51, č.p. 1, s. 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska a G. Chen, "Neuroplasticita a buněčná odolnost při poruchách nálady," Molecular Psychiatry, sv. 5, č. 6, s. 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis a AF Carvalho, "Beyond monoamines-novel targets for treatment-rezistentní deprese: Komplexní přehled," Current Neuropharmacology, sv. 13, č. 5, s. 636–655, 2015.

[4] K. Wilson a P. Mottram, "Srovnání vedlejších účinků selektivních inhibitorů zpětného vychytávání serotoninu a tricyklických antidepresiv u starších pacientů s depresí: metaanalýza," International Journal of Geriatric Psychiatry, sv. 19, č. 8, s. 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljkovic´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Farmakokinetika a účinnost fluvoxaminu a amitriptylinu při depresi," Journal of Pharmacological Sciences, sv. 110, č.p. 1, s. 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "Doplňky stravy a funkční potraviny: 2 strany mince?" American Journal of Clinical Nutrition, sv. 77, s. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang a kol., "Výzkum antidepresivního účinku oleje ze semen rakytníku prostřednictvím metabolomického přístupu založeného na GC-MS ve spojení s multivariační analýzou," Food and Function, sv. 6, č. 11, s. 3585–3592, 2015.

[8] Y. Hou, MA Aboukhatwa, D.-L. Lei, K. Manaye, I. Khan a

Y. Luo, "Antidepresivní přírodní flavonoly modulují BDNF a

beta-amyloid v neuronech a hippocampu dvojitých myší TgAD," Neuropharmacology, sv. 58, č. 6, str. 911–920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem a O. Tankamnerdthai, "Piperine, potenciální funkční potravina pro poruchy nálady a kognitivních poruch," Food and Chemical Toxicology, sv. 46, č. 9, s. 3106–3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi a J. Terao, "Přístup k novým funkčním potravinám pro kontrolu stresu 5. Profily antioxidační aktivity antidepresivních bylin a jejich aktivních složek," Journal of Medical Investigation, sv. 52, s. 249–251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain a B. Jitendra, „Přehled Griffonia simplicifollia – ideální bylinné antidepresivum“, International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 2010.

[12] Z.-L. Jin, N. Gao, W. Xu a kol., "Receptor and transporter binding and activity profiles of albiflorin extrahované z Radix Paeonia Alba," Scientific Reports, sv. 6, ID článku 33793, 2016.

[13] S.-H. Lin, M.-L. Chou, W.-C. Chen a kol., "Léčivá bylina, Melissa officinalis L. zlepšuje depresivní chování krys v testu nuceného plavání prostřednictvím regulace serotonergního neurotransmiteru," Journal of Ethnopharmacology, sv. 175, článek č. 9741, s. 266–272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan a M.-H. Su, "Hypocholesterolemické účinky extraktu Cistanche tubulosa, čínské tradiční surové medicíny, u myší," American Journal of Chinese Medicine, sv. 37, č.p. 6, s. 1125–1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui a LI Xiu-Wei, „Vliv různých regulátorů růstu rostlin na poměr přežití sazenic haloxyfop ammodendronu a parazitický poměr cistanche deserticola“, Journal of Chinese Medicinal Materials, sv. 32, s. 1651–1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani a T. Namba, "Antioxidační účinky fenylethanoidů z Cistanche deserticola," Biological and Pharmaceutical Bulletin, sv. 19, č. 12, s. 1580–1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen a Y.-Q. Li, "Ochranné účinky echinakosidu na hepatotoxicitu u krys vyvolanou chloridem uhličitým," Toxicology, sv. 232, č.p. 1-2, str. 50–56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby a X. Zhang, "Etanolový extrakt Cistanche tubulosa zprostředkovává hladiny pohlavních hormonů u potkanů ​​indukcí testikulárních steroidogenních enzymů," Pharmaceutical Biology, sv. 54, č.p. 3, s. 481–487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang a X. Liu, "Účinky extraktu Cistanche deserticola na erektilní odpověď penisu u kastrovaných potkanů", Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, sv. 29, č. 2, s. 557–562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang a kol., "Jak čínské léky, které tonizují ledviny, inhibují apoptózu dopaminergních neuronů?" Neural Regeneration Research, sv. 8, č. 30, s. 2820–2826, 2013.

[21] C.-R. Wu, H.-C. Lin a M.-H. Su, "Zvrat pomocí vodných extraktů z Cistanche tubulosa z behaviorálních deficitů v modelu potkanů ​​podobných Alzheimerově chorobě: význam pro ukládání amyloidu a funkci centrálního neurotransmiteru," BMC Complementary and Alternative Medicine, sv. 14, s. 1–11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol a LR Munari, "Antidepresivní, náladu stabilizující a prokognitivní účinky velmi nízké dávky sublingválního ketaminu u refrakterní unipolární a bipolární deprese," International Journal of Neuropsychopharmacology, sv. 16, č. 9, s. 2111–2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai a H. Liu, "Molekulární cesty související s podporou dlouhověkosti a kognitivním zlepšením Cistanche tubulosa u Drosophila,"

Fytomedicína, sv. 26, s. 37–44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau a A. Vassout, "Test zavěšení ocasu jako model pro hodnocení antidepresivní aktivity: Přehled farmakologických a genetických studií u myší," Neuroscience and Biobehavioral Reviews, sv. 29, č. 4-5, str. 571–625, 2005.

[25] CV Vorhees a MT Williams, "Morrisovo vodní bludiště: postupy pro hodnocení prostorových a souvisejících forem učení a paměti," Nature Protocols, sv. 1, č. 2, s. 848–858, 2006.

[26] R. Morris, "Vývoj postupu ve vodním bludišti pro studium prostorového učení u krys," Journal of Neuroscience Methods, sv. 11, č. 1, s. 47–60, 1984.

[27] A. Wolf, B. Bauer, EL Abner, T. Ashkenazy-Frolinger a A.

MS Hartz, "Komplexní behaviorální testová baterie pro hodnocení učení a paměti u myší 129S6/Tg2576," PLoS ONE, sv. 11, č. 1, ID článku e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young a AA Leenaars, "Dětská porucha učení, která predisponuje ty, kteří trpí depresemi a sebevraždami u dospívajících a dospělých.", Journal of Learning Disabilities, sv. 22, č. 3, s. 169–175, 1989.

[29] R. D'Hooge a PP De Deyn, "Aplikace Morrisova vodního bludiště při studiu učení a paměti," Brain Research Reviews, sv. 36, č. 1, s. 60–90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen a MJ Ridd, "Monoaminooxidáza: od genů k chování", Annual Review of Neuroscience, sv. 22, s. 197–217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein a JP Herman, "Disociace ACTH a glukokortikoidů," Trends in Endocrinology and Metabolism, sv. 19, č. 5, s. 175–180, 2008.

[32] S. Whirledge a JA Cidlowski, "Glukokortikoidy, stres a plodnost," Minerva Endocrinologica, sv. 35, č. 2, s. 109–125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu a kol., "Cistanches Herba: Chemical Constituents and Pharmacological Effects," Chinese Herbal Medicines, sv. 7, č. 2, s. 135–142, 2015.

[34] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao a C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jeden z nejlepších farmaceutických darů tradiční čínské medicíny," Frontiers in Pharmacology, sv. 7, článek 41, 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu a XB Li, "Identification of Cistanche species by chemical and inter-simple sequence repeat fingerprinting," Biological and Pharmaceutical Bulletin, sv. 32, č. 1, s. 142–146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim a

MS Oh, "Cistanches Herba zlepšuje učení a paměť indukcí nervového růstového faktoru," Behavioral Brain Research, sv. 216, č.p. 2, s. 652–658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang a kol., "Otevřená, placebem nekontrolovaná studie o kapslích glykosidu cistanche tubulosa (Memoregain®) pro léčbu středně těžké Alzheimerovy choroby," American Journal of Alzheimer's Disease and other Dementias, sv. 28, č. 4, s. 363–370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli a G. Racagni, "Modulation of synaptic plasticity by stress and antidepressants," Bipolar Disorders, sv. 4, č. 3, s. 166–182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor a V. O'Keane, "Neuroendokrinní důkazy o spojení mezi hypotyreózou, sníženou centrální 5-aktivitou HT a depresí," Clinical Endocrinology, sv. 43, č.p. 6, s. 713–719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs a CJ George, "Dysregulace osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny u dětí a adolescentů s depresí: metaanalýza," Psychoneuroendocrinology, sv. 34, č. 9, s. 1272–1283, 2009.

[41] N. Barden, "Implementace osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny ve fyziopatologii deprese," Journal of Psychiatry and Neuroscience, sv. 29, č. 3, s. 185–193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu a W. Li, "Přechodná expozice echinakosidu je dostatečná k aktivaci signalizace Trk a ochraně neuronálních buněk před rotenonem," Journal of Neurochemistry, sv. 124, č.p. 4, s. 571–580, 2013.

[43] T.-H. Lu, C.-C. Su, F.-C. Tang a kol., "Kyselina chloroctová spouští apoptózu v neuronových buňkách prostřednictvím signální dráhy stresu endoplazmatického retikula indukovaného reaktivními druhy kyslíku," Chemico-Biological Interactions, sv. 225, s. 1–12, 2015.

[44] Y.-H. Wang, Z.-H. Xuan, S. Tian a G.-H. Du, "Echinakosid chrání proti 6-hydroxydopaminem indukované mitochondriální dysfunkci a zánětlivým reakcím v buňkách PC12 prostřednictvím snížení produkce ROS," Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, sv. 2015, ID článku 189239, 9 stran, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin a CF Chen, "Akteosidy chrání endoteliální buňky proti oxidativnímu stresu vyvolanému volnými radikály", Journal of Pharmacy and Pharmacology, sv. 56, č.p. 6, s. 743–748, 2004.